CC BY
58
3. Вандер А. Физиология почек. — Спб. — Изд-во “Питер”, 2000. — 256 с.
4. Волкова О.Е., Елецкий Ю.К. Основы гистологии с гистологической техникой. — М. — 1982. — 304 с.
5. Меньшиков В.В., Делекторская Л.Н., Золотницкая Р.П. и др Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник/Под ред. В.В.Меньшикова. — М.: Медицна, 1987. — 368 с.
6. Микроскопическая техника. Руководство для врачей и лаборантов. — М.: Медицина, 1996. — 544 с.
7. Мирошниченко В.П., Громашевская Л.Л., Касаткина М.Г.,
Козачек Г.А. Определение содержания желчных кислот и холестерина в желчи// Лаб. дело. — 1978. — № 3. — С. 149-153.
8. Патент РФ на изобретение № 1621449 от 25. 10. 1993 г.
9. Патент РФ на изобретение № 2153328. Способ получения липосом. Тыхеева Н.А., Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Опубл. 27 июля 2000 г.
10. Скакун Н.П. Нейрогуморальный механизм желчегонного действия инсулина// Проблемы эндокринологии. — 1956. — № 6. — С. 75-78.
11. Bangham A.D., Horne R.W. // J. Mol. Biol. — 1964. — 8. — P. 660-668.
Адрес для переписки: 670047, Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6
© ИСАЕВА Е.Н., ИСАЕВ Ю.С., СЕМИНСКИЙ И.Ж. — 2009
СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКАЯ ОЦЕНКА ПОПУЛЯЦИОННЫХ ЧАСТОТ АЛЛЕЛЕЙ ЛОКУСОВ D16S539, TH01, D3S51358 У
БУРЯТСКОГО НАСЕЛЕНИЯ ВОСТОЧНОЙ СИБИРИ
Е.Н. Исаева, Ю.С. Исаев, И.Ж. Семинский (Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра судебной медицины и медицинского права, зав. — д.м.н., проф. Ю.С. Исаев, кафедра биологии с курсом медицинской генетики, зав. — д.б.н., проф. А.А. Майборода)
Резюме. Широкое применение молекулярно-генетических методов для идентификации личности выявило определенные трудности, связанные с применением стандартов типирования, разработанных для европейской расы. В данной работе показано несоответствие идентификационных локусов Российского стандарта и локусов, выявленных у популяции бурят, проживающих на территории Восточной Сибири. В частности, в исследуемом ло-кусе D3S51358 среди бурят самыми частыми являются аллели 15 и 16, причем частота аллеля 15 почти в два раза превышает рекомендованные данные. Существенная разница отмечается также и в аллелях 14, 17,18. Аллельные формы 19,20 среди бурят нами зарегистрированы не были.
Ключевые слова: молекулярно-генетическое типирование, буряты Восточной Сибири.
CRIMINALISTIC ANALYSIS OF THE ALLEL LOCUSES D16S539, TH01, D3S51358 IN THE BURYAT POPULATION OF EAST SIBIRIA
E. Isaeva, Y. Isaev, I. Seminskii (Irkutsk State Medical University)
Summary. 117 aborigines of East Sibiria were examined by PCR-method (allel locuses D16S539, TH01, D3S51358). In the result, there is difference between allel locuses D16S539, TH01, D3S51358 aborigines of East Sibiria and Europe population:
Key words: ciminalistic analysis, allel locuses, East Siberia.
Одним из наиболее доказательных методов изучения биологического материала при судебно-медицинских исследованиях является метод молекулярно-генетического идентификационного анализа, в основе которого лежит феномен полиморфизма длин амплифицированных фрагментов ДНК. В качестве маркерных элементов при изучении генома человека, в частности, в экспертной практике при идентификации личности и установлении кровного родства, используются генетические локусы главным образом микро-сателлитной природы, во множестве представленные в геноме человека, обладающие высоким уровнем полиморфизма длины [5,6]. Для того, чтобы определить индивидуализирующее значение выявленного геномного профиля, нужно определить его распространенность в популяции. От частотных характеристик индивидуального аллельного спектра зависит окончательная интерпретация результатов и формулировка вывода эксперта [2,3].
На практике для оценки полученных результатов пользуются базовыми данными, приводимыми фирмой производителем реагентов используемых в исследованиях или рекомендациями, появившимися в публикациях отечественных производителей [4]. Однако общеизвестно, что наиболее эффективного и объективного использования возможностей типирования того или иного локуса можно достичь, если интерпретация результатов будет происходить с учетом региональной частоты встречаемости у населения аллелей и генотипов [1,9]. Причем, чем ближе соответствие популяционных данных распределению аллелей в регионе, обслуживаемом судебно-медицинской лабораторией, тем выше достоверность результатов генетических исследований.
В частности, территорию Восточной Сибири населяет обширная и довольно изолированная популяция бурят. Многие исследователи рассматривали бурят как единое целое или как «этнический конгломерат», спаянный общими интересами и общностью культуры. Среди бурят распространена легенда о происхождении трех основных племен Прибайкалья от легендарных предков — Булагата, Эхирита и Хоредоя, а основной массы родов — от их сыновей и внуков. Все остальные родоплеменные группы считаются более поздними пришельцами. У родовых отношений была важная функция — функция регулирования семейно-брачных отношений, продолжения рода, что было связано с целой серией сложных обрядов, определенной системой родства, запретов и табу.
В прошлом у бурят и их предков существовала так называемая кольцевая система родства: мужчина из рода А, взявший жену из рода Б, уже не имел права выдать свою сестру в этот род замуж. Следовательно мужчина из рода Б должен искать себе жену а третьем роде В, а мужчина из рода В мог жениться на женщине из рода А. Кольцевая триада — сложное и противоречивое образование: с одной стороны, это закрытая система — для ее существования достаточно трех родов, с другой — открытая, так как основана на однонаправленном характере родства, в котором зять — всегда чужой человек, хурыген (в буквальном переводе — «сосед по ограде», т.е. представитель чужого рода), с которым данный род может вступать в родство, отдавать в этот род своих женщин. Брать же жен можно только в роду тестя, тоже из чужого рода. Следовательно, любой чужой род в данной системе мог оказаться родом или тестя, или зятя. При разделении рода существовал специальный обряд, сохранившийся до начала ХХ века.
Таблица 1
Популяционные частоты аллелей локуса D16S539
Номер аллеля Длины аллелей п.н. Частота встречаемости
Популяционная выборка бурят Рекомендуемые частоты фирмой-производителем Консервативная оценка для европеоидного населения России
8 106 0,067 0,026 0,02
9 110 0,304 0,107 0,13
10 114 0,124 0,079 0,06
11 118 0,175 0,319 0,31
12 122 0,237 0,269 0,37
13 126 0,077 0,167 0,21
14 130 0,015 0,031 0,07
15 134 0 0,002 0,01
Таблица 2
Популяционные частоты аллелей локуса TH01
Номер аллеля Длины аллелей п.н. Частота встречаемости
Популяционная выборка бурят Рекомендуемые частоты фирмой-производителем Консервативная оценка для европеоидного населения России
5 128 0 0,007 0,01
6 132 0,139 0,237 0,22
7 136 0,313 0,148 0,17
8 140 0,173 0,117 0,14
9 144 0,269 0,155 0,18
9.3 147 0,101 0,331 0,35
10 148 0,005 0,005 0,03
11 152 0 0 0,01
Таблица 3
Популяционные частоты аллелей локуса D3S51358
Номер аллеля Длины аллелей п.н. Частота встречаемости
Популяционная выборка бурят Рекомендуемые частоты фирмой-производителем Консервативная оценка для европеоидного населения России
11 111 0 0 0,01
12 115 0 0 0,01
13 119 0 0 0,01
14 123 0,023 0,103 0,14
15 127 0,463 0,262 0,27
16 131 0,310 0,253 0,31
17 135 0,130 0,215 0,22
18 139 0,074 0,152 0,15
19 143 0 0,012 0,03
20 147 0 0,002 0,01
Достаточно разросшийся род через своих «родовичей» решал вопрос о необходимости его разделения. В назначенный день все старейшие представители рода съезжались, молились предкам и на границе родовых участков ломали надвое котел и лук, указывая при этом, что как две половины котла и две половины лука никогда не составят больше целого предмета, так и две ветви рода никогда больше не составят одного рода [11].
Как известно, объективным носителем этнокультурного наследия в различные исторические эпохи был сам человек. Но существует и биологическая сторона его природы, когда одновременно он составляет часть естественноисторической общности людей, генетически связанных между собой разной степенью родства. В геноме человека заложены его внутренние и внешние особенности, а родственная группа людей обладает своим определенным комплексом этих особенностей. Замечено, что в силу географических и исторических причин в отдельных этнических группах частота проявления наследуемых признаков варьирует по-разному [7,8,10]. Именно характер распределения тех или иных генов среди представителей определенной общности людей многое может рассказать об этнической истории народа, его миграциях, контактах, или обособлениях в разные периоды [12]. В последнее время появился ряд работ, предлагающих оценку аллельных частот идентификационных локусов в отдельных регионах [12].
В связи с этим нами была поставлена цель — выявить популяционную частоту аллелей локусов Б^539, ТН01, D3S51358 у бурятского населения Восточной Сибири.
Было проведено исследование особенностей распределения аллельных и генотипических частот трех STR-локусов D16S539, D3S1358, ТН01 в выборке представителей этнических бурят, мужчин и женщин, не яв-
ляющихся родственниками и проживающих на территории Бурятского Автономного округа Иркутской области и Республики Бурятия. Это микросателлитные, тетра-мерные локусы, с длиной повторяющейся единицы 4 п.н. Продукты амплификации их колеблются от 100 п.н. до 152 п.н., что дает очевидное преимущество для исследования, как минимальных количеств, так и сильно деградированной ДНК, что нередко наблюдается в судебномедицинской экспертной практике. С целью выявления распределения частот встречаемости аллелей локусов D16S539, D3S1358, ТН01 было прогенотипировано 97, 108 и 104 человек соответственно. Типирование проводилось в монолокусном формате с помощью ПЦР с использованием системы энзиматической амплификации, руководствуясь методическими рекомендациями «Использование ин-дувидуализирующих систем на основе полиморфизма длин амплифицированных фрагментов (ПДРАФ) ДНК в судебно-медицинской экспертизе идентификации личности и установления родства» (утверждены приказом Минздрава РФ 19.01.1999 г.) [13,14,15]. Исследование проводили используя сертифицированные и рекомендованные к применению в судебной медицине наборы фирмы АТГ «Биотех» г. Москва. Размеры амплифицированных фрагментов геномной ДНК определяли с использованием локус специфических аллельных маркеров фирмы производителя.
Данные по распределению аллельных частот представлены в таблицах 1,2,3 и на диаграммах (рис.1,2,3)
На основании исследования выборки из популяции бурят, были выявлены в локусе D16S539 (см. табл. 1, рис.1) существенные различия по аллелю 8. В бурятской популяции он встречается более чем в два раза чаще, а аллель
в 9 10 11 12 13 14 15
Аллели локуса 0164539
__________________________Ш Ь\ря1ы И Рекомендуемые частоты |_____________
Рис. 1. Диаграмма распределения аллельных частот локуса D16S539
0.35
5 6 7 8 9 9.3 10
Аллели локуса ТН01
В Буряты Ш Рекомендуемые частоты |________
Рис. 2. Диаграмма распределения аллельных частот локуса ТН01
9 —почти в три раза чаще, чем в стандарте. В рекомендуемых величинах, редко встречающийся аллель 10, является достаточно частым среди бурят. Так же существенно разнятся величины по аллелям 11,13,14. Лишь незначительные различия отмечены по аллелю 12. Редко встречающийся аллель 15 в популяционной выборке бурят нами не был зарегистрирован ни разу.
В локусе ТН01 (см. табл.2, рис.2) выявлены существенные различия по всем аллелям (кроме 10). Особо хочется отметить аллель 9.3. Он является самым распространенным во многих популяционных выборках, в то время как в исследуемой выборке у бурят самым распространенным является аллель 7. Редкий аллель 5 среди исследованных бурят нами не был выявлен.
В исследуемом локусе D3S51358(см. тал.3, рис.3) среди бурят самыми частыми являются аллели 15 и 16, причем частота аллеля 15 почти в два раза превышает рекомендованные данные. Существенная разница отмечается также и в аллелях 14, 17,18. Аллельные формы 19,20 среди бурят нами зарегистрированы не были.
0.5
0.45
0.4
0.35
S-
14 15 16 17 18 19 20
Аллели локуса D3S1358
Д Буряты Ш Рекомендуемые частоты |________
Рис. 3. Диаграмма распределения аллельных частот локуса D3S1358
При сравнительном анализе полученных аллельных частот практически во всех случаях имеются отличия, достигающие по отдельным аллелям критической разницы в частоте. Так же хочется отметить наличие меньшего количества аллельных форм по всем исследуемым локусам среди популяционной выборки бурят (отсутствие аллелей 15; 5; 19 и 20 локусов D16S539, ТН01, D3S51358 соответственно). Вышеуказанное подтверждает наличие региональных особенностей в показателях аллельных частот и вызывает необходимость строгого учета генетических различий населения отдельных регионов и этнических популяций. Дальнейшие исследования, направленные на увеличение выборки и на выявление этнических особенностей распределения аллельных частот других используемых в лаборатории тест-систем, позволяют более объективно регламентировать интерпретационную часть молекулярно-генетических экспертных исследований, что в свою очередь, повысит достоверность судебномедицинских выводов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Алтухов Ю.П., Дуброва Ю.Е. Биохимический полиморфизм популяций и его биологическое значение // Успехи соврем. Биологии. — 1981. — Т. 91, №3. — С. 467-480.
2. Ачеркан Н.Н., Зарецкая Е.Ф., Жиленкова Е.В. Применение хромосомного анализа в экспертизе спорного происхождения детей // Судебно-медицинская экспертиза. — 1987. — №4. — С. 50-52.
3. Бедрин Л.М., Загрядская А.П., Томилин В.В., Федоровцев А.Л. Применение принципов теории криминалистической идентификации при исследовании объектов судебно-медицинской экспертизы // Судебно-медицинская экспертиза. — 1990. — №1. — С. 3.
4. Иванов П.Л. Использование индивидуализирующих систем на основе полиморфизма длины амплифицированных фрагментов (ПДАФ) ДНК в судебно-медицинской экспертизе идентификации личности и установления родства // Методические указания. — Минздрав РФ, Москва, 1999. — C. 1-12.
5. Иванов П.Л. О современном состоянии и перспективах развития молекулярно-генетических экспертных исследований в судебномедицинской службе Российской Федерации // Материалы первого всероссийского совещания — семинара «Состояние и перспективы развития судебно-генетической службы в Российской Федерации. — С.-Петербург, 1998. — С. 111-120.
6. Иванов П.Л., Гуртовая С.В. Молекулярно-генетические подходы в судебно-медицинской идентификации личности и установление кровного родства // Материалы III Всерос. Съезда судебных медиков. — Саратов, 1992. — Вып.2. — С. 273-275.
7. Иванов П.Л., Орехов В.А., Фролова С.А., Земскова Е.Ю., Соловьёва Н.О., Бинько И.А. Анализ генетического разнообразия митохондриальной ДНК в аспекте судебно-экспертной идентификации лично-
сти // Судебно-медицинская экспертиза. — 2003. — №2. — С. 20-24.
8. Иванов П.Л., Томилин В.В. О современном состоянии и перспективах развития молекулярно-генетических экспертных исследований в судебной медицине Российской Федерации // Проблемы идентификации в теории и практике судебной медицины. — Москва — Владимир, 1996. — Ч. II. — С. 93-96.
9. Исакова И.В. Современное состояние экспертизы спорного происхождения ребёнка // Актуальные вопросы судебномедицинской экспертизы детей. Л., 1989. — С. 102-104.
10. Кайданов Л.З. Генетика популяций // М.: Высш. шк., 1996. — С. 139-164.
11. Кондик В.М. Плантарный дерматоглифический полиморфизм народонаселения и его применение в этнической антропологии (генетико-популяционный подход) // Вопросы антропологии. — М., 1989. — №82. — С. 38-53.
12. Корниенко И.В., Афанасьева Г.Ф., Щербаков Е.В., Иванов П.Л. Распределение аллелей локусов HLA DQ A1, LDLR, GYPA, HBGG, D7S8, GC среди населения России // Судебно-медицинская экспертиза. — 2002. — №1. — С. 20-22.
13. Котлярова С.Э., Коваленко С.Н., Шаронова Д.А., Новоселов В.П. Применение метода полимеразной цепной реакции для анализа полиморфных участков генома человека при проведении судебномедицинской экспертизы вещественных доказательств // Судебномедицинская экспертиза. — 1994. — №2. — С. 19-21.
14. Ли Ч. Введение в популяционную генетику // М.: Мир. — 1978. — С. 1-555.
15. Мазин А.В., Кузнеделов К.Д., Краев А.С. и др. Методы молекулярной генетики и генной инженерии // Новосибирск: Наука, 1990. — С.32-54.
Адрес для переписки: 664003, Иркутск, ул. Красного Восстания, 1, Исаев Юрий Сергеевич — зав. каф. судебной медицины, профессор
