CC BY
15
V Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием Санкт-Петербург «ГЕНЕТИКА ОПУХОЛЕЙ КРОВЕТВОРНОЙ СИСТЕМЫ -26-27 апреля 2019 г._ОТ ДИАГНОСТИКИ К ТЕРАПИИ»
А. О. Абдуллаев, Е. А. Степанова, О. А. Шухов, Е. Ю. Челышева, И. С. Немченко, А. Г. Туркина, А. Б. Судариков
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский медицинский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
НОВЫЕ МУТАЦИИ КИНАЗНОГО ДОМЕНА BCR-ABL1 У ПАЦИЕНТОВ, РЕЗИСТЕНТНЫХ КО ВСЕМ ПОКОЛЕНИЯМ ПРЕПАРАТОВ ИТК
Введение. Появление ингибиторов тиро-зинкиназ (ИТК) проложило путь эпохе таргет-ной терапии хронического миелолейкоза и Ph+ (Philadelphia positive) острого лимфобластного лейкоза (ОЛЛ). Гливек (STI-571, Glivec) стал первым таргетным препаратом ИТК с высокой ингибирующий эффективностью Bcr-Abl1 ти-розинкиназы. Однако у части пациентов со временем наблюдалась потеря терапевтического эффекта, обусловленная появлением клона клеток с мутацией КД (киназного домена) гена BCR-ABL1. Исследование молекулярных механизмов резистентности к Гливеку привело к разработке высокоэффективных препаратов ИТК, таких как Дазатиниб, Нилотиниб, Бозути-ниб и Понатиниб. Тем не менее, многолетний клинический опыт применения различных поколений ИТК показал неограниченную изобретательность природы — таргетное подавление одного клона приводит к появлению новых клонов с ранее не описанными мутациями.
Цель. Поиск новых мутаций КД BCR-ABL1 у пациентов ХМЛ и Ph+ ОЛЛ, резистентных к препаратам ИТК нескольких поколений.
Материалы и методы. Для молекулярно-генетического анализа использованы образцы
мРНК выделенные из клеток крови и костного мозга 52 пациентов ХМЛ и 12 пациентов с Ph+ ОЛЛ. Обратная транскрипция проводилась с использованием набора реагентов «РЕВЕРТА-L», по инструкции изготовителя («Интерлабсервис», Россия). В первом раунде амплифицировали участок кДНК BCR-ABL1 включающий 13 экзон BCR и 11 экзон ABL1. Во втором раунде получали фрагмент длиной 731 пн., включающий 4-8 экзоны ABL1. Амплификацию необходимого фрагмента, очистку и прямое секвенирование по Сэнгеру проводили с использованием набора реагентов компании «Синтол» (Россия) согласно инструкции производителя.
Результаты. Среди исследованных пациентов, резистентных к нескольким поколениям препаратов ИТК, были выявлены две новые мутации BCR-ABL1. del. c.1086-1270 (p. R362fs*21) c p. E282Q и BCR-BL. c908_1085del. (p. G303fs*26).
Выводы. Мутации BCR-ABL1. del. c.1086-1270 (p. R362fs*21) c p. E282Q и BCR-BL. c908_1085del. (p. G303fs*26) у пациентов ХМЛ и Ph+ ОЛЛ могут быть причиной резистентности к препаратам ИТК нескольких поколений.
Т. В. Абрамова, Т. Н. Обухова, Л. П. Менделеева, Е. О. Грибанова, М. В. Соловьев, М. В. Фирсова, С. М. Куликов, Ю. А. Чабаева, И. В. Гальцева, В. Г. Савченко
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский медицинский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ У БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОИ
Введение. Множественная миелома (ММ) имеет сложную генетическую структуру. Многочисленные зарубежные исследования по изучению ММ демонстрируют важность результатов цитогенетического исследования для определения прогноза заболевания. Одним из ключевых вопросов в этой области является влияние хромосомных нарушений на клиническое течение заболевания и результаты лечения.
Цель. Изучить спектр и частоту встречаемости хромосомных аберраций у больных ММ, корреляцию клинико-лабораторных параметров с цитогенетическими нарушениями, а также клинические особенности течения ММ в зависимости от наличия цитогенетических нарушений.
Материалы и методы. В исследование включены 134 пациента с ММ (соотношение муж.: жен.— 67:67) в возрасте от 27 до 80 (медиана
VВсероссийская научно-практическая конференция с международным участием «ГЕНЕТИКА ОПУХОЛЕЙ КРОВЕТВОРНОЙ СИСТЕМЫ -ОТ ДИАГНОСТИКИ К ТЕРАПИИ»
57) лет. Диагноз был установлен в соответствии с критериями IMWG (2014 г.). До начала терапии больным выполнено FISH-исследование с центромерными и локус-специфичными ДНК-зондами для выявления t(11;14), t(4;14), t(14;16), t(14;20), (6;14), гипердиплоидии (три-сомий 5,9,15), делеции 13q14/моносомии 13 (del13q14/-13), делеции 17р13/ТР53 (del17p13/ ТР53), амплификации 1q21 (amp1q21), транслокаций с вовлечением локуса гена сMYC/8q24 (t(8q24)/cMYC). Медиана наблюдения за больными составила 20 мес (3,2-77,4). Согласно системе D-S: I стадия — у 8 (6 %), II — у 41 (30,6 %), III — у 85 (63,4 %) больных. У 41 (30,6 %) больного диагностирована подстадия B. Секреция парапротеина G выявлена у 70 (52,3 %), па-рапротеина А — у 25 (18,7 %), биклональная секреция — у 3 (2,2 %), М-протеин — у 1 (0,7 %) пациента. Секреция свободных легких цепей определена у 34 (25,4 %) больных. Несекре-тирующая миелома диагностирована у 1 пациента (0,7 %). По шкале ISS: I стадия — у 27 (20,1 %), II — у 38 (28,4 %), III — у 68 (50,8 %) больных, у 1-го (0,7 %) нет данных. Повышение концентрации кальция более 2,75 ммоль/л отмечалось у 29 (21,6 %); активности ЛДГ относительно нормальных значений (более 378 Е/л) — у 58 (43,3 %); повышение концентрации ß2-микроглобулина (ß2-MT) свыше 5,5 мг/л — у 68 (50,8 %); анемия с уровнем гемоглобина ниже 100 г/л — у 56 (41,8%) пациентов. Индукционная терапия выполнялась бортезомиб-со-держащими курсами. Количество индукционных курсов составляло от 4 до 10 (медиана 8). Трансплантация аутологичных гемопоэтиче-ских стволовых клеток (ауто-ТГСК) выполнена 37,3 % пациентам (n = 50).
Результаты. В дебюте ММ частота первичных хромосомных нарушений составила 88,8 %, среди них t(14q32)/IGH — 42,5 %, множественные трисомии — 57,5 %, их сочетание — 11,2 %, t(11;14) — 16,4 %, t(4;14) — 12,7 %, t(14;16) и t(14;20) — 3,7 % и 2,2 %, соответственно. Частота вторичных хромосомных нарушений составила 69,4 %, среди них del13q14/-13-40,3 %, amp1q21-39,6 % (в 32 случаях (60,4 %) выявлена 1 дополнительная копия локуса 1q21, в 21 (39,6 %) — 2 и более дополнительные копии
Санкт-Петербург 26-27 апреля 2019 г.
^21), t(8q24)/сMYC — 17,2 %, ае117р13/ТР53-12,7 %, ёе11р32-2,2 %. Анализ сочетания первичных и вторичных хромосомных нарушений достоверно доказал (р < 0,05), что вторичная аберрация de113q14/-13 чаще отмечена в сочетании с первичной ^4;14) и реже — с множественными трисомиями. Вторичная аберрация ашр^21 чаще обнаружена одновременно с ^4;14) и реже — с ^11;14) (р < 0,05). Выявлено, что у больных с ^4;14) достоверно чаще (р < 0,05) диагностировали анемию ниже 100 г/л, а при наличии ашр^21 и de117p13/ ТР53 — повышенную активность ЛДГ. Аберрация t(8q24)/cMYC чаще сопровождалась повышенной концентрацией Р2-МГ (р<0,05).
Показано, что наличие резистентности опухоли к бортезомиб-содержащей терапии ассоциировано с t(8q24)/cMYC (р <.0001). Доказано негативное влияние de117p13/TP53 и t(8q24)/cMYC на показатели общей выживаемости (ОВ) больных ММ. Так, 3-х летняя ОВ при наличии de117p13/TP53 составила 35,5 % против 71,3 % без неё (р = 0,002), а при наличии t(8q24)/cMYC — 50,8 % против 67 % без неё (р = 0,001). Установлено неблагоприятное влияние ашр^21 при наличии двух и более дополнительных копий локуса ^21 (р < 0,05) на ОВ и выживаемости без прогрессии (ВБП). Так, у больных без ашр^21, с одной дополнительной копией ^21 или с двумя и более дополнительными копиями ^21 5-летняя ОВ составила 79,4 %, 67,3 %, 20,9 %, соответственно, а 2-х летняя ВБП — 83 %, 50 % и 0 %, соответственно. Выполнение ауто-ТГСК повышает показатели ОВ больных ММ, однако не нивелирует неблагоприятное влияние de117p13/ ТР53, t(8q24)/cMYc и ашр^21 с двумя и более дополнительными копиями локуса ^21.
Выводы. Наличие резистентности к терапии бортезомиб-содержащими курсами ассоциировано с t(8q24)/cMYC. De117p13/TP53, ^24)/ еМУС и ашр^21 при наличии двух и более дополнительных копий локуса ^21 достоверно влияют на ОВ больных ММ. Лшр^21 при наличии двух и более дополнительных копий локуса ^21 в дебюте заболевания является прогностически значимой для больных ММ, отрицательно влияя на ВБП.
