CC BY
117
Применяемые в настоящее время для местного лечения бактериального вагиноза мази, вагинальные таблетки, спринцевания в большинстве случаев не оптимальны с точки зрения выполняемых ими функций - они не обеспечивают длительной и равномерной подачи лекарственного вещества, при этом очень быстро выводятся из влагалища. Перспективной лекарственной формой, обеспечивающей пролонгированное высвобождение лекарственных веществ, а также точную фиксацию в месте аппликации, является вагинальная биоплёнка.
Целью настоящей работы явилось получение вагинальных биораствори-мых лекарственных пленок с сульфацилом-натрия для местного лечения бактериального вагиноза.
Сульфацил-натрия обладает антимикробным действием в отношении гонококковых, стрептококковых, стафилококковых и колибациллярных инфекций, используется в виде водных растворов при лечении кольпитов, эн-доцервитов, эрозий шейки матки.
Биоплёнки получали методом полива на подложку с последующим вырубанием плёнок диаметром 2 см. Высвобождение сульфацила-натрия из плёнок и их антимикробное действие изучали с помощью микробиологического теста диффузии в агар по зонам ингибирования роста тест-микроорганизмов S.aureus и Е.соН.
Для изготовления биоплёнок с сульфацилом-натрия в качестве плёнко-образователей использовались полимер биорастворимый и натрийкарбокси-метилцеллюлоза. Максимальное высвобождение сульфацила-натрия и максимальная антимикробная активность в отношении S.aureus и E.coli наблюдается из пленок на основе полимера биорастворимого.
Биоплёнки с сульфацилом-натрия на основе полимера биорастворимого обеспечивают длительную фиксацию лекарственной формы во влагалище, максимальную фармацевтическую доступность и пролонгированное высвобождение сульфацила-натрия и могут использоваться при лечении бактериального вагиноза.
л л л
Т.А. Балаев , Б.Л. Молдавер
ТЕХНОЛОГИЯ ГАЛЕНОФИЛЛИПТА - НОВОГО ПРОТИВОМИКРОБНОГО
ПРЕПАРАТА, СОДЕРЖАЩЕГО ЭУГЛОБАЛИ И ФЕОФИТИНАТЫ МЕДИ
ОАО «Фармацевтическая Фабрика Санкт-Петербурга»; Санкт-
Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия
1. Состав эвкалиптов и их применение в медицине
В роде Эвкалипт насчитываются до 800 видов этого растения, широко распространенного в тропиках и субтропиках. В России культивируют 3 вида эвкалиптов, в основном - наиболее морозоустойвый вид - эвкалипт прутовидный (Eucalyptus viminalis labill). В листьях, побегах, почках, эфирном масле и других частях эвкалиптов содержится более 200 биологически ак-
- 396 -
тивных веществ (БАВ), многие из которых издавна используются в медицине, косметике, ветеринарии и др. Они включают десятки антисептических, противовоспалительных, противовирусных, ароматических и противоопухолевых веществ, в том числе разнообразные терпены, спирты, фенолы, сложные эфиры, альдегиды, флавоноиды, дубильные вещества, хлорофиллы и эуглобали (фенолоальдегиды) и ряд других.
2.Технология хлорофиллипта
Одним из наиболее применяемых препаратов эвкалипта, производимом в России и в Украине, является комплексный препарат Хлорофиллипт, получаемый методом бисмацерации спиртом этиловым из листьев эвкалипта прутовидного (ЛЭП) при гидромодуле 1:5 и комнатной температуре в течение 12 часов. Спиртовой экстракт ЛЭП упаривают под вакуумом при 40 оС.
Согласно патенту, остаток гидрофобных веществ, содержащих хлорофиллы, феофитины, эуглобали и другие вещества разбавляют водой и обрабатывают избытком 2% раствора меди (II) сульфата с «целью осаждения сопутствующих веществ». Из полученной смеси трижды экстрагируют бензолом гидрофобные вещества. Отгоняют бензол в вакууме при 40 оС. Остаток трехкратно обрабатывают этанолом, затем при нагревании отгоняют спирт и азеотропно трижды удаляют со спиртом остатки бензола. Оставшуюся массу высушивают при 40 оС в вакууме, получая воскообразное вещество зеленого цвета, содержащее 10% влаги, и как указано в патенте - смесь хлорофиллов а и Ь ( густой экстракт хлорофиллипта). Из густого экстракта получают спиртовой раствор хлорофиллипта 1% и ряд других препаратов. Несмотря на то, что хлорофиллипт нашёл широкое применение в медицине при лечении многих инфекционных заболеваниях и как антисептик, отмечается ряд недостатков его технологии и стандартизации: многостадийность производства, значительное количество используемого оборудования, высокая энергоемкость; отрицательно влияющие на стабильность БАВ нагревание, аэрация при перемешивании и экстракциях, способствующие окислению: вакуум-отгонка, приводящая к потере летучих веществ, использование легковоспламеняющегося бензола, его высокая токсичность, неэкологичность производства, необоснованное применение избытка меди сульфата. Отсутствует идентификация основных ингредиентов препарата и их количественное определение.
3. Цель и задачи исследования
Целью исследования явилась разработка технологии нового препарата, аналогичного хлорофиллипту по исходным компонентам и фармакологической активности, но лишенного указанных выше недостатков, а также соответствующая стандартизация.
Для достижения этой цели необходимо было экспериментально обосновать технологию спиртового экстракта ЛЭП, позволяющую повысить выход БАВ экстракта, а также рациональность превращения хлорофиллов и феофи-тинов экстракта ЛЭП в медные аналоги хлорофилла - феофитинаты меди (II). Опытным путем следовало установить при омеднении необходимое количество омедняющего агента, исключающее его избыток или недостаток, а так-
же определить оптимальные условия проведения этой реакции.
В результате указанного исследования ожидалась разработка экологичной и щадящей технологии препарата - аналога хлорофиллипта, получаемого без нагревания, упаривания, высушивания, аэрации, использования токсичных и горючих органических растворителей. Необходимо было также провести сравнительную оценку фотостабильности экстракта листьев эвкалипта спиртового, галенофиллипта, хлорофиллипта и других родственных препаратов к дневному и ультрафиолетовому излучению.
Следовало разработать методики стандартизации экстракта ЛЭП спиртового и галенофиллипта с применением физико-химических методов и провести сравнительное фармакологическое и микробиологическое исследование галенофиллипта и хлорофиллипта, разработать опытно-промышленный регламент производства галенофиллипта и ФСП.
4. Товароведческий анализ сырья
На первом этапе исследования проведен товароведческий анализ исходного сырья -листьев эвкалипта прутовидного (ЛЭП) заготовленного, главным образом, на побережье Черного моря. В литературе содержится мало сведений о сопоставлении качества различных партий ЛЭП, в особенности -о содержании в них основного противомикробного компонента - суммы эуг-лобалей (фенолоальдегидов). В связи с этим исследовано качество 18 отобранных партий сырья. Содержание фенолоальдегидов в них находилось в пределах от 3,0 до 5,8 % (х =3,9%); эфирного масла - от 0,9 до 1,9% ( х =1,2%); общей золы - от 3,5 до 4,9% (х =4,3%); влаги - от 5,3 до 10,3% ( х =7,8%); потемневших и побуревших листьев от 0 до 3,0%; минеральных примесей от 0 до 0,5% (х =0,2%). Существенный разброс некоторых показателей качества, в особенности - фенолоальдегидов, связан с большим диапазоном времени сбора сырья: поздняя осень, зима, ранняя весна, что несомненно влияет на качество различных партий.
5. Электронные спектры поглощения БАВ экстракта ЛЭП
Значительный интерес при анализе и сравнении различных партий ЛЭП и полученных из них полупродуктов и препаратов представляет сопоставление их электронных спектров поглощения (ЭСП).
Спиртовые экстракты ЛЭП получали методом ремацерации ЛЭП спиртом этиловым 95% при их соотношении 1:5 в течение 24 часов и комнатной температуре с последующим отстаиванием при (6-8)0С в течение 48 часов и фильтрацией.
В полученные спиртовые экстракты ЛЭП переходит большое количество различных веществ: фенолоальдегиды, многочисленные компоненты эфирного масла, хлорофиллы, феофитины, терпены, дубильные вещества и многие др.
Характер ЭСП экстрактов ЛЭП обусловлен наличием в них многих веществ, содержащих хромофорные группировки. Их взнос в формирование суммарного интегрального ЭСП обусловлен как природой хромофоров, так и концентрацией в экстракте той или иной группы компонентов. Существен-
- 398 -
ный вклад в ЭСП экстракта ЛЭП вносят фенолоальдегиды (эуглобали), главным образом - их флороглюцинол-диальдегидный фрагмент. Сочлененные с ним терпеновые фрагменты лишь в отдельных случаях содержат слабоинтенсивные хромофоры. Для фенолоальдегидов всех спиртовых экстрактов характерно поглощение с максимумом при 276-278 нм (е от 44000 до 22000), плечом при 340 нм (е от 35000 до 4500), а также минимумом около 245 нм.
Второй группой веществ, четко выраженной в ЭСП экстрактов ЛЭП, но с меньшей почти на порядок интенсивностью поглощения, являются хлорофиллы и феофитины, которые представлены в ЭСП пятью характеристичными полосами, позволяющими надежно идентифицировать и отличать отдельные соединения порфиринового ряда.
Наличие компонентов эфирного масла, в частности, основного из них -цинеола, мало влияет на ЭСП экстракта, т.к. в них отсутствуют хромофорные группировки. Пинен содержит очень слабый хромофор и тоже практически мало влияет на ЭСП. Таким образом, наиболее существенным при спектральном анализе экстракта ЛЭП является поглощение фенолоальдегидов и хлорофиллов.
В ЭСП экстракта ЛЭП в видимой области наблюдается 2 максимума поглощения: первый - при 667-668 нм, второй - при 656 нм, которые можно отнести к поглощению полосы I феофитина а и I полосы феофитина Ь, соответственно.
Данное предположение подтверждено выделением из экстракта ЛЭП хроматографированием в тонком слое сорбента 2ух пятен индивидуальных веществ, спиртовые элюаты которых имеют ЭСП, содержащие две полосы: феофитина а и феофитина Ь, а также ЭСП хлорофилла а.
2: 657; 602; 558; 530; 438;
3: 662
Рис.1. Электронные спектры поглощения спиртовых элюатов пятен феофитина а (1), феофитина Ь (2), хлорофилла а (3), хроматографически выделенных из спиртового экстракта ЛЭП.
Таким образом, нами показано, что в спиртовых экстрактах исследован-
ных партий ЛЭП содержатся в основном феофитин а и феофитин Ь, а не исходные хлорофиллы. Аналогичная картина характерна и для ЭСП 85% водно-ацетонового экстракта ЛЭП.
Это позволяет предположить, что получение феофитината меди (II) из высушенных ЛЭП можно осуществлять без предварительного превращения хлорофиллов в феофитины, сопровождающегося нежелательным подкисле-нием экстракта, вызывающего деструкцию хлорофиллов и тем самым сократить длительность стадии омеднения экстракта ЛЭП.
6. Многократная экстракция ЛЭП этанолом
Анализ спиртовых экстрактов, полученных методом бисмацерации из 6 различных партий сырья показал удовлетворительную близость содержания в них фенолоальдегидов, хлорофилла А, сухого остатка, величины рН, что позволяет считать используемую технологию получения экстракта ЛЭП воспроизводимой.
На рис.2 и в табл.1 представлены данные кинетики одновременного изменения содержания фенолоальдегидов, хлорофилла А и сухого остатка в 7 последовательных извлечениях из ЛЭП спиртом этиловым 95%. Кроме того, в табл.1 приведено содержание трех указанных групп веществ в сумме I и II и в сумме Ш^П извлечений. Видно, что в сумму первых двух извлечений переходит одинаковое количество (63-64%) сухого остатка, фенолоальдегидов, а также хлорофиллов. Сумма последующих пяти извлечений (Ш^П) также содержит одинаковые относительные количества этих же групп веществ, только в значительно меньших (36%), чем сумма первых двух извлечений.
• содержание сухого остатка (в % от их суммы в извлечениях)
содержание фенолоальдегидов (в % от их суммы в извлечениях) содержание хлорофилла А (в % от их суммы в извлечениях)
Рис.2. Кинетика одновременного изменения содержания фенолоальдегидов, хлорофилла А и сухого остатка в извлечениях из ЛЭП спиртом этиловым 95% в одном эксперименте
Этот неожиданный на первый взгляд феномен связан по-видимому, с тем, что компоненты всех трех групп веществ достаточно легко растворимы в спирте 95% и поэтому извлекаются пропорционально их содержанию в
ЛЭП.
Интересно отметить, что в статье об экстрагировании лекарственного растительного сырья двухфазной системой экстрагентов авторы также приходят к выводу о том, что экстракция производных хлорофилла и флавонои-дов из травы зверобоя продырявленного с использованием спирто-водного экстрагента протекает одновременно и с одинаковой скоростью [Е.В.Иванов с сотр.2008г].
Полученные нами экспериментальные данные об относительном количестве извлекаемой суммы фенолоальдегидов, хлорофиллов и сухого остатка в различных извлечениях также свидетельствуют о том, что эти группы веществ извлекаются из ЛЭП с одинаковой скоростью, что представляет интерес при экстракции сырья, содержащего несколько БАВ.
Следует также отметить, что при многоступенчатой экстракции БАВ нужно учитывать, какие из извлечений можно использовать сразу после получения, и какие - объединять и подвергать дальнейшей обработке, например - концентрированию. В случае экстрагирования ЛЭП спиртом мы исходили из того, что омеднению может подвергаться лишь экстракт с содержанием суммы фенолоальдегидов более 0,6%, т.к. это количество должно содержаться в полученном из экстракта конечном препарате - галенофиллипте.
Поэтому весьма актуальным является повышение выхода БАВ в I и II извлечениях, в связи с чем представляет интерес применить для повышения концентрации БАВ в экстракте ЛЭП предварительное набухание сырья, используемое в технологии фитопрепаратов.
7. Влияние предварительного набухания ЛЭП на выход БАВ при экстракции.
В табл.1 приведенные наши экспериментальные данные о влиянии предварительного набухания ЛЭП на выход БАВ при экстракции 95% этанолом.
Таблица 1. Содержание БАВ в первых спиртовых извлечениях из ЛЭП при
$
экстракции без предварительного набухания и с набуханием
N п/ п Способ получения экстракта Количество ЛЭП в опыте, г Количество извлечений Содержание БАВ в первых извлечениях в % от содержания в сумме извлечений
Фенолоальде- гиды Хлорофил- лы Сухой остаток
1 Без набухания 5 7 35,3 [0,639] 35,5 [0,0876] 44,6
2 С набуханием 10 3 81,5 [0.896] (2,31) 76,9 [0,0074] (2,17) 76,6 (1,72)
3 С набуханием 100 2 81,3 [0.900] (2.3) 72,0 [0,0088] (2,03) 81,0 (1,82)
В круглых скобках - соотношение процента извлечения БАВ в эксперимен-
- 401 -
те с предварительным набуханием к проценту извлечения БАВ в эксперименте без набухания; в квадратных скобках - содержание БАВ в I извлечении (%).
Из приведенных данных видно, что предварительное набухание ЛЭП 70% этанолом приводит к повышению выхода сухого остатка в 1,7-1,82 раза, фенолоальдегидов - в 2,3 раза. Повышение выхода хлорофилла не обнаружено.
8. Омеднения спиртового экстракта ЛЭП
Самые устойчивые комплексы с феофитинами образуют соли Си (II). Они кроме того, обладают высокой антибактериальной активностью, наиболее выраженную по отношению к антибиотикоустойчивым штаммам золотистого стафилококка. Исходя из этого было целесообразным превратить фео-фитин а в меди (II) феофитинат (а).
Поэтому при разработке технологии галенофилипта необходимо было выбрать омедняющий агент и экспериментально обосновать оптимальное количественное соотношение молей хлорофилла или феофитина с солью меди для полного превращения их в феофитинат меди. В качестве омедняющего агента был выбран легко растворимый в спирте меди (II) хлорид двуводный, так как скорость образования феофитината меди (II) с ним существенно выше, чем с меди сульфатом.
Контроль процесса образования феофитината меди осуществяли спектрофотометрическим методом, исходя из данных литературы о специфическом для хлорофилла поглощения при Хтах (664±3) нм, феофитина а - при 668 нм, а для феофитината меди - при Атах (650±3) нм. Наиболее подходящей реакционной средой является спирт этиловый 95%.
При определении оптимальных условий омеднения феофитинов, очень близких по своим спектрометрическим показателям хлорофиллу, в экстракте ЛЭП спиртовым предварительно количественно устанавливали содержание хлорофилла а, используя модифицированную методику КО. Затем в серии экспериментов к 6 равным объемам экстракта ЛЭП с известной концентрацией феофитина или хлорофилла добавляли расчетные возрастающие количества омедняющего агента - спиртового раствора меди (II) хлорида при следующих соотношениях хлорофилл-меди (II) хлорид (1:0,5; 1:1;1:2;1:3;1:4;1:5.
Через различные промежутки времени (1;3;6;9;24 ч.) снимали ЭСП излучаемых растворов, определяя в них максимумы поглощения и величины оптических плотностей, а также изменения характера ЭСП в зависимости от продолжительности реакции и мольных соотношений.
Полученные ЭСП исходного экстракта ЛЭП и реакционных смесей представлены на рис.3 и 4. Как видно из них, ЭСП спиртового экстракта ЛЭП характеризуется наличием поглощения при 668 нм. В ЭСП реакционных смесей, в зависимости от количества омедняющего агента и длительности процесса, наблюдается либо постепенное гипсохромное смещение максимума поглощения при 668 нм в область 650 нм (в случае мольных соотношений 1:0,5; 1:1; 1:2), либо - более быстрое исчезновение максимума при 668 нм и
оптическая плотность
одновременное постепенное появление максимума поглощения при 650±3 нм уже через 1 час взаимодействия веществ при мольных соотношениях 1:3, 1:4, 1:5. О завершении процесса омеднения судили по достижению максимальной интенсивности поглощения реакционной смеси при 650±3 нм, не возрастающей при дальнейшем добавлении омедняющего агента (рис.4).
Рис.4. Электронные спектры поглощения спиртового экстракта листьев эвкалипта проутовидного до его омеднения (экстракт) и после омеднения при мольных соотношениях хлорофилл-меди (II) хлорид 2-водный:
1:0,5 (0,5); 1:1 (1); 1:2 (2); 1:3 (3); 1:4 (4); 1:5 (Б); при температуре (18-20)0С в течение 6ч.
Рис.3. Электронные спектры поглощения спиртового экстракта листьев эвкалипта прутовидного до омеднения (экстракт) и после омеднения при мольных соотношениях хлорофилл - меди (II) хлорид 2-водный:
1:0,5 (0,5); 1:1 (1); 1:2 (2); 1:3 (3); 1:4 (4); 1:5 (5); при температуре (18-20)0С в течение 1 ч. Разведение 1:25 в 95% этаноле (об. %).
Из других полученных нами данных следует, что наибольшая скорость уменьшения Хтах в видимой области ЭСП наблюдается в первый час взаимодействия, а наибольшее возрастание величины А и наибольшее снижение pH
- в первые 3 часа. После этого скорость изменения указанных величин резко снижается.
Учитывая, что согласно данным литературы, скорость взаимодействия
ионов
Си (II) с феофитином а (существенно выше, чем с феофитином Ь), можно предположить, что в спиртовом экстракте ЛЭП при взаимодействии с СиС12 идет параллельно с различной скоростью омеднение обоих видов феофитина. При этом образование феофитината а меди (II) завершается в течение первого часа взаимодействия, а феоифитината Ь - примерно к 3му часу.
Таким образом, экспериментально установлено, что при комнатной температуре к концу первого часа взаимодействия величина оптической плотности реакционной смеси при 650±3 нм достигает максимума лишь в случае избытка омедняющего агента при мольном соотношении хлорофилл-меди (II) хлорид 1:5 (рис.4). Через 6 часов выдержки величина оптической плотности реакционной смеси имели одинаковое предельное значение также при мольных соотношениях хлорофилл-меди (II) хлорид как 1:4, так и 1:3 (рис.4.2), а через
12 часов - при соотношении 1:2.
Представленные данные позволяют считать, что при температуре 18200С для быстрого и полного омеднения хлорофилла или феофитина в экстракте ЛЭП необходим либо избыток омедняющего агента, равный в мольных соотношениях 1:5, либо (при мольных соотношениях 1:2 - 1:3) - длительность взаимодействия более 12 часов. Однако, избыток меди в готовом препарате в первом случае недопустим, т.к. последующее удаление его значительно усложнило бы технологию и снизило качество препарата.
Исследовали также изменение ЭСП реакционных смесей в области 260-290 нм, в которой находится максимум поглощения фенолоальдегидов при (278±2) нм, под влиянием омедняющего агента (рис.5). Установлено, что при соотношении хлорофиллов 1:1, 1:2, 1:3 не наблюдалось изменения ни положения характеристического максимума при (278±3) нм, плеча при 334 нм, минимума при 243 нм, ни выраженное уменьшение интенсивности их поглощения. Полученные данные позволяют предполагать, что в условиях эксперимента медь (II) хлорид взаимодействует лишь с феофитином. Взаимодействие с другими компонентами экстракта ЛЭП, в том числе - с феноло-альдегидами,в этих условиях нами не установлено.
9. Особенности технологии галенофиилипта
Таким образом,результаты проведенных исследований позволяют:
1. Исключить стадию концентрирования спиртового экстракта ЛЭП с использованием повышенной температуры и вакуума, сопровождающуюся частичной потерей легколетучих компонентов эфирного масла; а также аэрацию препарата на других стадиях и операциях.
2. Предварительно рассчитать количество омедняющего агента, необходимого для превращения хлорофилла экстракта ЛЭП в феофитинат меди (II), избегая как избытка, так и недостатка меди (II) хлорида в готовом продукте.
3. Исключить операции обработки полупродукта водой, экстракцию его бензолом, отгонку бензола, азеотропную очистку полупродукта от следов бензола, удаление избытка соли меди (II).
4. Повысить экологичность технологии за счет исключения бензола.
5. Впервые разработать технологию нового препарата из ЛЭП, содержащего эуглобали и феофитинаты меди (I).
10. Влияние степени омеднения экстракта ЛЭП на противомикробную активность
Для определения влияния степени омеднения экстракта ЛЭП на его противомикробную активность по отношению к золотистому стафилококку (Staphylococcus aureus) изучали указанную активность исходного экстракта ЛЭП (1), полупродуктов омеднения экстракта ЛЭП (1) при мольных соотношениях: хлорофилл-меди дихлорид 1:1 (2), 1:2 (3), 1:3 (4), а также спиртового
раствора меди (II) хлорида (5) - табл.
Определение антимикробного действия проводили в соответствии с ФС 42-1348-91 и ГФ XI, вып.2 и измен. №3 в Северо-Западном центре по контролю качества и сертификации лекарственных средств, Санкт-Петербург. Использовались 5 разведений каждого образца.
Из приведенных в табл. 5 данных видно, что антимикробная активность наблюдалась при всех использованных разведениях (1:50; 1:100; 1:200; 1:400 и 1:800) в 1, 3 и 4 образцах, т.е в исходном экстракте и при мольных соотношениях 1:2 и 1:3. При мольном соотношении 1:1 противомикроб-ной активностью обладали лишь первые три разведения: 1:50; 1:100 и 1:200. Спиртовой раствор меди (II) хлорида с концентрацией, используемой при омеднении в соотношении 1:3, не обнаружил противомикробную активность.
Табл.5. Антимикробная эффективность в отношении золотистого стафилококка Staphylococcus aureus спиртового экстракта из листьев эвкалипта прутовидного и полученного из него различных продуктов омеднения медью (II) хлористой 2-водной
№ п/п Анализируемый объект Разведение Контрольный рост тест культуры
1:50 1:100 1:200 1:400 1:800
1 Спиртовой экстракт листьев эвкалипта + + + + + рост
2 Полупродукт омеднения при мольном соотношении CuCl2 • 2И2О: хлорофилл (1:1) + + + рост
3 То же (1:2) + + + + + рост
4 То же (1:3) + + + + + рост
5 Спиртовой раствор CuCl2 • 2И2О в концентрации, используемой при омеднении в соотношении (1:3) нет роста
— отсутствие антимикробного действия + наличие антимикробного действия
Таким образом, установлено, что при омеднении экстракта ЛЭП с мольным соотношением 1:2 и 1:3 образующиеся продукты омеднения сохраняют антистафилакокковую активность, присущую исходному экстракту, в то время как при мольном соотношении 1:1 эффективность разведений 1:400 и 1:800 отсутствует. Во всех контрольных пробах наблюдается рост тест-культуры.
11. Химиотерапевтическая эффективность Галенофиллипта в сравнении с Хлорофиллиптом Проводилось исследование указанных выше препаратов in vitro на 6ти
- 405 -
стандартных культурах, рекомендованных ГФ XII, и in vivo на модели стафилококковой локализованной инфекции в кожно-мышечной ране у белых мышей (66 самцов).
Установили, что в опытах in vitro грамположительные бактерии оказались более чувствительны, чем грамотрицательные грибы. Самой чувствительной культурой оказался Staphylococcus aureus. Максимальное разведение галенофиллипта, полностью ингибирующее размножение стафилоккоков, составляет 1:800, а для хлорофиллипта 1:100. Скорость заживления кожного дефекта ран у белых мышей, динамика микробных показателей в инфицированных ранах достоверно не отличались у животных, леченных обоими препаратами. Микробная обсемененность ран на 10 сутки снижалась в 6 раз по сравнению с контролем без лечения.
Применение препаратов хлорофиллипт и галенофиллипт по сравнению с контролем без лечения способствует более быстрому освобождению от микробов глубоких слоев раны и отграничению очага воспаления грануляционной тканью. Динамика этих показателей была более выражена у галено-филлипта. Его применение стимулировало макрофагальную реакцию в более ранние, чем у хлорофиллипта сроки (с 3 сут).
Таким образом галенофиллипт по ряду терапевтических показателей не только не уступает хлорофиллипту, но и обладает по сравнению с ним определенными преимуществами.
Фармакологические исследования проведены в ФГУ РНИНТО им. Р.Р.Вредена Санкт-Петербург под руковдоством Г.Е. Афигенова с нашим участием.
12. Исследование фотостабильности препаратов из ЛЭП
Ранее фотостабильность феофитинов, феофитинатов меди, а также эуг-лобалей и эвкалиминов, содержащихся в различных растениях, в т.ч. в ЛЭП не изучалось. Представляло интерес исследовать этот вопрос, имеющий теоретическое и практическое значение. Снимали ЭСП исходных и облученных препаратов как дневным светом, так и жестким ультрафиолетом с максимумом излучения 254 нм. Облучаемые препараты находились в бесцветных стеклянных пробирках или во флаконах темного стекла без доступа воздуха. Сравнивая ЭСП исходных и облученных растворов веществ, определяли уменьшение величин оптической плотности через различные промежутки времени: для эуглобалей при 278 нм, для феофитинов - при 667 нм, для фео-фитинатов меди - при 650±3 нм.
Скорость омеднения вычисляли как величину снижения оптической плотности за 1 сутки (при облучении дневным светом) или за 1 мин (при облучении ультрафиолетом).
В результате проведенного исследования получили следующие результаты
- Облучение дневным светом и жестким ультрафиолетом спиртосодержащих препаратов из ЛЭП приводит к снижению оптической плотности в максимумах характеристических полос ЭСП эуглобалей, феофитинов и феофитина-
тов меди (II).
- Феофитинаты меди (II), содержащиеся в галенофиллипте, имеют в 1,5-2,0 раза большую фотостабильность, чем исходные феофитины в спиртовых экстрактах ЛЭП.
- При облучении ультрафиолетом в темном стекле не наблюдается фотолиза ни эуглобалей, ни феофитинов меди (II).
- Эуглобали, содержащиеся в галенофиллипте, подвергаются фотолизу значительно меньшей степени, чем в спиртовом растворе эвкалимина, что можно объяснить наличием в последнем меньшего количества других веществ, взаимодействующих с УФ светом.
- Скорость фотолиза эуглобалей, феофитинов и феофитинатов меди (II) под влиянием ультрафиолета на 2-3 порядка выше таковой под воздействием дневного света.
- Индекс деструкции препаратов ЛЭП возрастает в ряду: спиртовой экстракт ЛЭП<галенофиллипт<хлорофиллипт<настойка эвкалипта.
- Отсутствие прямой концентрационной зависимости скорости фотолиза эуглобалей от длительности облучения может быть обусловлено неоднородностью изомерного состава эуглобалей в растворе эвкалимина.
Проведенные исследования фотостабильности препаратов из ЛЭП показывают значительную, примерно на 3 порядка большую скорость деструкции биологически активных компонентов спиртового экстракта ЛЭП (эуглобалей, феофитинов), а также феофитинатов меди (II) ультрафиолетом по сравнению с облучением дневным светом.
Исходя из широкого использования ультрафиолета в технологии лекарственных средств необходимо учитывать его опасность на всех стадиях производства препаратов из ЛЭП.
А.В. Басевич, В.Ц. Болотова, Н.Е. Тушина, О.А. Лукьянова
РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ЭКСТРАКТА НА ОСНОВЕ КАЛИНЫ ЛИСТЬЕВ И ЧЕРЕДЫ ТРАВЫ
Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая
академия
В настоящее время в России наблюдается прогрессирующая тенденция развития аллергических заболеваний.
В период с 1992 по 2007 год прирост заболеваемости кожными болезнями по Российской Федерации в целом составил 27%. Высокую тенденцию к росту - 40% за рассмотренный период - имеет заболеваемость атопическим дерматитом. Атопический дерматит - хроническое заболевание, в основе которого лежит воспаление кожи и ее гиперреактивность, нарушающие естественную реакцию кожи на внешние и внутренние раздражители. Многолетние наблюдения доказали положительное влияние применения лекарственных растений при дерматозах. Фитотерапия многих кожных заболеваний прове-
- 407 -
