CC BY
157
раза, болезней мочеполовой системы в 1,6 раза, болезней глаз в 1,3 раза, психические расстройства в 2,1 раза. Таким образом, на территории района отмечается прямая зависимость между заболеваемостью населения и социально-экологическими факторами.
Т.А.Балаев, Б.Л.Молдавер, И.Б.Бадюгина, О.М.Беляева ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ПРЕПАРАТЫ ИЗ ЛИСТЬЕВ ЭВКАЛИПТА ПРУТОВИДНОГО, СОДЕРЖАЩИЕ МЕДНЫЕ АНАЛОГИ ХЛОРОФИЛЛА
Санкт-Петербург, ОАО «Фармацевтическая фабрика Санкт-Петербурга»
В последние годы большое внимание ученых и практиков привлекает использование хлорофиллов и их производных в качестве лекарственных и лечебно-косметических средств, а также БАД. Во многих сотнях публикаций описано применение хлорофиллов в медицине (М.В.Моисеева, Т.А.Михайлец, 2000 г.)
Однако вследствие очень сложной структуры хлорофилла, он является неустойчивым соединением, весьма чувствительным к воздействию кислорода, кислой и щелочной среды, высокой температуры, света и легко подвергается гидролизу, фотолизу, окислению, децик-лизации и другим химическим превращениям (Б.Д.Березин и др., 2004 г).
В то же время магний в порфириновом цикле хлорофилла легко замещается на ионы других металлов (цинка, меди, кобальта, никеля и др.). Образующиеся металлические аналоги хлорофилла имеют значительно большую стабильность, чем хлорофилл и представляют интерес как потенциальные биологически активные вещества. Их красивый цвет делает весьма перспективными указанные аналоги в качестве экологически чистых красителей.
В последние десятилетия появилось множество патентов и публикаций, посвященных данной проблеме.
Особое внимание вызывают медные аналоги хлорофиллов (МАХ), обладающие изумрудно-зеленым цветом, весьма стабильные и являющиеся высоко активными в отношении грамположительной микрофлоры, в особенности - против стафилококков, в том числе анти-биотикоустойчивых.
Следует отметить, что соли меди (II) не относятся к ядовитым веществам, значительно менее токсичны и применяются внутрь в составе известных комплексных препаратов с витаминами, в каплях Береша, в водных вытяжках из лекарственного растительного сырья и др.
Известны способы получения различных лекарственных препаратов и БАД с МАХ
путем экстракции и последующего омеднения хлорофиллов, содержащихся в экстрактах из различных видов природного сырья или отходов производства, например, хвои (патент России № 20040266), осиновой коры (патент России № 20034555), травы маргаритки многоцветной (патент России № 2066191), водорослей ламинарии (авторское свидетельство СССР № 1782603), листьев мяты (авторское свидетельство СССР № 288869), способ получения ме-таллосодержащих производных хлорофилла и фармацевтические композиции на его основе (патент США № 5,744,598).
Использование МАХ представляет интерес и для препаратов, получаемых из листьев эвкалиптов, однако в доступной нам литературе мы не нашли сведений о них.
В России находят применение эвкалипт прутовидный и эвкалипт шариковый, используемые для получения противомикробных, антисептических, противовоспалительных и других препаратов.
Основными БАВ, извлекаемыми из листьев эвкалиптов экстракцией 95% этанолом, являются эфирное масло (содержащее, главным образом, цинеол и пинены), фенолоальдеги-ды, хлорофиллы и др.
В качестве противовоспалительного и антисептического средства используют настойку эвкалипта. Из листьев и побегов эвкалипта прутовидного получают также содержащий фенолоальдегиды препарат «Эвкалимин», который используется в качестве препарата, обладающего бактериостатическим действием на стафилококки, стрептококки, дифтерийную палочку и противовирусной активностью (Н.М.Крутикова,1997 г).
Наиболее известен препарат «Хлорофиллипт», получаемый из листьев эвкалипта в виде густого экстракта. «Хлорофиллипт» обладает антибактериальной активностью и используется в виде 1% спиртового и 2% масляного растворов. В патентной литературе описаны способы применения «Хлорофиллипта», раствора спиртового 1% в медицинской практике (авторское свидетельство СССР № 240932 и авторское свидетельство СССР № 463706).
Способ получения «Хлорофиллипта» (раствора спиртового 1%) из эвкалипта пруто-видного (Eucalyptus viminalis. L) описан в авторском свидетельстве СССР № 801341.
Препарат получают путем экстракции листьев эвкалипта прутовидного 95% этанолом, обработкой концентрата экстракта избытком меди (II) сульфата для очистки от сопутствующих веществ, многократным извлечением суммы гидрофобных компонентов бензолом при перемешивании. Бензольное извлечение трижды промывают водой и упаривают под вакуумом при нагревании, а затем трижды при нагревании азеотропно отгоняют остатки бензола. Полученный концентрат высушивают в сушильных шкафах.
При получении «Хлорофиллипта» хлорофилл подвергается как термической обработке, так и химическому воздействию избытком меди сульфата, а также механической обработке, способствующей его деградации, что ведет к снижению качества целевого продукта за счет потери его нативных свойств, а также снижению стабильности препарата вследствие термического разрушения проэкстрагированного хлорофилла и некоторому снижению антибактериальной активности препарата.
Факт разрушения хлорофилла в результате термического и других воздействий известен из патента РФ № 2034555. Снижение активности «Хлорофиллипта» (раствора спиртового 1%) в отношении золотистого стафилококка также известно из патента РФ № 2066191.
Учитывая недостатки технологии «Хлорофиллипта», нами разработан способ получения препарата-аналога «Хлорофиллипта», названного «Галенофиллипт» (патент на изобретение № 2320360 «Способ получения лекарственного препарата, содержащего медные аналоги хлорофиллов» ОАО «Фармацевтическая фабрика Санкт-Петербурга» Заявка № 2003122903. Приоритет изобретения 27 июня 2006 г).
При получении «Галенофиллипта» по разработанной нами технологии нативный спиртовой экстракт из листьев эвкалипта прутовидного обрабатывают меди(11) хлоридом в количестве 3-4 эквивалента на 1 эквивалент хлорофилла, содержащегося в спиртовом экстракте, что значительно меньше, чем при получении «Хлорофиллипта», и позволяет избежать как избытка меди, так и очистки препарата от нее. В технологии «Галенофиллипта» не используются ни термическая обработка, ни экстракция бензолом, ни интенсивное многократное перемешивание в присутствии воздуха, способствующие деградации, ни длительная сушка экстракта. Поэтому «Галенофиллипт» не только не ухудшает своих свойств по сравнению с «Хлорофиллиптом», но и напротив - несколько улучшает их, т.к. в нем исключена возможность наличия примесей бензола и избытка двухвалентной меди. У препарата несколько выше противомикробная активность и существенно выше фотостабильность.
Наряду с оптимизацией состава и технологии «Галенофиллипта» значительно повышены требования к его качеству по сравнению с «Хлорофиллиптом» (ФСП на «Галенофил-липт»).
При определении подлинности «Галенофиллипта» в нем идентифицируют цинеол, пинен, МАХ, медь и фенолоальдегиды. Количественно в препарате определяют фенолоаль-дегиды, общее содержание меди, сухой остаток, спирт. Кроме того, для «Галенофиллипта» разработана методика определения «Токсичности», для чего разработана тест-доза препарата.
Набор указанных показателей качества позволяет надежно идентифицировать препарат и определить его возможную фальсификацию.
Во всех опубликованных официально материалах «Хлорофиллипт» рассматривается как препарат, содержащий сумму хлорофиллов a и b. Однако нами экспериментально установлено, что «Хлорофиллипт», в действительности, содержит не хлорофиллы, а сумму медных аналогов хлорофиллов. Для электронных спектров поглощения «Хлорофиллипта» характерна, как и для «Галенофиллипта», полоса поглощения с максимумом при (650±3)нм, присущая медным аналогам хлорофиллов, на ТСХ «Хлорофиллипта» также обнаруживаются пятна МАХ. Кроме того, методом атомно-абсорбционной пламенной спектрофотометрии в «Хлорофиллипте» обнаруживается содержание меди, близкое таковому в «Галенофиллипте».
Таким образом, использование в технологии производства «Хлорофиллипта» и «Галенофиллипта» одинакового сырья: листьев эвкалипта прутовидного, спирта этилового 95%, соли двухвалентной меди и принципиально одинаковый состав позволяют предположить, что «Галенофиллипт» является дженериком «Хлорофиллипта», несмотря на то, что препараты отличаются технологией.
Рассмотрение «Галенофиллипта» как дженерика «Хлорофиллипта» может быть подтверждено биоэквивалентностью обоих препаратов, обоснованной результатами сравнительного изучения их противомикробной активности в экспериментах in vitro и in vivo.
В связи с этим, при доклинических исследованиях «Галенофиллипта» изучена его антимикробная активность в сравнении с «Хлорофиллиптом» в опытах in vitro. В исследовании использованы музейные штаммы микроорганизмов: грамположительные кокки - Stafilococ-cus aureus-209 P; грамотрицательные палочки - Escherichia coli-88; спорообразующие палочки - Clostridium dificille-4938 и грибы Candida albicans-674, а также полевые штаммы Pseudomonas aerugenosa и Salmonella typhi suis. В качестве антибиотиков для сравнения были использованы бензилпенициллин, эритромицин, олеандомицин, стрептомицин, тетрациклин и левомицетин. Установлено, что новый препарат обладает выраженным антимикробным действием в концентрациях, сопоставимых с эффективными дозами антибиотиков. «Галенофил-липт» имеет несколько более широкий спектр действия по сравнению с большинством антибиотиков, применяемых в медицинской практике. По сравнению с «Хлорофиллиптом» «Га-ленофиллипт» in vitro был заметно эффективнее. Он оказывает биоцидное действие на представителей как нормальной, так и условно-патогенной микрофлоры, превосходя в этом отношении препарат сравнения.
Изучение активности «Галенофиллипта» на модели изолированной гнойной раны в
экспериментах на крысах показало, что он обладает высокими антибактериальным, противовоспалительным, противоожоговым и регенераторным свойствами, несколько превосходящими по эффективности «Хлорофиллипт». При этом следует отметить, что в случае «Гале-нофиллипта» раны заживали первичным натяжением без образования рубца.
Оценка антимикробной активности «Галенофиллипта» в опытах in vivo в другой лаборатории проводилась на модели локализованной инфекции в кожно-мышечной ране, вызванной устойчивым к антибиотикам штаммом золотистого стафилококка (опыты проводились на 66 мышах-самцах). Длительность лечения и наблюдения составляла 10 дней. По результатам оценки микробной обсемененности ран и ее динамики, оценки морфологических изменений в тканях ран, динамики заживления кожно-мышечной раны были сделаны следующие выводы:
1. Скорость заживления кожного дефекта ран у животных с локализованной стафилококковой инфекцией и динамика микробных показателей в инфицированных ранах у экспериментальных животных достоверно не отличались в группах животных без лечения и леченных «Хлорофиллиптом» и «Галенофиллиптом». У мышей, леченных этими препаратами, микробная обсемененность ран на 10ые сутки снижалась в 6 раз по сравнению с контролем без лечения.
2. Применение препаратов «Хлорофиллипт» и «Галенофиллипт» по сравнению с контролем без лечения способствует более быстрому освобождению от микробов глубоких слоев раны и отграничению очага воспаления грануляционной тканью. Однако динамика этих показателей была более выражена у «Галенофиллипта», его применение стимулировало мак-рофагальную реакцию в более ранние, чем у «Хлорофиллипта» сроки (с 3 сут).
Проведенные токсикологические, фармакологические и микробиологические исследования in vitro и in vivo установили безвредность «Галенофиллипта», его эффективность на моделях различных заболеваний и тем самым - его биоэквивалентность «Хлорофиллипту».
Полученные данные позволяют с достаточным основанием считать «Галенофиллипт» дженериком «Хлорофиллипта».
Препарат «Галенофиллипт, раствор для приема внутрь и местного применения спиртовой» рекомендован к применению и производству с 13 марта 2008 года. Разработана и утверждена ФСП, опытно-промышленный регламент, наработаны первые промышленные серии препарата, которые прошли экспертизу качества эффективности и безопасности в рамках государственного предварительного контроля. В настоящее время на предприятии осуществляется промышленный выпуск препарата.
