CC BY
39УДК 616.155.36:616-056.3:582.282.123.4:611.24
ТЕСТ АКТИВАЦИИ
БАЗОФИЛОВ В
ДИАГНОСТИКЕ
АЛЛЕРГИЧЕСКОГО
БРОНХОЛЕГОЧНОГО
АСПЕРГИЛЛЕЗА
1Козлова я.и. (доцент кафедры)*, 2учеваткина А.Е. (с.н.с.), 3бычкова н.В. (с.н.с.), 2Филиппова л.В. (с.н.с.), ^ак о.В. (в.н.с.), 1Пятакова А.В. (старший лаборант кафедры), 2Фролова Е.В. (зав. лаб.), 3Давыдова н.и. (зав. лаб.), 1Климко н.н. (зав. кафедрой)
Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова:1 Кафедра клинической микологии, аллергологии и иммунологии и 2НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина; 3 Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины им. А.М. Никифорова МЧС России, Санкт-Петербург, Россия
©Коллектив авторов, 2016
Аллергический бронхолегочный аспергиллез (АБЛА) - заболевание легких, возникающее у больных бронхиальной астмой или му-ковисцидозом, вызванное гиперчувствительностью к антигенам Aspergillus spp. АБЛА характеризуется плохо контролируемым течением фоновой патологии и развитием дыхательной недостаточности. Кожные и провокационные пробы с грибковыми аллергенами как методы диагностики АБЛА in vivo не всегда обладают достаточной надежностью результатов, при этом провокационные пробы могут привести к опасному осложнению в виде анафилактического шока. В статье описано первое в России использование теста активации базофилов для выявления микогенной аллергии в качестве метода диагностики гиперчувствительности 1 типа in vitro. Установлено, что применение этого теста позволяет дифференцировать АБЛА и атопическую бронхиальную астму без микогенной сенсибилизации и открывает новые возможности для диагностики аллергического бронхолегочного аспергиллеза.
Ключевые слова: аллергический бронхолегочный аспергиллез, Aspergillus spp., микогенная аллергия, тест активации базофилов
BASOPHIL ACTIVATION TEST IN THE DIAGNOSIS OF ALLERGIC BRONCHOPULMONARY ASPERGILLOSIS
1Kozlova Y.i. (associate professor of the chair), 2Uchevatkina A.E. (senior scientific collaborator), 3Bychkova N.v. (senior scientific collaborator), 2Filippova L.v. (senior scientific collaborator), ^ak o.v. (leading scientific collaborator), 1Pyatakova A.v. (senior laboratorian of the chair), frolova E.v. (head of the laboratory), 3Davydova N.I. (head of the laboratory), 1Klimko N.N. (head of the chair) North-Western State Medical University named after I.I.Mechnikov: 1Chair of clinical mycology, allergology and immunology and, 2Kashkin Research Institute of Medical Mycology; 3 All-Russian Center of Extremal and Radiation Medicine, Russian Ministry of Extreme Situations, St. Petersburg, Russia
Контактное лицо: Козлова Яна Игоревна, Тел.: (812) 303-51-46
©Collective of authors, 2016
Allergic bronchopulmonary aspergillosis (ABPA) is a lung disease arising in patients with bronchial asthma or cystic fibrosis caused by the hypersensitivity against antigens of Aspergillus spp. ABPA is characterized by poorly controlled over background pathology and the development of respiratory failure. Skin and provocation tests with fungal allergens as methods of diagnosis of ABPA in vivo do not always have sufficient reliability of results, while provocative tests can cause dangerous complications in the form of anaphylactic shock. The first in Russia use of basophil activation test for the detection of fungal sensitization as a method of diagnosis of hypersensitivity type 1 in vitro have been described in this article. It was found that the use of this test allows us to differentiate ABPA and atopic asthma without fungal sensitization and opens up the new opportunities for the diagnosis of allergic bronchopulmonary aspergillosis.
Key words: allergic bronchopulmonary aspergillosis, Aspergillus spp., basophil activation test, fungal sensitization
введение
Аллергический бронхолегочный аспергиллез (АБЛА) - заболевание легких, обусловленное гиперчувствительностью к Aspergillus spp., которое осложняет течение бронхиальной астмы и муковисцидоза [1, 2]. Развитие АБЛА утяжеляет течение фоновой патологии и способствует прогрессированию дыхательной недостаточности [3]. По данным D.W. Denning и соавт., вероятное количество больных АБЛА составляет около 4,8 млн. пациентов среди общего количества (193 млн.) больных бронхиальной астмой по всему миру [4]. В Российской Федерации расчетное количество больных АБЛА - 175 тысяч человек [5]. Своевременная диагностика АБЛА очень важна, поскольку помогает предупредить прогрессирование этого хронического инвалидизирующего заболевания легких и начать специфическую антимикотическую терапию [6].
Микогенная сенсибилизация - значимый патогенетический компонент АБЛА. Важно выявление сенсибилизации именно к Aspergillus spp., так как, по мнению многих авторов, она ассоциирована с более высокой частотой развития бронхоэктазов и тяжелым течением бронхиальной астмы [7-10]. На сегодняшний день в качестве средств специфической диагностики гиперчувствительности к грибковым аллергенам врачи располагают только кожными тестами и определением специфических IgE-антител (sIgE). Ингаляционный провокационный тест с антигенами Aspergillus spp. не рекомендуют в связи с возможностью развития фатального бронхоспазма [3, 11]. К недостаткам кожного тестирования относят риск развития побочных реакций организма на дополнительную антигенную нагрузку, а также возможность возникновения лож-ноположительных и ложноотрицательных результатов [12]. Несмотря на большой прогресс в современной аллергодиагностике, определение sIgE связано с рядом трудностей. Иммуноглобулины этого класса характеризуются низким содержанием в сыворотке крови, могут отсутствовать в циркуляции, но быть фиксированными на клетках-мишенях - базофилах и тучных клетках [13]. Таким образом, в рутинной практике специалисты часто сталкиваются с проблемой подтверждения неясных результатов кожных тестов и определения sIgE независимым методом.
В настоящее время ведут поиск новых тестов, которые помогут выявить патогенетические механизмы аллергии, диагностировать и дифференцировать псевдоаллергические реакции. Одно из наиболее перспективных направлений аллергодиагностики in vitro - тест активации базофилов специфическими аллергенами с
■
помощью проточной цитометрии [14-17].
Базофилы периферической крови и тканевые тучные клетки являются ключевыми эффекторны-ми клетками в реакциях гиперчувствительности немедленного типа. Они важны в дифференцировке Т-хелперов 2-го типа (Th2) путем секреции цитокинов и антигенной презентации, что имеет большое значение в развитии IgE-опосредованного хронического аллергического воспаления, и играют ключевую роль в IgG-опосредованной системной анафилаксии [18]. Кроме того, базофилы и тучные клетки также могут быть вовлечены и в другие типы аллергического и неаллергического ответов, в основе которых лежат иные механизмы реакции: активация комплемента, не-IgE-опосредованная стимуляция и прямое цитотокси-ческое (неиммунологическое) воздействие. Поэтому изучение функциональной активности базофилов имеет важное диагностическое значение [19]. Принцип теста активации базофилов сводится к тому, что при контакте аллергена с молекулами фиксированных на базофилах IgE запускается каскад ферментных реакций, приводящих к дегрануляции и появлению на клеточной поверхности дополнительных молекул. К таким молекулам относятся, например, маркер дегра-нуляции CD63 и активационные молекулы CD203c, CD13, CD107a, CD643 [20]. В настоящее время наиболее изученными и перспективными в аллергодиагно-стике маркерами активации базофилов считают CD63 и CD203с [21, 22].
Тест активации базофилов как провокационный тест in vitro рекомендуют для диагностики аллергических реакций I типа в дополнение к традиционным способам определения sIgE и кожным пробам. Кроме того, этот тест можно использовать для контроля де-сенситизации и специфической иммунотерапии [21, 23, 24]. Опубликованы, в том числе и нашей стране, результаты применения теста активации базофилов в диагностике инсектной, пищевой, пыльцевой, лекарственной аллергии, а также хронической крапивницы [14-17, 25, 26]. В 2012 г. Gernez и соавторы представили результаты применения теста активации базофилов для диагностики АБЛА у больных муковисцидозом [27], где показали, что тест активации базофилов дает возможность дифференцировать колонизацию дыхательных путей больных муковисцидозом и сенсибилизацию к Aspergillus. Ряд исследователей считает, что тест активации базофилов, в сочетании с определением sIgE к Aspergillus и общего IgE, способствует своевременному выявлению всех случаев АБЛА у больных муковисцидозом и в дальнейшем может быть использован у больных бронхиальной астмой [27-29]. Данных об использовании теста активации базофилов с грибковыми аллергенами в России не найдено.
Цель работы - изучить возможности применения теста активации базофилов с аллергенами Aspergillus fumigatus in vitro методом проточной цитометрии для выявления микогенной аллергии у больных аллергическим бронхолегочным аспергиллезом.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Обследованы 136 больных бронхиальной астмой различной степени тяжести. Медиана возраста - 32 года (от 5 до 71 года). Использовали клинические, аллергологические, иммунологические и инструмен-
тальные методы исследования. При подозрении на АБЛА выполняли компьютерную томографию органов грудной клетки.
Аллергологическое обследование включало кожные прик-тесты с шестью грибковыми аллергенами: Alternaria, Aspergillus, Cladosporium, Penicillium, Rhizopus, Candida («Allergopharma», Германия). С помощью иммуноферментного анализа определяли уровень общего IgE (ООО «Полигност», Россия) и sIgE к грибковым, бытовым и эпидермальным аллергенам (панель биотинилированных аллергенов «Алкор Био», Россия) в сыворотке крови.
Уровень контроля симптомов и степень тяжести бронхиальной астмы выявляли в соответствии с критериями «Глобальной стратегии лечения и профилактики бронхиальной астмы» (GINA, 2014). Для обнаружения микогенной сенсибилизации применяли критерий, предложенный международными экспертами ISHAM [30]: положительный кожный прик-тест (>3 мм) и/или выявление в сыворотке крови уровня специфического IgE к грибковому аллергену, соответствующего классу 1 и выше (>0,35 МЕ/мл). Диагноз АБЛА устанавливали на основании критериев Agarwal R. et al., 2013 г [31].
Тест активации базофилов выполняли на базе лаборатории клинической иммунологии Всероссийского центра экстренной и радиационной медицины им. А.М. Никифорова МЧС России. Кровь для исследования забирали натощак из кубитальной вены. В качестве антикоагулянта использовали гепарин. Постановку исследуемых проб осуществляли в течение 1-2 часов от момента забора крови. Изучение активации базофилов проводили в многоцветном анализе методом проточной цитометрии с применением набора Allerginicity Kit (Cellular Analysis of Allergy, BECKMAN-COULTER) в соответствии с инструкцией производителя. Базофилы идентифицировали с помощью маркеров CD3-CRTH2+CD203c+ (CRTH2 - хемоаттрактант-ный рецептор, который экспрессируется на нескольких типах клеток крови, в том числе базофилах, Th2), а выявление активации базофилов - по увеличению содержания клеток с высокой экспрессией CD203c. Методика теста активации базофилов Allerginicity Kit: 100 мкл цельной периферической крови окрашивали тройным коктейлем моноклональных антител CRTH2-FITC/CD203c-PE/CD3-PC7 в присутствии буферного раствора (отрицательный контроль), анти-IgE антител - антител к комплексу IgE с высокоаффинным рецептором для IgE (Fc£R1) (положительный контроль) и аллергенов A. fumigatus в течение 15 минут при 37 оС на водяной бане в темноте. Далее проводили лизис эритроцитов лизирующим фиксирующим реагентом, входящим в набор Allerginicity Kit. В каждой пробе оценивали 500 базофилов методом проточной цито-метрии в мультипараметрическом протоколе с многоэтапным гейтированием.
Таким образом, у каждого пациента исследовали спонтанную активацию базофилов - долю клеток CD3-CRTH2+CD203c++ от общего количества базофилов в пробе с буферным раствором, что дает возможность разграничить уровень экспрессии молекул покоящихся клеток по сравнению с состоянием активации клетки. Оценку положительного контроля, обеспечивающего имитацию связывания аллергена с комплексом
бронхиальной астмой без микогенной сенсибилизации в возрасте от 22 до 63 лет (медиана - 45). Пациентам обеих групп в дополнение к стандартному аллер-гологическому обследованию провели тест активации базофилов с аллергенами A. fumigatus (табл.).
Установлено, что спонтанная активация базофилов не различалась у больных АБЛА и БА и колебалась в пределах от 1,4% до 8,6%. Активация базофилов анти-IgE антителами (положительный контроль) у пациентов с АБЛА была выше, чем у больных БА.
Отметим, что для оценки уровня активации базофилов по экспрессии CD203c в ответ на инкубацию с аллергеном используют не только определение количества активированных базофилов, но и индекс стимуляции (ИС). ИС - отношение процента активированных базофилов в пробе с аллергеном к проценту их спонтанной активации в нестимулированном контроле. Для выявления сенсибилизации к Aspergillus spp. у больных муковисцидозом Mirkovic B. и соавторы рассматривают диагностически значимым ИС более 1,36 [29]. В нашем исследовании тест с аллергеном считали положительным при ИС 1,1 и более.
При использовании в тесте активации базофилов аллергенов A. fumigatus различных производителей получены сопоставимые данные. В крови больных АБЛА определено от 9,2 до 93,8% базофилов, активированных аллергеном A. fumigatus («Алкор Био», Россия), и от 15,2 до 95,4% - стимулированных аллергеном A. fumigatus BAG-M3 («BUEHLMANN, Швейцария). ИС колебался от 1,1 до 18,0 и от 1,8 до 48,6 соответственно. Данные теста активации базофилов пациента с АБЛА представлены на рисунке.
В группе сравнения установлено достоверно более низкое количество сенсибилизированных базофилов. После внесения в пробу специфических аллергенов уровни активированных базофилов были не выше фоновых значений и колебались в пределах от 2,6 до 7,6% и от 1,4 до 8,0% при использовании для стимуляции аллергенов различных производителей. ИС не превышал значения 0,9 в первом случае и 1,05 - во втором. Следовательно, в группе пациентов с бронхиальной астмой при выполнении аллерген-индуцированной активации клеток сенсибилизации к A. fumigatus не выявили.
Таблица
Показатели теста активации базофилов с аллергенами A. fumigatus
Пациенты Уровень sIgE Aspergillus (МЕ/мл) Спонтанная активация базофилов, % Активация базофилов анти-IgE антителами, % Кол-во активированных базофилов, % «Алкор Био» ИС Кол-во активированных базофилов, % «Buehlmann» ИС
Группа 1. Аллергический бронхолегочный аспергиллез
Пац. 1 1,3 8,6 71,0 9,2 1,1 15,2 1,8
Пац. 2 6,5 1,4 41,0 11,2 8,0 68,0 48,6
Пац. 3 6,6 6,4 41,2 41,6 6,5 52,6 8,2
Пац. 4 1,0 4,5 67,0 76,2 16,9 83,0 18,5
Пац. 5 18,0 5,2 87,8 93,8 18,0 95,4 18,3
Me 6,47 5,2 67 41,6 6,5 68 18,3
Lq-Hq 1,25-6,60 4,5-6,4 41,2-71 11,2-76,2 3,7-16,9 52,6-83,0 8,8-18,5
Группа 2. Бронхиальная астма
Пац. 6 0,01 4,2 9,6 2,6 0,8 1,4 0,3
Пац. 7 0,01 6,6 45,0 5,6 0,9 1,6 0,2
Пац. 8 0,01 8,0 37,0 4,8 0,6 5,2 0,7
Пац. 9 0,02 8,3 21,0 7,6 0,9 8 0,96
Пац.10 0,03 3,8 32,6 3,2 0,8 4 1,05
Me 0,01 6,6 32,6 4,8 0,8 4 0,7
Lq-Hq 0,01-0,02 4,2-8,0 21,0-37,0 3,2-5,6 0,8-0,9 1,6-5,2 0,3-0,96
Р 0,01 0,75 0,03 0,01 0,01 0,01 0,01 9
sIgE/FceR1 на мембране базофилов, применяли для анализа способности базофилов к активации. Для стимуляции базофилов в работе использовали аллергены A. fumigatus двух производителей: «BUEHLMANN», Flou-CAST-Allergens, BAG-M3 (Швейцария) и «Алкор-Био» (Россия).
Полученные результаты статистически обрабатывали с помощью программной системы STATISTICA for Windows (версия 6.0). Оценивали значимость различий количественных показателей в независимых выборках по U-критерию Манна-Уитни. Достоверными различиями сравниваемых параметров считали значения р<0,05. Степень зависимости между показателями определяли с помощью ранговой корреляции Спирмена.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Как известно, плесневые микромицеты являются широко распространенными источниками аллергенов в окружающей среде. В многочисленных исследованиях показана высокая частота микогенной сенсибилизации у больных бронхиальной астмой. По данным Agarwal R. и соавт., которые провели мета-анализ 21 исследования, у больных БА частота сенсибилизации к Aspergillus spp. составила 28%, а развитие АБЛА -12,9% [11].
В микологической клинике СЗГМУ им. И.И. Мечникова в Санкт-Петербурге при обследовании 136 больных бронхиальной астмой микогенную сенсибилизацию выявили у 57 человек, что составило 42% от общего числа обследованных. Результаты аллерголо-гического обследования сопоставимы с другими исследованиями. Самую высокую частоту микогенной сенсибилизации отмечали к Aspergillus spp. (25,7%). Частота сенсибилизации к другим микромицетам составила: Penicillium spp. - 22,6%, Alternaria spp. - 17,1%, Mucor spp. - 13,8%, Cladosporium spp. - 12,7%, Rhizopus spp. - 1,6%. На основании результатов углубленного микологического и рентгенологического обследований АБЛА выявили у 7 (5,1%) больных бронхиальной астмой.
В данное исследование включили 5 пациентов с АБЛА в возрасте от 34 до 63 лет, (медиана - 41). Контрольную группу составили 5 больных атопической
Рис. Данные теста активации базофилов (АБЛА, пациент 5): А - спонтанная активация базофилов (отрицательный контроль); В - активация базофилов анти-1дЕ антителами (положительный контроль); С - активация базофилов аллергеном А. ^ит1даи «Алкор-Био», Россия; Э - активация базофилов аллергеном А. ^т1даи «Вие1тапп», Швейцария.
Установлены достоверные различия по уровням sIgE к A. fumigatus у больных АБЛА и атопической БА. Таким образом, исследованные группы пациентов различались как по содержанию sIgE к A. fumigatus в сыворотке крови, так и по количеству активированных аллергенами базофилов, что подтверждено данными корреляционного анализа. Определена прямая положительная корреляционная связь между уровнями sIgE к A. fumigatus и количеством базофилов, активированных аллергенами A. fumigatus («Алкор Био»), и BAG-M3 (r=0,73; r=0,76 соответственно, при р<0,05).
При анализе полученных данных установили, что тест активации базофилов выявил сенсибилизацию к A. fumigatus у всех обследованных больных АБЛА. В то же время, у пациентов с БА без микогенной сенсибилизации результаты теста in vitro с использованными аллергенами были отрицательными. Итоги теста соответствовали данным анамнеза, положительным результатам кожных проб и sIgE к A. fumigatus, что может быть показателем высокой специфичности и чувствительности предложенного метода. Тест активации базофилов может быть рекомендован для использования в алгоритме диагностики микогенной аллергии. Преимуществом метода являются безопасность для пациента и возможность стандартизации. Кроме того, он может быть использован как экспресс-тест, так как учет результатов проводят через один час от начала исследования, при этом возможна количественная оценка степени сенсибилизации организма.
Диагностика микогенной аллергии - актуальная задача современной медицины. Гиперчувствительность к
грибковым аллергенам играет важную роль в патогенезе не только АБЛА, но и тяжелой бронхиальной астмы с микогенной сенсибилизацией, аллергического мико-тического риносинусита и других хронических заболеваний органов дыхания [1-4, 8, 9, 32]. Своевременное выявление этих заболеваний необходимо для назначения адекватной противовоспалительной и антими-котической терапии. В том случае, когда выполнение провокационных исследований связано с риском развития системных реакций, а для проведения кожных проб имеются противопоказания, особенно важны методы диагностики in vitro. Тест активации базофилов с помощью проточной цитометрии - доступный и перспективный метод исследования гиперчувствительности немедленного типа. В настоящее время тест может быть использован в качестве дополнительного метода диагностики микогенной аллергии.
выводы
1. У больных бронхиальной астмой частота сенсибилизации к Aspergillus spp. составила 25%, частота развития аллергического бронхолегочного аспергил-леза - 5,1%.
2. У всех больных АБЛА с помощью теста активации базофилов была подтверждена сенсибилизация к A. fumigatus.
3. Тест активации базофилов - перспективный метод для лабораторной диагностики микогенной аллергии и оценки ее влияния на степень поляризации иммунного ответа по Th2 типу.
цитированная литература
1. Agarwal R. Allergic bronchopulmonary aspergillosis // Chest. - 2009. - Vol. 135. - Р. 805-826.
2. Hogan C., Denning D.W. Allergic bronchopulmonary aspergillosis and related allergic syndromes // Semin Respir. Crit .Care Med. - 2011. - Vol. 32. - Р. 682-692.
3. Agarwal R., Chakrabarti A., Shah A., et al. For the ABPA complicating asthma ISHAM working group Allergic bronchopulmonary aspergillosis: review of literature and proposal of new diagnostic and classification criteria // Clinical & Experimental Allergy. - 2013. -Vol. 43. - Р. 850-873.
4. Denning D.W., Pleuvry A., Cole D.C. Global burden of allergic bronchopulmonary aspergillosis with asthma and its complication chronic pulmonary aspergillosis in adults // Med Mycol. - 2013. - Vol. 51. - Р. 361-370.
5. Климко Н.Н., Козлова Я.И., Хостелиди С.Н. и др. Распространенность тяжелых и хронических микотических заболеваний в Российской Федерации по модели LIFE program // Проблемы медицинской микологии. - 2014. - № 1. - С.3-9.
6. Agarwal R. What is the current place of azoles in allergic bronchopulmonary aspergillosis and severe asthma with fungal sensitization // Expert Rev Respir Med. - 2012. - Vol. 6. - P. 363-371.
7. Fairs A., Agbetile J., Hargadon B. et al. IgE sensitisation to Aspergillus fumigatus is associated with reduced lung function in asthma // Am J Respir Crit Care Med. - 2010. - Vol. 182. - Р. 1362-1368.
8. Menzies D., Holmes L., McCumesky G. et al. Aspergillus sensitization is associated with airflow limitation and bronchiectasis in severe asthma // Allergy. - 2011. - Vol. 66. - Р. 679-685.
9. Agarwal R., Noel V., Aggarwal A.N. et al. Clinical significance of Aspergillus sensitization in bronchial asthma. - Mycoses. -2011. - Vol. 54. - Р. 531-538.
10. Agbetile J., Fairs A., Desai D. et al. Isolation of filamentous fungi from sputum in asthma is associated with reduced post-bron-chodilator FEV(1) // Clin Exp Allergy. - 2012. - Vol. 42. - Р.782-791.
11. Agarwal R., Aggarwal A.N., Gupta D., Jindal S.K. Aspergillus hypersensitivity and allergic bronchopulmonary aspergillosis in patients with bronchial asthma: systematic review and metaanalysis // Int J Tuberc Lung Dis. - 2009. - Vol.13. - Р. 936-944.
12. Oppenheimer J., Nelson H.S. Skin testing // Ann. Allergy Asthma Immunol. - 2006. - Vol. 96. - P. 6-12.
13. Karasuyama H., Tsujimura Y., Obata K., Mukai K. Role for basophils in systemic anaphylaxis //J Anaphylaxis. Chem Immunol Allergy. - 2010. - Vol. 95. - P. 85-97.
14. Бычкова Н.В. Применение метода проточной цитометрии для диагностики аллергических заболеваний // Справочник заведующего КДЛ. - 2016. - №4. - С.21-29.
15. Hausmann O.V., Gentinetta T., Bridts C.H., Ebo D.G. The basophil activation test in immediate-type drug allergy // J. Immunol. Allergy Clin. North Am. - 2009. - Vol.29, №3. - P. 555-566.
16. Potapinska O., Gorska E., Zawadzka-Krajewska A. The usefulness of CD203c expression measurement on basophils after activation with grass pollen and Dermatophagoides pteronyssinus antigens // Preliminary study. Pneumonol. Alergol. Pol . - 2009. - Vol. 77, № 2. - P. 138-144.
17. Peternelj A., Silar M., Erzen R. Basophil activation test (BAT) in «in vitro» diagnosis of hymenoptera venom hypersensitivity // Zdravn. Vest. - 2008. - Vol. 77. - P.183-187.
18. Karasuyama H., Tsujimura Y., Obata K., Mukai K. Role for basophils in systemic anaphylaxis // J Anaphylaxis. Chem Immunol Allergy. - 2010. - Vol. 95. - P. 85-97.
19. Kang M.G., Song W.J., Park H.K. et al. Basophil Activation Test with Food Additives in Chronic Urticaria Patients // Clinical Nutrition Research. - 2014. - Vol. 3. - P. 9-16.
20. Boumiza R., Debard A.L., Monneret G. The basophil activation test by flow cytometry: recent development in clinical studies, standardization and emerging perspectives // Clin Mol Allergy. - 2005. - Vol. 3. - P. 9-13.
21. Chirumbolo S., Vella A., Ortolani R. et al. Differential response of human basophil activation markers: a multiparameter flow cytometry approach // Clin and Molec Allergy. - 2008. -Vol.6. P. 12.
22. Mikkelsen S., Bibby B.M., DolbergM.K.B. et al. Basophil sensitivity through CD63 or CD203c is a functional measure for specific immunotherapy // Clin and Molec Allergy. - 2010. - P. 8-12.
23. Eberlein B., Suares I.L., Darson U. et al. A new basophil activation test usingCD63 and CCR3 in allergy to antibiotics // Clin et Experim Allergy. - 2010. - P. 1-8.
24. Lund G., Jacobi H., Skov P.S. et al. Effect on cell surface markers following allergen-induced desensitization of human whole-blood basophils // Int Arch Allergy Immunol. - 2010. - Vol. 153. - P. 323-334.
25. Ebo D.G., Bridts C.H., Hagendorens M.M. et al. Basophil activation test by flow cytometry: present and furure applications in allergology // Clinical Cytometry. - 2008. - Vol. 74 B. - P. 201-210.
26. Синельникова Н.А., Бычкова Н.В., Калинина Н.М. Особенности иммунного ответа и активации базофилов у детей с хронической крапивницей // Медицинская иммунология. - 2015. - Т. 17, № 1. - С. 39-46.
27. Gernez Y, Dunn CE, Everson C, et al. Blood basophils from cystic fibrosis patients with allergic bronchopulmonary aspergillosis are primed and hyper-responsive to stimulation by aspergillus allergens // J Cyst Fibros. - 2012. - Vol. 11. - P. 502-510.
28. Gernez Y, Walters J, Mirkovic B, et al. Blood basophil activation is a reliable biomarker of allergic bronchopulmonary aspergillosis in cystic fibrosis // Eur Respir J. - 2016. - Vol. 47. - P. 177-185.
29. Mirkovic B., Lavelle G.M., Azim A.A. et al. The Basophil surface marker CD203C identifies Aspergillus species sensitization in patients with cystic fibrosis // J. Allergy Clin. Immunol. - 2016. - Vol. 137. - P. 436-443.
30. Denning D.W., Pashley C., Hartl D. et al. Fungal allergy in asthma-state of the art and research needs // Clinical and Transla-tional Allergy. - 2014. - Vol. 4. - P. 14.
31. Agarwal R.A., Chakrabarti A., Shah D. et al. For the ABPA complicating asthma ISHAM working group 2013. Allergic bronchopulmonary aspergillosis: review of literature and proposal of new diagnostic and classification criteria // Clinical & Experimental Allergy. - 2013. - Vol. 43. - P. 850-873.
32. Glass D., AmedeeR.G. Allergic fungal rhinosinusitis A Review // The Ochsner Journal. - 2011. - Vol. 11. - P. 271-275.
Поступила в редакцию журнала 06.09.2016
Рецензент: В.С. Митрофанов
