CC BY
95
УДК 615.463
СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ И МЕТОДИК СТАНДАРТИЗАЦИИ ПРЕПАРАТОВ ЭВКАЛИПТА ПРУТОВИДНОГО
© 2007 г. И.Н. Зилфикаров
Studied on improvement of technologies Chlorophylliptum - lypophylic drug from Eucalyptus viminalis L. Revealled intercoupling between the operational procedure on clear and biological activity of the final product, is offered new scheme production. It Is Installed that in composition of Chlorophylliptum dominate the diterpen derives - phenolaldehyds (euglobals). The new method of spectrophotometry determinations of the amount euglobals, allowing conduct the standardization raw material, intermediates and final objects of industrial production of Chlorophylliptum is designed.
Хлорофиллипт (Chlorophylliptum) - биологически активная субстанция из листьев эвкалипта, обладающая выраженной антибактериальной активностью, сопоставимой с некоторыми антибиотиками. Применяется в виде растворов 1%-го в спирте и 2%-го в масле местно и наружно при инфекциях, заболеваниях, вызванных антибиотикоустойчивыми стафилококками, пневмонии, наличии стафилококков в кишечнике, для профилактики послеоперационных осложнений [1]. В литературе имеется сравнительно немного информации о технологии и составе хлорофиллипта. Известно, что он получается из листьев эвкалипта (шарикового и прутовидного), кратко описана последовательность технологических операций, а в составе действующих веществ указаны хлорофиллы [2-4]. Кроме того, подходы к стандартизации исходного сырья, промежуточных и конечных продуктов до настоящего времени не гармонизированы: так, в исходном сырье нормировано содержание эфирного масла, в полупродуктах - показатели сухих остатков и плотности, а в конечных препаратах - показатель подлинности на хлорофиллы и титр антибактериальной активности (не более 12,5 мкг/мл), определяемый по предложенной в ФС методике.
Цель нашей работы - уточнение химического состава основных действующих веществ хлорофиллипта, а также совершенствование технологии препарата и методик стандартизации объектов, участвующих в его производстве.
Объекты и методы
В качестве исходного сырья использовали листья эвкалипта прутовидного (Eucalyptus viminalis L. сем. Myrtaceae), соответствующие ГФ СССР XI изд. Экст-рагентом служил 95%-й этиловый спирт, органическим растворителем - хлороформ. Для химической очистки хлорофиллипта использовали 4%-й водный раствор меди (II) сульфата. В фитохимическом анализе в качестве вещества-свидетеля и стандарта использовали эвкалимин (ВИЛАР) - препарат схожего фармакологического действия, технология которого в начальных стадиях совпадает с технологией хлорофиллипта. Методами анализа были УФ-спектрофотометрия, экстракционная фотометрия, тонкослойная хроматография (ТСХ). Технологические исследования проводились в промышленных условиях отечественного производителя фитопрепаратов.
Результаты и обсуждение
В ходе технологических исследований нами установлено, что количество меди (II) сульфата, участвующего в технологическом процессе, имеет основное значение для достижения необходимого уровня очистки конечного продукта. Катионы меди выполняют в технологии и свойствах хлорофиллипта несколько функций. Во-первых, связывают большинство природных соединений в соли, нерастворимые ни в одном из используемых растворителей, удаляют значительную часть полифенолов, тритерпеноидов и высших органических кислот. Затем, образуя достаточно прочные комплексы с липофильными соединениями эвкалипта, придают препарату насыщенно зеленый цвет. Наконец, вероятно, катионы меди (II), переходящие в виде комплексов в хлорофиллипт, потенцируют его антибактериальную активность.
Нами изучено, какое влияние на биологическую активность конечного продукта оказывает соотношение количества меди сульфата к сумме экстрактивных веществ эвкалипта (таблица). Как видно из данных таблицы, увеличение количества меди сульфата приводит к более полной очистке препарата (снижается относительный выход хлорофиллипта) и значительному возрастанию степени его биологической активности. Однако в производственной практике добавление больших количеств раствора меди сульфата представляет ряд трудностей, поскольку, помимо подорожания себестоимости продукта, приводит к необходимости привлечения больших объемов органического растворителя на стадии ж/ж экстракции, а также к большим объемам утилизируемой медьсодержащей воды.
На основании исследований, проведенных в производственных условиях, мы предлагаем очистку осуществлять в две фазы в соответствии со схемой II на рис. 1. Сначала экстракт эвкалипта обрабатывается в соотношении Си2/ЭВ - 1/150, производится экстракция хлорофиллипта, промывание органической фазы водой от нерастворимых солей. Затем хлоро-филлипт подвергается повторной обработке некоторым избытком раствора меди сульфата, позволяющим достичь более полной очистки, одновременно происходит так называемое «насыщение» препарата катионами меди.
Влияние количества катионов меди (II) на биологическую активность хлорофиллипта
Объем упаренного спиртового извлечения, мл Содержание ЭВ, г Объем 4%-го р-ра CuSO4, мл Соотношение Си2+/ ЭВ, г/г Характеристика конечного продукта
Выход, % к сырью Титр активности, мкг/мл Соответствие требованиям ФС
2000 840 500 1/150 8,55 Более 25,0 Не соотв.
2000 780 750 1/100 8,45 25,0 »
2000 810 1000 1/75 8,40 12,5 Соотв.
2000 835 1250 1/60 8,19 6,25 »
2000 795 1500 1/50 8,15 1,56 »
2000 820 2000 1/40 8,10 1,56 »
2000 825 2500 1/30 8,10 0,78 »
Рис. 1. Фрагменты технологии хлорофиллипта по известной (I) и усовершенствованной (II) схемам
Предложенная схема позволяет многократно сократить расход меди (II) сульфата, заметно уменьшить рабочие объемы, получая при этом препарат со значительно большей активностью и выдерживающий испытания по токсичности.
Учитывая, что в составе хлорофиллипта могут присутствовать эуглобали (фонолоальдегиды дитерпено-вой природы), мы провели сравнительный химический анализ хлорофиллипта и эвкалимина, который показал, что, несмотря на различия в технологии и описании, у них практически совпадают ТСХ-хроматограммы и УФ-спектры - Атоах = 278 ± 2 нм, Хт1П = 243 ± 3 нм (рис. 2). Кроме того, приняв навеску хлорофиллипта в роли промежуточного звена в технологии эвкалими-на, мы выделили субстанцию, соответствующую эв-калимину, в то время как обратная процедура не позволила нам получить из эвкалимина хлорофиллипт, т.е. в образовании комплексов с медью при получении хлорофиллипта участвуют не эуглобали, а другие ве-
щества липофильного характера (возможно хлоро-филлы).
220 240 260 280 300
Рис. 2. УФ-спектры и тонкослойная хроматограмма эвкали-мина (Э) и хлорофиллипта (Х)
Как было определено ранее, дитерпеновые фено-лоальдегиды эвкалипта, обусловливающие биологическую активность эвкалимина и хлорофиллипта, имеют следующее строение [3]:
CHO
На основании полученных результатов нами подобраны условия количественного определения суммы фенолоальдегидов в исходном сырье, полупродуктах, хлорофиллипте и его лекарственных формах в пересчете на ГСО эвкалимина прямой спектрофото-метрией при длине волны 278 нм. Методики характеризуются хорошей воспроизводимостью и простотой исполнения. Относительная погрешность составляет не более 5 %.
По результатам анализа пяти промышленных серий установлено, что содержание суммы эуглобалей в
субстанции хлорофиллипта в пересчете на эвкалимин варьирует в пределах от 45 до 48 %. В проекте новой нормативной документации на хлорофиллипт нормируется содержание не менее 40 %. Остаточное содержание катионов меди (II), выявленное нами методом экстракционной фотометрии, не превышает 0,2 и
0.002.% в субстанции и 1 % в спиртовом растворе хлорофиллипта.
Сравнительная оценка препаратов эвкалипта пру-товидного, хлорофиллипта и эвкалимина показала сходство природы действующих веществ, входящих в их состав. Совершенствование промышленной технологии позволяет получать препарат с более высокой антимикробной активностью, а также обеспечивает ресурсосбережение и экологическую безопасность производства. Полученные в ходе фитохимических исследований данные послужили основой для разработки методик контроля качества исходного сырья, полупродуктов и конечного препарата, что отвечает современному принципу так называемой «сквозной» стандартизации.
Литература
1. МашковскийМ.Д. Лекарственные средства. М., 1993.
2. А.с. 801341 СССР. 1978. Способ получения хлорофил-
липта.
3. Куркин В.А. Фармакогнозия. Самара, 2004.
4. Минина С.А., Каухова И.Е. Химия и технология фито-
препаратов. М., 2004.
Пятигорская государственная фармацевтическая академия_24 августа 2006 г
