CC BY
22
БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ
ОБЩАЯ БИОЛОГИЯ
МИКРОБИОЛОГИЯ
ТЕРМОТОЛЕРАНТНЫЕ АКТИНОМИЦЕТЫ, ВЫДЕЛЕННЫЕ ИЗ ЭКСТРЕМАЛЬНЫХ ЗОН УЗБЕКИСТАНА
Бекмухамедова Нигора Каримовна
канд. биол. наук, ст. науч. сотр., Институт микробиологии Академии наук Республики Узбекистан,
Республика Узбекистан, г. Ташкент E-mail: nigora1967@bk.ru
THERMOTOLERANT ACTINOMYCETES, SEPARATED FROM THE EXTREME ZONES
OF UZBEKISTAN
Nigora Bekmukhamedova
Candidate of Biological Sciences, Senior Researcher Institute of Microbiology of the Academy of Sciences of the Republic of Uzbekistan,
Republic of Uzbekistan, Tashkent
АННОТАЦИЯ
Показана ферментативная активность термотолерантных актиномицетов, выделенных из экстремальных зон Узбекистана. Изучены морфолого-культуральные характеристики отобранных активных культур актиномицетов и определена их родовая принадлежность. Полагается, что термотолерантные актиномицеты рода Streptomyces, выделенные из экстремальных зон Узбекистана, могут иметь биотехнологический потенциал как продуценты термостабильных целлюлаз и ксиланаз.
ABSTRACT
Shown is the enzymatic activity of thermotolerant actinomycetes isolated from the extreme zones of Uzbekistan. The morphological and cultural characteristics of the selected active cultures of actinomycetes were studied and their generic affiliation was determined. It is believed that thermotolerant actinomycetes of the genus Strepto myces isolated from the extreme zones of Uzbekistan may have biotechnological potential as producers of thermostable cellulases and xylanases.
Ключевые слова: термотолерантные актиномицеты, Streptomyces, воздушный мицелий (ВМ), субстратный мицелий (СМ), спороносцы, ферменты.
Keywords: thermotolerant actinomycetes, Streptomyces, aerial mycelium (VM), substrate mycelium (SM), spore carriers, enzymes.
Введение
Для пустынных почв Узбекистана характерна повышенная температура (в летние месяцы 45-50 °С и выше), а также обилие пустынных растений: полынь, верблюжья колючка, солянка, белая акация [6; 7] -заслуживают внимания как источник термофильных актиномицетов, представляющих интерес как продуценты термостабильных ферментов.
Актиномицеты, растущие при температуре 50 °С и выше, широко распространены в природе, их выделяют из почвы, ризосферы растений, торфа, ила,
воды, компоста, навоза и т.д. Благодаря высокой скорости роста термофильные актиномицеты находят широкое применение в самых различных отраслях промышленности и сельского хозяйства, играют существенную роль в круговороте веществ, в природе: в разрушении нефти и озокеритов, превращениях серы и других процессах, в очистке сточных вод.
Согласно давно сложившимся представлениям, обмен веществ у термофильных штаммов актино-мицетов происходит более интенсивно, чем у мезо-фильных [5]. Об этом косвенно свидетельствуют экспериментальные данные о более высокой
Библиографическое описание: Бекмухамедова Н.К. Термотолерантные актиномицеты, выделенные из экстремальных зон Узбекистана // Universum: химия и биология : электрон. научн. журн. 2020. № 8 (74). URL: https://7universum. com/ru/nature/archive/item/10589
ферментативной активности термофилов и о повышенном количественном содержании в клетках термофильных актиномицетов некоторых ферментов [8], в частности, гидролаз.
В этой связи целью настоящей работы явилось выделение местных штаммов термофильных актиномице-тов и изучение их целлюлолитической активности.
Объекты и методы исследования
Материалом для исследований служили образцы почв и ризосферы растений, произрастающие в песчаных почвах Навоийского вилоята, пустыни Кызыл-Кум, а также нефтяного месторождения Кок-дума-лак. Учет микроорганизмов проводили по общепринятой методике методом предельных разведений с последующим высевом на элективные среды.
Актиномицеты выделяли стандартными методами накопительных культур с использованием крах-мало-аммиачного агара (КАА) следующего состава, г/л: NaNOз - 1,0; MgSО4 - 1,0; K2HPO4 - 1,0; крахмал - 10,0; рН = 6,8-7,0, агар - 20,0. Чистые культуры термофилов получали путем 2-3-кратных пассажей на твердые среды. Культивирование проводили в течение 2 дней при температуре 50 °С [4].
Так как термофильные микроорганизмы растут очень быстро, испытуемые культуры инкубировали при температуре 50 °С в течение 2 дней. В качестве контроля использовали те же штаммы актиномице-тов, выросшие на среде Чапека-Докса при температуре 30 °С в течение 5 суток.
Ксиланазную и целлюлазную активности определяли по количеству редуцирующих сахаров, используя в качестве субстата ксилан и фильтровальную бумагу, в качестве стандарта - ксилозу и глюкозу соответственно [1].
Для изучения морфологического строения актино-мицетов их выращивали в чашках Петри на голодном
агаре (агар - 20 г, вода - 1 л). Тип цепочек спор определяли у зрелых культур на 7-й день роста, просматривали в световом микроскопе Olympus BX-41 (Япония) при увеличении в 320-400 раз. Культуральные свойства определяли на среде Чапека (г/л: сахароза - 30; NaNO3
- 2,0; KH2PO4 - 1,0; KCl - 0,5; MgSO4 - 0,5 FeSO4 - 0,01; pH = 7,2) [3]. Родовую принадлежность культур микроорганизмов устанавливали по определителю актиномицетов Г.Ф. Гаузе и др. [2].
Результаты исследования
Выделение и отбор термофильных культур актиномицетов осуществляли из образцов ризосферных почв Навоийского вилоята под различными растениями, пустынных почв Кызыл-Кума, а также нефтяного месторождения Кок-думалак. Всего выделено более 40 накопительных культур, растущих при 40-50 °С, из них в чистую культуру выделено 35 штаммов.
При сравнительном изучении роста вновь выделенных изолятов актиномицетов при температурах 30 °С и 50 °С было установлено, что только 11 из 35 обладают термотолерантными свойствами, сохраняя способность к росту при 50 °С. Это послужило основанием для изучения целлюлазной и ксиланазной активностей этих изолятов.
Как видно из данных, представленных в табл. 1, во всех исследованных изолятах целлюлазная активность невысока, и при двух выбранных температурах
- 30 °С и 50 °С - не отличается или отличается очень незначительно. Тем не менее некоторые изоляты -Т-33, Т-34, Т-63 - обладают заметной целлюлазной активностью для диких штаммов и составляют 0,220,35 ед./мл, что, на наш взгляд, заслуживает внимания. Поскольку целлюлазная активность сохраняется на одном уровне при обеих температурах, по-видимому, можно сделать предварительное заключение о термостойкой природе фермента в этих изолятах.
Таблица 1.
Ферментативная активность термотолерантных актиномицетов
№ п/п Месторождение Ризосфера ксеро-фитных растений Изолят № Целлюлаза, ед./мл Ксиланаза, ед./мл
50 °С 30 °С 50 °С 30 °С
1 Кок-думалак Астрагал Т-6 0,002 0,002 7,2 5,1
2 Пиганум Т-8 0,001 0,001 2,2 1,8
3 Астрагал Т-18 0,003 0,003 1,7 1,2
4 Полынь туранская Т - 13 0,003 0,001 0,86 0,70
5 Пустыня Кызыл-Кум Опытная станция АН института Ботаники Песчаная почва без растений Т-33 0,22 0,20 1,01 0,86
6 Т-34 0,35 0,30 0,12 0,1
7 Навоийский вилоят Верблюжья колючка Т-45 0,14 0,17 0,12 0,45
8 Т-61 0,11 0,10 0,04 0,04
9 Т-62 0,08 0,08 - -
10 Т-63 0,22 0,15 - 2,7
11 Т-64 0,13 0,1 11,7 3,2
В отличие от целлюлазной активности, ксиланаз-ная активность достаточно заметно меняется при повышенной температуре. Так, например, в изолятах Т-45 и Т-63 ксиланазная активность при 50 °С снижается или вовсе отсутствует, в то время как в других
изолятах заметно повышается с повышением температуры культивирования. Наиболее высокая ксила-назная активность отмечена в изоляте Т-6 (7,2 ед./мл), выделенном из ризосферы астрагала месторождения Кок-думалак, и изоляте Т-64 (11,7 ед./мл), выделенном из ризосферы верблюжьей колючки
Навоийского вилоята. Особенного внимания эти изо-ляты заслуживают потому, что при 50 °С ксиланаз-ная активность возрастает в 1,4 и 3,6 раза соответственно, что, несомненно, указывает на их термофильную природу.
Таким образом, при изучении ферментативной активности, выделенных термотолерантных актиномице-тов по максимальной активности при высокой температуре для идентификации как потенциальные
продуценты термостабильных ксиланаз отобраны изо-ляты Т-6 и Т-64, а термостабильной целлюлазы - изолят Т-34.
Данные по изучению морфолого-культуральных свойств отобранных культур актиномицетов отражены в табл. 2 и рис. 1. На голодном агаре определяли строение спороносцев, на среде Чапека изучали некоторые культуральные свойства актиномицетов.
Таблица 2.
Морфолого-культуральные свойства отобранных актиномицетов
Штамм, № Морфологические свойства, строение спороносцев Культуральные свойства
Т-6 «б» форма - прямые, длинные, часто разветвленные спороносцы с цепочками спор Колонии сильно врастают в агар. Культура плохо суспендируется в воде. На среде Чапека и на Крахмал-аммиачном агаре (КАА) на 4-5-е сутки рост хороший, колонии бесцветные, гладкие с ровными краями. ВМ не образует
Т-34 «г» форма - длинные, в виде крючков, петель и неправильных спиралей Очень хорошо растет на среде Чапека, образует ВМ и СМ светло-серого цвета, хорошо суспендируется на воде
Т-64 «г» форма - длинные, в виде крючков, петель и неправильных спиралей На среде Чапека образует светло-серый ВМ и СМ беловато-серого цвета, не врастает в агар, хорошо суспендируется на воде
шт. Т-6 шт. Т-34 шт. Т-64
Рисунок 1. Строение спороносцев отобранных актиномицетов
актиномицеты рода Streptomyces, выделенные из экстремальных зон Узбекистана, имеют биотехнологический потенциал как продуценты термостойких целлюлаз и ксиланаз.
Как видно из приведенных морфолого-культу-
ральных характеристик, все три культуры актиномицетов относятся к роду Streptomyces.
Таким образом, совокупность полученных данных свидетельствует о том, что термотолерантные
Список литературы:
1. Билай В.И. Методы экспериментальной микологии. - Киев, 1982. - 550 с.
2. Гаузе Г.Ф., Преображенская Т.Ф. Определитель актиномицетов. - М. : Наука, 1983. - 244 с.
3. Зенова Г.М. Почвенные актиномицеты. - М. : Наука, 1992. - 75 с.
4. Логинова П.Г., Головачева Р.С., Егорова. Л.А. Жизнь микроорганизмов при высоких температурах. - М. : Наука, 1966. - С. 295.
5. Нетрусов А.И., Егорова М.А., Захарчук Л.М. Практикум по микробиологии / под ред. проф. А.И. Нетрусова. - М. : Академия, 2005. - 608 с.
6. Оборотов Г.В. Стрептомицеты засоленных почв дельты Аму-Дарьи // Экология-2003: Тезисы молодежной международной конференции (17-18 июня 2003 г.). - Архангельск. - С. 194.
7. Экстремальные микроорганизмы аридных зон Узбекистана и их биологический потенциал / Р.Н. Жураева, Н.К. Бекмухамедова, Г.Д. Золотилина, Ж.Ж. Ташпулатов // Материалы Республиканской научной конференции «Проблемы современной микробиологии и биотехнологии». - Ташкент, 2009. - С. 18.
8. Egorova K., Trauthwein H., Verseck S. Purification and properties of an enantioselective and thermoactive amidase from the thermophilic actinomycete Pseudonocardia thermophila // Appl. Microbiol. Biotechnol. - 2004. - № 65. -P. 38-45.
