CC BY
121
УДК 57.03 + 636.068:636.13.046.3
Тромбоэластографическая оценка коагуляционного потенциала крови
у лошадей
Ошуркова Юлия Леонидовна, кандидат биологических наук, доцент e-mail: yul.oshurkova@yandex.ru
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Вологодская государственная молочнохозяйственная академия им. Н.В. Верещагина»
Муллагалиева Оксана Андреевна, аспирант e-mail: mullagalieva.lady-oksana@yandex.ru
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Вологодская государственная молочнохозяйственная академия им. Н.В. Верещагина»
Воробьева Елизавета Алексеевна, студент-специалист e-mail: liza180497@mail.ru
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Вологодская государственная молочнохозяйственная академия им. Н.В. Верещагина»
Богданова Полина Николаевна, студент-специалист e-mail: polinabog1997@yandex.ru
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Вологодская государственная молочнохозяйственная академия им. Н.В. Верещагина»
Преображенская Елена Ивановна, студент-специалист e-mail: eledwen@mail.ru
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Вологодская государственная молочнохозяйственная академия им. Н.В. Верещагина»
Аннотация. В работе дана оценка возможности использования тромбоэласто-граммы для оценки коагуляционного потенциала у лошадей. В опыт были включены 10 клинически здоровых кобыл в возрасте от года до 5 лет и 5 новорожденных жеребят до 10-дневного возраста русской рысистой породы. Тромбоэластограмму регистрировали в цитратной крови на двухканальном компьютеризированном приборе Coagulation Analyser (TEG® 5000 - Hemoscope, USA) и прикладной диагностической программе. Учитывали такие параметры, как R (min), K (min), Ang (°), MA (mm); при этом достоверной разницы показателей между кобылами и жере-
бятами мы не обнаружили. Показатели R (min) и К (min), у лошадей (13,55±2,11 мин и 4,6±0,91 мин соответственно) были выше, чем у жеребят (12,77±0,41 мин и 3,65±0,34 мин соответственно). Показатель Ang (°) у лошадей был ниже по сравнению с жеребятами (46,41±5,89° и 52,14±3,58° соответственно). Показатель МА (mm) у животных обеих групп находился на одном уровне и составил 57,28±3,04 мм у лошадей и 57,77±2,59 мм у жеребят. В работе представлены опорные интервалы коагуляции у взрослых лошадей и жеребят, но при интерпретации индивидуальных результатов необходимо учитывать влияние гематокрита, количества тромбоцитов и концентрации фибриногена.
Ключевые слова: тромбоэластограмма, кровь лошадей, гемостаз, свертывание крови, кобылы, жеребята.
Тромбоэластография представляет собой оценку состояния системы гемостаза путем изучения вязко-эластических свойств сгустка в цельной крови, позволяет оценить как клеточные, так и плазменные компоненты системы гемостаза, обеспечивая интегральную оценку гемостатической системы. Эти особенности отличают тромбоэластографию от обычных рутинных коагулометрических тестов (например, количество тромбоцитов, протромбиновое время, активированное частичное время тромбопластина, концентрация фибриногена), которые предоставляют информацию только об одном компоненте гемостатического процесса, и требуют сочетания нескольких показателей для полной оценки гемостаза.
Тромбоэластография, как метод оценки гемостаза, используется в медицине человека для диагностики и мониторинга коагулопатий уже более 50 лет. Однако она является относительно новой для ветеринарии [1, 2, 3] и только в последние годы стала использоваться в ветеринарной медицине лошадей [4, 5].
В настоящее время за рубежом проводятся обширные исследования по использования тромбоэластограммы для оценки гемостаза у собак и кошек [6, 7]. В отечественной литературе описаны возможности использования тромбоэластограммы у коров [8, 9] и морских млекопитающих [10].
Таким образом, ожидается, что использование тромбоэластограммы также будет набирать популярность для исследования системы гемостаза у лошадей. На сегодняшний день в зарубежной литературе представлены лишь единичные исследования гемостаза с помощью тромбоэластограммы на небольшом поголовье у здоровых лошадей [11, 12, 13, 14], лошадей с желудочно-кишечными заболеваниями [15, 16], жеребят с сепсисом [17], скаковых лошадей с индуцированным легочным кровотечением [18] и у одной кобылы с тромбастенией Гланцмана [19]. В отечественной литературе подобные исследования не освещены.
В этой связи основной целью данной работы была оценка коагуляционного потенциала у лошадей c помощью тромбоэластограммы.
Материал и методы исследования. Исследования проводили в период с декабря 2018 года по февраль 2019 года на базе СПК «Племенной конный завод Вологодский». В опыт были включены 10 клинически здоровых кобыл в возрасте от года до 5 лет и 5 новорожденных жеребят до 10-дневного возраста русской рысистой породы. Для определения состояния здоровья у животных перед взятием крови был проведен физикальный осмотр (осмотр, измерение температуры тела, частоты сердечных и дыхательных движений, аускультация легких, у жеребят -дополнительно пальпация пуповины).
сельскохозяйственные и ветеринарные науки
Кровь для гемостазиологического исследования брали в утренние часы до первого кормления из яремной вены в вакуумные пробирки с цитратом натрия 3,8%. Кровь для исследования доставляли в лабораторию ВОДБ (г. Вологда) в течение 2 часов. Тромбоэластограмму регистрировали в цитратной крови на двухканальном компьютеризированном приборе Coagulation Analyser (TEG® 5000 - Hemoscope, USA) и прикладной диагностической программе. Для этого в кювету тромбоэла-стографа вносили 20 мкл 0,2М раствора кальция хлорида, затем 340 мкл цельной цитратной крови.
Анализатор Coagulation Analyser (TEG® 5000 - Hemoscope, USA) измеряет физические свойства сгустка крови, используя для этого специальную цилиндрическую чашечку в которую помещается образец крови [19]. Чашечка совершает вращательные движения относительно своей оси на угол 4045'. Каждый вращательный цикл длится 10 секунд. Стержень, погруженный в образец крови, подвешен на скручивающейся проволоке (рис. 1). Крутящий момент вращающейся чашечки передается на погруженный в образец стержень только после того, как образующийся за счет фибрино-тромбоцитных связей сгусток начинают соединять чашечку и стержень вместе. Сила этих связей определяет угол поворота стержня: не свернувшаяся кровь не передает вращение, рыхлый сгусток лишь частично передает вращение, а прочный сгусток заставляет стержень двигаться синхронно с чашечкой.
.-Torsion wire
Heating element, sensor a controller
.36 ml whole blood (Clotted)
( *4°454
Рисунок 1. Принцип работы тромбоэластографа [20].
Таким образом, угол вращения стержня напрямую зависит от прочности сформировавшегося сгустка. Как только сгусток начинает сжиматься или разрушаться (лизис), связи рвутся, взаимодействие между чашечкой и стержнем ослабевает, и передача движения чашечки на стержень уменьшается. Вращательное движение стержня преобразуется из механического в электрический сигнал, который фиксируется с помощью компьютера [1, 2, 19]. По полученной тромбоэластограмме (рис. 2) компьютер автоматически выполняет расчет основных параметров [20].
Коагуляция
Фибринолиз
Фермент Фибриноген
Тромболизис (Ly30, ERL)
Стабильность сгустка Разрыв сгустка
(R) (К,а)
Время сеертытт Кишим Коагулщтные ауатш
факторы
TEG предлагает визуальное отображение гемостаза пациента
Рисунок 2. Схема тромбоэластограммы [20].
Полученные в ходе исследования результаты обрабатывались с помощью программы Microsoft Ехсе1. Значения полученных результатов в работе представлены в виде средней величины и стандартной ошибки средней (M ± m). Сравнение независимых выборок проводили с помощью критерия Манна - Уитни. Результаты исследования со значением вероятности допущения альфа-ошибки, равные либо менее 5% (р < 0,05) расценивались как статистически значимые.
Результаты исследования. Классическая тромбоэластография является методом интегральной оценки состояния системы гемостаза. Она позволяет оценивать динамику протекания процессов свертывания крови, измерять эластичность сгустка и его качества, а также активность системы фибринолиза. В данной статье мы приводим предварительные результаты по исследованию системы гемостаза методом тромбоэластографии у здоровых лошадей в возрасте от 1 до 5 лет и у жеребят до 10-дневного возраста. Учитывали такие параметры, как R (min), K (min), Ang (°), MA (mm); при этом достоверной разницы показателей между кобылами и жеребятами мы не обнаружили.
Показатель R - время реакции, тромбоэластографическая константа тромбо-пластина. Эта величина определяет период свертывания крови и характеризует 1-2 фазу - образование активной протромбиназы и активного тромбина. Так, показатель времени реакции у лошадей составил 13,55±2,11 мин, а у жеребят -12,77±0,41 мин (рис. 3).
В, т1п К, гшп
■ лошади ■ жеребята
Рисунок 3. Показатели времени реакции (Я) и времени формирования сгустка (К)
АПЕ. р МА, тгтп
■ лошади ■ жеребята
Рисунок 4. Показатели скорости полимеризации фибрина (Апд) и максимальной амплитуды (МА)
Показатель К - время формирования сгустка или коагуляции, тромбоэласто-графическая константа тромбина. Данная величина характеризует 3 фазу свертывания крови, превращение фибриногена в нерастворимый фибрин. Так, у лошадей данный показатель соответствовал 4,6±0,91 мин., а у жеребят - 3,65±0,34 мин.
Показатель Апд - скорость полимеризации фибрина (формирование фибрина и поперечных связей) у взрослых лошадей был ниже по сравнению с жеребятами и составил 46,41±5,89° и 52,14±3,58° соответственно (рис. 4).
Показатель МА, максимальная амплитуда или максимальная плотность образовавшегося сгустка, у животных обеих групп находился на одном уровне и составил у лошадей 57,28±3,04 мм и у жеребят 57,77±2,59 мм.
Полученные нами данные по оценке тромбоэластограммы у лошадей в целом совпадают с результатами, описанными в литературе [5, 11, 16], за исключением показателя максимальной плотности сгустка (МА). В зарубежной литературе этот показатель у жеребят выше по сравнению с взрослыми лошадьми.
Заключение. Тромбоэластограмма является приемлемым методом оценки коа-гуляционного потенциала крови у лошадей. В литературе данный метод описывается как надежный для оценки коагуляции, но рекомендуют учитывать возможную изменчивость параметров. В работе представлены опорные интервалы коагуляции у взрослых лошадей и жеребят, но при интерпретации индивидуальных ре-
зультатов необходимо учитывать влияние гематокрита, количества тромбоцитов и концентрации фибриногена. Кроме того, необходимы дальнейшие исследования в данной области, включая сравнение тромбоэластограммы и стандартных коагуля-ционных тестов.
Список литературы:
1. Ошуркова, Ю. Л. Оценка гемостаза с помощью тромбоэластограммы у коров [Текст] / Ю. Л. Ошуркова, Е. Н. Соболева // Вестник АПК Верхневолжья. -2011. - №. 2. - С. 34-36.
2. Соболева, Е. Н. Анализ состояния системы гемостаза у коров в разные периоды лактации с использованием тромбоэластографии [Текст] / Е. Н. Соболева, Ю. Л. Ошуркова // Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. - 2012. - Т. 1. - С. 212-217.
3. Goggs R., et al. Variability in veterinary thromboelastography [Текст] //Journal of Veterinary Emergency and Critical Care. - 2012. - Т. 22. - №. 2. - С. 145147.
4. Ghassab S., et al. Thromboelastographic clot characteristics of autologous equine blood products after activation by autologous thrombin, bovine thrombin, or calcium chloride [Текст] //Veterinary Surgery. - 2015. - Т. 44. - №. 8. - С. 970-975.
5. MendezllAngulo J. L., et al. Thromboelastography in equine medicine: Technique and use in clinical research [Текст] //Equine Veterinary Education. - 2012. - Т. 24. - №. 12. - С. 639-649.
6. Kristensen A. T. et al. Evaluation of human recombinant tissue factor activated thromboelastography in 49 dogs with neoplasia [Текст] //Journal of veterinary internal medicine. - 2008. - Т. 22. - №. 1. - С. 140-147.
7. Hall D. J. et al. Kaolin-activated thromboelastography in echocardiographically normal cats [Текст] //American journal of veterinary research. - 2012. - Т. 73.
- №. 6. - С. 775-778.
8. Ошуркова, Ю. Л. Оценка состояния системы гемостаза у коров при клинической форме мастита [Текст] / Ю. Л. Ошуркова, Е. Н. Соболева // Известия высших учебных заведений. Северо-Кавказский регион. Естественные науки. - 2015. - №. 2 (186).
9. Фомина, Л. Л. Влияние половых гормонов на функционирование системы гемостаза у коров [Текст]: автореферат ... канд. биол. наук / Л. Л. Фомина.
- Ярославль: 2009. - 24 с.
10. Богданова, Л. Н. Особенности свертывания крови и тромбоэластограм-ма черноморских дельфинов афалин (tursiops truncatus) / Л. Н. Богданова // Вестник физиотерапии и курортологии. - 2015. - Т. 21. - №. 4. - С. 54-56.
11. Junge H. K. et al. Assessment of method reliability and determination of reference intervals for rotational thromboelastometry in horses //Journal of veterinary emergency and critical care. - 2016. - Т. 26. - №. 5. - С. 691-703.
12. Scruggs J. L. et al. Biological variation of thromboelastrography variables in 10 clinically healthy horses //Journal of Veterinary Emergency and Critical Care.
- 2016. - Т. 26. - №. 1. - С. 80-84.
13. Dibiasi C. et al. Viscoelasticity and structure of blood clots generated in-
vitro by rheometry: A comparison between human, horse, rat, and camel // Clinical hemorheology and microcirculation. - 2018. - №. Preprint. - С. 1-17.
14. Tennent Brown B. S. et al. Use of viscoelastic coagulation testing to monitor low molecular weight heparin administration to healthy horses //Journal of Veterinary Emergency and Critical Care. - 2013. - Т. 23. - №. 3. - С. 291-299.
15. Epstein K. L. et al. Thrombelastography in horses with acute gastrointestinal disease //Journal of veterinary internal medicine. - 2011. - Т. 25. - №. 2. - С. 307-314.
16. Epstein K. L. et al. Serial viscoelastic and traditional coagulation testing in horses with gastrointestinal disease //Journal of Veterinary Emergency and Critical Care. - 2013. - Т. 23. - №. 5. - С. 504-516.
17. Mendez-Angulo, Jóse L et al. Thromboelastography in healthy, sick non-septic and septic neonatal foals// Australian veterinary journal. - 2011. - Т. 89. - № 12. - с. 500-505.
18. Alessia Giordano, Cecilia Meazza, Marco Salvadori, and Saverio Paltrinieri, "Thromboelastometric Profiles of Horses Affected by Exercise-Induced Pulmonary Hemorrhages," Veterinary Medicine International, vol. 2010, Article ID 945789, 6 pages, 2010.
19. Macieira, Susana & Rivard, et al. Glanzmann thrombasthenia in an Oldenbourg filly. Veterinary clinical pathology / American Society for Veterinary Clinical Pathology. 2007. n. p. [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http:// www.biomedsearch.com/nih/Glanzmann-thrombasthenia-in-Oldenbourg-filly/17523098.html.
20. TEG 5000 Тромбоэластограф, анализатор гемостаза: подробное описание [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://vitaomed.com/teg-5000-tromboelastograf-analizator-gemos/
References:
1. Oshurkova YU. L., Soboleva E. N. Assessment of hemostasis by using tromboelastogram in cows. Vestnik APK Verkhnevolzh'ya [Bulletin of Agrarian and Industrial Complex of the Upper Volga Region], 2011, no. 2, pp. 34-36. (in Russian)
2. Soboleva E. N., Oshurkova YU. L. The analysis of a condition of hemostasis system in cows in different periods of lactation with use of thromboelastography. Agrarnaya nauka i obrazovanie na sovremennom etape razvitiya: opyt, problemy i puti ikh resheniya [Agrarian Science and Education at the Present Stage of Development: Experience, Problems and Ways of their Solution], 2012, Vol. 1, pp. 212-217. (in Russian)
3. Goggs R. et al. Variability in veterinary thromboelastography. Journal of Veterinary Emergency and Critical Care, 2012, Vol. 22, no. 2, pp. 145-147.
4. Ghassab S. et al. Thromboelastographic clot characteristics of autologous equine blood products after activation by autologous thrombin, bovine thrombin, or calcium chloride. Veterinary Surgery, 2015, Vol. 44, no. 8. pp. 970-975.
5. Mendez-Angulo J. L. et al. Thromboelastography in equine medicine: Technique and use in clinical research. Equine Veterinary Education, 2012, Vol. 24, no. 12. pp. 639-649.
6. Kristensen A. T., et al. Evaluation of human recombinant tissue factoractivated
thromboelastography in 49 dogs with neoplasia. Journal of Veterinary Internal Medicine, 2008, Vol. 22, no. 1. pp. 140-147.
7. Hall D. J. et al. Kaolin-activated thromboelastography in echocardiographically normal cats. American Journal of Veterinary Research, 2012, Vol. 73, no. 6. pp. 775-778.
8. Oshurkova Yu. L., Soboleva E. N. Assessment of hemostasis in cows with clinical form of mastitis. Izvestiya vysshikh uchebnykh zavedeniy. Severo-Kavkazskiy region. Estestvennye nauki [Proceedings of Higher Educational Institutions. North Caucasus Region. Natural science], 2015, no. 2 (186). (in Russian)
9. Fomina L.L. Vliyanie polovyh gormonov na funkcionirovanie sistemy gemostaza u korov. [The influence of sex hormones on the functioning of the cows' hemostasis system. Abstract of Cand. Diss]. Yaroslavl, 2009, 24 p.
10. Bogdanova L. N. Features of blood clotting and thromboelastogram of black sea bottlenose dolphins (tursiops truncatus). Vestnik fizioterapii i kurortologii [Bulletin of Physiotherapy and Health Resort Study], 2015, Vol. 21, no. 4, pp. 54-56. (in Russian)
11. Junge H. K. et al. Assessment of method reliability and determination of reference intervals for rotational thromboelastometry in horses . Journal of Veterinary Emergency and Critical Care, 2016, Vol. 26, no. 5, pp. 691-703.
12. Scruggs J. L. et al. Biological variation of thromboelastrography variables in 10 clinically healthy horses. Journal of Veterinary Emergency and Critical Care, 2016, Vol. 26, no. 1, pp. 80-84.
13. Dibiasi C. et al. Viscoelasticity and structure of blood clots generated in-vitro by rheometry: a comparison between human, horse, rat, and camel. Clinical Hemorheology and Microcirculation, 2018, no. preprint, pp. 1-17.
14. Tennent-Brown B. S. et al. Use of viscoelastic coagulation testing to monitor low molecular weight heparin administration to healthy horses. Journal of Veterinary Emergency and Critical Care, 2013, Vol. 23, no. 3, pp. 291-299.
15. Epstein K. L. et al. Thrombelastography in horses with acute gastrointestinal disease. Journal of Veterinary Internal Medicine, 2011, Vol. 25, no. 2, pp. 307314.
16. Epstein K. L. et al. Serial viscoelastic and traditional coagulation testing in horses with gastrointestinal disease. Journal of Veterinary Emergency and Critical Care, 2013, Vol. 23, no. , pp. 504-516.
17. Mendez-Angulo, Jóse L. et al. Thromboelastography in healthy, sick non-septic and septic neonatal foals. Australian Veterinary Journal, 2011, Vol. 89, no. 12, pp. 500-505.
18. Giordano A., Meazza C., Salvadori M., Paltrinieri S. Thromboelastometric Profiles of Horses Affected by Exercise-Induced Pulmonary Hemorrhages. Veterinary Medicine International, 2010, Article ID 945789, 6 p.
19. Macieira, Susana & Rivard et al. Glanzmann thrombasthenia in an Oldenbourg filly. Veterinary clinical pathology. American Society for Veterinary Clinical Pathology, 2007. Available at: http://www.biomedsearch.com/nih/Glanzmann-thrombasthenia-in-0ldenbourg-filly/17523098.html
20. TEG 5000 Thromboelastograph, Hemostatic Analyzer: Detailed Description. Available at: http://vitaomed.com/teg-5000-tromboelastograf-analizator-gemos/ (in Russian)
Thromboelastographic Assessment of Coagulation Potential of Blood in Horses
Oshurkova Yulia Leonidovna, Candidate of Science (Biology), Associate Professor e-mail: yul.oshurkova@yandex.ru
Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education the Vereshchagin State Dairy Farming Academy of Vologda
Mullagalieva Oksana Andreevna, post-graduate student e-mail: mullagalieva.lady-oksana@yandex.ru
Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education the Vereshchagin State Dairy Farming Academy of Vologda
Vorob'eva Elizaveta Alekseevna, student of specialist's degree program e-mail: liza180497@mail.ru
Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education the Vereshchagin State Dairy Farming Academy of Vologda
Bogdanova Polina Nikolaevna, student of specialist's degree program e-mail: polinabog1997@yandex.ru
Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education the Vereshchagin State Dairy Farming Academy of Vologda
Preobrazhenskaya Elena Ivanovna, student of specialist's degree program eledwen@mail.ru
Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education the Vereshchagin State Dairy Farming Academy of Vologda
Abstract. The work reviews the possibility of using thromboelastogram to assess the coagulation potential in horses. The experiment engaged ten clinically healthy mares aged from one to five years and five newborn foals up to ten days of Russian trotting breed. The thromboelastogram was recorded in citrated blood by means of a two-channel computerized Coagulation Analyzer (TEG® 5000 - Hemoscope, USA) and applied diagnostic program. Such parameters as R (min), K (min), Ang (°), MA (mm) were taken into consideration; no significant difference was found in parameters between mares and foals. R (min) and K (min) were higher in horses (13.55 ± 2.11 min and 4.6 ± 0.91 min, respectively) than in foals (12.77 ± 0.41 min and 3, 65 ± 0.34 min, respectively). Ang (°) was lower in horses compared to foals (46.41 ± 5.89 ° and 52.14 ± 3.58 °, respectively). MA (mm) was at the same level in animals of both groups and amounted to 57.28 ± 3.04 mm in horses and 57.77 ± 2.59 mm in foals. The work presents reference coagulation intervals in adult horses and foals, but when interpreting of individual results, the effect of hematocrit, platelet count and fibrinogen concentration must be taken into account.
Keywords: tromboelastogram, horses' blood, hemostasis, blood coagulation, mares, foals
