CC BY
36
Рис. 2. Денситограммы ганглиозидов некоторых опухолей костей с пластинок HPTLC, с силикагелем 60 (10X10 см) фирмы «E. Merck» (ФРГ). Денситометр «Chromoscan-200» фирмы «Joyce-Loebl» (Англия).
1—саркома Юинга, 2 — злокачественная фиброзная гистиоцитома, 3—гигантоклеточная опухоль.
фракционного состава ганглиозидов, позволяющие однозначно дифференцировать ее от опухолей другого типа. В гигантоклеточных опухолях это наличие примерно одинаковых количеств GM3 и GD3 (синглетного); в саркоме Юинга — экспрессия GD3 (дуплетного) как основного ганглиозида; в злокачественной фиброзной гистио-цитоме — наличие опухолеспецифического маркера GMy и относительно высокое содержание GD2 и, наконец, своеобразие образца фибросаркомы кости (см. рис. 1, а, позиция 6) состоит в преобладании ранее упоминавшегося ганглиозида GDx.
Полученные нами данные показывают, что при различных морфологических вариантах костных сарком фракционный состав ганглиозидов претерпевает значительные изменения. Направления этих изменений, их особенности и основанные на этих результатах диагностические возможности должны быть изучены на значительно большем числе костных опухолей различного морфологического типа.
ЛИТЕРАТУРА
1. Новиков А. М., Махова Е. £., Травников М. А., Басса-лык Л. С. //Экспер. онкол.— 1989.— № 3.— С. 52—55.
2. Dyatlovitskaya E. V., Novikov А. М., Gorkova N. Р., Bergeisen L. D. //Europ. J. Biochem.— 1976.— Vol. 63.— P. 357—364.
3. Hakamori S.-Т., Kannagi R. // J. nat. Cancer Inst.— 1983.— Vol. 71,— P. 231—251.
4. Magnani J. L., Brockhaus M., Smith D. F. et al. // Science.—
1981,—Vol. 212,— P. 55—56.
5. Niloson O., Brezicka F. Т., Holmgren J. et al.//Cancer Res.— 1986.—Vol. 46,—P. 1403—1407.
6. Pukel C. S., Lloyd К. O., Travassos L. R. j j J. exp. Med.—
1982,— Vol. 155,—P. 1133—1137.
7. Siddiqui B., Buehler J., De Gregorio M. W. et al. // Cancer Res.— 1984,— Vol. 44,— P. 5262—5265.
8. Schulz G., Cheresh D. A., Varid N. M. et al. // Cancer Res.— 1984,—Vol. 44,— P. 5914—5920.
9. Svenuerholm L. // Biochim. biophys. Acta. — 1957.— Vol. 24,— P. 604—611.
10. Wu Z.-L., Schwartz E., Seeger L. et al.//Cancer Res.— 1986,— Vol. 46,— P. 440—443.
Поступила 11.01.90
TYPING OF VARIOUS OSTEAL SARCOMAS BY THE FRACTIONAL COMPOSITION OF TUMOR CELL SIALO-GLYCOLIPIDS
N. E. Kushlinsky, A. M. Novikov, L. S. Bassalyk
There have been performed the studies of the general content of lipid-bound sialic acids and fractional composition of gangliosides in the following osteal sarcomas: giant cell tumor, Ewing’s sarcoma, malignant fibrous histiocytoma, fibrosarcoma. The highest concentration of lipid-bound acids
is detected in Ewing’s sarcoma. The groups oi tumors studied proved to have peculiar fractional composition of gangliosides which differentiates them from each other. Approximately similar amounts of GM3 and GD3 were noted in giant cell tumors, while GD3 was expressed as the main ganglioside in Ewing's sarcoma, tumor-specific marker GMy and relatively high amount of GD2 were detected in malignant fibrous histiocytoma, and finally, a fibrosarcoma sample has a peculiar prevalence of Gp* ganglioside detected previously. Our data show that the fractional composition of gangliosides significantly differs in varying morphological types of osteal sarcomas. The pathway of these changes, their peculiarities and diagnostic possibilities based on these results should be studied involving a higher number of osteal tumor samples of varying morphology.
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ. 1990 УДК 616-006.6-085.37-092.9
Е. О. Федоровская, А. В. Афанасьева, В. М. Сенин,
А. М. Поверенный
ВЛИЯНИЕ СЕРДЕЧНОГО ВАЗОДИЛАТАТОРА ДИПИРИ-ДАМОЛА НА ДИССЕМИ НАЦИЮ ВЫСОКОМЕТАСТАЗИ-РУЮЩЕГО РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ МЫШЕЙ
НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей, Институт медицинской радиологии (Обнинск)
Первоочередной проблемой лечения злокачественных опухолей является профилактика мета-стазирования, в связи с чем поиск средств, предотвращающих и значительно подавляющих метастазирование, чрезвычайно актуален. В последнее время привлечено внимание к ряду препаратов, обладающих вазодилататорной активностью, которые, как выяснилось, проявляют противоопухолевые эффекты. Особенно интересен среди них дипиридамол (Дп) (курантил, пер-сантин, антистенокордин) — эффективный коро-нарорасширяющий препарат. Дп обладает рядом свойств, которые могут играть важную роль в диссеминации опухолей. Известно угнетающее действие Дп на размножение опухолевых клеток [9], а также на пролиферацию лимфоцитов, что связывается с ингибированием транспорта нуклеотидов через мембрану [5]. Была обнаружена способность Дп индуцировать синтез интерферона у животных и человека [7, 11], связанная, как предполагают, с накоплением иммунокомпетентными клетками внутриклеточного медиатора цАМФ [1]. Кроме того, Дп значительно изменяет агрегационные свойства тромбоцитов, активирует протромбиновую активность макрофагов [10], а также влияет на уровни простациклина и метаболизм арахидоновой кислоты [8].
Все эти свойства обосновали необходимость проведения опытов, изучающих влияние Дп на метастазирование. Так, в опытах с метастази-рованием карциномы Льюис нами был получен выраженный антиметастатический эффект при использовании дозы Дп 500 мкг на мышь 1 раз в неделю, начиная с 1-го дня после прививки опухоли [4]. Однако, чтобы исключить возможность специфического воздействия Дп на метастазирование лишь в легкие, желательно было оценить влияние этого препарата на диссеми-нацию опухоли с другой органной тропностью метастазов. Для этой цели мы использовали субштамм мышиного высокометастазирующего
рака с преимущественной локализацией метастазов в печени (ВМР-П). Штамм был получен из спонтанной карциномы молочной железы [3]. Опухоль перевивается сингенно и с высокой частотой метастазирует в печень,. а также дает метастазы в селезенку, легкие, лейки, яичники. Опухоль прививали внутримышечно суспензией клеток в дозе 3X105. В опытах были использованы самки A/Sn 2—3-месячного возраста. Всех животных забивали на 24—25-е сутки (после первых падежей животных в контрольной группе).
Интенсивность метастазирования оценивали, во-первых, полуколичественно, по степени поражения метастазами печени и легких. Отмечали высокую (свыше 40 метастазов), среднюю (от 10 до 40) и низкую (меньше 10) степени метастазирования, а также количество животных без метастазов. Достоверность отличий между опытными и контрольными группами проверяли по критерию U Вилкоксона [2]. Во-вторых, оценивали нарастание массы печени за счет роста метастазов в опыте и контроле, определяя индекс печени (отношение массы печени к массе тушки). В этом случае достоверность различий оценивали по критерию Стьюдента.
Так как нас более всего привлекали интер-ферониндуцирующие свойства Дп, то его воздействие на метастазирование мы сравнивали с воздействием стандартного индуктора синтеза интерферона — полиинозин-полицитидиловой кислоты (поли И:Ц). Дп (VEB, ГДР, в ампулах) вводили перорально по 500 мкг на мышь массой 19—20 г 1 раз в неделю, начиная с первого дня после прививки опухоли. Поли И:Ц (Calbiochem, Швейцария) вводили парентерально по 50 мкг на мышь в 0,2 мл физиЬлоги-ческого раствора, также начиная с первых суток после прививки опухоли по одному разу еженедельно.
Результаты и обсуждение. Проведено 2 опыта по изучению * влияния Дп и поли И:Ц на метастазирование опухоли ВМР-П. Ни в одной из опытных групп не отмечено достоверных отличий в изменении размера опухоли от контрольных групп.
Результаты полуколичественной оценки интенсивности метастазирования в легкие и печень представлены в виде гистограмм на рис. 1 и 2. В первом опыте (рис. 1, а) в контрольной груп-
? Шз [~<
'-ШОг-
Контроль П0ЛиИ:Ц
Рис. 1. Влияние поли И:Ц и Дп в I опыте на интенсивность метастазирования ВМР-П.
а—в печень (для поли И:Ц ри<0,01. для Дп рц<0,05>; б — в легкие (для поли И:II ри<0,05, для Дп ри<0,05);* — см. табл.
Обозначения интенсивности метастазирования:
I—сильная степень (свыше 40 местастазов), 2 — средняя степень (от 10 до 40), 3 — слабая степень (меньше 10), 4 — отсутствие метастазов.
t Je-
Б * 5
О'їз =3
40 О д
Ш
си Сэ Cj
> <^ N ijö g с; * с
о
1; <J ?
50
Контроль поли И-Ц Дп
Контроль поли H U Дп
Рис. 2. Влияние поли И:Ц и Дп во II опыте на интенсивность метастазирования ВМР-П.
а — в печень (для поли И:Ц Ри<0,05, для Дп р^<0,05); б — в легкие (для поли И:Ц ри<0,05, для ДТ1ри>0,05)
пе все животные имели максимальную выраженность поражения печени метастазами. После введения животным поли И:Ц у 55 % из них не было видимых метастазов в печень. При введении Дп метастазов не было у 8 % животных, а у 25 % наблюдались лишь единичные метастазы по сравнению со 100 % высоким уровнем метастазирования в контроле. Все различия между опытными и контрольными группами достоверны по критерию и. При исследовании интенсивности метастазирования в легкие (рис. 1,6) в контрольной группе на поверхности легких наблюдали среднее количество метастазов у 20 % мышей, а у 80 % — единичные метастазы. В группе с использованием поли И:Ц метастазы отсутствовали у 55 % животных, а в группе с применением Дп — у 27 %. Все отличия достоверны по критерию и. Кроме того, в этом опыте наблюдались единичные метастазы в селезенке: в контрольной группе —
у всех мышей, в группах же с Дп и с поли И:Ц было соответственно 25 и 54 % животных без видимых метастазов.
Во втором опыте (рис. 2, а) в контрольной группе наблюдали высокую степень метастазирования в печень у 80 % животных, а у остальных — среднюю. При использовании поли И:Ц у 23 % животных обнаружили единичные метастазы в печень, а у 69 % животных метастазов в легкие не было (рис. 2,6).
При использовании Дп у 23 % животных были единичные метастазы на поверхности печени, а метастазов в легкие не обнаружено у 46 % животных. Но отличие интенсивности метастазирования на поверхности легких от контроля было недостоверным (Рц>0,05, п 1= 12, п2= 13).
Интенсивность метастазирования в печень оценивали также по индексу печени. Масса и индекс печени опытных и контрольных групп представлены в табл. Из таблицы видно, что индекс печени во всех контрольных группах достоверно отличался от такового в опытных группах. Эти результаты хорошо коррелируют с оценкой, полученной полуколичественным методом. В случае оценки метастазирования по индексу печени результаты для Дп выглядят несколько лучше, чем для поли И:Ц, в отличие от полуколичественной оценки интенсивности метастазирования. Учитывая, что поли И:Ц чрезвычайно токсичен и является поликлональным стимулятором, антиметастатические свойства Дп заслуживают внимания и дальнейшего изучения [6].
3 В-к ВОНЦ № 1
17
Название групп Опыт 1 Опыт 2
масса печени, г индекс печени масса печени, г индекс печени
1. Контроль 1,82+0,27 0,086+0,020 1,57+0,50 0,088±0,020
(10)* (12)
2. Дипиридамол 1,36±0,27 0,061+0,010 1,30+0,22 0,062+0,020
(500 мкг на мышь) (13) (13)
р<0,01 р<0,01 р<0,01 р<0,01
3. Поли И:Ц 1,46+0,27 0,064+0,020 1,32+0,21 0,066+0,050
(50 мкг на мышь) (13) (13)
р<0,05 р<0,05 р<;0,05 р<0,05
Примечание. Звездочкой обозначено количество животных в группе; р — достоверность различий между опытными и контрольными группами по ^критерию Стьюдента.
В наших опытах Дп использовался в дозе 25 мг на 1 кг массы, которая является интер-ферониндуцирующей у мышей [7, 11]. При использовании максимально переносимых доз у мышей (свыше 100 мг/кг при подкожном введении) происходит подавление размножения опухолевых клеток, что связывают с ингибированием транспорта нуклеотидов через мембрану [5]. Высокие дозы Дп вместе с цитостатиками, апробированные в клинических испытаниях, дают значительный синергический эффект, однако эти дозы являются токсичными для организма [12].
В наших опытах показано, что препарат дипи-ридамол и в терапевтических дозах дает выраженный антиметастатический эффект, причем уменьшает метастазирование опухолей с разной органной тропностью. Хорошо изученные токсикологические и фармакологические свойства Дп делают возможными его испытания с целью профилактики метастазов. Однако вопрос о механизмах действия Дп на диссеминацию опухолей остается открытым.
ЛИТЕРАТУРА
1. Григорян С. С., Поверенный А. М., Ершов Ф. И. // Вопр. вирусол.— 1987.— № 2.— С. 204—207.
2. Гублер Е. В., Генкин А. А. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. Л., 1973.
3. Сенин. В. М., Иванов А. В., Афанасьева А. В., Бун-цевич А. М. // Вестн. АМН СССР.— 1984.— № 5.— С. 85—91.
4. Федоровская Е. О., Пелевина И. И., Афанасьев Г. Г. и др. // Бюл. экспер. биол.— 1989.— № 1.— С. 83—85.
5. Brusereid Q. // Clin. Immunol. Immunopath.— 1987.— Vol. 42,— P. 102—109.
6. Cao Sh., Zhen Y. // Cancer ChemQther. Pharmacol.— 1989,—Vol. 24,— P. 181 —186.
7. Galabov A. S., Masticova M. // Acta virol.— 1982.—
Vol. 26,— P. 137—147. \
8. Grem J. L., Fisher P. M. // Pharmacol. Ther.— 1989.—
Vol. 40,—P. 349—371. i
9. Masao H., Eys /., Tsumo N. et al. // Cancer Res.— 1986,—Vol. 33,—P. 51—57.
10. Neiwiarowski S., Lukasiewicz H. et al.i // J. Lab. clin. Med.— 1975,— Vol. 86,— P. 64—76.
11. Tonev E., Indulen М. K-, Dzeguza D. R.\ // Acta virol.—
1982,—Vol. 26,—P. 125—129.
12. Young C. W. U Med. Clin. N. Amer.— 1971,—Vol. 55,— P. 721—728.
Поступила 3.01.90
THE EFFECT OF THE HEART VASODILATATOR DIPYRIDAMOLE ON THE DISSEMINATION OF HIGHLY-ME-
TASTATIC MURINE MAMMARY CARCINOMA
E. O. Fedorovskaya, A. V. Afanasyeva, V. M. Senin, A. M. Poverenny
The well-known heart vasodilatator dipyridamole was studied to determine its effect on the dissemination of a highly-metastatic murine mammary tumor. The dose of dipyridamole selected (25 mg/kg per week) was therapeutic, non-toxic and known to induce interferon production. Dipyridamole, given at this dose per os, significantly inhibited formation of métastasés in liver, lungs and other organs.
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 1990 УДК 576.8.078.73
А. К- Язова, А. И. Гусев, В. С. Полторанина, Е. Ф. Якименко, Г. И. Абелев
ЭПИТОПЫ АЛЬФА-ФЕТОПРОТЕИНА ЧЕЛОВЕКА — ВЫЯВЛЕНИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫМИ АНТИТЕЛАМИ
НИИ канцерогенеза
Альфа-фетопротеин (АФП) — эмбриоспецифи-ческий сывороточный одноцепочечный гликопротеин с мол. м. 70 кД, содержащий около 4 % углеводов,— является маркером гепатоцеллюлярного рака и тератокарцином [1]. Попытки изучения антигенной структуры этого белка делались путем иммунологического сравнения АФП различных видов млекопитающих на уровне поликлональных антител [3, 5, 11, 15, 6], но такой подход позволял регистрировать только наличие или отсутствие сходных антигенных детерминант (эпитопов) и не позволял судить о количестве эпитопов АФП. Моноклональные антитела (МкАт) — продукты гибридом [13] —представляют уникальный инструмент для изучения антигенов с точки зрения их эпитопного построения, так как моноклональность гибридом определяет специфичность МкАт относительно одного лишь эпитопа антигена, если этот эпитоп не повторяется в молекуле. Так, с помощью МкАт к АФП человека (АФПч) разными группами исследователей выявлено в этом антигене разное количество эпитопов: 4 — при анализе 7 МкАт [16], 5 МкАт [17] и 7 отдельных эпитопов — при анализе 20 МкАт [12].
В настоящей работе приводятся полученные иммуноферментным методом (ИФМ) данные по изучению эпитопной специфичности 12 МкАт к АФПч. Сочетанием двух подходов (анализ реакции с гетерологичкыми АФП и анализ кооперативного связывания парных смесей МкАт с
