CC BY
45УДК 611-018.2+611-013:616-003.93
ВЛИЯНИЕ ПОЛИНУКЛЕОТИДОВ НА СОДЕРЖАНИЕ ТУЧНЫХ КЛЕТОК В ТКАНЯХ РЕГЕНЕРИРУЮЩЕЙ ИШЕМИЗИРОВАННОЙ РАНЫ КОЖИ
Шаповалова Е. Ю., Бойко Т. А., Барановский Ю. Г., Харченко С. В., Юнси Г. А.
Кафедра гистологии и эмбриологии, Медицинская академия имени С. И. Георгиевского ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет имени В. И.Вернадского», 295051, бульвар Ленина, 5/7, Симферополь, Россия
Для корреспонденции: Шаповалова Елена Юрьевна, доктор медицинских наук, профессор, зав. кафедрой гистологии и эмбриологии, Медицинская академия имени С. И. Георгиевского ФГАОУ ВО «КФУ им. В. И. Вернадского». E-mail: Shapovalova_L@mail.ru
For correspondence: Shapovalova Ye. Yu., MD, Professor, Head of the Department of Histology and Embryology, Medical Academy named after S. I. Georgievsky of V. I. Vernadsky CFU, е-mail: Shapovalova_L@mail.ru
Information about authors:
Шаповалова Е. Ю., orcid.org. 0000-0003-2544-7696 Бойко Т. А., orcid.org. 0000-0002-9627-4051 Барановский Ю. Г., orcid.org. 0000-0002-7044-1122 Харченко С. А., orcid.org. 0000-0002-9434-3789 Юнси Г. А., orcid.org. 0000-0003-2965-4975
РЕЗЮМЕ
Тучным клеткам отводится одна из важнейших ролей в восстановительных процессах, однако модулирующее влияние полидезоксирибонуклеотидов (PDRN) на присутствие этих клеток и их функциональную активность неизвестно. Целью исследования было проведение анализа содержания тучных клеток на этапах регенерации экспериментальной кожной ишемизированной раны на фоне введения PDRN. Мышей линии С57/В1 (возраст 4-6 месяцев) разделили на контрольную и экспериментальную группы. В экспериментальной группе в дно и вокруг раны вводили 0,38 мл полинуклеотидов. Через 4, 7, 12, 15 и 23 дня после операции ткани раны иссекали, заливали в парафин, окрашивали сочетанием гематоксилина и эозина. Тучные клетки визуализировали толуидиновым синим при рН 5,60. Подсчитывали индекс тучных клеток и индекс их дегрануляции. Установлено, что содержание тучных клеток и их функциональная активность, выражающаяся в дегрануляции, в регенерирующей ишемизированной ране коррелируются со стадией раневого процесса и определяют течение фазы раневого процесса. Введение PDRN оказывает существенное влияние на количество и функциональную активность тучных клеток во всех фазах репаративной регенерации ишемизированной кожной раны. Полинуклеотиды достоверно уменьшают индекс мастоцитов в тканях раны и индекс их дегрануляции во всех изученных сроках заживления, снижая тем самым воспалительную реакцию, уменьшая грануляционную ткань, стимулируя дифференцировку эпидермиса, ускоряя смену фаз раневого процесса и способствуя формированию полноценного нормотрофического рубца с кожными дериватами, который занимает меньшую площадь.
Ключевые слова: тучные клетки; полинуклеотиды; ишемизированная рана; кожа; раневой процесс.
INFLUENCE OF POLYDEOXYRIBONUCLEOTIDE ON THE CONTENT OF MAST CELLS IN TISSUE OF REGENERATING ISCHEMIZED SKIN WOUND
Shapovalova Ye. Yu., Boyko T. A., Baranovskiy Yu. G., Harchenko S. V., Yunsi G. A.
Medical Academy named after S. I. Georgievsky of V. I. Vernadsky CFU, Simferopol, Russia
SUMMARY
Mast cells have one of the most important roles in the recovery processes, but the modulating effect of Polydeoxy-ribonucleotide (PDRN) on the presence of these cells and their functional activity is not known. The aim of the study was to analyze the content of mast cells at the stages of regeneration of the experimental cutaneous ischemic wound against the background of the introduction of PDRN. Mice of the C57 / B1 line aged 4-6 months were divided into a control group and an experimental one. In the experimental group, PDRN solution with a dose of 0.38 ml was injected into the bottom of the wound and around it. On the 4th, 7th, 10th, 12th, 15th and 23th days after the operation, the tissues were excised, embedded into paraffin, stained with a combination of hematoxylin and eosin. The mast cells were visualized with toluidine blue at pH 5.60. The mast cell index and the index of their degranulation were calculated. It has been found that the content of mast cells and their functional activity expressed by degranulation, correlate in the regenerating ischemic wound with the stage of the wound process and determine the course of the wound process phase. Introduction of PDRN has a significant effect on the number and functional activity of mast cells in all phases of reparative regeneration of an ischemic cutaneous wound. Polydeoxyribonucleotide reliably decreases the index of mast cells in the wound tissues the and the index of their degranulation in all the healing periods studied, thereby diminishing the inflammatory response, reducing the granulation tissue, stimulating the differentiation of the epidermis, accelerating the phase change of the wound process and promoting the formation of a full normotrophic scar with cutaneous derivatives that takes up a smaller area.
Key words: mast cells; Polydeoxyribonucleotide; ischemic wound; skin; wound process.
На протяжении многих лет с разной степенью успеха предпринимались многочисленные попытки ускорить заживление ран [1]. Для достижения этой цели необходимы достоверные сведения о составе регенерационного гистиона в разные фазы раневого процесса [2; 3]. В настоящее время появились сообщения о решающей роли первой фазы раневого процесса - воспалении - в успешном заживлении ран и формировании умеренного нормотрофического рубца [4; 5]. В исследовании, включающем безрубцовую фетальную модель регенерации ран, образование рубцов было вызвано инъекцией тучных клеток [6]. Тучным клеткам отводится одна из важнейших ролей во всех фазах раневого процесса [7]. Эти клетки являются регуляторами не только сосудистых реакций в зоне травмы, но и иммунологических, защитных и репаративных процессов в ране [8]. Полидезоксирибонукле-отиды (PDRN) состоят из смеси нуклеотидов, экстрагированных из спермы форели [9]. Немногочисленные работы свидетельствуют, что PDRN оказывает противовоспалительное действие, ингибируя дегрануляцию тучных клеток и воспалительные цитокины [10; 11]. Сведения о содержании тучных клеток во время регенерации ишемизированной раны в разные стадии раневого процесса после введения полинукле-отидов в доступной литературе отсутствуют.
Цель исследования - оценить содержание тучных клеток на этапах регенерации экспериментальной кожной ишемизированной раны на фоне введения полинуклеотидов.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Операция по созданию кожной раны с ишемией была проведена на спине у 36 4-6-месячных линейных мышей (С57/В1). Алгоритм операции образования раны описан в статье Барановского Ю. Г. с соавт., 2016 [12]. Были выделены две группы. В контрольной группе в составе 18 особей рана заживала естественным путем. В экспериментальной группе из 18 особей в края раны вводили 0,38 мл PDRN "Plenhyage Medium" фирмы I.R.A., Istituto Ricerche Applicate Sri (Италия). В экспериментальной серии через 4, 7, 12, 15 и 23 дня ткани регенерирующего кожного дефекта иссекали и в течение суток содержали в нейтральном формалине 10%-ой концентрации. Ткани биоптата инфильтрировали парафином и нарезали на серии срезов толщиной 5 мкм. Структуры тканей срезов окрашивали сочетанием двух красителей: гематоксилином, а вслед за ним - эозином. Тучные клетки в составе дермы визуализировали с помощью набора реактивов фирмы «Биовитрум» с использованием толуиди-нового синего при рН 5,60. Индекс тучных кле-
ток определяли путём подсчёта количества клеток, окрашенных толуидиновым синим, на 100 клеток дермы. Индекс представлен в процентах в среднем по результатам изучения срезов всех биоптатов каждого срока. Функциональную активность тучных клеток определяли по индексу дегрануляции как отношение количества дегра-нулировавших тучных клеток к их общему числу в процентах. Сравнения средней величины индекса тучных клеток и индекса их деграну-ляции проводили в процентах по отношению к контрольной группе в этом же сроке заживления раны, а также по отношению к соответствующему индексу в срезах предыдущего срока.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
По прошествии 4-х дней после моделирования раны на спине экспериментальных животных обеих групп в раневых биоптатах имеется струп, закрывающий белую жировую ткань гиподермы. Клетки гиподермы поднялись вверх и граничат со струпом из-за отсутствия эпителия эпидермиса. Кровеносные сосуды немногочисленны и находятся на стадии формирования. Больше их в глубоких слоях, где просматривается начало образования прямых сосудов, поднимающихся вверх перпендикулярно к поверхности раны. В рыхлой соединительной ткани с редкими коллагеновыми волокнами между белыми адипоцитами и сосудами имеются тучные клетки с крупными яркими метахромати-ческими гранулами. Их индекс в контрольной и экспериментальной группах представлены в таблице 1. Часть мастоцитов дегранулировала и рядом с клетками присутствуют метахрома-тические гранулы (рис. 1). Индекс дегрануляции тучных клеток в обеих группах также представлен в таблице 1. Дегрануляция свидетельствует о функциональной активности тучных клеток, секреции гепарина и других биологически активных провоспалительных веществ, оказывающих стимулирующее воздействие на клетки воспалительного ряда и ангиогенез [13, 14]. Индекс тучных клеток и индекс их дегрануля-ции в экспериментальной группе после введения РБК^ на 4,29 % и 15,29 % соответственно ниже по сравнению с контролем. Это согласуется с данными ВШо А. с соавт. [15] о том, что в процессе заживления обычных ран полинуклео-тиды снижают содержание провоспалительных медиаторов, таких как фактор некроза опухоли альфа (ТОТ-а), интерлейкин 6 (1Ь-6) и ИМСВ-1.
По прошествии семи дней от операции и обкалывания раны РБЯМ кольцо, удерживающее края раны, остается на месте. Струп по-прежнему присутствует. В серии гистологических срезов видно, что эпителизация началась
Таблица 1
Индекс тучных клеток и индекс дегрануляции тучных клеток в биоптатах раны мышей контрольной и
экспериментальной групп
Количество суток после операции Контрольная группа Экспериментальная группа
Индекс тучных клеток Индекс деграну-ляции тучных клеток Индекс тучных клеток Индекс деграну-ляции тучных клеток
4-е сутки 12,36 ± 0,13 64,28±0,16 11,83 ± 0,10 54,45 ± 0,15
7-е сутки 23,18 ± 0,14 63,82 ± 0,17 22,41 ± 0,14 53,79 ± 0,13
12-е сутки 26,15 ± 0,10 27,18 ± 0,12 23,67 ± 0,12 25,14 ± 0,10
15-е сутки 27,52 ± 0,12 21,03 ± 0,10 23,29 ± 0,09 19,37 ± 0,12
23-е сутки 22,47 ± 0,12 15,38 ± 0,12 20,64 ± 0,11 12,08 ± 0,11
Рис. 1. Тучные клетки в срезе регенерирующей раны экспериментальной группы на 4-е сутки. 1 - тучная клетка; 2 - дегранулировавшая тучная клетка. Окраска толуидиновым синим. Увеличение: х400.
по краям раны и распространилась на всю ее поверхность. Образовался эпителий, где на ба-зальной мембране лежат два ряда кубических клеток, а в экспериментальной группе - три ряда клеток. Раневой процесс находится на стадии начала образования грануляционной ткани, когда нежные коллагеновые волокна переплетаются в виде сети, в петлях которой прослеживаются новообразованные кровеносные сосуды и активные фибробласты. В грануляционной ткани будущей дермы, в основном рядом с сосудами, присутствуют тучные клетки, часть из которых дегранулировала (см. табл. 1). Индекс мастоцитов в экспериментальной группе на 3,33 % ниже, чем в контрольной группе, а индекс де-грануляции ниже на 15,72 %. Вместе с тем индекс тучных клеток увеличился по сравнению с 4-ми сутками в контрольной группе на 46,68 % и в экспериментальной группе - на 47,21 %. Индекс дегрануляции мастоцитов также изменился по сравнению с предыдущим сроком: в контроле увеличился на 0,72 %, на фоне полинуклеоти-
дов - на 1,21 %. Тучным клеткам исследователи отводят важнейшую роль в формировании грануляционной ткани за счет активации ими функции коллагенообразования у фибробла-стов [16], чем и объясняется возрастание количества мастоцитов во второй фазе раневого процесса. Однако статистически достоверное подавление активности этих клеток полину-клеотидами обусловливает снижение воспаления и умеренное образование грануляционной ткани, что, согласно мнению ряда авторов, приводит в конечном этапе к более быстрому заживлению раны и формированию более организованного нормотрофического рубца [17; 5].
К 12-му дню грануляционная ткань под эпидермисом уже хорошо развита. Основным ее компонентом становится сеть коллагеновых волокон с большим количеством кровеносных капилляров и венул. На фоне присутствия РЭИК биоптаты экспериментальной группы демонстрируют более развитую грануляционную ткань и более дифференцированный эпидермис,
который имеет уже не полностью сформированный роговой слой. Грануляционная ткань вдается в эпидермис, формируя сосочки. Овальной или круглой формы тучные клетки с яркими крупными метахроматическими гранулами в цитоплазме встречаются вблизи кровеносных сосудов и между коллагеновыми волокнами грануляционной ткани (см. табл. 1). Присутствие тучных клеток в грануляционной ткани подтверждается также исследованиями [18]. В био-птатах экспериментальной группы индекс тучных клеток на 9,48 % меньше, чем в контрольной группе. По сравнению с 7-ми сутками индекс мастоцитов в контроле увеличился на 11,36 %, а в экспериментальной группе достоверно меньше - на 5,32 %. Рядом с некоторыми тучными клетками имеются метахроматические гранулы, что свидетельствует об активной дегрануляции с выделением гепарина и других биологически активных веществ. Индекс дегрануляции после введения полинуклеотидов на 7,51 % ниже, чем в контроле. За период с 7-х до 12-х суток в контроле снижение индекса дегрануляции тучных клеток максимально и составляет 57,41 %, в то время, как в экспериментальной группе снижение этого показателя составляет 53,26%. Аналогичные процессы прослеживаются и после трансплантации аутологичных фибробла-стов, которым также приписывают противовоспалительные и модулирующие свойства [19].
К 15-м суткам заживления ишемизированной раны наметились признаки перехода второй фазы раневого процесса в третью стадию ремоделирования грануляционной ткани или рубцевания, которые ярче выражены под влиянием инъекций полинуклеотидов. В экспериментальной группе в биоптатах произошла реорганизация архитектоники коллагеновых волокон с сетчатой на параллельное расположение относительно эпидермиса тонких пучков оксифильных волокон. Количество кровеносных сосудов и фибробластов заметно уменьшилось. Сформировался сосочковый слой будущей дермы. Тучные клетки, подтверждая свое гематогенное происхождение, по-прежнему локализуются вблизи кровеносных сосудов. Их индекс (см. табл.2) достоверно ниже под влиянием PDRN - на 15,37 % по сравнению с контрольной группой, а индекс дегрануляции - на 7,89 %. В контроле без лечения за прошедшие трое суток индекс тучных клеток увеличился на 4,98 %. В экспериментальной группе тот же показатель снизился на 1,61 %, что недостоверно. Одновременно индекс дегрануляции почти одинаково уменьшился в контрольной и экспериментальной группе: на 22,64 % и 22,95 % соответственно,
что подтверждает уменьшение функциональной активности тучных клеток в обеих группах.
На 23-и сутки, которые, исходя из срока жизни белых мышей, являются очень отдаленным периодом времени, рубец у животных, которым вводили полинуклеотиды, полностью сформировался и даже покрыт шерстяным покровом. На срезах рубцов эпидермис состоит из четырех слоев, как и положено тонкой коже, и имеет дериваты - закладки волос. В дерме грануляционная ткань полностью заместилась фиброзной, представленной пучками коллаге-новых волокон, расположенных параллельно поверхности эпидермиса, с небольшим количеством кровеносных сосудов. Встречаются отдельные тучные клетки, преимущественно в глубоких слоях дермы. Дегранулировавшие мастоциты редки (см. табл. 2). Индекс тучных клеток и индекс дегрануляции существенно статистически достоверно снизился по сравнению с 15-ми сутками: на 11,38 % и 37,64 % соответственно. По сравнению с контрольной группой на 23-и сутки они также меньше: на 8,14 % и 21,46 % соответственно. В контрольной группе сформировался более грубый рубец без волос с толстыми пучками коллагеновых волокон, среди которых много капилляров. В контрольной группе по сравнению с 15-ми сутками индекс тучных клеток впервые за весь срок наблюдений уменьшился на 18,35 %. Индекс дегрануля-ции мастоцитов уменьшился только на 26,87 %.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, мы установили, что содержание тучных клеток и их функциональная активность, выражающаяся в дегрануляции, в регенерирующей ишемизированной ране коррелируется со стадией раневого процесса и определяет течение фазы раневого процесса. Введение PDRN оказывает существенное влияние на количество и функциональную активность тучных клеток во всех фазах ре-паративной регенерации ишемизированной кожной раны. Полинуклеотиды достоверно уменьшают индекс мастоцитов в тканях раны и индекс их дегрануляции во всех изученных сроках заживления, снижая тем самым воспалительную реакцию, уменьшая грануляционную ткань, стимулируя дифференцировку эпидермиса, ускоряя смену фаз раневого процесса и способствуя формированию полноценного нормотрофического рубца с кожными дериватами, который занимает меньшую площадь.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Conflict of interest. The authors declare no conflict of interests.
2018, т. 8, № 1
Финансирование. Работа поддержана проектом академической мобильности «РНИЭМ» ФГАОУ ВО «КФУ имени В. И. Вернадского» и выполнена с использованием инфраструктуры НУЗ «НКЦ ОАО «РЖД» (г. Москва).
Funding. The work is supported by the project "Academic Mobility Network «DSREM" of Vernadsky Crimean Federal University and implemented using the infrastructure of the Scientific clinical center JSC "Russian Railways" (Moscow).
ЛИТЕРАТУРА
1. Appleton I. Wound healing: future directions. Drugs. 2003;6(11):1067-72.
2. Данилов Р К. Раневой процесс: гистогенетиче-ские основы. СПб.: ВМедА; 2008.
3. Одинцова И. А. Современные аспекты гистологического анализа раневого процесса. Вопросы морфологии XXI века. 2015; 4:51-53.
4. Walmsley G. G., Maan Z. N., Wong V. W., Duscher D., Hu M. S., Zielins E. R., Wearda T., Muhonen E., McArdle A., Tevlin R. Scarless wound healing: Chasing the holy grail. Plast. Reconstr. Surg. 2015;135:907-917. doi: 10.1097/PRS.0000000000000972.
5. Woonhyeok J., Chae E. Y., Tai S. R., Jun H. K., Ju Hee L., Won J.L. Scar Prevention and Enhanced Wound Healing Induced by Polydeoxyribonucleotide in a Rat Incisional Wound-Healing Modelnt. J Mol Sci. 2017;18(8):1698. doi: 10.3390/ijms18081698
6. Wulff B. C., Parent A. E., Meleski M. A., DiPietro L. A., Schrementi M. E., Wilgus T. A. Mast cells contribute to scar formation during fetal wound healing. J. Investig. Dermatol. 2012;132:458-465. doi: 10.1038/jid.2011.324.
7. Алексеева Н. Т., Глухов А. А. К вопросу о роли тучных клеток в заживлении ран. Вестник экспериментальной и клинической хирургии. 2011; 4(4):864-870.
8. Жукова О. В., Потекаев Н. Н., Стенько А. Г., Бурдина А. А. Патогенез и Гистоморфологические особенности рубцовых изменений кожи. Клиническая дерматология и венерология. 2009;3(4):4-9.
9. Altavilla D., Bitto A., Polito F., Marini H., Minutoli L., Di Stefano V., Irrera N., G., Squadrito F. Polydeoxyribonucleotide (PDRN): a safe approach to induce therapeutic angiogenesis in peripheral artery occlusive disease and in diabetic foot ulcers. Cardiovasc Hematol Agents Med Chem. 2009;7(4):313-321.
10. Bitto A., Polito F., Irrera N., D'Ascola A., Avenoso A., Nastasi G., Campo G., Micali A., Bagnato G., Minutoli L. Polydeoxyribonucleotide reduces cytokine production and the severity of collagen-induced arthritis by stimulation of adenosine A2A receptor. Arthritis Rheum. 2011;63:3364-71. doi: 10.1002/art.30538.
11. Rork T. H., Wallace K. L., Kennedy D. P., Marshall M. A., Lankford A. R., Linden J. Adenosine A2Areceptor activation reduces infarct size in the isolated, perfused mouse heart by inhibiting resident cardiac mast cell
degranulation. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2008;295:H1825-H1833. doi: 10.1152/ajpheart.495.2008.
12. Барановский Ю. Г., Ильченко Ф. Н., Шаповалова Е. Ю. Способ моделирования трофической язвы у лабораторных мышей в опытной модели. Вестник неотложной и восстановительной хирургии. 2016;1(2):259-261.
13. Алексеева Н. Т., Клочкова С. В., Никитюк Д. Б. Морфологическая характеристика тучных клеток при регенерации кожи. Оренбургский медицинский вестник. 2016;6(3):13-16.
14. Speirman K. Endogenous suppression of mast cell development and survival by IL-4 and IL-10. J. Leukos. Biol. 2009;85(5):826-836.
15. Bitto A., Oteri G., Pisano M., Polito F., Irrera N., Minutoli L., Squadrito F., Altavilla D. Adenosine receptor stimulation by polynucleotides (PDRN) reduces inflammation in experimental periodontitis. J. Clin. Periodontol. 2013;40:26-32. doi: 10.1111/jcpe.12010.
16. Быков В. Л. Секреторные механизмы и секреторные продукты тучных клеток. Морфология. 1999;115(2):64-72.
17. Dovi J. V., He L. K., DiPietro L. A. Accelerated wound closure in neutrophil-depleted mice. J. Leukoc. Biol. 2003;73:448-55. doi: 10.1189/jlb.0802406.
18. Мяделец О. Д., Суханов А. Ф. Взаимодействие тканевых базофилов и макрофагов в коже и лимфоузле крыс при воздействии общей глубокой гипотермии. Криобиология. 1990;(4):19-22.
19. Шаповалова Е. Ю., Бойко Т. А., Барановский Ю. Г., Василенко С. А. Содержание тучных клеток в структурах ишемизированной модельной раны на 12 сутки после стимуляции регенераторного потенциала ауто- и гетерофибробластами и дермальным эквивалентом. Кубанский научный медицинский вестник. 2017;24(5): 96-102.
REFERENSES
1. 1.Appleton I. Wound healing: future directions. Drugs. 2003;6(11):1067-72.
2. Danilov R. K. Wound process: histogenetic basis. SPb.: VMedA; 2008.
3. Odincova I. A. Modern aspects of the histological analysis of the wound process. Questions of the morphology of the XXI century. 2015;4:51-53.
4. Walmsley G. G., Maan Z. N., Wong V. W., Duscher D., Hu M. S., Zielins E. R., Wearda T., Muhonen E., McArdle A., Tevlin R. Scarless wound healing: Chasing the holy grail. Plast. Reconstr. Surg. 2015;135:907-17. doi: 10.1097/PRS.0000000000000972.
5. Woonhyeok J., Chae E. Y., Tai S. R., Jun H. K., Ju Hee L., Won J. L. Scar Prevention and Enhanced Wound Healing Induced by Polydeoxyribonucleotide in a Rat Incisional Wound-Healing Modelnt. J Mol Sci. 2017;18(8):1698. doi: 10.3390/ijms18081698
6. Wulff B. C., Parent A. E., Meleski M. A., DiPietro L. A., Schrementi M. E., Wilgus T. A. Mast cells contribute
to scar formation during fetal wound healing. J. Investig. Dermatol. 2012;132:458-65. doi: 10.1038/jid.2011.324.
7. Alekseeva N. T., Gluhov A. A. On the role of mast cells in wound healing. Vestnik jeksperimental'noj i klinicheskoj hirurgii. 2011; 4(4):864-70.
8. Zhukova O. V., Potekaev N. N., Sten'ko A. G., Burdina A. A. Pathogenesis and histomorphological features of cicatricial skin changes. Klinicheskaja dermatologija i venerologija. 2009;3(4):4-9.
9. Altavilla D., Bitto A., Polito F., Marini H., Minutoli L., Di Stefano V., Irrera N., Cattarini G., Squadrito F. Polydeoxyribonucleotide (PDRN): a safe approach to induce therapeutic angiogenesis in peripheral artery occlusive disease and in diabetic foot ulcers. Cardiovasc Hematol Agents Med Chem. 2009;7(4):313-21.
10. Bitto A., Polito F., Irrera N., D'Ascola A., Avenoso A., Nastasi G., Campo G., Micali A., Bagnato G., Minutoli L. Polydeoxyribonucleotide reduces cytokine production and the severity of collagen-induced arthritis by stimulation of adenosine A2A receptor. Arthritis Rheum. 2011;63:3364-3371. doi: 10.1002/art.30538.
11. Rork T. H., Wallace K. L., Kennedy D. P., Marshall M. A., Lankford A. R., Linden J. Adenosine A2Areceptor activation reduces infarct size in the isolated, perfused mouse heart by inhibiting resident cardiac mast cell degranulation. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2008;295:H1825-H1833. doi: 10.1152/ajpheart.495.2008.
12. Baranovskiy Yu. G., Ilchenko F. N., Shapovalova Ye. Yu. Method of modeling trophic ulcers in laboratory
mice in the experimental model. Vestnik neotlozhnoj i vosstanovitel'noj hirurgii. 2016;1(2):259-61. (in Russian)
13. Alekseeva N. T., Klochkova S. V., Nikitjuk D. B. Morphological characteristics of mast cells during skin regeneration. Orenburgskij medicinskij vestnik. 2016;6(3):13—16.
14. Speirman K. Endogenous suppression of mast cell development and survival by IL-4 and IL-10. J. Leukos. Biol. 2009;85(5):826-836.
15. Bitto A., Oteri G., Pisano M., Polito F., Irrera N., Minutoli L., Squadrito F., Altavilla D. Adenosine receptor stimulation by polynucleotides (PDRN) reduces inflammation in experimental periodontitis. J. Clin. Periodontol. 2013;40:26-32. doi: 10.1111/jcpe.12010.
16. Bykov V. L. Secretory mechanisms and secretory products of mast cells. Morfologija. 1999; 115(2):64-72.
17. Dovi J. V., He L. K., DiPietro L. A. Accelerated wound closure in neutrophil-depleted mice. J. Leukoc. Biol. 2003;73:448-455. doi: 10.1189/jlb.0802406.
18. Mjadelec O. D., Suhanov A. F. Interaction of tissue basophils and macrophages in the skin and lymph node of rats under the influence of general deep hypothermia. Kriobiologija. 1990;(4):19-22.
19. Shapovalova E. Ju., Bojko T. A., Baranovskij Ju. G., Vasilenko S. A. The content of mast cells in the structures of the ischemic model wound on the 12th day after stimulation of the regenerative potential by auto-and heterophyroblasts and dermal equivalent. Kubanskij nauchnyj medicinskij vestnik. 2017;24(5):96-102.
