CC BY
2
РОССИЙСКИЙ Willi НШОШЕСКШ 11 Vil ШГРЕСС 2DZ3 АЛ I II
Экспериментальная онкология
СРАВНЕНИЕ МЕТОДОВ СОЗДАНИЯ ОРТОТОПИЧЕСКОЙ МОДЕЛИ ГЕПАТОЦЕЛЛЮЛЯРНОЙ КАРЦИНОМЫ ПЕЧЕНИ
С.В. Гурова, А.С. Гончарова, Т.М. Кечерюкова, А.В. Галина, Д.В. Ходакова, Е.Н. Колесников.
Место работы: ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России,
Ростов-на-Дону, Россия
Эл. почта: [email protected]
Цель: Сравнить инъекционный и имплантационный методы создания ксенографта первичного рака печени in vivo. Материалы и методы: Данное исследование проводилось на базе испытательного лабораторного центра ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России. Эксперимент проводили на самцах мышей линии Balb/c Nude в возрасте 10-12 недель. В соответствии с методом создания модели, животных распределили на две группы (n = 8 для каждой группы).
Для создания ксенографта рака печени инъекционным методом клетки линии HepG2 культивировали в среде DMEM с добавлением 10% FBS при температуре 37°С и атмосфере 5% СО2. Затем культуру клеток в количестве 3 х106 ино-кулировали мышам в левую долю печени. Для создания ксенографта рака печени имплантационным методом предварительно ввели мышам клеточную суспензию линии HepG2 в количестве 5х106 подкожно в правый бок для создания опухолевого узла. По достижению подкожных узлов оптимальных размеров (1-1,5 см в диаметре), животных эвтанизировали, выделили новообразование, разделили на небольшие фрагменты и трансплантировали в печень. По достижению гемостаза печень возвращали в брюшную полость, а операционную рану ушивали непрерывным швом. Измерение размеров опухолевых узлов проводили в ходе диагностической лапаротомии при помощи штангенциркуля на 14 сутки.
Результаты: Согласно полученным результатам, импланта-ционный метод создания ксенографта продемонстрировал удовлетворительный результат: приживаемость опухолевого материала составила 100%, показатель выживаемости — 100%, все новообразования были сформированы в виде узлов округлой формы. Тогда как инъекционный метод показал неудовлетворительный результат: клеточная суспензия либо вытекала через прокол, тем самым контаминировав всю брюшную полость, в связи с этим ксенографт менял заданную локализацию и показатель приживаемости оказался значительно ниже, нежели у им-плантационного метода, и составил 50%, большинство опухолевых узлов имели форму вытянутых образований с неровными краями.
Заключение: В рамках нашего исследования подверглись сравнению способы создания ксенографта первичного рака печени in vivo путем инъекции и имплантации опухолевого материала. Проанализировав полученные данные
можно сделать вывод, что наиболее эффективным методом создания ксенографта является имплантационный.
ТРАНСКРИПТОМНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПЛОСКОКЛЕТОЧНОГО РАКА ГОЛОВЫ И ШЕИ ПОСЛЕ ОБЛУЧЕНИЯ ПРОТОНАМИ В ДОЗЕ 10 ИЗОГР
Э.Д. Джуманиязова1, П.А. Вишнякова1,2, Т.Х. Фатхудинов13
Место работы: 1. Научно-исследовательский институт молекулярно-клеточной медицины Российского Университета Дружбы Народов, Москва, Россия; 2. ФГБУ «НМИЦ акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И. Кулакова» Минздрава России, Москва, Россия; 3. ФГБНУ «Научно-исследовательский институт морфологии человека имени академика А.П. Авцына», Москва, Россия Эл. почта: [email protected]
Цель: Оценить изменения транскриптома в образцах плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ) у пациентов после протонного облучения.
Материалы и методы: Биопсийный материал, полученный от 3 пациентов ПРГШ до и после протонного облучения в суммарной дозе 10 изоГр, был подвергнут гомогенизации, очистке и концентрации, после чего была выделена тотальная РНК. Далее из 1 мкг тотальной РНК для секвери-нования на платформе Illumina были приготовлены библиотеки с использованием набора TruSeq RNA Sample Prep Kit v2 с этапом обогащения в 10 циклов. Окончательные библиотеки объединяли в эквимолярных пропорциях перед секвенированием на платформе Illumina HiSeq 2500 с использованием парно-концевых прочтений по 50 оснований. Необработанные прочтения были обработаны с использованием RTA 1.17.21.3 и Casava 1.8.2 (Illumina). Для получения матриц экспрессий из fastq файлов использовался пайплайн nf-core/rnaseq версии 3.0. Пайплайн запускался с референсным геномом GRCh38, выравнивание проводилось с помощью инструмента STAR, а квантификация с помощью Salmon. Анализ дифференциальной экспрессии проводился между опухолевыми образцами до и после облучения. Анализ обогащения был выполнен с помощью программного обеспечения PANTHER 17.0 по классификатору Reactome pathways.
Результаты: В ходе транскриптомного анализа ПРГШ после облучения протонами в дозе 10 изоГр было обнаружено 1414 дифференциально экспрессированных генов. Был обнаружен ряд подавленных сигнальных путей (связанных с низкоэкспрессированными генами) таких как: сигнальный путь STAT5; сигнальный путь PD-1; отмечено подавление MET-опосредованной активации сигнального пути PTK2, подавление передачи сигналов PDGF; нарушение CD22-опосредованной регуляция BCR; подавление MAPK, опосредованной FCERI; подавление FCGR3A-опо-средованного фагоцитоза и FCGR3A-опосредованного
ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ ОПУХОЛИ Российское общество клинической онкологии
том/vol. 13 #3s1 • 2023
MALIGNANT TUMOURS
Russian Society of Clinical Oncology
ТЕЗИСЫ ПОСТЕРНЫХ ДОКЛАДОВ И ПРИНЯТЫЕ К ПУБЛИКАЦИИ
Экспериментальная онкология
синтеза IL10. При анализе обогащения среди высоко-экспрессируемых генов в ткани ПРГШ после протонного облучения были активированы процессы ороговения и биологического окисления. Обращает на себя внимание преобладающее количество подавленных сигнальных путей над активированными.
Заключение: Подавленные сигнальные пути соответствуют нормальному функциональному состоянию клеток. Очевидно, что клетки ткани опухоли в месте облучения готовятся к апоптозу и, вероятно, это объясняет тот факт, что большинство из обнаруженных путей подавлены, а не активированы.
ВЛИЯНИЕ МЕТАБОЛИТОВ РАЗНЫХ ШТАММОВ E. COLI НА МИГРАЦИОННУЮ АКТИВНОСТЬ КЛЕТОК КОЛОРЕКТАЛЬНОГО РАКА
Н.И. Игнатова, М.И. Пряжникова, И.Н. Дружкова, М.В. Ширманова
Место работы: ФГБОУ ВО «Приволжский исследовательский медицинский университет» Минздрава России, Нижний Новгород, Россия
Эл. почта: [email protected]
Цель: Оценить миграционную активность линий КРР под влиянием метаболитов различных штаммов E. coli. Материалы и методы: Материалом для исследования послужили линии КРР НСТ116, НТ29, SW480, SW837, а также метаболиты различных штаммов E. coli, в том числе, представители нормобиоты и полученные от пациентов с КРР. Линии КРР были охарактеризованы по морфологии, экспрессии Е-кадгерина, исходному уровню миграционной активности. Для получения метаболитов бактерии культивировали в жидкой среде ДМЕМ в течение 24ч, затем фильтровали и использовали для экспериментов в разведении 1:1,5. Воздействие метаболитов проводили на моделях 2D культуры и сфероидов (3D). Пролиферацию оценивали по измерению площади сфероидов. Миграцию оценивали путем измерения зоны мигрирующих из сфероида клеток и в эксперименте «заживление раны». Для определения молекулярных изменений в клетках КРР под действием метаболитов было проведено иммуно-цитохимическое исследование экспрессии E-кадгерина. Полученные данные анализировали с помощью методов непараметрической статистики в программе Statistica 10.0. Результаты: Линии КРР отличались по уровню экспрессии Е-кадгерина и исходному уровню миграционной активности. Наименее чувствительными к действиям метаболитов оказались линии НТ29 и SW837, их исходный уровень миграции был низким и не изменился в эксперименте. В то время каклинии НСТ116 и SW480 показали увеличение мобильности под действием метаболитов опухоль-ассоциированных штаммов E. coli. Показано статистически значимое увеличение миграции клеток КРР в присутствии
метаболитов бактерий кишечной флоры по сравнению с контролем (p < 0,05). По сравнению с пробиотическими штаммами метаболиты бактерий, полученных от пациентов, активнее стимулировали миграцию КРР. Заключение: Метаболиты представителей микробиома кишечника онкобольных могут усиливать миграционную активность клеток КРР, однако вытеснение агрессивных штаммов пробиотическими может быть использовано при поддерживающей терапии в послеоперационный период и в процессе химиотерапии. Исследование выполнено при поддержке РНФ 23-74-00045.
РОЛЬ ДЛИННЫХ НЕКОДИРУЮЩИХ РНК В ФОРМИРОВАНИИ УСТОЙЧИВОСТИ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК К ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ МАКРОФАГОВ
О.В. Ковалева, П.А. Подлесная, М.А. Сорокин, А.Н. Грачев
Место работы: ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия Эл. почта: [email protected]
Цель: Целью данного исследования является изучение роли длинных некодирующих РНК (днРНК) в формировании устойчивости опухолевых клеток различных нозологий к цитотоксической активности макрофагов. Материалы и методы: В качестве биологической модели использовали производные клеточных линий рака легкого (H1975, H292), рака предстательной железы (DU145 и РС3) и рака молочной железы (SKBR3), устойчивые к цитотоксической активности макрофагов, полученные ранее в лаборатории. Приготовление кДНК библиотек и секвенирование проводили на платформе Illumina HiSeq 2000 в соответствии с протоколами Illumina для RNA-seq. Функциональная аннотация генов проводилась с использованием пакета R Homo. sapiens, Team BC (2015) и базы данных Ensembl. Анализ насыщенности метаболических путей проводили для достоверно дифференциально экс-прессирующихся генов с использованием пакета R fgsea. Функциональная аннотация дифференциально экспрес-сирующихся генов была проведена с использованием базы данных кластеров ортологичных групп генов (COG). Результаты: В результате секвенирования транскриптома устойчивых производных клеточных линий Н1975 и РС3 были выявлены 7днРНК с достоверной дифференциальной экспрессией по отношению к контрольным клеткам. Экспрессия днРНК LINC01508 и OLMALINC понижалась относительно контроля, в то время как экспрессия PSMB8-AS1, MBNL1-AS1, LCAL1, IGFL2-AS1 и LINC02301 повышалась. Для выявления универсальных механизмов приобретения устойчивости опухолевых клеток к цитотоксической активности макрофагов экспрессия данных днРНК была исследована в опухолевых клетках различных нозологий.
ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ ОПУХОЛИ Российское общество клинической онкологии
том/vol. 13 #3s1 • 2023
MALIGNANT TUMOURS
Russian Society of Clinical Oncology
