Типирование различных видов костных сарком по фракционному составу сиалогликолипидов опухолевых клеток Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

13. Nishizuka Y.//J. nat. Cancer Inst.— 1986,—Vol. 76.— P. :1G3—370.

14. Nishizuka Y. 11 Science.— 1986,—Vol. ‘233.—P. 305—311.

15. Rosengurt E.. Rodrigucs-Pena A., Coombs M., Sinnett-Smith /.//Proc. nat. Acad. Sei.— 1984.— Vol. 81.— P. 5748—5752.

16. Vandenbark G. R., Kuhn L. G., Niedel G. E.//J. Clin. Invest.— 1984,— Vol. 73,— P. 448—457.

17. Yamasaki H., Enomoto Т., Martel N. et al.//Exp. Cell Res.— 1985,—Vol. 146,—P. 297—308.

18. Yott L. P., Chang C. C., Trosko J. E. // Science.— 1979.— Vol. 209,— P. 1089—1091.

Поступила 18.01.90

ACTION OF TUMOUR PROMOTER 12-O-TETRADECANOYL PHORBOL-13-ACETATE ON CULTURED EPITHELIAL CELLS

Yu. M. Vasiliev, I. D. Karavanova

Incubation of epithelial cells of the MDCK line with 12-0-tetradecanoyl phorbol-13-acetate (TPA), in 50 ng/ml concentration lead to dissociation of cell-cell contacts and to striking alteration of cell shape, namely, to separation of cell periphery into wide lamellas and narrow processes. Alterations of cytoskeleton accompanying these shape changes were studied by the method of immunofluorescent microscopy using monoclonal antibodies against various individual cytoskeletal proteins. It was found that TPA — treated cells, in contrast to control ones, had no actin microfilament bundles. The predominant cytoskeletal structures in the processes were microtubules and intermediate filaments of two types, containing keratins o vimentin. In is suggested that these reorganizations of cytoskeleton play an important role in the mechanisms of the promotion stage of carcinogenesis, especially, in the development of mutual isolation of cells within the tissue.

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 1990 УДК: 616.71-006.3.04:612.015

Н. Е. Кдшлинский, А. М. Новиков, Л. С. Бассалык

ТИПИРОВАНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ КОСТНЫХ САРКОМ ПО ФРАКЦИОННОМУ СОСТАВУ СИАЛОГЛИКО-ЛИПИДОВ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК

НИИ клинической онкологии

Процесс злокачественной трансформации клеток сопровождается глубокими изменениями в биосинтезе сиалогликолипидов — структурных компонентов клеточных мембран. Эти изменения могут выражаться в незавершенном синтезе, «неосинтезе» отдельных сиалогликолипидов, изменении их структуры и организации в клеточной мембране [3]. Результатом этих комбинаций является изменение фракционного состава и накопление маркеров гликолипидной природы, специфичных для данного вида опухолевых клеток. В числе таких маркеров были найдены ганглиозид йоз в меланоме [6], раке яичников человека [1] и при некоторых видах лейкозов [7], сложные фукозосодержащие моносиалоганглиозиды при неоплазмах желудочно-кишечного тракта [4] и мелкоклеточном раке легкого [5], ганглиозид 0[)2 при нейробластоме человека [8, 10]. Поскольку каждый тип опухолевых клеток имеет специфический профиль гликолипидов, типирова-ние опухолей по этому признаку может в ряде случаев иметь диагностическую значимость.

Ранее нами было проведено сравнительное исследование фракционного состава ганглиози-дов остеогенных и хондросарком и установлена связь этого показателя с метастатическим потенциалом костных опухолей. В настоящей ра-

боте определено содержание и изучен фракционный состав ганглиозидов клеток других костных опухолей: гигантоклеточной опухоли, саркомы

Юинга, злокачественной фиброзной гистиоцитомы и фибросаркомы.

Изучено 18 оперированных костных опухолей больных в возрасте от 18 до 42 лет. Всем больным до операции лечение не проводилось. Клинико-рентгенологический диагноз опухолей у обследованных больных подтвержден данными морфологического исследования. Гигантоклеточная опухоль обнаружена у 6, саркома Юинга — у 5, злокачественная фиброзная гистиоцитома — у 5 и фибросаркома кости — у 2 больных.

Ткани опухоли получали после оперативного ее удаления, замораживали в жидком азоте и хранили при —70 °С. Ганглиозиды выделяли из опухолевой ткани и очищали по ранее описанному методу [2]. Содержание липидно-связанных сиаловых кислот в образце ганглиозидов определяли резорциновым методом [9]. Ганглиозиды разделяли и идентифицировали с помощью тонкослойной хроматографии на пластинках НРТЬС (10X10 см) с силикагелем 60 («Е. Мегск», ФРГ) в системе: хлороформ—метанол — 0,2 % СаСЬ— 60:35:6. Пластинки предварительно не активировали, камеру насыщали 4 ч. В качестве стандарта использовали ганглиозиды известного строения из нормальных и опухолевых тканей человека и животных. Фракционный состав ганглиозидов определяли на сканирующем денситометре «СЬгогпозсап-200» фирмы «Лоусе-ЬоеЫ» (Англия).

Уровни липидно-связанных сиаловых кислот (ЛСК) в суммарных фракциях ганглиозидов изученных опухолей представлены в табл. 1. Как видно из представленных данных, содержание липидно-связанных сиаловых кислот широко варьирует в различных морфологических типах костных сарком. При этом в саркоме Юинга обнаружены более высокие значения липидно-связанных сиаловых кислот по сравнению с другими изученными опухолями костей. Не выявлено достоверных различий между гигантоклеточной опухолью и злокачественной фиброзной гистиоци-томой в средних значениях липидно-связанных сиаловых кислот.

На рис. 1 представлены хроматограммы ганглиозидов исследованных опухолей. Фракционный состав ганглиозидов костных опухолей приведен в табл. 2. Денситограммы ганглиозидов некоторых опухолей костей представлены на рис. 2.

Следует отметить, что основными ганглиози-

Таблица 1

Содержание липидно-связанных сиаловых кислот (ЛСК) в общей фракции ганглиозидов костных опухолей различного морфологического типа (мкг/г ткани)

Морфологический вариант опухоли Коли- чество обследо- ванных образцов Уровень ЛСК (М ± m) Разброс ЛСК в обследованных образцах

Гигантоклеточная опухоль 6 29,2+6,9 13,6—47,0

Саркома Юинга 5 69,0+16,3 20,1 —165,0

Злокачественная фиброз- 5 32,5+12,4 19,0—57,3

ная гистиоцитома

Фибросаркома 2 50,0

25,8

б

'-■ад

^ * Ш

^ ^0 ;.^. яш

т^г смх тввм1 вмх ОМУ

Я? тт. .ПЕ 9 тт 9* шт. Фт вРЗ щщСР1а швш 603 вог — тт дцрц 49ЩК тот-

/ г 3 4 5 е 7 а 3 /о и 12 13 14 15

Рис. 1. Хроматограммы ганглиозидов, исследованных в некоторых костных опухолях на пластинках НРТЬС с силикагелем 60 в системе: хлороформ-метанол — 0,2 % СаСЬ— 60:35:6

а— I—4 — саркома Юинга; 5—6 — фибросаркома; 7—8 — ганглиозиды-стандарты, выделенные из мозга и печенн животных и человека; б — 9—12 — гигантоклеточная опухоль; 13—15 — злокачественная фиброзная гнстиоцнтома.

и 0Т1Ь. Во всех злокачественных фиброзных гистиоцитомах кости в заметной пропорции был найден ганглиозид, промежуточный по хроматографической ПОДВИЖНОСТИ между Омз И Ом2- Этот моносиалоганглиозид был обозначен нами как 0Му и не обнаруживался ни в одном из образцов исследованных гигантоклеточных опухолей, сарком Юинга, фибросаркомы.

Обследовано 2 фибросаркомы кости, одна из которых (рис. 1,а, позиция 5) резко отличалась по профилю от другой (рис. I, а, позиция 6). Если в первой преобладал ганглиозид 001а, то во второй его уровень был незначителен и основным ганглиозидом был 0Мх (в виде дублета).

На основании полученных данных можно утверждать следующее. Во всех исследованных нами опухолях костей (гигантоклеточная, саркома Юинга, злокачественная фиброзная гистиоцито-ма, фибросаркома) найден ганглиозид, обозначенный как 0Мх. Этот ганглиозид был ранее выделен нами в значительных количествах из опухолевой ткани метастазов Крукенберга. В меньших количествах он присутствовал в первичных опухолях яичников, а также в асцитической жидкости и печени мышей, носителей асцитной саркомы-37. Не исключено, что этот ганглиозид может быть связан с метастатическим потенциа лом конкретной опухоли. Каждая из изученные нами групп опухолей имеет свои особенносп

Таблица 2

Фракционный состав ганглиозидов костных опухолей различного морфологического типа (% от суммы)

Морфологический вариант опухоли Фракции ганглиозидов

°мз °02 °Т1Ь

Гигантоклеточная опухоль 44,7+3,1 6,0+3,3 33,7+5,2 6,3±1,9 9,3+0,8

Саркома Юинга 23,5+2,4 — 7,8±4, ] 56,0+9,8 — 7,9+2,6 4,8+1,9

Злокачественная фиброзная гистиоци- 33,9±6,8 7,7+3,7 9,1 + 1,6 24,2+9,2 — 19,3±2,6 5,8±1,3

тома

Фибросаркома (ФС-6) 23,3 — 52,1 3,8 13,1 — 7,7

Фибросаркома (ФС-5) 7,6 7,4 3,0 57,1 7,5 17,4

дами гигантоклеточной опухоли кости были ге-'матозиды Омз, содержащие Ы-ацетилнейрамино-вую кислоту (дублет обусловлен различиями в жирной части молекулы) и фракция йоз, а также 002 и 0Т1Ь. Во всех этих опухолях обнаруживался компонент, имевший хроматографическую подвижность, промежуточную между и Омь и обозначенный нами как 0Мх. Четвертый образец гигантоклеточной опухоли (рис. 1,6, позиция 12) также содержал в основном Омз и 003, но минорные ганглиозиды практически отсутствовали.

Образцы ганглиозидов саркомы Юинга характеризовались преобладанием Овз (дублет обусловлен наличием как М-ацетил, так и Ы-глико-лилнейраминовых кислот). Кроме того, в убывающем порядке присутствовали Омз, 0Мх, 0В2 и 0Т1Ь. Один из пяти обследованных образцов саркомы Юинга был наиболее неоднородным по ганглиозидному составу (рис. 1, а, позиция 4) и существенно отличался от остальных образцов саркомы Юинга как количественно, так и качественно. Это характеризовалось появлением значительных количеств 0Ша.

Образцы ганглиозидов злокачественной гистио-цитомы содержали 6 основных компонентов. Их соотношение заметно варьировало от опухоли к опухоли, но везде основными были ганглиозиды Омз> Орз и и в меньших количествах

Ш0-

, АеиАс-СМЭ

'«Неивс-смв

■*т

Рис. 2. Денситограммы ганглиозидов некоторых опухолей костей с пластинок HPTLC, с силикагелем 60 (10X10 см) фирмы «E. Merck» (ФРГ). Денситометр «Chromoscan-200» фирмы «Joyce-Loebl» (Англия).

1—саркома Юинга, 2— злокачественная фиброзная гистноцитома, 3—гигантоклеточная опухоль.

фракционного состава ганглиозидов, позволяющие однозначно дифференцировать ее от опухолей другого типа. В гигантоклеточных опухолях это наличие примерно одинаковых количеств GM3 и GD3 (синглетного); в саркоме Юинга — экспрессия GD3 (дуплетного) как основного ганглиозида; в злокачественной фиброзной гистио-цитоме — наличие опухолеспецифического маркера GMy и относительно высокое содержание GD2 и, наконец, своеобразие образца фибросаркомы кости (см. рис. 1, а, позиция 6) состоит в преобладании ранее упоминавшегося ганглиозида GDx.

Полученные нами данные показывают, что при различных морфологических вариантах костных сарком фракционный состав ганглиозидов претерпевает значительные изменения. Направления этих изменений, их особенности и основанные на этих результатах диагностические возможности должны быть изучены на значительно большем числе костных опухолей различного морфологического типа.

ЛИТЕРАТУРА

1. Новиков А. М., Махова Е. £., Травников М. А., Басса-лык Л. С. //Экспер. онкол.— 1989.— № 3.— С. 52—55.

2. Dyatlovitskaya E. V., Novikov А. М., Gorkova N. Р., Bergelson L. D. //Europ. J. Biochem.— 1976.— Vol. 63.— P. 357—364.

3. Hakamori S.-Т., Kannagi R. // J. nat. Cancer Inst.— 1983.— Vol. 71,— P. 231—251.

4. Magnani J. L., Brockhaus M., Smith D. F. et al. // Science.—

1981,—Vol. 212,— P. 55—56.

5. Niloson O., Brezicka F. Т., Holmgren J. et al.//Cancer Res.— 1986.—Vol. 46,—P. 1403—1407.

6. Pukel C. S., Lloyd К. O., Travassos L. R. j j J. exp. Med.—

1982,— Vol. 155,—P. 1133—1137.

7. Siddiqui B., Buehler J., De Gregorio M. W. et al. // Cancer Res.— 1984,— Vol. 44,— P. 5262—5265.

8. Schulz G., Cheresh D. A., Varid N. M. et al. // Cancer Res.— 1984,—Vol. 44,— P. 5914—5920.

9. Svenuerholm L. // Biochim. biophys. Acta. — 1957.— Vol. 24,— P. 604—611.

10. Wu Z.-L., Schwartz E., Seeger L. et al.//Cancer Res.— 1986,— Vol. 46,— P. 440—443.

Поступила 11.01.90

TYPING OF VARIOUS OSTEAL SARCOMAS BY THE FRACTIONAL COMPOSITION OF TUMOR CELL SIALO-GLYCOLIPIDS

N. E. Kushlinsky, A. M. Novikov, L. S. Bassalyk

There have been performed the studies of the general content of lipid-bound sialic acids and fractional composition of gangliosides in the following osteal sarcomas: giant cell tumor, Ewing’s sarcoma, malignant fibrous histiocytoma, fibrosarcoma. The highest concentration of lipid-bound acids

is detected in Ewing’s sarcoma. The groups oi tumors studied proved to have peculiar fractional composition of gangliosides which differentiates them from each other. Approximately similar amounts of GM3 and GD3 were noted in giant cell tumors, while GD3 was expressed as the main ganglioside in Ewing's sarcoma, tumor-specific marker GMy and relatively high amount of GD2 were detected in malignant fibrous histiocytoma, and finally, a fibrosarcoma sample has a peculiar prevalence of Gdx ganglioside detected previously. Our data show that the fractional composition of gangliosides significantly differs in varying morphological types of osteal sarcomas. The pathway of these changes, their peculiarities and diagnostic possibilities based on these results should be studied involving a higher number of osteal tumor samples of varying morphology.

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 1990 УДК 616-006.6-085.37-092.9

Е. О. Федоровская, А. В. Афанасьева, В. М. Сенин,

А. М. Поверенный

ВЛИЯНИЕ СЕРДЕЧНОГО ВАЗОДИЛАТАТОРА ДИПИРИ-ДАМОЛА НА ДИССЕМИ НАЦИЮ ВЫСОКОМЕТАСТАЗИ-РУЮЩЕГО РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ МЫШЕЙ

НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей, Институт медицинской радиологии (Обнинск)

Первоочередной проблемой лечения злокачественных опухолей является профилактика мета-стазирования, в связи с чем поиск средств, предотвращающих и значительно подавляющих метастазирование, чрезвычайно актуален. В последнее время привлечено внимание к ряду препаратов, обладающих вазодилататорной активностью, которые, как выяснилось, проявляют противоопухолевые эффекты. Особенно интересен среди них дипиридамол (Дп) (курантил, пер-сантин, антистенокордин) — эффективный коро-нарорасширяющий препарат. Дп обладает рядом свойств, которые могут играть важную роль в диссеминации опухолей. Известно угнетающее действие Дп на размножение опухолевых клеток [9], а также на пролиферацию лимфоцитов, что связывается с ингибированием транспорта нуклеотидов через мембрану [5]. Была обнаружена способность Дп индуцировать синтез интерферона у животных и человека [7, 11], связанная, как предполагают, с накоплением иммунокомпетентными клетками внутриклеточного медиатора цАМФ [1]. Кроме того, Дп значительно изменяет агрегационные свойства тромбоцитов, активирует протромбиновую активность макрофагов [10], а также влияет на уровни простациклина и метаболизм арахидоновой кислоты [8].

Все эти свойства обосновали необходимость проведения опытов, изучающих влияние Дп на метастазирование. Так, в опытах с метастази-рованием карциномы Льюис нами был получен выраженный антиметастатический эффект при использовании дозы Дп 500 мкг на мышь 1 раз в неделю, начиная с 1-го дня после прививки опухоли [4]. Однако, чтобы исключить возможность специфического воздействия Дп на метастазирование лишь в легкие, желательно было оценить влияние этого препарата на диссеми-нацию опухоли с другой органной тропностью метастазов. Для этой цели мы использовали субштамм мышиного высокометастазирующего