ЦИТОСПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ РНК И ШИК-ПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ В МАКРОФАГАХ ЛЕГКИХ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ПЫЛИ МЕДНО-НИКЕЛЕВЫХ РУД Текст научной статьи по специальности «Промышленные биотехнологии»

УДК 616.24-003.66-07:616.24-008.9-092.18-074:543.42

Б. И. Якубов

ЦИТОСПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ РНК

И ШИК-ПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ В МАКРОФАГАХ ЛЕГКИХ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ПЫЛИ МЕДНО-НИКЕЛЕВЫХ РУД

Московский научно-исследовательский институт гигиены нм. Ф. Ф. Эрисмана

Последовательная микрофотометрия — сканирование дает возможность получить средние оптические плотности в сравниваемых гистологических срезах (контрольных и опытных) одинаковой толщины и обработанных в стандартных условиях. Одним из сканирующих приборов простой конструкции, позволяющим измерять оптическую плотность и размеры микрообъекта в 4 направлениях, является интегрирующий микроспектрофотометр конструкции Г. Г. Автандилова и соавт.

Мы не нашли в литературе описания количественного (цитоспектрофо-тометрического) изучения содержания в макрофагах легких нуклеиновых кислот и полисахаридов при воздействии промышленных аэрозолей. Между тем изучение изменения содержания этих веществ при гигиенической оценке патогенных свойств промышленных аэрозолей настоятельно требует объективного количественного учета их. Мы предприняли настоящую работу с целью количественного определения содержания РНК и ШИК-положи-тельных веществ в макрофагах легких после однократного интратрахеаль-ного введения 50 мг взвеси пыли 2 образцов медно-никелевых руд (№ 1 и 2) в сроки 5, 30, 90, 180 и 270 сут. По химическому составу руды отличались содержанием свободной и связанной двуокиси кремния и окислов металлов. Так, руда М° 1 содержала 7,1% свободной двуокиси кремния и 39,5% связанной, 11% окислов железа, 15,4% алюминия, 13,9% магния, 0,34% никеля и 0,48% меди. Соответственно руда № 2 содержала 3,6% свободной двуокиси кремния и 9,6% связанной, 34,3% окислов железа, 5,3% алюминия, 1,4% магния, 4% никеля и 15% меди.

Кусочки легких контрольных и подопытных животных фиксировали по методу В. Я- Бродского, заливали в парафин и монтировали в блоке. Срезы ткани легких толщиной 5—8 мкм получали при помощи синхронной резки и подвергали гистохимическим реакциям на выявление РНК по методу Браше и ШИК-положительных веществ по Шабадаш — Соррес — Хочкису.

Срезы цитофотометрировали на интегрирующем, сканирующем микроспектрофотометре. Методом избирательного сканирования макрофагов с фагоцитированными пылинками (по 16 в 1 препарате) и макрофагов без пыли (контроль) определяли оптическую плотность красителей в стандартно обработанных срезах. Цитоспектрофотометрию цитоплазмы макрофагов, окрашенных по Браше, проводили в монохроматическом луче света при длине волны 585 нм, с ШИК-реакцией — при 546 мк, величине зонда, проведенного в плоскости препарата, — 3 кв мк; время сканирования 10 с. Измерение проводили с 48 макрофагов с пылью (опыт) и с 48 макрофагов без пыли (контроль).

Сравнительный анализ содержания РНК в макрофагах легких при воздействии пыли руды № 1 и 2 позволил установить, что наименьшая концентрация их отмечена в 3-месячном эксперименте (90 сут) и составляла для пыли руды № 131±0,5 (контроль 55±1),адля пыли руды№2 26± 1,5 (контроль 34± 1,5). К 180-м суткам количество РН К в макрофагах под воздействием пыли руды № 1 резко возросло и стало наибольшим во всем эксперименте по сравнению с воздействием пыли руды № 2; в последнем случае оно постепенно увеличивалось и к 270-м суткам почти равнялось контролю, тогда как РНК в макрофагах при воздействии пыли № 1 к этому сроку резко уменьшилась. Наибольшее содержание ШИК-положительных веществ отмечено на

90-е сутки эксперимента при воздействии руды № 1 на макрофаги (269,0± ±3,5; контроль 491±11) и наименьшее — на 180-е сутки (172±4; контроль 419±7). Что касается содержания ШИК-положительных веществ в макрофагах при воздействии пыли руды № 2, то наибольшим оно было к концу 270-х суток, а наименьшим — к 10-м суткам эксперимента (153±55, контроль 346±5,5).

Содержание РНК и ШИК-положительных веществ в макрофагах при воздействии пыли медно-никелевой руды № 1 в 5-суточном эксперименте было почти одинаковым. К 30-м суткам количество РНК начало снижаться до 40±1,5 (контроль 57±2) и к 90-м суткам стало наименьшим (31±0,5; контроль 55±1), а количество ШИК-положительных веществ, наоборот к 30-м суткам увеличилось до 233±6 (контроль 369±7) и к 90-м суткам было наибольшим (269±8,5; контроль 491±7). К 180-м суткам количество РНК начало возрастать (53±4), а количество ШИК-положительных веществ снизилось до 172±4 (контроль 419±2). К 270-м суткам отмечалась обратная зависимость: содержание РНК снизилось до 45±1,5 (контроль 60±1,5), а количество ШИК-положительных веществ возросло до 206±9 (контроль 333±5). Содержание РНК и ШИК-положительных веществ в макрофагах при воздействии пыли медно-никелевой руды № 1 было значительно ниже (почти в 2 раза), чем при воздействии пыли руды № 2. Результаты динамических изменений содержания РНК и ШИК-положительных веществ в цитоплазме макрофагов указывают на нарушения белкового и углеводного обменов.

Выводы

1. Цитоспектрофотометрический метод как объективный критерий оценки функционального и патологического состояния клеток показал снижение содержания РНК и ШИК-положительных веществ в макрофагах легких от воздействия пыли 2 руд и особенно руды № 1.

2. Сравнительное количественное изучение содержания РНК и ШИК-положительных веществ в цитоплазме макрофагов может быть использовано при гигиенической оценке цитопатогенных свойств промышленных аэрозолей.

ЛИТЕРАТУРА. Автандилов Г. Г., Червоная Л. В. Сравнительное ми кроспектрсфотометрическое исследование содержания ДНК в клетках первичных очагов злокачественной меланомы и ее метастазов. — «Бюлл. экспер. биол.», 1973, № 4, с. 77—79.

Поступила 19/ХП 1974 г.

УДК 613.632.4+ 6Н.72Ы546.2Н+543.272.31-074

Д. А. Шустов, Л. А. Бакулина

УПРОЩЕННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОЗОНА И ДВУОКИСИ АЗОТА ПРИ СОВМЕСТНОМ ИХ ПРИСУТСТВИИ В ВОЗДУХЕ

Кафедра радиационной гигиены Центрального института усовершенствования врачей, Москва

Существует несколько методов определения озона и окислов азота при совместном их присутствии в воздухе. Каждый из них имеет свои преимущества, а также недостатки, к которым относятся сложность аппаратуры, малодоступность реактивов, необходимость высокой квалификации исполнителя и др. Мы предлагаем сравнительно простой метод определения озона и двуокиси азота при совместном их присутствии в воздухе, в значительной степени исключающий перечисленные выше недостатки. Чувствительность метода равна 10~в г/л, точность составляет ±10%. К ним относится: продолжительность опыта, усредненные значения и др.