CC BY
15«1нноваци в стоматологи», № 4, 2015 ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ТЕОРЕТИЧНИЙ РОЗД1Л
УДК 616.311:616.314.17-008.1-02.001.5:599.323.4
В. Н. Почтарь, к. мед. н., С. А. Шнайдер, д. мед. н., В. Е. Бреус
ЦИТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ СОСТОЯНИЯ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ РТА КРЫС ПОД ВЛИЯНИЕМ АНТАГОНИСТА ВИТАМИНА К
Государственное учреждение «Институт стоматологии Национальной Академии Медицинских Наук Украины»
Особенности изменений в слизистой оболочке щеки крыс под влиянием варфарина свидетельствуют о наличии реактивных изменений в эпителии и в подлежащей соединительной ткани. Так, коэффициент эрозии эпителиального пласта увеличивался в 6,4 раза по сравнению с интактной группой. Значительно снижалось количество митотически делящихся клеток. Показатели зоны клеточных слоев возрастали, в то время как размеры зоны рогового слоя существенно снижались. Рыхлая волокнистая соединительная ткань характеризовалась выраженной отечностью.
Ключевые слова: антагонист витамина К, варфарин, коэффициент эрозии эпителия, митотический индекс, рыхлая волокнистая соединительная ткань, белые крысы.
В. М. Почтар, С. А. Шнайдер, В. С. Бреус
Державна установа «1нститут стоматологи Нацюнально! Академп Медичних Наук Украши»
ЦИТОМОРФОЛОГ1ЧН1 ЗМ1НИ СТАНУ СЛИЗОВО1 ОБОЛОНКИ ПОРОЖНИНИ РОТА ЩУР1В П1Д ВПЛИВОМ АНТАГОН1СТУ В1ТАМ1НА К
Особливостi змт в слизовт оболонцi щоки щур1в тд впливом варфарину св1дчать про наявнгсть реактив-них змт в ептелИ та в сполучнт тканин власно! пластинки слизово! оболонки щоки. Так, коефщент ерози епiтелiального шару збыьшувався в 6,4 рази в порiвнянi з iнтактною групою. Значно знижувалась кшьюсть клтин, як мiтотично дшяться. Показники зони miтинних шарiв збшьшувались, в той час, як розмiри зони рогового шару значно знижувались. Пухка волокниста сполучна тканина характеризувалась суттевим вiдтiком.
Ключовi слова: антагонкт втамту К, варфарин, коефщент ерозп еттелт, мiтотичний тдекс, пухка сполучна тканина, бШ щури.
V. N. Pochtar, S. A. Shnaider, V. E. Breus
State Establishment "The Institute of Stomatology of the National academy of medical science of Ukraine"
THE CYTOMORPHOLOGIC CHANGES IN THE STATE OF ORAL MUCOUS MEMBRANE IN RATS UNDER THE INFLUENCE OF VITAMIN K ANTAGONIST
The aim of the investigation is the study of the cytomorphologic changes in epithelium and areolar tissue of the own plate of mucous membrane of rat's cheek under the influence of vitamin K antagonist - warfarin.
The materials and the methods. 13 white rats of Vistar line of herd breeding at the age of 1.5 months, kept to the standard diet of vivarium and divided into 2 series were taken for the experiment: the 1st group is an intact group (6 animals), the 2nd one (7) got warfarin per os dosed at 1 mg/kg of rat's weight each other day for 60 days.
The conclusion. The peculiarities of the changes in cheek mucous membrane of rats under the influence of warfarin speak of the reactive shifts in epithelium and underlying connective tissue. Thus, the coefficient of the erosion of the epithelium layer grew in comparison to the intact group, the number of mitotically dividing cells reduced considerably. The indices of the area of cellular layers increased, when the dimensions of the zone of horny layer decreased substantially. Areolar fibrous tissue was characterized by evident edema.
Key words: vitamin K antagonist, warfarin, coefficient of epithelial erosion, mitotic index, areolar fibrous tissue, white rats.
© Почтарь В. Н., Шнайдер С. А., Бреус В. Е., 2015.
Известно, что для нормального функционирования соединительной ткани (СТ) необходим витамин К, который повышает уровень коллагена, гексозаминосодержащих биополимеров (гли-козаминогликанов, гликопротеинов и др.) [1].
В условиях алиментарного К-авитаминоза у крыс наблюдается отек СТ, кожи, нарушение дифференцировки фибробластов, разрыхление коллагенов и эластиновых волокон [2]. Одновременно с этим резко снижается уровень гексо-заминосодержащих биополимеров в различных тканях. Нарушения в обмене гексозаминосодер-жащих полимеров, в свою очередь, может служить причиной тех отклонений в метаболизме коллагена и эластина, которые найдены при К-авитаминозе.
Цель исследования. Изучение цитоморфоло-гических изменений эпителия и рыхлой соединительной ткани собственной пластинки слизистой оболочки щеки крыс под влиянием антагониста витамина К - варфарина.
Материалы и методы. В опыт были взяты 13 белых крыс линии Вистар 1,5 мес. возраста стадного разведения, содержащихся на стандартном рационе вивария и распределенных в 2-х сериях: 1 - интактная группа (6 особей), 2 группа (7) получала per os варфарин (производства «Никомед Дания AnC», Дания) в дозе 1 мг /кг массы тела крыс через день в продолжении 60 дней. По завершению эксперимента крыс умерщвляли путем тотального кровопускания из сердца под тиопенталовым наркозом (40 мг/кг). Слизистую оболочку щеки (СОЩ) иссекали, фиксировали в формалине и заключали в парафин. Срезы толщиной 6-8 мкм (тонкие использовали для фотометрии) окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван Гизону и толуидиновым синим [3, 4]. Подсчет митозов эпителиоцитов проводили в базальном и шиповатых слоях слизистой оболочки щеки при увеличении 15^40. Митотический индекс (МИ) вычисляли, исходя из общего количества учтенных клеток (3000) и выражали в процентах. Двуядер-ные эпителиоциты определяли в шиповатом слое на ограниченной площади среза при таком же увеличении. Степень эрозирования эпителиального пласта учитывали с помощью шкалы микрометра при увеличении 8^20. Коэффициент эрозии эпителия (КЭЭ) вычисляли по соотношению протяженности: эпителий поврежденный / эпителий исследованный в усл. ед., что позволяло судить о высоте эпителия в целом. На зарисовках кровеносных сосудов микроциркулятор-ного русла (МЦР), выполненных при увеличении 15x40, точечным методом определяли удельную площадь стенки кровеносного сосуда с образующими ее клетками и удельную площадь его
просвета. По соотношению площадь стенки/площадь просвета рассчитывали коэффициент стеноза сосудов (КСС).
Результаты опытов обрабатывали статистическим методом с определением t критериев достоверности по Стьюденту.
Результаты исследования. В исследованиях оценивали состояние слизистой, подслизистой и частично мышечной оболочек щеки крыс. Слизистая оболочка щеки интактных животных имеет характерное строение. Снаружи ее покрывает многослойный плоский ороговевающий эпителий, достаточно четко видны отдельные слои клеток. Базальный слой эпителия представлен высокими цилиндрическими клетками. Ядра его клеток относительно светлые и имеют четко выраженные признаки белкового синтеза, о чем свидетельствовал характерный рисунок эухрома-тина и хорошо выраженные ядрышки. Часть клеток базального слоя находилась в состоянии деления, о чем свидетельствовали фигуры митоза, наблюдаемые в этих клетках. Шиповатый слой содержал клетки полигональной формы, имеющие крупные и относительно светлые ядра. Встречались полиплоидные клетки, содержащие обычно по два ядра примерно одинакового размера и внутреннего строения. Цитоплазма клеток чаще однородная и слабо базофильная. По мере удаления от базального слоя клетки шиповатого слоя вытягивались вдоль эпителиального пласта. Ядра таких клеток вытянутой формы и более плотные. В шиповатом слое делящиеся клетки встречались реже, чем в базальном слое. Чем ближе к роговому слою, тем чаще цитоплазма клеток становилась зернистой: выявлялись базо-фильные гранулы кератогиалина. Зернистый слой имел небольшую и относительно неравномерную толщину, переходя в роговой слой, где отмечалось наличие многочисленных, относительно плохо спрессованных роговых чешуек. Роговой слой наиболее неравномерен по толщине вдоль эпителиального пласта и достаточно плотно прилегает к клеточным слоям эпителия. Встречались участки небольших расслоений рогового слоя, изредка наблюдались небольшие зоны разрушения наружной поверхности этого слоя, но подобные картины встречались сравнительно редко, что подтвердили небольшие показатели КЭЭ: 0,05±0,02 усл.ед (табл. 1).
Состояние эпителия во многом зависит от расположенной под ним рыхлой волокнистой СТ. Ткань собственной пластинки СОЩ представлена рыхлой сетью коллагеновых волокон, которые не имели видимых различий по окраске и толщине. Между волокнами расположены клеточные элементы и мелкие кровеносные сосуды. Среди клеток преобладали фибробласты и фиб-
роциты. Местами отмечались небольшие скопления лимфоцитов. Кровеносные сосуды были умерено расширены, стенки клеток не имели видимых признаков набухания. Периваскулярный отек внешне выражен не был. Подобную картину
с признаками более рыхлой структуры (более редкая сеть волокон, меньшее количество клеточных элементов) имела СТ подслизистой оболочки, а также межмышечные прослойки в мышечной оболочке.
Таблица 1
Морфометрические показатели состояния эпителия слизистой оболочки щеки крыс
под влиянием варфарина(М±т; р)
Группы животных КЭЭ (усл.ед.) МИ, (%) Количество двуядерных клеток, (%)
Интактная 0,05±0,02 1,9±0,02 12,2±0,8
Варфрин 0,32±0,08 1,1±0,03 24,2±1,2
р=0,02 р<0,001 р=0,001
Примечание . В табл. 1 -2 показатель достоверности р рассчитан относительно интактной группы.
Под влиянием анатагониста витамина К -варфарина были отмечены особенности морфологической картины СОЩ. Отмечалась неоднородность структуры эпителия в его разных участках. В одних местах вдоль пласта эпителия картина отдельных его слоев внешне соответствовала описанным ранее в интактной группе, а в других - отмечались изменения. Обращали на себя внимание часто встречающиеся участки с расслоением эпителиальных слоев (в большей степени в зоне ороговения) и большие зоны разрушений поверхностных эпителиальных слоев. Закономерным подтверждением этого служил достоверный рост величины КЭЭ: 0,32±0,08 усл.ед. (р=0,02; табл. 1) по сравнению с интакт-
ной группой. Клетки эпителия выглядели менее однородными в пределах соответствующих слоев. Контуры клеток, структура их цитоплазмы и ядер выглядели размытыми. Сами клетки во всех слоях различались по размеру и форме. Особенно это было характерно для слоя шиповатых клеток. Часть клеток имели набухшие ядра и начальные признаки белковой и вакуолярной дистрофии: помутнение структуры цитоплазмы, её ячеистый характер, уплотнение и деформация контуров ядер. Делящиеся клетки встречались реже, чем в интактной группе. Местами наблюдались участки неплотного прилегания клеток друг к другу, что характерно для развития локального перицеллюлярного отека.
Таблица 2
Выраженность зоны клеточных слоев (ЗКС) и зоны рогового слоя (ЗРС) в эпителии слизистой оболочки щеки крыс под влиянием варфарина (М±т; р)
Группы животных ЗКС (%) ЗРС (%)
Интактная 36,5±1,2 19,5±0,5
Варфарин 42,2±1,6 р=0,03 12,3±0,8 р<0,001
Таблица 3
Коэффициент стеноза сосудов микроциркуляторного русла слизистой оболочки щеки крыс под
влиянием варфарина (М±т)
Группы животных КСС (усл.ед.)
Интактная 3,1±0,29
Варфарин 3,3±0,39
Проведенные морфометрические исследования состояния эпителия СОЩ под действием варфарина свидетельствовали о следующем. МИ снижался на 42 % (р<0,001; табл. 2) по сравнению с интактной группой. Одновременно с этим, только в большей степени (на 98 %) увеличивалось количество полиплоидных клеток (р=0,03).
Отмечалось увеличение показателя размера зоны клеточных слоев (ЗКС), который возрастал на 16% (р=0,03; табл. 2). Возможно, полученный факт является результатом противоположно направленных изменений - снижения числа делящихся клеток на фоне увеличения количества крупных двуядерных клеток и клеток с проявле-
ниями вакуолярной дистрофии, которые несколько крупнее других. В то же время, показатель размера зоны ороговения (ЗРС) значительно снижался (на 37 %, р<0,001) по сравнению с ин-тактной группой (табл. 2).
Коллагеновые волокна в рыхлой волокнистой СТ несколько утолщены, образуют четко выраженную сеть, в ячейках которой расположены клеточные элементы. Кроме типичных клеток фибробластического ряда чаще, чем в интактной группе, встречались преимущество лимфоциты. Большинство клеток встречались рядом с кровеносными сосудами. Стенки кровеносных сосудов МЦР утолщены в основном за счет набухания присутствующих здесь клеток и волокон. В то же время, морфометрические показатели КСС мик-роциркуляторного русла СОЩ свидетельствуют о его незначительном увеличении, что может рассматриваться как тенденция: 3,3±0,39 усл.ед против 3,1±0,29 усл.ед в интактной группе (табл. 3). Просвет сосудов внешне выглядел суженным. Подобную картину имела и СТ подслизистой и прослойки СТ в мышечной оболочке.
Заключение. Суммируя вышеизложенное, следует констатировать неоднородность и расслоение структуры эпителия СОЩ под действием варфарина. Так, коэффициент эрозии эпите-
лиального пласта увеличивался в 6,4 раза по сравнению с интактной группой. Значительно снижалось количество митотически делящихся клеток. Показатели зоны клеточных слоев под действием варфарина возрастали за счет появления клеток более крупных размеров, в то время как размеры зоны ороговения существенно снижались. Рыхлая волокнистая СТ характеризовалась выраженной отечностью. Отмеченные особенности изменений в слизистой оболочке щеки крыс под влиянием варфарина свидетельствуют о наличии реактивных изменений в эпителии и в подлежащей соединительной ткани.
Список литературы
1. Сокольников А. А. Функциональная роль витамина К / А.Сокольников, В. Коденцова // Вопросы медицинской химии. - 1999. - Т. 45. - С. 453-461.
2. Шараев П. Н. Роль витамина К в обмене биополимеров соединительной ткани (обзор) / П. Н. Шараев // Вопросы медицинской химии. - 1983. - № 1. - С. 13-17.
3. Меркулов Г. А. Курс патологической техники / Меркулов Г.А. - Л.: - 1969. - 423 с.
4. Яцковский А. Н. Оценка активности клеточных ядер / А. Н. Яцковский. // Архив АГЭ. - 1987. - № 1. - С.76-79.
Поступила 02.11.15
УДК 577.15.016+616.31:599.323
С. А. Шнайдер, д. мед. н.
Государственное учреждение «Институт стоматологии Национальной Академии Медицинских Наук Украины»
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ РТА КРЫС ПОД ВЛИЯНИЕМ ЭЛЛАГОТАНИНОВ ПРИ ДЕЙСТВИИ ПАТОГЕННЫХ ФАКТОРОВ
В опытах на 21 белой крысе линии Вистар стадного разведения изучена коррекция альтаном структурно -функциональных нарушений в слизистой оболочке полости рта крыс в условиях сочетанного действия лекарственного ксенобиотика делагила и хронического эмоционально-болевого стресса при алиментарной недостаточности пищевых полифенолов. Альтан вызвал снижение количества эрозий, очагов деструкции, нормализацию структуры эпителиоцитов.
Ключевые слова: морфологические исследования, слизистая оболочка щеки, эллаготанины, патогенные факторы, белые крысы.
© Шнайдер С. А., 2015.
