Связь делеций и точечных мутаций гена р53 с резистентностью клеточных линий метастатической меланомы кожи человека к аранозе Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

64

Оригинальные статьи

СВЯЗЬ ДЕЛЕЦИй и ТОЧЕЧНЫХ МУТАЦИЙ ГЕНА Р53 С РЕЗИСТЕНТНОСТЬЮ КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЙ МЕТАСТАТИЧЕСКОЙ МЕЛАНОМЫ КОЖИ ЧЕЛОВЕКА К АРАНОЗЕ

A.B. Пономарев1, A.A. Солодовник1, А.С. Мкртчян2, Ю.П. Финашутина1, A.A. Турба2, B.A. Мисюрин1, 2, A.B. Мисюрин1, M.A. Барышникова1

ФГБУ«НМИЦонкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России; Россия, 115478 Москва, Каширское шоссе, 24; 2ООО «ГеноТехнология»; Россия, 117485 Москва, ул. Профсоюзная, 104

Контакты: Александр Васильевич Пономарев kl8546@yandex.ru

Введение. Одним из химиопрепаратов, применяемых для лечения меланомы, является араноза, препарат из класса производных нитрозомочевины — метилирующий ДНК агент. Действие аранозы связано с повреждением ДНК, после которого включаются механизмы апоптоза. Важную роль в этом процессе должен осуществлять белок р53, а различные нарушения данного белка могут приводить к лекарственной устойчивости.

Цель исследования — изучить мутационный статус белка р53 в клеточных линиях метастатической меланомы кожи человека и оценить его связь с резистентностью клеточных линий к аранозе.

Материалы и методы. Исследование проводили на 14 клеточных линиях метастатической меланомы кожи человека. Методом МТТ-теста была определена ИК5д аранозы для клеточных линий. С помощью флуоресцентной гибридизации in situ оценили состояние короткого плеча хромосомы 17, на котором находится ген р53. С помощью секвенирования по Сэнгеру изучили наличие точечных мутаций в ДНК-связывающем домене гена р53.

Результаты. Клеточные линии метастатической меланомы кожи имели разную чувствительность к аранозе. Практически все клеточные линии были неоднородны по состоянию хромосомы 17. В 2 линиях были обнаружены точечные мутации в гене р53. При этом часть устойчивых клеточных линий почти не имели мутационных нарушений р53, а другая часть устойчивых линий, наоборот, несла множество нарушений гена р53.

Выводы. Для части клеточных линий метастатической меланомы кожи можно установить корреляцию резистентности с мутациями гена р53. Однако для других клеточных линий метастатической меланомы кожи резистентность, скорее всего, обусловлена и иными механизмами.

Ключевые слова: араноза, меланома, р53, мутации, флуоресцентная гибридизация in situ, секвенирование

DOI: 10.17650/1726-9784-2018-17-1-64-69

RELATIONSHIP BETWEEN DELETION AND POINT MUTATIONS OF P53 AND DRUG RESISTANCE TO ARANOZA IN HUMAN MELANOMA CELL LINES

A. V. Ponomarev1, A.A. Solodovnik', A.S. Mkrtchyan2, Yu.P. Finashutina1, A.A. Turba2, V.A. Misyurin1,2,

A. V. Misyurin1, M.A. Baryshnikova1

'N.N. Blokhin National Medical Research Center of Oncology, Ministry of Health of Russia; 24 Kashirskoe Shosse, Moscow 115478, Russia; 2"GenoTechnology" LLC; 104 Profsoyuznaya St., Moscow 117485, Russia

Introduction. Aranosa, nitrozourea derivative is a DNA-methylating agent that has been approved for treatment of patients with disseminated melanoma. Aranoza effect is based on DNA damage and then as a result apoptosis mechanisms start launching. The important role in this process must be played by p53protein, and its different dysfunctions can result in drug resistance.

Objective. The purpose is to study p53 mutational status in cell lines of human skin metastatic melanoma and to estimate its connection with cell lines resistance to aranoza.

Materials and methods. The research was conducted on 14 cell lines of human skin metastatic melanoma. Aranoza IC00 for cell lines was determined by MTT-test. The 17p chromosome's condition was estimated by fluorescence in situ hybridization. The presence of point mutations in DNA-binding domain of human p53 was researched by Sanger sequencing.

Results. Skin metastatic melanoma cell lines had different sensitivity to aranoza. Almost all cell lines were heterogeneous in the condition of 17'h chromosome. P53 point mutations were found in 2 cell lines. But one part of resistant cell lines almost didn't have any mutational disorders of p53, another part of resistant lines on the contrary had plenty of p53 mutational disorders.

Conclusion. The correlation of resistance and p53 mutations can be established for one part of human skin metastatic melanoma cell lines. But for another part of human skin metastatic melanoma cell lines resistance most likely are driven by other mechanisms.

Key words: aranoza, melanoma, p53, mutations, fluorescence in situ hybridization, sequencing

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ | RUSSiAN JOURNAL OF BiOTHERAPY

1'2018 том 17 | vol. 17

Оригинальные статьи 65

Введение Мы исследовали участок на коротком плече хро-Как известно, образование и прогрессирование мосомы 17p, где находится генр53, который подвер-опухоли связаны с генетическими изменениями, про- гается делециям или мутациям при многих опухолях. исходящими в различных участках генома. В нашей Например, при В-клеточном хроническом лимфо-работе был изучен мутационный статус белка p53 для цитарном лейкозе делеции 17p связаны с худшим метастатической меланомы — наиболее агрессивной клиническим прогнозом [17]. опухоли кожи. Исследование проводили на культурах клеток, Белок p53 кодируется геном TP53, который рас- полученных из метастатической меланомы кожи. Мы положен на коротком плече (p) хромосомы 17 и со- допускаем, что в процессе культивирования в них стоит из 11 экзонов. Ген TP53 человека охватывает могли произойти вторичные генетические измене-20 кб и кодирует ядерный фосфопротеин (длина 393 ния. Делеции гена р53 могли бы быть одной из при-аминокислоты). В качестве онкосупрессивного бел- чин утраты функции р53 в клетках без точечных мука р53 действует как «страж генома». В норме «стрес- таций. сорная» функция р53 неактивна до того момента, В связи с тем, что р53 вызывает арест пролифе-пока не произойдет ее активирование за счет повреж- рации или гибель клеток при повреждениях ДНК, мы дений ДНК или других геномных аберраций. Белок решили исследовать чувствительность клеточных р53 затем активирует свои нисходящие эффекторы линий метастатической меланомы кожи к аранозе, для ареста клеточной пролиферации и ингибирова- являющейся метилирующим ДНК агентом. ния репликации поврежденной ДНК, чтобы провести Цель исследования — изучить мутационный ста-процесс репарации. В случаях, если повреждение слож- тус белка р53 в клеточных линиях метастатической ное, белок р53 может запускать программу апоптоза. меланомы кожи человека и оценить его связь с рези-Потеря функции «хранителя генома» позволяет про- стентностью клеточных линий к аранозе. должить репликацию клеток с поврежденной ДНК и, в свою очередь, приводит к накоплению генетиче- Материалы и методы ских изменений, которые способствуют злокачест- клеточные линии. Исследования проводили венной прогрессии [1, 2]. на 14 клеточных линиях метастатической меланомы В здоровых клетках часто не обнаруживается бе- кожи человека из банка клеточных культур лабора-лок p53 из-за его быстрого убиквитинирования бел- тории экспериментальной диагностики и биотера-ком MDM2 и последующей протеасомной деграда- пии опухолей НИИ ЭДиТО ФГБУ «НМИЦ онколо-ции [3]. Однако при повреждении ДНК и некоторых гии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России [18]. Были других стрессах, включая онкогенный стресс, коли- изучены клеточные линии mel Kor, mel Rac, mel Is, чество р53 увеличивается вследствие его стабилиза- mel Si, mel Hn, mel R, mel Gi, mel H, mel Il, mel Ibr, ции [4]. Инактивация р53 является одной из зна- mel Me, mel Mtp, mel Gus, mel Bgf. Клеточные линии чимых характеристик опухолевой клетки. Для р53 культивировали в среде RPMI-1640, содержащей 10 % обнаружен широкий спектр различных мутаций, телячьей эмбриональной сыворотки, 10 мМ HEPES, которые встречаются в » 50 % всех опухолей [5]. Еще 2 мМ L-глутамина, пенициллин (25 000 Ед), стреп-одним механизмом ослабления реакции р53 на он- томицин (25 000 мкг), пируват натрия, 0,1 % раствор когенный стресс может быть повышенная экспрес- аминокислот и 0,1 % раствор витаминов при 37 °C сия MDM2 [6, 7]. Хотя мутация гена-супрессора в атмосфере 5 % СО2 (полная среда). Клетки поддер-опухоли р53 является общей чертой для многих типов живали в логарифмической фазе роста постоянным рака, мутационная инактивация р53 при меланоме пересевом культуры через 3—4 дня. встречается редко, а р53 дикого типа часто показы- Противоопухолевые препараты. «Араноза, лиофи-вает высокие уровни экспрессии [8—11]. Кроме того, лизат для приготовления раствора для инъекций увеличение экспрессии p53 не является достаточным 500 мг» (араноза) производства филиала «Наукопро-фактором для хорошего ответа на лечение меланомы фи» ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» [12]. Таким образом, можно предположить, что р53 ди- Минздрава России. кого типа в меланоме по каким-то причинам не про- мтт-тест. Клетки снимали раствором Версена, являет своих функций опухолевого супрессора [13]. отмывали от него полной средой и рассаживали Хромосомные изменения, в частности аллельные в 96-луночные плоскодонные планшеты (SPL, США) потери, практически на каждой хромосоме были по 7 х 103 клеток в 180 мкл полной среды RPMI-1640 описаны в первичной меланоме, а также в клеточных на лунку. Далее клетки помещали в термостат при линиях, полученных из метастазов, демонстрируя 37 °C в атмосфере 5 % СО2. Через 24 ч в лунки с клет-множественные генетические изменения на разных ками добавляли исследуемый препарат в выбранных участках генов и констатируя гетерогенную природу концентрациях. Клетки инкубировали с препаратом генетических изменений в меланоме [1, 14—16]. в течение 24 ч при 37 °С и 5 % СО2. После инкубации

1'2018 том 17 | vol. 17 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ | RUSSIAN JOURNAL OF BiOTHERAPY

66 Оригинальные статьи

в каждую лунку вносили по 20 мкл раствора 3-[4,5- тического анализатора ABIPRISM 310 (Applied Bio-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолия бро- systems, США). мида (1 мг/мл в фосфатно-солевом буфере c pH 7,4; Определение уровня экспрессии гена TP53. Прото-Sigma Chemical Co., США) и оставляли еще на 4 ч кол определения представлен в нашем исследовании: при 37 °C и 5 % СО2. По окончании инкубации план- из клеток производилось выделение РНК, далее ее шеты центрифугировали, отбирали супернатант и вно- конверсия в комплементарную ДНК и количествен-сили в лунки по 150 мкл диметилсульфоксида ная ПЦР в реальном времени для оценки уровня («ПанЭко», Россия) для растворения кристаллов экспрессии TP53 по отношению к гену домашнего формазана, после чего планшеты аккуратно встря- хозяйства ABL [20]. Использованная система позво-хивали на шейкере для равномерного распределения ляла установить наличие всех типов матричной РНК, раствора формазана. Оптическую плотность раство- кодирующих все известные изоформы белка p53 [20]. ра формазана определяли на фотометрическом ана- Статистический анализ данных. Для определения лизаторе иммуноферментных реакций MultiskanEX наиболее значимого фактора, связанного с чувстви-(ThermoLabsystems, США) при длине волны 540 нм. тельностью клеток меланомы к аранозе, применялся Величина поглощения прямо пропорциональна чис- многофакторный регрессионный анализ. В качестве лу живых клеток. Цитотоксичность (Ц) оценивали «входных» параметров были использованы следующие в % по формуле факторы: уровень экспрессии TP53; отсутствие аномалий хромосомы 17; наличие делеций или точечных Ц = (1 — Оо/Ок) х 100 %, мутаций гена TP53; количество клеток с трисомией хромосомы 17; количество клеток с тетрасомией хро-где Ок — оптическая плотность в контрольных лун- мосомы 17; количество клеток с гексасомией хромо-ках; Оо — оптическая плотность в опытных лунках. сомы 17 и общее количество клеток с аномалиями Для оценки цитотоксического эффекта опреде- хромосомы 17. Для статистического анализа данных ляли ИК50 — концентрацию вещества, вызывающую FISH-исследования использовались значения, превы-гибель 50 % клеток. шающие 5 %, так как меньшие значения процента де-Флуоресцентная гибридизация in situ (fluorescence леций могли быть ложноположительными. Анализ in situ hybridization, FISH). Для постановки FISH проводился в программе Statistica 10. Результаты при-использовался зонд ONp53 (17p13)/SE17 (Kreatech, нимались как значимые приp <0,05. Германия), исследование проводилось согласно рекомендациям производителя. Результаты Секвенирование по Сэнгеру. Секвенирование про- С помощью метода FISH изучили состояние водили с использованием набора реактивов BigDye- хромосомы 17, кодирующей белок р53. Обнаружено, Terminator 3.1vCycleSequencingKit (Applied Biosys- что практически все клеточные линии были неодно-tems, США) с учетом рекомендаций производителя. родны по своему составу (табл. 1). В пределах одной Проводилось секвенирование последовательности, клеточной линии были как нормальные клетки, так кодирующей ДНК-связывающий домен белка p53. и клетки с трисомией или тетрасомией хромосомы Для данной последовательности характерно наи- 17. Часто встречались более сложные нарушения. большее количество мутаций, нарушающих функции Ряд клеточных линий имели делеции р53. Также белка р53 [19]. Для проведения секвенирующей ре- изучили наличие мутаций р53 в клеточных линиях акции в прямом направлении использовали следую- метастатической меланомы и обнаружили наличие щие праймеры: мутаций только в 2 линиях из 9 исследованных, это ♦ праймеры для секвенирования экзонов 5 и 6 — mel Hn и mel Ibr (табл. 2). Полученные результаты 5-6F5'-TGTTCACTTGTGCCCTGACT-3' согласуются с данными исследований, подтвердив-и 5-6R5'-GGAGGGCCACTGACAACCA-3'; ших, что точечные мутации р53 при меланоме встре- ♦ праймеры для секвенирования экзона 7 — 7F5'- чаются редко [13]. ACTGGCCTCATCTTGGGCCT-3' и 7R5'-GTCA- С помощью МТТ-теста определили чувствитель-GAGGCAAGCAGAGGCT-3'; ность клеточных линий метастатической меланомы ♦ праймеры для секвенирования экзона 8 — 8F5'- к аранозе. Клеточные линии имели разную чувстви-TAAATGGGACAGGTAGGACC-3' и 8R5'-TCCA- тельность к исследуемому препарату (табл. 3). Рези-CCGCTTCTTGTCCTGC-3'. стентными к аранозе считали линии, для которых После проведения секвенирующих реакций про- значение ИК50 составляло 1500 мкг/мл или выше. дукты полимеразной цепной реакции очищали с по- Методом пошаговой селекции обнаружены наи-мощью набора BigDyeXTerminatorPurificationKit (Ap- более значимые факторы, коррелирующие со зна-plied Biosystems). Продукты секвенирующей реакции чением ИК50 аранозы. Большее значение ИК50 на-разделяли и анализировали с использованием гене- блюдалось при отсутствии аномалий хромосомы 17

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ | RUSSiAN JOURNAL OF BiOTHERAPY 1'2018 том 17 | vol. 17

Оригинальные статьи

67

Таблица 1. Мутационный статус р53 в клеточных линиях метастатической меланомы

Клеточные линии Мутационный статус р53

mel R В 50 % клеток — трисомия хромосомы 17 с делецией гена р53 на 1 хромосоме, в 25 % — тетрасомия хромосомы 17 с делецией гена р53 на 2 хромосомах, 15 % нормальных клеток, в 6 % — гексасомия хромосомы 17 с делецией гена р53 на 2 хромосомах, в 4 % — разное сочетание количественных изменений хромосомы 17 и делеций гена р53

mel Bgf В 44 % клеток — тетрасомия хромосомы 17 с делецией гена р53 на 2 хромосомах, в 21 % — трисомия хромосомы 17 с делецией гена р53 на 1 хромосоме, 12 % нормальных клеток, в 8 % — гексасомия хромосомы 17 с делецией гена р53 на 2 хромосомах, в 6 % — тетрасомия хромосомы 17, в 4 % — октасомия хромосомы 17 с делецией гена р53 на 4 хромосомах; в 3 % — разное сочетание количественных изменений хромосомы 17 и делеции гена р53

mel Kor В 60 % клеток — тетрасомия хромосомы 17, в 30 % — трисомия хромосомы 17

mel Hn В 85 % клеток — трисомия хромосомы 17

mel Gi В 80 % клеток — трисомия хромосомы 17

mel Gus В 3 % клеток — делеция генар53, в 2 % — трисомия хромосомы 17

mel Rac В 90 % клеток — трисомия хромосомы 17, остальные клетки нормальные

mel Il В 40 % — тетрасомия с делецией гена р53 на 2 из 4 хромосом 17, в 40 % — трисомия с делецией гена р53 на 1 хромосоме 17

mel Ibr В 87 % клеток — тетрасомия хромосомы 17, в 9 % — трисомия хромосомы 17

mel Cher В 65 % клеток — тетрасомия хромосомы 17, в 5 % — гексасомия хромосомы 17

mel H В 60 % клеток — тетрасомия хромосомы 17 с делецией гена р53 на 2 из 4 хромосом, в 37 % — трисомия хромосомы 17 с делецией гена р53 на 1 хромосоме

mel Is В 80 % клеток — тетрасомия, в 15 % — трисомия хромосомы 17

mel Me В 70 % клеток — тетрасомия, в 15 % — трисомия, в 4 % — трисомия хромосомы 17 с делецией гена р53 на 1 из 3 хромосом

mel Mtp 90 % нормальных клеток, в 7 % — трисомия, в 2 % — дисомия с делецией гена р53 на 1 из 2 хромосом, в 1 % — тетрасомия

mel Si В 65 % клеток — трисомия, 25 % — нормальные клетки, в 4 % — трисомия с делецией гена р53 на 1 хромосоме, в 5 % — пентасомия, в 1 % — дисомия с делецией гена на 1 хромосоме

Таблица 2. Точечные мутации в гене TP53 (указано количество мутантных аллелей в процентах от общего числа аллелей)

Клеточная линия Наличие точечных мутаций в гене ТР53

mel Hn с.451С>Т 47 % р.Пролин151Серин с.722С>Т 38 % р.Серин240Фенилаланин

mel Ibr с.512А>С 15 % р.1лутамин171Аланин

mel Rac отсутствие

mel Kor отсутствие

mel Gi отсутствие

mel Is отсутствие

mel Gus отсутствие

mel Ch отсутствие

mel Il отсутствие

(р = 0,0028), наличии множественных аномалий хромосомы 17 (р = 0,0057), отсутствии трисомии хромосомы 17 (р = 0,032) и наличии делеций хромосомы 17 или мутаций гена ТР53 (р = 0,0395).

Уровень экспрессии гена ТР53, тетрасомия и гек-сасомия хромосомы 17 не были значимо связаны с величиной ИК50 аранозы (р >0,05).

Заключение

В исследовании был определен мутационный статус белка р53 в клеточных линиях меланомы человека. Обнаружены количественные изменения хромосомы 17, делеции участка короткого плеча р53 хромосомы 17 (ген р53) и точечные мутации в определенных линиях. В одном случае для клеточных линий с повышенной резистентностью к аранозе характерно наличие аномалий хромосомы 17, в другом — наблюдается отсутствие аномалий хромосомы 17. В результате было выявлено 2 состояния. Первое: клетка

1'2018 том 17 i vol. 17

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ I RUSSIAN JOURNAL OF BiOTHERAPY

68

Оригинальные статьи

Таблица 3. ИК50 аранозы и экспрессия ТР53 в клеточных линиях метастатической меланомы

Клеточные линии ИК50 аранозы, мкг/мл Уровень экспрессии TP53, относительно гена ABL, % Наличие мутации ДНК-связывающего домена % клеток с делениями локуса гена TP53 от общей популяции

mel Kor 500 не определено - 0

mel Rac 1250 не определено - 0

mel Is 1300 162 - 0

mel Si 1350 не определено не определено 0

mel Hn 1500 246 + 85

mel R 1500 не определено не определено 50

mel Gi 1550 не определено - 0

mel H 1800 107 не определено 33

mel Il 1900 100 - 50

mel Ibr 2000 214 + 15

mel Me 2000 132 не определено 0

mel Mtp 2000 100 не определено 0

mel Gus 2000 62 - 0

mel Bgf 2000 2 не определено 50

резистентна к аранозе при наличии множества нарушений хромосомы 17. Второе: хромосома 17 сохранна. Уровень экспрессии ТР53 оказался не связанным с устойчивостью к аранозе фактором. Мы можем объяснить наблюдаемый дуализм тем, что у одних больных меланома прогрессирует при наличии аномалий хромосомы 17 и отсутствии «стража генома».

Но существует такая группа больных, у которых прогрессия и резистентность меланомы оказались не связаны с аномалиями хромосомы 17. Прогрессия могла произойти только в том случае, если клетка с самого начала не имела возможности осуществить р53-зависимый апоптоз. Причины этого явления еще недостаточно изучены [6, 13].

ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES

1. Bogdan I., Xin H., Burg G., Boni R. Heterogeneity of allelic deletions within melanoma metastases. Melanoma Res 2001;11(4):349-54. PMID: 11479423.

2. Копнин Б.П., Копнин П.Б., Хромова Н.В. и др. Многоликий р53: разнообразие форм, функций, опу-хольсупрессирующих и онкогенных активностей. Клиническая онкогема-тология 2008;1(1):2-9.

3. Blagosklonny M.V. Loss of function and p53 protein stabilization. Oncogene 1997;15:1889-93. DOI: 10.1038/sj.onc. 1201374. PMID: 9365234.

4. Lavin M.F., Gueven N. The complexity of p53 stabilization and activation. Cell Death Differ 2006;13(6):941-50. DOI: 10.1038/sj.cdd.4401925. PMID: 16601750.

5. Roemer K. Mutant p53: gain-of-func-tion oncoproteins and wild-type p53 inactivators. Biol Chem 1999; 380(7-8):879-87.

DOI: 10.1515/BC.1999.108. PMID: 10494837.

6. Houben R., Hesbacher S., Schmid C.P. et al. High-level expression of wild-type p53 in melanoma cells is frequently associated with inactivity in p53 reporter gene assays. PLoS One 2011;6(7): e22096. DOI: 10.1371/journal.pone. 0022096. PMID: 21760960.

7. Michael D., Oren M. The p53 and Mdm2 families in cancer. Curr Opin Genet Dev 2002;12(7):53-9. PMID: 11790555.

8. Soussi T., Beroud C. Assessing TP53 status in human tumours to evaluate clinical

outcome. Nat Rev Cancer 2001;1(3):233-40. DOI: 10.1038/ 35106009. PMID: 11902578.

9. Gwosdz C., Scheckenbach K., Lieven O. et al. Comprehensive analysis of the p53 status in mucosal and cutaneous melanomas. Int J Cancer 2006;118(3):577-82. DOI: 10.1002/ijc.21366. PMID: 16094622.

10. Sparrow L.E., Soong R., Dawkins H.J. et al. p53 gene mutation and expression in naevi and melanomas. Melanoma Res 1995;5(2):93-100. PMID: 7620345.

11. Soto J.L., Cabrera C.M., Serrano S., Lopez-Nevot M.A. Mutation analysis of genes that control the G1/S cell cycle in melanoma: TP53, CDKN1A, CDKN2A, and CDKN2B.

BMC Cancer 2005;5:36.

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ | RUSSiAN JOURNAL OF BiOTHERAPY

1'2018 том 17 | vol. 17

Оригинальные статьи 69

DOI: 10.1186/1471-2407-5-36. PMID: 15819981.

12. Li W., Sanki A., Karim R.Z. et al.

The role of cell cycle regulatory proteins in the pathogenesis of melanoma. Pathology 2006;38(4):287-301. DOI: 10.1080/00313020600817951. PMID: 16916716.

13. Avery-Kiejda K.A., Bowden N.A., Croft A.J. et al. P53 in human melanoma fails to regulate target genes associated with apoptosis and the cell cycle and may contribute to proliferation. BMC Cancer 2011;11:203. DOI: 10.1186/ 1471-2407-11-203. PMID: 21615965.

14. Healy E., Belgaid C.E., Takata M. et al. Allelotypes of primary cutaneous melanoma and benign melanocytic nevi. Cancer Res 1996;56(3):589-93.

15. Boni R., Matt D., Voetmeyer A. et al. Chromosomal allele loss in primary cuta-

neous melanoma is heterogeneous and correlates with proliferation. J Invest Dermatol 1998;110(3):215-7. DOI: 10.1046/j.1523-1747.1998.00109.x. PMID: 9506438.

16. Soto Martinez J.L., Cabrera Morales C.M., Serrano Ortega S., Lopez-Nevot M.A. Mutation and homozygous deletion analyses of genes that control the G1/S transition of the cell cycle in skin melanoma: p53, p21, p16 and p15. Clin Transl Oncol 2005;7(4):156-64.

PMID: 15960923.

17. Shahjahani M., Mohammadiasl J., Noroozi F. et al. Molecular basis

of chronic lymphocytic leukemia diagnosis and prognosis. Cell Oncol (Dordr) 2015;38(2):93-109. DOI: 10.1007/s13402-014-0215-3. PMID: 25563586.

18. Михайлова И.Н., Лукашина М.И., Барышников А.Ю. и др. Клеточные линии меланомы — основа для создания противоопухолевых вакцин. Вестник РАМН 2005;7:37-40.

19. Olivier M., Hollstein M., Hainaut P. TP53 mutations in human cancers: origins, consequences, and clinical use. Cold Spring Harb Perspect Biol 2010;2(1):a001008.

DOI: 10.1101/cshperspect.a001008. PMID:20182602

20. Пономарев А.В., Мисюрин В.А., Рудакова А.А. и др. Изменение экспрессии мРНК MDM2 и NFKB1 в клеточных линиях меланомы человека

при воздействии двух лекарственных форм аранозы. Российский биотерапевтический журнал 2017;16(3):52-8. DOI: 10.17650/1726-9784-2017-16-352-58.

1'2018 том 17 | vol. 17

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ | RUSSIAN JOURNAL OF BiOTHERAPY