CC BY
75Фізика живого, Т. 17, No2, 2009. С.102-104.
© Диль О. Д., Мінченко О. Г., Виноградова К. Г.
УДК 573.086.83.002.5
СУЧАСНІ ПІДХОДИ ДО ВИЗНАЧЕННЯ ПАРАЦЕТАМОЛУ В БАГАТОКОМПОНЕНТНИХ ЛІКАРСЬКИХ ПРЕПАРАТАХ ВИСОКОЕФЕКТИВНОЮ РІДИННОЮ ХРОМАТОГРАФІЄЮ
Диль О. Д., Мінченко О. Г., Виноградова К. Г.
Київский національний університет імени Тараса Шевченко;
Інститут біохімії ім. А.В. Палладина НАН України, Київ;
Лабораторія контролю якості лікарських засобів ТОВ “Міжнародна об’єднана лабораторна група”, Украина, Киев е-атаіі: [email protected]
Надійшла до редакції 15.04.2009
Підібрані умови для ефективного та надійного кількісного визначення парацетамолу в комбінованих лікарських препаратах, що містять анальгін на основі високоефективної рідинної хроматографії.
Ключові слова: парацетамол, анальгін, високоефективна рідинна хроматографія, кількісне визначення.
ВСТУП
В наш час ненаркотичні анальгетики мають широке застосування в медичній практиці. Ними широко користуються при різноманітних захворюваннях, зокрема при головних болях, невралгіях, ревматичних болях, запальних процесах та багатьох інших. До таких анальгетиків належать як препарати з діючою речовиною анальгін, так і комбіновані лікарські засоби, до складу яких крім анальгіну можуть входити також парацетамол, кофеїн, кодеїн, фенобарбітал та інші. Лікарські препарати, в яких поєднані ці компоненти мають складнішу дію, що тісно пов’язано з направленістю фармакологічної дії кожного з них. Будь які лікарські засоби, а особливо багатокомпонентні, потребують використання швидких та точних методів контролю їх якості [1,2].
МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ
Дослідження проводились на хроматографічному обладнанні фірми Perkin Elmer® з відповідним програмним забезпеченням. Використовувався лабо®раторний посу®д класу А, реактиви фірми Fluka® та Merck®. В якості сорбентів використовувались готові хромато-графісні колонки таких виробників як Merck®, Phenomenex®, Supelco®.
РЕЗУЛЬТАТИ ТА ОБГОВОРЕННЯ
Для комбінованих препаратів з анальгіном у своєму складі досить тяжко створити швидкий, ефективний та надійний метод контролю
компонентів цих препаратів. Це пов’язано з нестабільністю анальгіну і, як наслідок, його високою оптичною активністю. Найбільш складним виявилося визначення вмісту парацетамолу в лікарських засобах з анальгіном у своєму складі. Для вирішення цієї проблеми доцільно було застосовувати більш нові і чутливі методи аналізу, до яких, зокрема, належить високоефективна рідинна хроматографія [3,4].
Метою даної роботи було розробити швидкий, ефективний та надійний метод кількісного визначення парацетамолу в присутності анальгіну за допомогою високоефективної рідинної хроматографії.
Відомо декілька методів визначення вмісту парацетамолу, які детально описані в провідних фармакопейних виданнях [5-7]. Разом з тим, проведена нами перевірка цих методів показала, що за описаних умов неможливо провести надійний контроль кількості парацетамолу у присутності анальгіну. Це обумовлено тим, що парацетамол та анальгін виходили з колонки одним піком (з однаковим часом утримування), тобто під час хроматографічного аналізу вони мали один і той же час елюції (рисунок 1). Але для кількісного визначення діючої речовини за вимогами Державної фармакопеї України [5] необхідно, щоб між піками найближчих компонентів коефіцієнт розділення був не меншим 1,5. Тільки в такому випадку можна говорити про придатність хроматографічної системи для надійної кількісної оцінки вмісту досліджуваної речовини в комбінованих лікарських препаратах.
СУЧАСНІ ПІДХОДИ ДО ВИЗНАЧЕННЯ ПАРАЦЕТАМОЛУ В БАГАТОКОМПОНЕНТНИХ ЛІКАРСЬКИХ ПРЕПАРАТАХ ВИСОКОЕФЕКТИВНОЮ РІДИННОЮ ХРОМАТОГРАФІЄЮ_________________________________________
А215 *' ........ і
А
А™ . ... , . .. , _ ... І .. .
В
Рис. 1. Профіль елюції розчинів парацетамолу (А) та анальгіну (В) в початкових умовах.
Для того, щоб розділити піки виходу парацетамолу та анальгіну при хроматографічному їх аналізі, нами були проведені дослідження із застосуванням різних сорбентів та
хроматографічних колонок, різного складу рухомої фази та концентрації солей, різної величини рН рухомої фази та іон парних компонентів, їх наявності у рухомій фазі.
На першому етапі в методику, описану для кількісного визначення парацетамолу, ми внесли зміни у співвідношення органічної та неорганічної частин рухомої фази, а також замінили її органічну частину, а саме, замінили метанол на ацетонітрил, але розділити піки виходу парацетамолу та анальгіну так і не вдалося. На наступному етапі ми змінили іонну силу буферного розчину за рахунок як концентрації солей, так і іон парного реагенту. Це привело до змін у взаємному розміщенні піків у напрямку розділення компонентів. В зв’язку з цим, наступним кроком стала поступова зміна рН рухомої фази від 3,0 до 8,5, що дозволило досягти коефіцієнту розділення піків парацетамолу та анальгіну рівним 1,6 при рН 8,5. За таких умов розділення уже стає можливим проведення кількісної оцінки вмісту парацетамолу в лікарському засобі, що містить в своєму складі анальгін.
Разом з тим, відомо досить мало хроматографічних сорбентів, які дозволяли би ефективно працювати при таких «критичних» концентраціях рН, а саме в межах 8,5. Деякі з таких хроматографічних сорбентів здатні витримувати значення рН в межах 8,5, але вони досить швидко втрачаюсь свої властивості. В зв’язку з цим, ми продовжили пошуки оптимальних умов для хроматографічного розділення парацетамолу та анальгіну шляхом включення в рухому фазу різних іон парних компонентів. Було встановлено, що гідроксид тетрабутил амонію значно покращує розділення парацетамолу та анальгіну і що він є найбільш придатним іон парним компонентом для хроматографічного визначення кількості Парацетамолу. Більше того, ми модифікували сольовий склад буферного розчину та відмовитись від
органічного компоненту в рухомій фазі, причому ефективне розділення досліджуваних компонентів спостерігалось при рН рухомої фази рівним 6,8. Виявилося, що при такому значенні рН немає жодних проблем із застосування різних типів сорбентів. Натомість довелося змінити довжину хвилі детектування з першого максимуму за 215 нм до другого за 245 нм.
Із різних типів сорбентів найбільш ефективним для хроматографічного аналізу парацетамолу в присутності анальгіну виявився октилсиліл силікагель. Застосування цього типу сорбенту дало можливість максимально розділити піки парацетамолу і анальгіну, отримавши коефіцієнт розділення 5,2 (рис 2). Саме таке розділення піків парацетамолу і анальгіну дозволило не лише розрахувати показники придатності хроматографічної системи та провести кількісне визначення парацетамолу, а і завершити формування методики контролю якості комбінованих лікарських засобів з парацетамолом та анальгіном методом високоефективної рідинної хроматографії.
А245 4,9 тіп
___________і
А В
Рис. 2 Профіль елюції суміші парацетамолу (А) та анальгіну (В) з розділенням 5,2.
Такими показниками придатності
хроматографічної системи стали: хроматографічна колонка заповнена сорбентом С8 довжиною 250мм діаметром 4,6мм та розміром часток 5 мкм; довжина хвилі детектування 245нм; швидкість рухомої фази 1,0 мл/хв.; рухома фаза: суміш 17,9 г/л №2НР04, 7.8 г/л Ш^Р04 та 4.6 п/д 40% розчину ацетату тетрабутиламонію.
ВИСНОВКИ
В результаті проведених нами досліджень розроблені умови, які дозволяють кількісно визначити вміст парацетамолу в комбінованих лікарських засобах, які містять анальгін. Для розробленого нами методу розраховані показники придатності хроматографічної системи, дотримання яких забезпечить ефективне і надійне визначення кількості парацетамолу в присутності анальгіну. Метод є готовим до внесення в аналітичну документацію після проведення валідаційного процесу у відповідності до Державної фармакопеї України.
Диль О. Д., Мінченко О. Г., Виноградова К. Г.
Література
1. Машковский М.Д. Лекарства двадцатого века. - М.: «Новая Волна», 1998.— 320 с.
2. Драник Л. И. Мягкие лекарственные формы и вспомогательные для их производства // Фармация.-1999.- №3—45-47 с.
3. Стискин Е.Л. Ициксон Л.Б. Брауде Е.В. Практическая високоэфектив-ная жидкосная хроматографія. - М.: Химия, 1986.— 205 с.
4.Хедтман Е., Кастер Т. Хроматография: практическое применение метода. В 2 ч. - М.: Мир, - 1986. - 335 с.
5. Державна Фармакопея України, 1-е вид. - Х.: РІРЕГ, 2001. - 556 с.
6. Державна Фармакопея України, 1-е вид. Доповнення 1. РІРЕГ, 2004.— 494 с.
7. The United States Pharmacopocia. - VIII ed. -Convention Inc, 2005. - 2149 p.
СОВРЕМЕННЫЕ ПОДХОДЫ К ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПАРАЦЕТАМОЛА В МНОГОКОМПОНЕНТНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТАХ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
Дыль А. Д., Минченко А. Г., Виноградова Е. Г.
Подобраны условия для эффективного и надежного определения парацетамола в комбинированных лекарственных препаратах, содержащих анальгин на основе высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Ключевые слова: : парацетамол, анальгин, высокоэффективная жидкосная хроматография, количественное определение.
MODERN APPROACHES FOR PARACETAMOL DETERMINATION IN MULTICOMPONENT MEDICAL DRUGS BY HIGH PRESSURE LIQUID CHROMATOGRAPHY
Dyl O.D., Minchenko O.H., Vinogradova ^G.
The conditions for quantitative determination of paracetamol in multi component drugs which contains analgin by high performance liquid chromatography was developed.
Key words: paracetamol, analgin, High performance liquid chromatography, assay determination.
