CC BY
93
Экспериментальная биология и медицина УДК 612.112.94:575:615.28]:616-092.9
ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ЛИМФОЦИТАХ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ
КРОЛИКОВ ПРИ ПОЛИХИМИОТЕРАПИИ
© Иванов В.П., Барков А.Н., Трубникова Е.В., Стабровская Н.В.
Кафедра биологии, медицинской генетики и экологии Курского государственного медицинского университета, Курск; кафедра зоологии и теории эволюции Курского государственного университета, Курск; Научно-исследовательская лаборатория ”Г енетика”
Курского государственного университета, Курск E-mail: main@kgmu.kursknet.ru
Представлены данные исследований уровня экспрессии рибосомных генов в интерфазных ядрах популяций лимфоцитов периферической крови кроликов, выявлены закономерности их изменения при прохождении двух курсов полихимиотерапии, аналогичных таковым у больных злокачественными лимфомами. Определяли следующие показатели функциональной активности рибосомных генов: площадь ядра, количество окрашенных ядрышек, их площадь и ее процентное отношение к площади ядер клеток. По указанным параметрам были выявлены значительные изменения, отразившие индивидуальную реакцию клеточных популяций организмов животных на воздействие противоопухолевых препаратов: преднизолона, винкри-стина, доксорубицина и циклофосфана. После прохождения животными первого курса полихимиотерапии наблюдалось индивидуальное увеличение площади ядер, количества ядрышек и их площади, после второго курса произошел возврат вышеперечисленных показателей до исходного уровня.
Ключевые слова: функциональная активность рибосомных генов, лимфоциты периферической крови, полихимиотерапия.
CYTOGENETIC EFFECTS IN LYMPHOCYTES OF PERIPHERAL BLOOD OF RABBITS AFTER CHEMOTHERAPY Ivanov V.P., Barkov A.N., Trubnikova E.V., Stabrovskaya N.V.
Department of Biology, Medical Genetics and Ecology of the Kursk State Medical University, Kursk Department of Zoology and Evolution Theory of the Kursk State University, Kursk Laboratory for Genetics Research of the Kursk State University, Kursk The research data of the level of ribosomal genes expression in the interphase nuclei in the lymphocytes population in peripheral blood of rabbits, and their changes after two courses of polychemotherapy, similar to the ones taken by patients with lymphoma are presented. The following parameters of functional activity of ribosomal genes were defined: nuclei area, the quantity of stained nucleoli, their area, and its percentage to the area of cell nuclei. According to the indicated parameters, the significant changes were found, which reflected the individual reaction of cell population of animal organisms to the effect of the antineoplastic drugs, such as prednisolon, vincristin, doxorubicin and cyclophosphan. After the first course of polychemotherapy there was the individual increase of the nuclei area, the quantity of nucleoli, and their area observed; after the second course there was the return of the parameters mentioned above to the initial level.
Key words: functional activity of ribosomal genes, lymphocytes of peripheral blood, polychemotherapy.
Развитие молекулярной генетики открывает новые возможности оценки работы целого генома - в перспективе изучения и понимания различных аспектов работы кластеров рибосомных генов. Рядом исследований последних лет по изменчивости функциональной активности рибосомных генов (ФАРГ) человека [1, 16] обнаружено, что активность рибосомных цистронов является важным интегральным маркером функцио-
нального состояния клеток [8, 13], который может быть использован для решения многих теоретических и практических задач цитологии и медицины [2].
На сегодняшний день известны данные по работе генома не только человека, но и животных, связанные с функциональной активностью рибосомных генов в лимфоцитах периферической крови у разных видов млекопитающих [15]. К примеру, достаточно хо-
рошо изучены особенности строения и работы кластеров рибосомных генов у копытных
[5], грызунов [10] и др. Согласно имеющимся данным, не вызывает сомнений схожесть функционирования рибосомных генов человека и других представителей класса Млекопитающие как в зависимости от общего функционального состояния клеток, так и при воздействии разного рода экзогенных факторов [17, 18].
Ранее нами были проведены исследования по оценке изменчивости показателей функциональной активности рибосомных генов в популяциях лимфоцитов периферической крови у больных злокачественными лимфо-мами (ЗЛ) при прохождении ими курсов полихимиотерапии (ПХТ) после поступления на учёт в Курский областной онкологический диспансер.
В ходе наших исследований мы столкнулись с неизвестным ранее явлением. Показатели ФАРГ у больных при первом поступлении абсолютно не связаны с показателями ФАРГ у этих же больных после первого курса ПХТ и так же не были взаимосвязаны с ФАРГ этих же больных после второго курса ПХТ.
Выявленные результаты независимого характера проявления ФАРГ клеточных популяций, по нашему мнению, являются следствием сугубо индивидуальной реакции организмов больных ЗЛ на ПХТ. Так как показатели ФАРГ есть признаки менделирующие, то можно говорить о том, что степень фенотипического проявления менделирующего признака при пролонгированном воздействии экзогенных факторов может колебаться в зависимости от индивидуальных особенностей реагирования организма; таким образом, на основании проведенных исследований можно утверждать о наличии индивидуальных особенностей реализации механизмов регуляции ФАРГ.
Необходимость дальнейшей проверки полученных результатов, а также факт наличия общих закономерностей в изменении параметров функциональной активности рибо-сомных генов человека и других представителей класса Млекопитающие послужили основой для проведения настоящего исследования.
Цель исследования - изучить цитогенетические эффекты в лимфоцитах периферической крови отдельных представителей класса Млекопитающие и выявить закономерности их протекания при прохождении курсов полихимиотерапии, аналогичных таковым у больных злокачественными лимфомами.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В качестве модели для исследования индивидуальной реакции рибосомных генов на экзогенные химические факторы послужили беспородные кролики. Экспериментальные животные подвергались двум курсам стандартной полихимиотерапии для больных ЗЛ по схеме СНОР, вводя в организм комплекс из четырёх лекарственных препаратов: цик-лофосфан (ОАО "Биохимик", Россия) - подкожно однократно, доксорубицин (TEVA Pharmaceutical Industries Ltd., The Netherlands) и винкристин (ЗАО "Верофарм", Россия) внутривенно однократно, преднизолон (ОАО "Химико-фармацевтический комбинат "АКРИХИН" , Россия) при помощи катетера два раза в день в течение пяти дней.
Пересчёт концентраций вводимых препаратов для организма кролика проводился с использованием специальных коэффициентов межвидового пересчёта доз фармакологических веществ [15].
Таблица 1
Схема полихимиотерапии, используемой в эксперименте
№ Препараты Дозировка
1 Циклофосфан 63,3 мг/кг 1-й день
2 Доксорубицин 4,2 мг/кг 1-й день
3 Винкристин 0,12 мг/кг 1-й день
4 Преднизолон 5,04 мг/кг 1 -5-й дни
Цикл возобновляется через 4 недели
Забор крови у животных производился непосредственно перед проведением ПХТ (для получения контрольных результатов) и спустя месяц после каждого курса ПХТ. Кровь затем выращивалась на искусственной питательной среде в течение трёх суток.
Выявление ядрышкообразующих районов рибосомных генов проводили с помощью метода Ag-окраски, предложенного Howell и Black, с некоторыми модификациями [4]. Об уровне генной экспрессии судили по интенсивности выпадения зёрен восстановленного серебра в районах ядрышковых организаторов.
Анализ функциональной активности ри-босомных генов проводили на цитогенетических препаратах лимфоцитов периферической крови. Выделение клеточных ядер проводилось с использованием полумикромето-да. Анализ окрашенных препаратов проводили на световом микроскопе с помощью цифровой системы-анализатора изображений и программы Image Scope. Определяли следующие показатели функциональной активности рибосомных генов: площадь ядра, количество окрашенных ядрышек, их площадь. Затем рассчитывали суммарную площадь окрашенных ядрышек и её процентное отношение к площади ядра лимфоцита периферической крови. Отдельно проводили подсчёт окрашенных ядрышек.
Всего от каждого животного было проанализировано по 40 интерфазных ядер в каждом заборе анализируемой крови.
Статистический анализ сформированного банка данных проводился на ПК с использованием пакета прикладных программ STA-TISTICA фирмы StatSoft Inc. (США), версия 6.0 [14]. Обработка данных осуществлялась по стандартным методикам вариационной статистики [19, 21]. Сравнительный анализ средних значений показателей ФАРГ проводили с использованием параметрического критерия Стьюдента при уровне значимости p<0,05. При анализе дисперсии изучаемых показателей ФАРГ мы использовали параметрический критерий Фишера при уровне значимости p<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
По сравнению с контрольными значениями все четыре показателя функциональной
активности рибосомных генов интерфазных ядер претерпели значительные изменения, отразившие индивидуальную реакцию организма животного на экзогенное воздействие химической природы (табл. 2, 3).
Изменение количества ядрышек
Изменение данного параметра ФАРГ при влиянии ксенобиотиков носило следующий характер.
После прохождении животными первого курса полихимиотерапии у четырех из шести кроликов количество ядрышек уменьшилось, причем у двух из них изменения носили статистически достоверный характер (кролики 1,
2, 3, 5). После прохождения второго курса ПХТ у данных животных произошло увеличение количества ядрышек до исходного уровня (кролики 1, 3, 5), тогда как у кролика 2 количество ядрышек даже статистически достоверно превысило первоначальные значения. У остальных животных после первого курса ПХТ количество ядрышек увеличивалось (кролики 4 и 6), но данные изменения статистически достоверными не являлись; после второго курса ПХТ количество ядрышек в интерфазных ядрах лимфоцитов также продолжало увеличиваться, значительно превысив контрольные показания.
Изменение суммарной площади ядрышек
Показатель суммарной площади ядрышек является важным маркером ФАРГ в интерфазных ядрах. Чем он больше, тем интенсивней происходит уровень транскрипции рибо-сомных генов и, следовательно, тем интенсивнее осуществляется работа белоксинтези-рующего аппарата клетки [20, 22].
Основная выявленная нами тенденция в изменении суммарной площади ядрышек лимфоцитов кроликов заключается в следующем. У большинства животных после прохождения ими первого курса полихимиотер-пии наблюдалось увеличение данного показателя (кролики 2, 3, 4, 5, 6), причем у кроликов
3, 4 и 5 изменения были очень существенны
(коэффициенты Стьюдента 3,05, 2,83 и 7,32). Лишь у одного экспериментального животного изменений по данному показателю не произошло (кролик 1). Далее, после прохождения животными второго курса ПХТ, основная тенденция в изменении площади ядрышек заключалась в ее уменьшении: у
Таблица 2
Показатели функциональной активности рибосомных генов лимфоцитов кроликов при прохождении курсов полихимиотерапии
Животные Показатели ФАРГ Контрольные значения (I) После 1-го курса ПХТ (II) После 2-го курса ПХТ (III)
Х±8х с 2 Х±8х с2 Х±8х с2
Кролик № 1 1 2,86±0,17 0,92 1,62±0,15 0,82 2,76±0,23 1,24
2 1300,52±115,92 624,27 1317,77±136,81 736,76 1160,28±106,25 572,16
3 12562,07±751,03 4044,43 13317,93±998,62 5377,72 10385,17±587,33 3162,91
4 10,07±0,47 2,54 10,06±0,76 4,11 11,14±0,76 4,07
Кролик № 2 1 2,09±0,18 1,03 1,88±0,16 3,59 2,68±0,18 1,09
2 1576,17±156,32 911,52 1874,92±118,85 693,00 1342,59±90,96 530,37
3 15495,88±937,79 5468,22 12880,88±692,47 4037,78 14095,00±840,97 4903,64
4 10,01±0,70 4,06 14,76±0,62 3,59 9,65±0,47 2,76
Кролик № 3 1 1,97±0,17 0,93 1,88±0,17 0,94 1,63±0,13 0,71
2 1152,32±66,45 375,91 1343,91±134,74 762,18 819,63±109,05 616,86
3 10207,81±453,64 2566,17 13380,94±997,81 6357,25 9916,88±905,83 5124,16
4 11,44±0,53 3,03 10,85±1,12 6,32 8,42±0,73 4,14
Кролик № 4 1 1,58±0,12 0,75 1,65±0,11 0,7 2,13±0,14 0,88
2 732,40±78,54 496,74 1069,43±89,66 567,06 1835,40±178,22 1127,18
3 12621,50±989,58 6258,62 12793,75±995,01 6292,98 12875,25±587,68 3716,80
4 6,39±0,70 4,45 9,02±0,65 4,14 13,83±0,97 6,12
Кролик № 5 1 2,03±0,17 0,97 1,88±0,17 1,01 2,41±0,22 1,26
2 1240,53±93,39 544,53 2639,32±183,54 1070,23 1459,32±112,58 656,46
3 12274,71±667,22 3890,53 16560,00±999,05 6315,23 12034,12±579,99 3381,91
4 10,25±0,62 3,61 17,37±1,33 7,75 12,06±0,75 4,35
Кролик № 6 1 1,68±0,11 0,69 1,85±0,13 0,83 2,40±0,16 1,01
2 1190,92±79,14 500,51 1371,39±114,45 723,85 1402,21±121,57 768,87
3 11150,25±554,47 3506,79 15110,25±942,75 5962,49 12109,50±680,99 4306,93
4 10,81±0,61 3,85 9,32±0,59 3,70 11,52±0,80 5,05
Примечание: 1 - количество ядрышек; 2 - суммарная площадь ядрышек; 3 - площадь ядра; 4 - процентное отношение суммарной площади ядрышек к площади ядра.
Таблица 3
Результаты сравнительного анализа по курсам полихимиотерапии
Животные Показатели ФАРГ 1 Б
1-11 1-Ш п-ш 1-11 1-Ш П-Ш
Кролик № 1 1 6,62* 0,26 4,75* 1,26 2,03 2,56*
2 0,40 0,11 0,48 1,22 1,16 1,42
3 1,31* 1,71 2,63* 0,09 1,54 2,68*
4 0,02 1,96 1,71 1,86 2,04 1,10
Кролик № 2 1 1,19 2,11* 3,31* 1,25 1,32 1,64
2 1,99* 0,20 1,45 1,51 1,71 2,60
3 2,35* 1,17 1,15 2,02* 1,27 1,59
4 5,87* 1,06 3,25* 3,72* 1,03 2,77*
Кролик № 3 1 0,00 1,41 1,38 1,06 1,62 1,73
2 1,41 3,05* 3,21* 4,20 3,05* 1,61
3 3,17* 0,33 2,68* 5,97* 4,18 1,42
4 0,78 3,87* 1,89 4,38 2,02* 2,18
Кролик № 4 1 0,46 3,01* 2,67* 1,14 1,40 1,59
2 2,83* 5,66* 3,84* 1,30 5,14* 3,95*
3 0,12 0,22 0,07 1,01 2,84 2,87
4 2,74* 6,22* 4,12* 1,16 1,90* 2,19*
Кролик № 5 1 1,43 1,07 2,34* 1,10 1,46 1,6*
2 7,32* 1,36 5,73* 2,96* 1,23 2,41*
3 3,53* 0,30 3,61* 2,56* 1,21 3,08*
4 5,38* 1,81 3,74* 3,86 1,27 3,04*
Кролик № 6 1 1,02 3,75* 2,66* 1,44 2,11* 0,24
2 1,30 1,46 0,18 2,09 2,36 1,13
3 3,62* 1,09 2,58* 2,89* 1,51 1,92*
4 1,77 0,71 2,22* 1,08 1,72 1,86*
Примечание: 1 - количество ядрышек; 2 - суммарная площадь ядрышек; 3 - площадь ядра; 4 - процентное отношение суммарной площади ядрышек к площади ядра; * - статистически достоверные различия, при р<0,05.
двух животных до первоначальных значений (кролики 2, 5, коэффициенты Стьюдента 0,2,
1,36 соответственно) и до значений существенно ниже первоначальных (кролик 3, коэффициент Стьюдента 3,05). У кроликов 4 и 6 в данном случае произошло дальнейшее увеличение площади ядрышек: с 1069,43 до 1835,40 мкм2 и с 1371,39 до 1402,21 мкм2 соответственно.
Отличительными показаниями площади ядрышек явились значения их у кролика 1, которые после прохождения обоих курсов полихимиотерапии не претерпели статистически достоверных изменений.
Изменения площади ядер
Основная тенденция в изменении данного показателя наблюдалась нами у кроликов 1,
3, 5 и 6. Она заключается в увеличении площади ядер после прохождения первого курса ПХТ и уменьшении после прохождения второго курса. У всех отмеченных животных после всех двух этапов эксперимента изменения носили статистически достоверный характер (коэффициенты Стьюдента составили после первого этапа 1,31, 3,17, 3,53 и 3,62 соответственно и после второго этапа 2,63, 2,68, 3,61 и 2,58 соответственно).
Отличительная индивидуальная реакция на воздействие ксенобиотиков по данному показателю наблюдалась нами у двух животных. У кролика 2 после прохождения первого курса ПХТ произошло его статистически достоверное снижение с 15495 до 12880 мкм , и далее, после второго курса ПХТ, наблюдалось увеличение, не носившее, однако, статистически достоверного характера. У кролика 4 после всех двух курсов ПХТ по данному показателю изменений не произошло (коэффициенты Стьюдента составили 0,12 и 0,07 соответственно).
Изменения процентного отношения суммарной площади ядрышек к площади ядра
По данному показателю нами были выявлены наибольшие вариативные изменения, отразившие индивидуальную реакцию популяций лимфоцитов периферической крови каждого конкретного животного. При этом лишь у двух из шести кроликов в ответ на воздействие ксенобиотиков наблюдались схожие изменения (кролики 2 и 5), которые заключились в увеличении значений показателя после прохождения первого курса ПХТ с
10,01 до 14,76% и с 10,25 до 17,37% соответственно, и в снижении значений после второго курса ПХТ до 9,65 и 12,06% соответственно. Показания процентного отношения суммарной площади ядрышек к площади ядра у всех остальных животных носили сугубо индивидуальный характер.
Так, у кролика 1 после всех двух этапов эксперимента в изменении данного показателя не наблюдалось статистически достоверных различий (с 10,07 до 10,06% после первого курса ПХТ и до 11,14% после второго курса). У кролика 3 в течение всего эксперимента наблюдалось устойчивое его снижение с 11,44 до 10,85 и 8,42% после первого и второго курсов ПХТ соответственно. Совершенно противоположная тенденция наблюдалась у кролика 4, в популяциях лимфоцитов которого процент окрашенных ядрышек постоянно увеличивался в статистически достоверных пределах (коэффициенты Стьюдента после первого и второго куров ПХТ составили 2,74 и 4,12 соответственно). У кролика 6 произошло снижение данного показателя с 10,81 до 9,32% после первого курса ПХТ и увеличение его после второго курса ПХТ до
11,52%, однако изменения эти не явились статистически достоверными.
Суммируя вышеперечисленные результаты, следует заключить, что в ответ на воздействия группы противоопухолевых препаратов в популяциях лимфоцитов периферической крови экспериментальных животных по исследованным параметрам функциональной активности рибосомных генов произошли количественные структурные изменения, носившие яркий вариативный характер и отразившие, по нашему мнению, индивидуальные функциональные изменения в работе белок-синтезирующего аппарата клеток в каждом конкретном организме.
Рядом исследований последних лет было обнаружено, что активность рибосомных ци-стронов в клетках млекопитающих хорошо коррелирует с их пролиферативными возможностями, степенью дифференцировки и полиплоидизации ядра, а также с общей функциональной активностью клеток [11]. Так, в физиологических состояниях активность рибосомных цистронов снижается при голодании, охлаждении и действии на клетки
ингибиторов ферментов, повышается при антигенной стимуляции клеток [7].
Вышеуказанные свойства характерны и для популяций клеток человека; здесь также следует добавить, что в условиях патологии активность белоксинтезирующего аппарата клеток тоже подвергается неоднозначным изменениям. Она повышается при малигни-зации, в тироцитах больных с гиперфункцией щитовидной железы и снижается в кроветворных клетках больных хроническим мие-лолейкозом [3, 9].
Однако вышеперечисленные данные по вариативности изменений в транскрипции рибосомных генов нуждались в большей детализации, так как выяснены были только общие закономерности реализации генетической информации. Проблема того, как данные изменения выражаются в каждом конкретном случае, оставалось до конца не изученным. В нашем исследовании было показано, что параметры ФАРГ кроликов после пролонгированного воздействия на клетки достаточно сильными экзогенными химическими веществами ведут себя как независимые статистические совокупности, хотя и отражают состояние клеточных популяций одних и тех же организмов. По нашему мнению, этот факт должен рассматриваться, во-первых, как доказательство самой возможности изменчивости функциональной активности рибосомных генов и, во-вторых, как доказательство явления, заключающегося в сугубо индивидуальном характере фенотипического проявления ФАРГ. Важным является тот момент, что полученные нами данные подтверждают и дополняют эффект независимого характера изменения ФАРГ, обнаруженный нами ранее у больных злокачественными лимфомами. Как в популяциях лимфоцитов человека, так и экспериментальных кроликов степень фенотипического проявления функциональной активности рибосомных генов может колебаться по-разному: в зависимости от индивидуальных особенностей реагирования организма животного на какой-либо конкретный экзогенный фактор.
К настоящему моменту накоплено множество данных об изменении количества активных копий рибосомных генов при воздействии целого ряда экзогенных факторов. Так, данные вариативные изменения обнаружены
после пролонгированного воздействия на ге-патоциты и лимфоциты периферической крови глюкокортикоидов и липопротеинов высокой плотности [12], актиномицина Б [23], воздействия высоких доз фолиевой кислоты
[6] и др. Модифицирующее влияние данных веществ можно рассматривать как примеры воздействия внешних - средовых факторов. В нашем эксперименте таким фактором явился комплекс противоопухолевых препаратов. Так как показатели ФАРГ являются мендели-рующим признаком, то результаты нашего исследования подтверждают и дополняют вывод о том, что средовые воздействия способны выступать как факторы-модификаторы менделирующих признаков.
Механизмы таких изменений могут быть различными. В первом приближении можно допустить два из них. Первый - в ответ на воздействие ксенобиотика в популяциях лимфоцитов происходит элиминация клеток с некоторыми определенными значениями параметров ФАРГ, что меняет общую картину значений данных параметров. И второй - по нашему мнению, наиболее вероятный, - это непосредственная реакции организма на воздействие весьма мощных ксенобиотиков, заключающаяся в запуске неизвестного механизма внутриклеточной регуляции ФАРГ -активации цепи факторов молекулярной природы, изменяющих степень экспрессии рибо-сомных генов как в положительную, так и в отрицательную стороны, причем изменения эти носят сугубо индивидуальный характер.
Таким образом, проведенное нами исследование выявило новое свойство рибосомных генов - возможность изменчивости экспрессии рибосомных цистронов в результате дозированного воздействия на лимфоциты периферической крови кроликов экзогенных химических факторов. Данное свойство проявилось в интерфазном состоянии популяций клеток и выразилось в существенном увеличении площадей ядер, количества и площадей ядрышек лимфоцитов после первого курса полихимиотерапии. Пролонгированное воздействие экзогенных химических факторов (второй курс полихимиотерапии) вызвало запуск не известных еще компенсаторных регуляторных механизмов, приведших к возврату вышеперечисленных цитогенетических показателей до исходного уровня.
ЛИТЕРАТУРА
1. Барановская Л.И., Гарькавцев И.В., Кравец И.А. Характеристика функционального состояния ядрышкообразующих районов хромосом человека // Цитология. - 1991. - Т. 29, № 9. - С. 5152.
2. Бродский В.Я., Маршак Т.Л., Аврущенко М.Ш., Дунгенова Р.Е. Возможность цитофотометрии ядрышковых белков. Перспективы исследований состояния ядрышкового аппарата // Цитология. - 1991. - Т. 33, № 8. - С. 65-73.
3. Букаева И.А., Райхлин Н.Т., Пробатова Н.А. и др. Дифференциально-диагностическое и прогностическое значение активности области ядрышковых организаторов при неходжкинских злокачественных лимфомах // Клинич. лаб. диагностика. - 1997. - № 10. - С. 37-38.
4. Воронкова Л.Н., Сахаров В.Н. Кинетика роста и локализации ядрышек в клеточном цикле клеток СПЭВ в монослойной культуре // Цитология. -
1993. - Т. 35, № 10. - С. 62.
5. Дерюшева С.Е., Логинова Д.А., Чиряева О.Т. и др. Анализ распределения генов рРНК на хромосомах домашних лошадей с помощью флуоресцентной in situ гибридизации // Генетика. -1997. - Т. 33, № 9. - С. 1281-1286.
6. Драудин-Крыленко В.А., Мазуров С.Т., Лев-чук А.А. и др. Подавление суперэкспрессии протоонкогена орнитиндекарбоксилазы в аденоматозных полипах толстой кишки при назначении больным высоких доз фолиевой кислоты // Современная онкология. - 2002. - № 3. - С. 124127.
7. Козлов В.А., Коненков В.И., Ширинский В.С. и др. Оценка радиационного воздействия на состояние иммунной системы жителей Алтайского края // Вестн. науч. программы. "Семипалатинский полигон - Алтай". - Новосибирск,
1994. - № 3. - С. 63-75.
8. Ляпунова Н.А., Еголина Н.А., Вейко Н.Н. и др. Ядрышкообразующие районы (ЯОР) хромосом человека: опыт количественного цитологического и молекулярного анализа // Биологич. мембраны. - 2001. - Т. 18, № 3. - С. 189-199.
9. Мамаев Н.Н., Мамаева С.Е., Либуркина И.Л. и др. Активность ядрышкообразующих районов нормальных и лейкозных клеток костного мозга человека // Цитология. - 1984. - Т. 26, № 1. -С. 46-51.
10. Ментейфель В.М., Челидзе П.В. Изменение тонкой организации неактивных кольцевидных ядрышек зрелых лимфоцитов крыс на ранних этапах бласттрансформации // Молекуляр. биология. - 1986. - № 20. - С. 564-572.
11. Молекулярная биология: структура и биосинтез нуклеиновых кислот / под ред. Н.С. Спирина. -М.: Высш. школа, 1990. - 352 с.
12. Панин Л.Е., Максимов В.Ф., Коростылев-ская И.М. Активация ядрышковой ДНК и биосинтеза рибосом в гепатоцитах под влиянием глюкокортикоидов и липопротеинов высокой плотности // Цитология. - 1998. - № 5. - С. 461463.
13. Прокофьева-Бельговская, А.А. Основы цитогенетики человека. - М.: Медицина, 1969. - С. 1317.
14. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA. - М.: МедиаСфера, 2003. - 312 с.
15. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общ. ред. М.У. Хабриева. - М.: Медицина, 2005. - С. 40-41.
16. Смирнова О.Ю., Дудник О.А., Зацепина О.В. Особенности организации функционирования ядрышка в условиях полного пространственного разобщения его основных структур in situ // Цитология. - 2002. - Т. 44, № 1. - С. 5.
17. Стржижевский А.Д.Количественная оценка длительности существования хромосомных аберраций в клетках различных тканей млекопитающих in vivo // Генетика. - 1972. - Т. 8, № 2. - С. 93-99.
18. Стромская, Т.П., Погосянц Е.Е. Действие рубо-мицина на хромосомы нормальных и лейкозных клеток мышей // Генетика. - 1972. - Т. 7, № 11. - С. 57-62.
19. Трубников В.И., Гиндилис В.М. Многомерный статистический анализ антропометрических показателей. Сообщ. 1. Генетическая корреляция между признаками // Вопр. антропологии. -Вып. 64. - М.: Медицина, 1980. - С. 94-106.
20. Туганова Т.Н., Болгова Л.С., Алексеенко О.И. Цитологическая оценка ядрышкового аппарата в дифференциальной диагностике пролимфоци-тарных лимфом и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваний // Онкология. - 2003. - Т. 5, № 1. - С. 14-18.
21. Урбах В.Ю. Статистический анализ в биохимических и медицинских исследованиях. - М.: Медицина, 1975. - 296 с.
22. Хансон К.П., Имянитов Е.Н. Эпидемиология и биология неходжкинских лимфом // Практич. онкология. - 2004. - Т. 5, № 3. - 2004. - С. 163168.
23. Челидзе П.В. Фибриллярные центры в ядрышках клеток культуры СПЭВ после действия ак-тиномицина D // Цитология. - 1986. - № 7. -С.437-440.
