CC BY
18УДК 616-002.828:582.282.123.4:616.248
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ТЕСТА АКТИВАЦИИ БАЗОФИЛОВ В ВЫЯВЛЕНИИ АЛЛЕРГИЧЕСКОГО БРОНХОЛЕГОЧНОГО АСПЕРГИЛЛЕЗА У БОЛЬНЫХ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ
1 Козлова Я.И. (доцент кафедры)*, 2Фролова Е.В. (зав. лаб.), 2Учеваткина А.Е. (с.н.с.), 2Филиппова Л.В. (с.н.с.), 2Митрофанов В.С. (зав. отделением), 2Аак О.В. (в.н.с.), 2Соловьева Г.И. (в.н.с.), 1Кузнецов В.Д. (ординатор), 2Васильева Н.В. (директор НИИ, зав. кафедрой), 1Климко Н.Н. (зав. кафедрой) Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова: 1 кафедра клинической микологии, аллергологии и иммунологии, 2 НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина, Санкт-Петербург, Россия
©Коллектив авторов, 2018
Aspergillus spp. - один из основных источников грибковых аллергенов как в окружающей среде, так и внутри жилых и производственных помещений. Клинические проявления гиперчувствительности к Aspergillus spp. у больных с атопией могут варьировать от обострения бронхиальной астмы до развития аллергического бронхолегоч-ного аспергиллеза (АБЛА). Достоверное определение микогенной сенсибилизации чрезвычайно важно для установления диагноза АБЛА и назначения адекватной терапии. Существующие методы in vivo диагностики микогенной сенсибилизации - кожные и провокационные пробы с грибковыми аллергенами не всегда обладают достаточной надежностью результатов, при этом провокационные пробы могут привести к опасному осложнению в виде анафилактического шока. Поэтому в последнее время большое внимание уделяют in vitro методам, преимуществом которых является безопасность для пациента, специфичность и возможность стандартизации. В статье описано применение теста активации базофилов с аллергеном A. fumigatus в условиях in vitro с использованием проточной цитометрии для выявления АБЛА у больных бронхиальной астмой.
Ключевые слова: тест активации базофилов, Aspergillus spp., Aspergillus fumigatus, аллергический бронхолегочный аспергиллез, бронхиальная астма
DIAGNOSTIC POSSIBILITIES OF BASOPHIL ACTIVATION TEST IN THE IDENTIFICATION OF ALLERGIC BRONCHOPULMONARY ASPHERGILOSIS IN PATIENTS WITH ASTHMA
1Kozlova Y.I. (associate professor), 2Frolova E.V. (head of the laboratory), 2Uchevatkina A.E. (senior scientific collaborator), 2Filippova L.V. (senior scientific collaborator), 2Mitrofanov V.S. (head of the clinical department), 2Aak O.V. (leading scientific collaborator), 2Solovyova G.I. (leading scientific collaborator), 1Kuznetsov V.D. (hospital physician),
* Контактное лицо: Козлова Яна Игоревна, e-mail: Yana.kozlova@szgmu.ru
2Vasilyeva N.V. (director of the Institute, head of the department), 1Klimko N.N. (head of the department)
North-Western State Medical University named after I.I. Mechnikov: 1 Department of Clinical Mycology, Allergology and Immunology, 2Kashkin Research Institute of Medical Mycology, St. Petersburg, Russia
©Collective of authors, 2018
Aspergillus spp. is one of the main sources of fungal allergens in the environment, as well as in residential and industrial premises. Clinical manifestations of hypersensitivity to Aspergillus spp. in patients with atopy may vary from acute asthma to the development of allergic bronchopulmonary aspergillosis (ABPA). A reliable definition of fungus sensitization is extremely important for establishing the diagnosis of ABPA and prescribing adequate therapy Existing methods of in vivo diagnosis of fungus sensitization - skin and provocative tests with fungal allergens do not always have sufficient reliability of the results, while provocative tests can lead to a dangerous complication in the form of anaphylactic shock. Therefore, in recent years a lot of attention is paid to in vitro methods, the advantage of which is the safety for the patient, specificity and the possibility of standardization. Use of a basophil activation test with an A. fumigatus allergen in vitro using flow cytometry to detect ABPA in patients with bronchial asthma have been described in the article.
Key words: basophil activation test, Aspergillus spp., Aspergillus fumigatus, allergic bronchopulmonary aspergillosis, bronchial asthma
ВВЕДЕНИЕ
Аллергический бронхолегочный аспергиллез - тяжелое заболевание легких, вызванное гиперчувствительностью к антигенам Aspergillus spp., которое характеризуется плохо контролируемым течением фоновой патологии и развитием дыхательной недостаточности. Наиболее часто АБЛА осложняет течение бронхиальной астмы и муковисцидоза [1, 2]. Для больных из этих групп характерны нарушения защитных механизмов слизистых оболочек дыхательных путей, в том числе дефекты мукоцилиарного клиренса и функции эпителиальных клеток [3, 4]. АБЛА впервые описали K. Hinson и соавторами в 1952 году. С тех пор выявление случаев АБЛА возрастает с каждым годом во всех странах. Кроме того, результаты многочисленных исследований свидетельствуют о высокой частоте мико-генной сенсибилизации у больных бронхиальной астмой. По данным Agarwal R. и соавт., которые провели мета-анализ 21 исследования, у больных бронхиальной астмой частота сенсибилизации к Aspergillus spp. составила 28%, а развитие АБЛА - 12,9% [5].
Раннее выявление микогенной сенсибилизации чрезвычайно важно для своевременного установления диагноза АБЛА и назначения адекватной терапии, которая предотвратит прогрессирование поражения легких. Однако в рутинной практике специалисты часто сталкиваются с проблемой подтверждения неясных результатов кожных проб и определения sIgE независимым методом [6]. В настоящее время идет поиск новых тестов, которые позволят выявить патогенетические механизмы аллергии, диагностировать и дифференцировать псевдоаллергические реакции. Одним из наиболее перспективных направлений аллергодиаг-ностики in vitro является тест оценки активации базо-филов специфическими аллергенами с помощью проточной цитометрии [7-10].
Цель исследования - изучение возможности применения теста активации базофилов с аллергеном A. fumigatus в условиях in vitro с использованием проточной цитометрии для выявления аллергического брон-холегочного аспергиллеза у больных бронхиальной астмой.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В исследование включили 76 больных бронхиальной астмой (БА), медиана возраста - 32 года (от 23 до 78 лет). Использовали клинические, аллергологиче-ские, иммунологические и инструментальные методы. Особое внимание уделяли данным анамнеза (первые симптомы заболевания и время их появления, динамика развития, возможный контакт с плесневыми грибами дома или на работе, наличие аллергических реакций, наследственность по атопии, предшествующая терапия и ее эффективность).
Больным проводили кожное тестирование с 6 грибковыми аллергенами: Alternaria, Aspergillus, Cladosporium, Penicillium, Rhizopus, Candida («Allergopharma», Германия, разрешение этического комитета СЗГМУ им. И. И. Мечникова от 24.06.2014 г.). С помощью иммуноферментного анализа определяли уровень общего IgE (ООО «Полигност», Россия) и специфических IgE к грибковым, бытовым и эпидер-мальным аллергенам (панель биотинилированных аллергенов «Алкор Био», Россия) в сыворотке крови.
Кровь для теста активации базофилов забирали натощак из кубитальной вены. В качестве антикоагулянта использовали гепарин. Постановку проб осуществляли в течение 1-2 часов от момента забора крови. Исследование активации базофилов проводили методом проточной цитометрии с помощью набора Allerginicity kit (Cellular Analysis of Allergy, BECKMAN-COULTER). Идентификацию базофилов осуществляли с помощью маркеров CD3-CRTH2+ (СК.ТН2-хемоаттрактантный рецептор, который присутствует как на Th2, так и на базофилах), а выявление активации базофилов - по увеличению содержания клеток с высокой экспрессией CD203c. Методика теста активации базофилов Allerginicity kit: образцы цельной периферической крови окрашивали тройным коктейлем моноклональных антител CRTH2-FITC/CD203c-PE/CD3-PC7 в присутствии буферного раствора (отрицательный контроль) или моноклональных антител к IgE (положительный контроль), или аллергена A. fumigatus в течение 15 минут при 37 °С в темноте. Далее проводили лизис эритроцитов лизирующим фиксирующим реагентом, входящим в набор Allerginicity kit. В каждой пробе оценивали 500 базофилов методом проточной цитометрии в мультипараметрическом протоколе с многоэтапным гейтированием.
Для изучения функции внешнего дыхания использовали спирометрию методом выполнения петли «объем-поток» с компьютерной обработкой результатов исследования. Учитывали следующие показатели: объем форсированного выдоха за первую секунду (ОФВ1), форсированную жизненную емкость легких (ФЖЕЛ). По показаниям выполняли компьютерную томографию (КТ) легких в режиме высокого разрешения.
Уровень контроля симптомов и степень тяжести БА определяли в соответствии с критериями «Глобальной стратегии лечения и профилактики бронхиальной астмы» (GINA, 2016).
При оценке контроля над симптомами БА ориентировались на жалобы, клинические проявления, данные спирометрии с проведением теста на обратимость. Также использовали опросник АСТ (Asthma Control Test), который является краткой и доступной анкетой
и содержит 5 вопросов с 5-бальной оценкой ответов. Сумма 25 баллов означают полный контроль БА, 20-24 - неполный контроль, 19 баллов и меньше - указывает на отсутствие контроля. С помощью АСТ оценивали уровень контроля БА за последние 4 недели.
Для выявления микогенной сенсибилизации использовали критерий, предложенный международными экспертами ISHAM: положительный кожный прик-тест (>3 мм) и/или выявление в сыворотке крови уровня специфического IgE к грибковому аллергену, соответствующего классу 1 и выше (>0,35 Ед/мл) [5]. Диагноз АБЛА устанавливали на основании критериев R. Agarwal et al., 2013 г. [6].
Полученные данные обрабатывали с помощью программной системы STATISTICA 10, которые представляли в виде медианы, нижнего и верхнего квартилей (Ме^0>25^0>75)). Для оценки различий между независимыми выборками применяли непараметрический критерий Манна-Уитни. Корреляции были проверены с помощью теста Спирмана. Различия считали статистически значимыми при р< 0,05. Для оценки диагностической значимости индекса стимуляции в выявлении микогенной сенсибилизации использовали ROC-анализ (receiver-operator characteristic) с расчетом площади под кривой. Построение ROC-кривой заключается в расположении на осях X и Y частоты истинно положительных результатов (чувствительность) и ложноположительных результатов (специфичность) для каждой точки разделения. Количественную оценку характеристической кривой проводили, рассчитав площадь под ней (area under ROC curve, AUC).
РЕЗУЛЬТАТЫ
В ходе исследования больные БА были разделены на следующие группы. Положительные результаты кожного тестирования и уровни sIgE к грибковым аллергенам выше диагностического значения (0,35 МЕ/мл) позволили выявить 17 больных тяжелой бронхиальной астмой с микогенной сенсибилизацией (БАМС). У 39 человек была определена тяжелая бронхиальная астма без микогенной сенсибилизации (БА), у 20 - АБЛА, согласно критериям R. Agarwal et al., 2013 г.
Клинические характеристики групп представлены в таблице 1.
Таблица 1
Характеристика больных бронхиальной астмой
Показатели АБЛА ( п =20) Группа 1 БАМС (п=17) Группа 2 БА (п=39) Группа 3 Р
Me(Q0i25-Q075)
Возраст, лет 37,0 (28,5-57,0) 44,0 (30,0-63,0) 52,0 (39,0-65,0) -
Пол, м/ж 5/15 2/15 14/25 -
ФЖЕЛ, % 90,5 (85,0-97,5) 100,0 (96,0-101,0) 101,0 (88,0-110,0) Рт 2=0,021 Р, ,=0,004
ОФВ1,% 64,5 (61,5-71,0) 68,0 (57,0-80,0) 80,0 (58,0-88,0) р1_з=0,005
Индекс Тиффно,% 72,5 (64,0-87,5) 73,0 (59,0-80,0) 80,0 (68,0-87,0)
ACT, баллы 14,5 (11,5-17,5) 15,0 (11,0-20,0) 19,0 (16,0-21,0) Pi з=0,003 Р2-з=0,045
Как видно из приведенных данных, группы не отличались между собой по полу и возрасту. При анализе результатов субъективных и объективных методов оценки контроля бронхиальной астмы выявили, что в группе больных АБЛА течение бронхиальной астмы было самым тяжелым. Об этом свидетельствуют низ-
кий балл 14,5 (11,5-17,5) при заполнении анкеты АСТ, который достоверно отличался от результатов больных БА 19,0 (16,0-21,0),(p=0,003), и худшие показатели функции внешнего дыхания ФЖЕЛ и ОФВ1.
Иммунологические характеристики групп пациентов представлены в таблице 2.
Таблица 2
Иммунологические показатели больных бронхиальной астмой
Показатели АБЛА (п=20) Группа 1 БАМС (п=17) Группа 2 БА (п=39) Группа 3 Р
Me (Q0.25-Q0.75)
IgE общий, МЕ/мл 1890,0 (781,0-3095,0) 326,00 (37,0-808,0) 113,00 (34,0-538,0) Pi з=0,000 Р, 9=0,001
slgE Aspergillus, МЕ/мл 4,62 (1,40-10,12) 0,04 (0,02-0,50) 0,03 (0,02-0,05) р, 2=0,000 Pi-3=0,000
Эозинофи-лы, % 8,0 (5,5-15,5) 5,00 (3,00-8,00) 4,0 (2,00-6,00) Р1 з=0,000 Р, ,=0,029
Эозинофилы, х109/л 0,52 (0,34-1,10) 0,52 (0,32-1,09) 0,24 (0,16-0,46) Pi з=0,001 Р, ,=0,015
Спонтанная активация базофилов, % 3,10 (1,50-5,00) 2,60 (1,50-4,60) 3,60 (2,20-5,20)
Активация базофилов анти-lgE антителами, % 68,40 (54,25-89,45) 52,60 (24,40-74,00) 43,80 (13,20-71,00) Pi-3=0,003
Количество базофилов, активированных Л. fumigatus, % 81,85 (53,05-93,00) 8,10 (4,70-34,30) 4,30 (2,40-6,00) Р1 з=0,000 р, 2=0,000 Рг-з=0,002
Индекс стимуляции 21,56 (18,04-32,21) 4,40 (1,94-16,33) 1,00 (0,84-1,36) Pi з=0,000 Pi 2=0,001 р2 з=0,000
Известно, что у больных АБЛА содержание общего IgE в сыворотке крови может достигать чрезвычайно высоких значений, отражая продолжительную аллергенную стимуляцию гуморального иммунного ответа. В ходе исследования у этой категории пациентов установлено значительное повышение уровня общего IgE 1890,0 (781,0-3095,0) МЕ/мл. В группах сравнения этот показатель был достоверно ниже и составил: у больных БАМС - 326,0 (37,0-808,0) МЕ/мл, (p=0,001), у больных БА - 113,0 (34,0-538,0) МЕ/мл, (p=0,000).
Кроме того, у пациентов с АБЛА абсолютное количество эозинофилов было 0,52 ( 0,34-1,10) 109/л, а уровень sIgE к A. fumigatus - 4,62 (1,40-10,12) МЕ/мл. Эти показатели были достоверно выше по сравнению с данными групп сравнения (p<0,05). Повышение этих показателей подтверждает наличие персистирующе-го аллергического воспаления за счет активации Th2 типа иммунного ответа при развитии АБЛА.
Клинико-иммунологические данные больных БАМС занимали промежуточное положение между показателями пациентов с БА и АБЛА (табл. 1, 2). Значение АСТ у больных БАМС - 15,0 (11,0-20,0) баллов было статистически значимо ниже, чем в группе лиц с БА (p=0,045), что свидетельствует о более тяжелом течении заболевания. Уровень общего IgE у больных БАМС составил 326,0 (37,0-808,0) МЕ/мл, количество эозинофилов периферической крови - 0,52 (0,32-1,09)109/л. Данные показатели не достигли значений, выявленных у больных АБЛА, но были в 2,3 и 1,3 раза выше, чем у пациентов с тяжелой БА.
Всем включенным в исследование больным провели тест активации базофилов с аллергеном A. fumigatus в условиях in vitro с использованием проточной цито-метрии. Установлено, что спонтанная активация базо-
филов у больных АБЛА и пациентов в группах сравнения не различалась между собой и колебалась в пределах от 0,6 до 8,3%.
Количество активированных аллергеном A. fumigatus базофилов у больных АБЛА - 81,85 (53,05-93,00)%. Этот показатель достоверно отличался от значений групп сравнения. Количество сенсибилизированных базофилов у пациентов с БАМС и БА было достоверно меньше - 8,1(4,70-34,30)% и 4,3 (2,40-6,00)%, p=0,000; p=0,000 соответственно.
Надо учитывать, что для оценки уровня активации базофилов по экспрессии CD203c в ответ на инкубацию с аллергеном используют не только определение количества активированных базофилов, но и индекс стимуляции (ИС): отношение процента активированных базофилов в пробе с аллергеном к проценту их спонтанной активации в отрицательном контроле. ИС у больных АБЛА составил 21,56 (18,04-32,21) и был достоверно выше по сравнению с ИС больных БАМС и БА - 4,40 (1,94-16,33) и 1,00 (0,84-1,36), p=0,001, p=0,000 соответственно.
Для оценки диагностической значимости теста активации базофилов в выявлении микогенной сенсибилизации использовали ROC-анализ (receiver-operator characteristic) с расчетом площади под кривой. В нашем исследовании ИС колебался от 0,8 до 86,0 у больных с микогенной сенсибилизацией и от 0,6 до 5,6 - без микогенной сенсибилизации. Площадь под ROC-кривой (AUC) составила 0,940 (95% ДИ 0,884-0,995), чувствительность - 86,1% (95% ДИ 70,5-95,3), а специфичность - 89,7% (95% ДИ 75.8-97,1), (p<0,0001) (Рис.). Это указывает на высокую специфичность и чувствительность метода, а значение ИС более 2,55 является оптимальной диагностической точкой разделения (cut off) для выявления микогенной сенсибилизации с высоким уровнем достоверности у больных БА.
Рис.1. Оценка диагностической значимости теста активации базофилов в выявлении микогенной сенсибилизации с использованием ROC-анализа.
Среди всех лиц с микогенной сенсибилизацией установлена положительная корреляционная связь с процентным и абсолютным числом эозинофилов (г=0,42, г=0,46, р<0,05), уровнем з^Б к А. fumigatus (г=0,47, р<0,05), процентом активированных аллергеном А. fumigatus базофилов (г=0,41, р<0,05) и ИС (г=0,41, р<0,05), а также обратная корреляционная
связь с ФЖЕЛ (r=-0,35, p<0,05). Полученные данные подтверждают взаимосвязь гиперчувствительности немедленного типа к грибам рода Aspergillus с тяжестью течения бронхиальной астмы.
ОБСУЖДЕНИЕ
Выявление сенсибилизации к A. fumigatus - обязательный критерий в алгоритме диагностики АБЛА у больных БА. Для подтверждения микогенной сенсибилизации мы использовали постановку кожных проб, определение sIgE и тест активации базофилов. В данном исследовании мы сосредоточили внимание на маркере активации базофилов CD203c в качестве индикатора сенсибилизации к A. fumigatus и оценили пороговое значение индекса стимуляции.
Базофилы периферической крови и тканевые тучные клетки являются ключевыми эффекторны-ми клетками в реакциях гиперчувствительности немедленного типа. Они участвуют в дифференцировке Т-хелперов 2-го типа (Th2) путем секреции цитокинов и антигенной презентации, что имеет большое значение в развитии IgE-опосредованного хронического аллергического воспаления, и играют ключевую роль в IgG-опосредованной системной анафилаксии [6]. Кроме того, базофилы и тучные клетки могут быть вовлечены и в другие типы аллергического и неаллергического ответов, в основе которых лежат иные механизмы реакции: активация комплемента, не-IgE-опосредованная стимуляция и прямое цитотоксиче-ское (неиммунологическое) воздействие. Таким образом, изучение функциональной активности базофилов имеет важное диагностическое значение [11]. Принцип теста активации базофилов сводится к тому, что при контакте аллергена с молекулами IgE, фиксированных на базофилах, запускается каскад ферментных реакций, приводящих к дегрануляции и появлению на клеточной поверхности дополнительных молекул. К таким молекулам относятся, например, маркер дегра-нуляции CD63 и активационные молекулы CD203c, CD13, CD107a, CD643. В настоящее время наиболее изученными и перспективными в аллергодиагности-ке маркерами активации базофилов являются CD63 и CD203с [12, 13].
У каждого пациента исследовали спонтанную активацию базофилов - долю клеток CD3-CRTH2+CD203c++ от общего количества базофилов в пробе с буферным раствором, что позволяет разграничить уровень экспрессии молекул покоящихся клеток по сравнению с состоянием активации клетки. Проведение положительного контроля, обеспечивающего неспецифическую активацию базофилов, необходимо для исключения ложноотрицательных реакций и повышения специфичности метода.
Важной особенностью проведения исследования является то, что тест активации базофилов с аллергеном A. fumigatus можно выполнять менее чем за 2 часа, используя небольшой объем цельной периферической крови. Это можно сделать в том же образце крови, который используют для других иммунологических исследований, что существенно уменьшает дискомфорт для пациента. Выявление специфических IgE к A. fumigatus в сыворотке крови и проведение кожной пробы считают «золотыми стандартами» в рутинном обследовании больных и частью установленных кри-
териев для диагностики АБЛА [1], однако оба этих теста имеют недостатки.
Измерение уровней sIgE к A fumigatus - это легкодоступный тест для врача и удобный для пациента. Однако иммуноглобулины этого класса характеризуются низким содержанием в сыворотке крови, а также могут отсутствовать в циркуляции, но быть фиксированными на клетках-мишенях: базофилах и тучных клетках [6]. В ряде работ показано, что уровни sIgE со временем меняются и должны быть интерпретированы совместно с другими клиническими и лабораторными данными, чтобы установить диагноз [14]. Кроме того, высокий уровень общего IgE у больных может приводить к ложноположительным результатам вследствие неспецифического реагирования с аллергеном.
Диагностика микогенной аллергии in vivo подразумевает выполнение кожных проб в виде прик-тестов. К недостаткам кожного тестирования относят риск развития побочных реакций организма на дополнительную антигенную нагрузку, возможность возникновения ложноположительных и ложноотрица-тельных результатов [15]. Кожные пробы могут быть субъективными для лечащего врача и трудны для интерпретации [16].
Однако как определение sIgE, так и результаты кожных проб показывают лишь наличие сенсибилизации у пациентов, но не всегда клиническую значимость диагностируемого аллергена. В то же время тест активации базофилов является функциональным тестом, который представляет собой провокационную пробу, но выполненную ex vivo, в пробирке. Тест активации базофилов является специфической и надежной мерой IgE-зависимого ответа у сенсибилизированных субъектов, потому что базофилы циркулируют в крови, и усиление экспрессии маркеров активации на поверхности базофилов легко оценить с помощью проточной цитометрии.
Таким образом, тест активации базофилов с помощью проточной цитометрии является доступным и перспективным методом для лабораторной диагностики гиперчувствительности немедленного типа. В настоящее время опубликованы данные успешного применения теста активации базофилов для диагностики АБЛА у больных муковисцидозом [17, 18]. Полученные в ходе нашего исследования результаты свидетельствуют, что тест может быть использован в качестве дополнительного метода диагностики АБЛА у больных бронхиальной астмой. Выполнение теста активации базофилов может быть рекомендовано в том случае, когда проведение провокационных исследований связано с риском развития системных реакций, а для постановки кожных проб имеются противопоказания. Изменение уровня активационного маркера базофилов CD203c у больных АБЛА на фоне применения антимикотической и противовоспалительной терапии требует дальнейшего изучения.
ВЫВОДЫ
У больных АБЛА с помощью теста активации ба-зофилов была подтверждена сенсибилизация к A. fumigatus.
Установлена положительная корреляционная связь IgE с процентным и абсолютным числом эозинофилов, уровнем sIgE к A. fumigatus, процентом активирован-
ных аллергеном A. fumigatus базофилов и индексом стимуляции, а также обратная корреляционная связь с ФЖЕЛ.
Тест активации базофилов является перспектив-
ЛИТЕРАТУРА
1. Agarwal R.A., Chakrabarti A., Shah D., et al. For the ABPA complicating asthma ISHAM working group 2013. Allergic bronchopulmonary aspergillosis: review of literature and proposal of new diagnostic and classification criteria. Clinical & Experimental Allergy. 2013; 43: 850-873.
2. Denning D.W., Pleuvry A., Cole D.C. Global burden of allergic bronchopulmonary aspergillosis with asthma and its complication chronic pulmonary aspergillosis in adults. Med. Mycol. 2013; 51: 361-370.
3. Chaudhary N., Datta K., Askin F.B., et al. Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator regulates epithelial cell response to Aspergillus and resultant pulmonary inflammation. J. Respir. Crit. Care Med. 2012; 185: 301-310.
4. Hogan C., Denning D.W. Allergic bronchopulmonary aspergillosis and related allergic syndromes. Semin. Respir. Crit. Care Med. 2011; 32: 682-692.
5. Agarwal R, Aggarwal A.N., Gupta, D., et al. Aspergillus hypersensitivity and allergic bronchopulmonary aspergillosis in patients with bronchial asthma: Systematic review and meta-analysis. The international journal of Tuberculosis and Lung Disease. 2009; 13: 936-944.
6. Karasuyama H., Tsujimura Y., Obata K. et al. Role for basophils in systemic anaphylaxis. J. Anaphylaxis. Chemical Immunology and Allergy. 2010; 95: 85-97.
7. Hausmann O.V., Gentinetta T., Bridts C.H., et al. The basophil activation test in immediate-type drug allergy. Immunology and Allergy Clinics of North America. 2009; 29: 555-566.
8. Potapinska O., Gorska E., Zawadzka-Krajewska A., et al. The usefulness of CD203c expression measurement on basophils after activation with grass pollen and Dermatophagoides pteronyssinus antigens. Preliminary study. Pneumonol. Alergol. Pol. 2009; 77: 138-144.
9. Peternelj A., Erzen R., Bairovic N., et al. Basophil activation test (BAT) in «in vitro» diagnosis of hymenoptera venom hypersensitivity. Zdravniski Vestnik. 2008; 77: 183-187.
10. Синельникова Н.А., Бычкова Н.В., Калинина Н.М. Особенности иммунного ответа и активации базофилов у детей с хронической крапивницей. Медицинская иммунология. 2015; 17: 39-46. [Sinel'nikova N.A., Bychkova N.V., Kalinina N.M. Osobennosti immunnogo otveta i aktivacii ba-zofilov u detej s hronicheskoj krapivnicej. Medicinskaya immunologiya. 2015; 17: 39-46 (In Russ)].
11. Kang M.G., Song W.J., Park H.K., et al. Basophil activation test with food additives in chronic urticaria patients. Clinical Nutrition Research. 2014; 3: 9-16.
12. Boumiza R., Debard A.L., Monneret G. The basophil activation test by flou cytometry: recent development in clinical studies, standardization and emerging perspectives. Clinical and Molecular Allergy. 2005; 3: 9.
13. Chirumbolo S., Vella A., Ortolani R., et al. Differential response of human basophil activation markers: a multiparameter flow cytometry approach. Clinical and Molecular Allergy. 2008; 6: 12.
14. Chirumbolo S. Basophil activation test in allergy: time for an update? International Archives of Allergy and Immunology. 2012; 158: 99-114.
15. Oppenheimer J., Nelson H.S. Skin testing. Annals of Allergy, Asthma & Immunology. 2006; 96: 6-12.
16. Chotirmall S.H., Branagan P., Gunaratnam C., et al. Aspergillus/allergic bronchopulmonary aspergillosis in an Irish cystic fibrosis population: a diagnostically challenging entity. Respiratory Care. 2008; 53: 1035-1041.
17. Mirkovic B., Lavelle G.M., Abdul Azim A., et al. The basophil surface marker CD203c identifies Aspergillus species sensitization in patients with cystic fibrosis. Journal of Allergy and Clinical Immunology. 2016; 137: 436-443.
18. Gernez Y., Waters J., Mirkovic B., et al. Blood basophil activation is a reliable biomarker of allergic bronchopulmonary aspergillosis in cystic fibrosis. European Respiratory Journal. 2016; 47: 177-185.
Поступила в редакцию журнала 11.12.2018
Рецензент: М.А. Шевяков
ным методом для лабораторной диагностики микоген-ной аллергии и оценки перестройки иммунного ответа у больных АБЛА на фоне бронхиальной астмы.
