CC BY
29
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
УДК 618.19-006.6-08:612.112.94:616-006-092.18
А.И. Черткова, Е.Г. Славина, Л.Г. Жукова, И.П. Ганьшина, М.А. Окружнова, Э.К Шоуа, В.А. Нуртдинова, А.А. Борунова, З.Г. Кадагидзе СУБПОПУЛЯЦИОННЫЙ СОСТАВ ЛИМФОЦИТОВ ПРИ HERZ-ПОЛОЖИТЕЛЬНОМ
И ТРИЖДЫ-НЕГАТИВНОМ РАКЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
ФГБНУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н.Блохина», Москва
Контактная информация
Славина Елена Григорьевна, ведущий научный сотрудник лаборатории кинической иммунологии опухолей НИИ КО адрес: 115478, Москва, Каширское шоссе, 24; тел. +7(499)324-94-14 e-mail: elena.slavina@gmail. com
Статья поступила 16.03.2015, принята к печати 27.04.2015.
Резюме
Целью настоящей работы было исследование связи между исходным количеством основных субпопуляций лимфоцитов периферической крови и результатами проведенной терапии у больных HER2+ РМЖ и Т-Н РМЖ. До начала лечения проводилось иммунофенотипирование лимфоцитов периферической крови пациенток методом проточной цитометрии с использованием панели моноклональных антител к поверхностным маркерам лимфоцитов и внутриклеточному антигену FOXP3 и определение цитотоксической активности NK-клеток с помощью полуавтоматического колориметрического МТТ-теста в отношении клеток К-562. Были выявлены определенные различия в популяционном составе лимфоцитов и количестве регуляторных Т-клеток у больных HER2+ РМЖ и Т-Н РМЖ. Обсуждается связь между количеством супрессорных клеток и степенью лечебного патоморфоза опухоли.
Ключевые слова: HER2+ рак молочной железы, трижды негативный рак молочной железы, лечебный патоморфоз опухоли, регуляторные Т-клетки.
A.I. Chertkova, E.G.Slavina, L.G. Zhukova, I.P. Ganshina,
M.F. Okruzhnova, E.K.Shoua, V.A. Nurtdinova, A.A.Borunova, Z.G. Kadagidze
LYMPHOCYTE SUBSETS
IN PERIPHERAL BLOOD OF HER2-POSITIVE
AND TRIPLE NEGATIVE BREAST CANCER PATIENTS
FSBSI «N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center», Moscow
Abstract
The aim of this study was to investigate the relationship between the original amount of basic lymphocyte subpopulations in peripheral blood and the results of therapy in patients with HER2+ and triple negative breast cancer. Before treatment was conducted immunophenotyping of peripheral blood lymphocytes by flow cytometry using a panel of monoclonal antibodies to surface markers and intracellular lymphocyte antigen FOXP3 and determining the cytotoxic activity of NK-cells. Cytotoxic activity was determined with MTT colorimetric test against K-562 cells. Revealed some differences in the composition of the population of lymphocytes and the number of regulatory T cells in patients with HER2+ and triple negative breast cancer (BC). Discuss the relationship between the number of suppressor cells and the degree of therapeutic pathomorphosis of tumor.
Key words: HER2+ breast cancer, tripl negative breast cancer, pathomorphosis of tumor, regulatory T cells.
Введение
РМЖ является наиболее частым вариантом злокачественных опухолей у женщин во всем мире. Для РМЖ характерна клиническая и молекулярная
гетерогенность. У 20-30 % больных определяется гиперэкспрессия рецептора эпидермального фактора роста 2 (ИБЯ2+ РМЖ). Приблизительно в 1020 % случаев диагностируется так называемый трижды-негативный РМЖ (Т-Н РМЖ), который
характеризуется отсутствием рецепторов к эстрогенам и прогестерону, а также отсутствием гиперэкспрессии HER2 [7]. Эффективность различных методов лечения злокачественных опухолей и прогноз заболевания в значительной степени зависят от состояния иммунной системы пациентки[16]. Опухоль активно защищается от иммунной атаки, используя различные механизмы иммуносупрессии, приводящие к развитию толерантности к антигенам опухолевых клеток [10]. В экспериментальных и клинических исследованиях в последние десятилетия активно изучалась роль различных популяций регуляторных клеток, препятствующих развитию эффективного противоопухолевого иммунного ответа. Значительное внимание уделялось CD4+CD25+FOXP3+ (Трег) и CD8+CD28- Т-клеткам, повышение количества которых в опухолевой ткани и периферической крови (ПК) в большинстве случаев коррелирует с плохим прогнозом заболевания [2; 8]. В настоящей работе у больных HER2+ РМЖ и Т-Н РМЖ определяли связь между исходным количеством основных субпопуляций лимфоцитов периферической крови и результатами проведенной терапии. Особое внимание уделялось популяциям регуляторных Т-клеток с фенотипом CD4+CD25+FOXP3+ и CD8+CD28-.
Материалы и методы
В исследование были включены пациентки с HER2+ РМЖ с местно-распространенными первично-неоперабельными формами, с изолированными метастазами в л/у и висцеральные органы (n = 24) и Т-Н РМЖ с местно-распространенными первично-неоперабельными формами (n = 31). Контролем служили здоровые женщины (n = 28). Все включенные в исследование пациентки после соответствующей терапии (химиотерапия при Т-Н и химиотерапия и/или таргетная терапия при HER2+ РМЖ) получали оперативное лечение и в операционном материале определялась степень лечебного пато-морфоза опухоли. Пациенток с каждой формой РМЖ делили на 2 группы в соответствии со степенью лечебного патоморфоза: HER2+ РМЖ группа А (n=13) - пациентки с признаками патоморфоза 0-II степени и группа B (n=11) - пациентки с признаками патоморфоза III-IV степени; Т-Н РМЖ: группа C (n=11) - пациентки с признаками патоморфоза 02 степени и группа D (n=20) - пациентки с признаками патоморфоза III-IV степени. Иммунологическое обследование больных проводилось до начала лечения. Оно заключалось в иммунофенотипирова-нии лимфоцитов ПК и определении ЦТА естественных киллеров (NK-клеток). Иммунофенотипи-рование лимфоцитов ПК проводили методом проточной цитометрии с использованием панели мо-ноклональных антител производства компаний eBiocsience (USA) и «Сорбент» (Россия) к поверхностным маркерам лимфоцитов и внутриклеточному антигену FOXP3. ЦТА определялась полуавтоматическим колориметрическим МТТ-тестом в отношении клеток К-562 [14]. Для статистической
обработки результатов использовали пакет статистических программ «Статистика 7». Различия между средними значениями показателей определяли с помощью и-критерия Манна-Уитни и ^критерия Стьюдента. Для определения связи между изучаемыми признаками проводился непараметрический корреляционный анализ Спирмена. Различия между показателями считали статистически значимыми при Р < 0,05. Результаты представлены в виде среднего арифметического значения показателя ± стандартное отклонение (т±8Юеу).
Результаты и обсуждение
Как видно из представленных в табл. 1 данных, статистически значимые отклонения от нормы субпопуляционного состава лимфоцитов у больных с ИБИ2+ РМЖ в большей степени были выражены в группе В (патоморфоз Ш-1У степени), чем в группе А (патоморфоз 0- II степени). Однако, статистической взаимосвязи между количеством СБ3+, СБ3+СБ8+ СБ3+ИЬЛ-БК+, СВ3-СБ16+СБ56+ и СБ3+СБ38+ лимфоцитов и степенью лечебного патоморфоза опухоли выявлено не было. По-видимому, указанные выше незначительные нарушения субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови, обнаруженные до лечения у обследованных нами пациенток с ИБИ2+РМЖ, не имели большого значения для эффективности проводимого им лечения. Ранее мы обнаружили тенденцию к нормализации измененных показателей в процессе химио-и/или таргетной (трастузумаб + лапатиниб) терапии больных ИБЯ2+РМЖ [3]. Нарушения субпопуляционного состава лимфоцитов ПК у пациенток с Т-Н РМЖ (табл. 2) были менее выражены, чем у больных ИБЯ2+ РМЖ (табл. 1).
Основными клетками-эффекторами противоопухолевого иммунитета являются СБ8+ Т-лимфоциты. В то же время, описано несколько популяций СБ8+ Т-клеток-супрессоров, способных подавлять пролиферативную и цитотоксическую активность Т-клеток-эффекторов. Особый интерес представляют СБ8+СБ28- Т-клетки, повышение количества которых в опухолевом микроокружении и в периферической крови по данным различных авторов ассоциируется с опухолевым ростом. СВ8+СБ28-Т-клетки являются гетерогенной популяцией и включают в себя как клетки-супрессоры, так и клетки-эффекторы. Это подтверждается продукцией ими и супрессорных (1Ь-10, 1Ь-4, ТвР-Р) и эффекторных (№N-7, Т№-а) цитокинов [8]. Во многих экспериментальных и клинических исследованиях эта популяция характеризуется в основном как супрессорная [8; 9; 13; 18]. БПаС е! а1. [8] продемонстрировали, что только СБ8+СБ28-, но не СБ8+СБ28+ Т-клетки, выделенные из опухолевой ткани и метастатических лимфоузлов 42 больных с различными нозологическими формами злокачественных опухолей, обладали супрессор-ной активностью. Клетки-супрессоры с фенотипом СБ8+СБ28- были обнаружены и в периферической крови этих пациентов.
Таблица 1
Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови пациенток с HER2+ РМЖ_
HER2+ РМЖ
Маркер Патоморфоз 0-II степени (группа А) Патоморфоз III-IV степени (группа B) Контроль P
(m±St.Dev.) % n = 13 (m±St.Dev.) % n = 11 (m±St.Dev.) % n = 28
1 2 3
CD3+ 69,4±13,5 67,3±11,5 74,9±6,3 Р 2;3 = 0,012
CD4+ 38,2±12,2 38,3±11,4 44,5±10,4
CD3+CD4+ 37,2±12,3 37,7±11,6 44,2±10,5
CD8+ 20,9±10,8 20,1±11,5 26,0±8,9
CD3+CD8+ 16,7±10,8 14,7±10,9 20,4±7,8 Р 2;3 = 0,041
CD4/CD8 2,1±0,85 2,7±2,2 1,96±0,95
CD3+HLA-DR+ 8,3±4,9 9,8±5,8 6,6±2,7 Р 2;3 = 0,024
CD3+CD38+ 6,4±4,1 7,1±4,8 16,4±13,2 Р 1;3 = 0,024; Р2;3 = 0,039
CD16+CD56+ 36,2±22,8 33,6±16,2 24,8±10,7
CD3+CD16+CD56+ 16,2±18,4 11,6±6,4 9,8±5,6
CD3-CD16+CD56+ 19,8±13,7 22,0±12,4 15,0±7,7 Р 2;3 = 0,039
CD19+ 5,7±3,8 6,6±5,3 8,0±5,7
CD8+CD28+ 9,5±6,0 5,7±5,2 11,8±5,2 Р1;2 = 0,048; Р2;3 = 0,0012
CD8+CD28- 14,0±5,0 17,5±7,4 15,0±9,1
CD8+CD28+/ CD8+CD28- 0,76±0,57 0,32±0,20 1,15±0,88 Р1;2 = 0,007; Р2;3 = 0,0004
ЦТ активность ЕК-клеток 42,3±11,3 42,6±23,9 44,6±12,4 ( n=19)
CD4+CD25+ 5,6±3,3 5,8±2,1 9,1±4,3 (n=14) Р 1;3 = 0,029; Р2;3 = 0,035
CD4+CD25+FOXP3+ 0,23±0,26 0,77±1,1 0,26±0,14 (n = 14) Р 1;2 = 0,0026; Р2;3 = 0,005
Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови пациенток с Т-Н РМЖ. Таблица 2
Т-Н РМЖ
Маркер Патоморфоз 0-11степени (группа C) Патоморфоз III-IV степени (группа D) Контроль P
(m±St.Dev.) % n = 11 (m±St.Dev.) % n = 20 (m±St.Dev.) % n = 28
1 2 3
CD3+ 70,2±9,9 73,3±8,3 74,9±6,3
CD4+ 42,9±8,7 44,1±7,5 44,5±10,4
CD3+CD4+ 39,5±8,4 45,7±6,0 44,2±10,5 P 1;2 = 0,03
CD8+ 25,6±11,8 24,1±12,3 26,0±8,9
CD3+CD8+ 21,4±12,2 18,4±12,8 20,4±7,8
CD4/CD8 1,94±1,17 2,44±1,53 1,96±0,95
CD3+HLA-DR+ 6,96±3,3 11,1±6,98 6,6±2,7 P2;3 = 0,037
CD3+CD38+ 9,7±11,1 5,4±2,9 16,4±13,2 P 2;3 = 0,009
CD16+CD56+ 25,7±8,1 25,9±7,6 24,8±10,7
CD3+CD16+CD56+ 9,4±6,1 10,4±6,3 9,8±5,6
CD3-CD16+CD56+ 15,9±6,8 13,1±6,4 15,0±7,7
CD19+ 7,2±6,0 7,2±3,9 8,0±5,7
CD8+CD28+ 10,1±6,8 7,7±4,5 11,8±5,2 P 2;3 = 0,009
CD8+CD28- 13,7±10,9 15,9±8,7 15,0±9,1
CD8+CD28+/ CD8+CD28- 0,997±0,73 0,52±0,27 1,15±0,88 P1;2 = 0,019; P2;3 = 0,006
ЦТ активность ЕК-клеток 48,5±26,4 57,3±20,8 44,6±12,4 (n=19) P 2;3 = 0,036
CD4+CD25+ 8,1±3,5 7,4±8,8 9,1±4,3
50 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ СУБПОПУЛЯЦИОННЫЙ СОСТАВ ЛИМФОЦИТОВ...
Ни у одного из обследованных здоровых доноров (> 50 человек) эти клетки супрессорную активность не проявляли. При различных патологических состояниях большое значение имеет баланс между СБ8+СБ28+ и СБ8+СБ28- Т-клетками [6]. Мы обнаружили у пациенток группы В статистически значимое уменьшение величины соотношения СБ8+СВ28+/СВ8+СБ28- по сравнению с контролем и по сравнению с группой А, которое было главным образом связано со снижением количества СБ8 Т-лимфоцитов, экспрессирующих костимуляторный рецептор СБ28 (СБ8+СБ28+). Среднее значение этого показателя в группе В было в 2 раза ниже, чем в контрольной группе (табл. 1). Непараметрический корреляционный анализ Спирмена выявил умеренную статистически значимую отрицательную связь между степенью лечебного патоморфоза опухоли и величиной соотношения СБ8+28+/СБ8+28- в периферической крови больных ИБИ2+ РМЖ (коэффициент корреляции г=-0,480, Р=0,0018). Статистически значимой взаимосвязи между величиной соотношения СБ8+СВ28+/СВ8+СБ28- Т-клеток и количеством СБ3+, СБ3+СБ8+, СБ3-СБ16+СБ56+ и СБ3+СБ38+ лимфоцитов выявлено не было.
Следует отметить, что как и у больных ИБИ2+ РМЖ (группа В), у пациенток с Т-Н РМЖ с высокой степенью лечебного патоморфоза (группа Б) было снижено процентное содержание СБ8+СБ28+ клеток по сравнению с контролем и величина соотношения СБ8+СВ28+/СВ8+СБ28- по сравнению с контролем и группой С (табл. 2). Однако корреляционный анализ Спирмена не выявил в данном случае связи между степенью лечебного патоморфоза опухоли и соотношением СБ8+СВ28+/СВ8+СБ28- или количеством СБ8+СБ28+ Т-лимфоцитов.
Важную роль в обеспечении иммунологической аутотолерантности и негативном контроле как патологических, так и физиологических иммунных реакций играют регуляторные СБ3+СБ25+РОХР3+ Т-клетки. Они могут подавлять пролиферативную и функциональную активность различных иммуно-компетентных клеток, включая СБ4+ и СБ8+ Т-клетки, и наряду с другими иммуносупрессивными факторами обеспечивать прогрессивный рост опухоли [17]. При многих вариантах злокачественных опухолей, в том числе и при РМЖ, повышение количества регуляторных СБ4+СБ25+РОХР3+ Т-клеток в опухолевом узле и периферической крови коррелирует с плохим прогнозом заболевания [2]. Однако при раке толстой кишки [11], сквамозокле-точной карциноме головы и шеи [4] и при некоторых других формах опухолей было обнаружено, что повышенное количество Трег в опухоли может являться благоприятным признаком и ассоциироваться с увеличением выживаемости и продолжительности безрецидивного периода. В то же время, имеются сообщения о корреляции повышенного количества Трег в опухоли и периферической крови больных раком толстой кишки с прогрессивным опухолевым ростом [12].
Проведенное нами исследование показало, что до лечения у пациенток с ИБИ2+ РМЖ с Ш-1У
степенью лечебного патоморфоза (группа B) среднее количество Трег в периферической крови было в 3,34 раза выше, чем у пациенток с 0- II степенью (группа А) (Р=0,0026), и в 2,96 выше, чем в контроле (р=0,005; табл. 1, рис.).
*P < 0,05 по сравнению с контролем ** P < 0,05 по сравнению с группой А
0,8 0,7 0,6 0,5
I
Патоморфоз 0-2 степени (гр А)
Патоморфоз 3-4 степени (гр.В)
Контроль
Рис. Количество регуляторных СБ4+СБ25+РОХР3+ Т-клеток у пациенток с ИБЯ2+ РМЖ с различной степенью лечебного патоморфоза опухоли.
Непараметрический корреляционный анализ Спирмена выявил умеренную положительную связь между степенью лечебного патоморфоза опухоли и процентным содержанием Трег в периферической крови больных ИБЯ2+ РМЖ (коэффециент корреляции г=0,547 Р=0,0069). По мнению различных авторов, положительная роль Трег в определённых ситуациях может быть связана с их влиянием на воспаление, которое сопровождает опухолевый рост и является одним из важных факторов, способствующих пролиферации опухолевых клеток, ангиогенезу и метастазированию [4; 5; 11]. С другой стороны, повышение количества Трег может отражать реакцию клеток-супрессоров на эффективный противоопухолевый иммунный ответ, существующий до лечения у пациенток с высоким ответом на противоопухолевую терапию. У больных с различными вариантами злокачественных опухолей, включая рак молочной железы, часто обнаруживаются спонтанно возникшие активированные Т-клетки и антитела к различным опухоле-ассоциированным антигенам [15]. Ранее мы продемонстрировали значительно более выраженное снижение количества Трег у эффективно леченных больных ИБЯ2+ РМЖ (с высокой степенью лечебного патоморфоза опухоли), по сравнению с пациентками с низкой степенью, после 2-4 курсов хи-мио-и/или таргетной (трастузумаб + лапатиниб) терапии [3]. Можно предположить, что уменьшение опухолевой нагрузки под действием терапии и эффективного иммунного ответа приводит к снижению активности последнего и соответственно снижению количества регуляторных Т-клеток. Частично это подтверждается обнаруженной нами статистически значимой положительной корреляцией
0,4
0,3
0
между уровнем Трег в периферической крови у больных ИБИ2+ РМЖ и степенью лечебного пато-морфоза опухоли. Полученные нами результаты и данные других авторов позволяют сделать вывод о том, что повышенное по сравнению с нормой количество регуляторных СБ4+СБ25+РОХР3+ Т-клеток в опухолевом узле и периферической крови до лечения не во всех случаях следует рассматривать как отрицательный фактор прогноза заболевания. Необходимо изучать динамику изменений этого показателя в процессе лечения и корреляцию этих изменений с выживаемостью и продолжительностью безрецидивного периода.
В исследованиях нашей лаборатории у больных первично-операбельным РМЖ мы обнаружили, что количество регуляторных ККТ и СБ8+СБ28- лимфоцитов зависело от стадии заболевания: оно было выше нормы на ранних и снижалось до нормы на поздних стадиях заболевания [1].
Определение ЦТА КК-клеток у всех обследованных пациенток до лечения показало, что у больных ИБЯ2+ РМЖ ЦТА Ж-клеток была практически одинаковой у больных обеих групп (А и В) и не отличались от контроля.
В то же время, при Т-Н РМЖ среднее значение показателя в группе пациенток с высокой степенью патоморфоза было выше, чем в контроле (р=0,036) и в группе с низкой степенью патоморфо-за, хотя в последнем случае различие не было статистически значимым (табл. 1 и 2).
Выводы
1. У больных ИБЯ2+ РМЖ с высокой степенью лечебного патоморфоза опухоли до лечения выявляется повышение количества регуляторных СБ4+СБ25+РОХР3+ Т-клеток по сравнению с пациентками с низкой степенью патоморфоза и с контролем.
2. У больных ИБЯ2+ РМЖ и Т-Н РМЖ с высокой степенью лечебного патомор-фоза опухоли до лечения определяется уменьшение величины соотношения СБ8+СВ28+/СВ8+СБ28- Т-клеток.
3. У больных Т-Н РМЖ с высокой степенью патоморфоза до лечения наблюдается повышение цитотоксической активности естественных киллеров.
4. Определение связи между состоянием иммунной системы до лечения и эффективностью проводимой терапии, продолжительностью безрецидивного периода, развитием метастазов и общей продолжительностью жизни пациентов может помочь в разработке индивидуальных подходов к терапии больных злокачественными новообразованиями.
Работа поддержана грантом РФФИ № 1404-00867.
Литература
1. Кадагидзе З.Г., Черткова А.И., Заботина Т.Н. и др. Основные субпопуляции регуляторных лимфоцитов у больных злокачественной меланомой и раком молочной железы // Иммунология. - 2014. -35. - С. 64-67.
2. Кадагидзе З.Г., Черткова А.И., Славина Е.Г. Регуляторные Т-клетки и их роль в противоопухолевом иммунном ответе // Вопр. Онкол. - 2009. - 55 - С. 269 - 77.
3. Черткова А.И., Славина Е.Г., Ганьшина И.П. и др. Популяционный состав лимфоцитов периферической крови больных РМЖ с гиперэкспрессией HER-2 в процессе таргетной терапии трастузумабом и лапатинибом // Вестник «РОНЦ им. Н.Н. Блохина». - 2014. - 25. - C. 59-63.
4. Badoual C., Hans S., Rodriguez J. et al. Prognostic value of tumorinfiltrating CD4(+) T-cell subpopulations in head and neck cancers // Clin. Cancer Res. - 2006. - 12. - P. 465-72.
5. Colotta F., Allavena P., Sica A. Cancer related inflammation, the seventh hallmark of cancer: links to genetic instability // Carcinogenesis. - 2009. - 30. - P. 1073-81.
6. Dai S.X., Wu G., Zou Y. et al. Balance of CD8+ CD28+/CD8+ CD28- T lymphocytes is vital for patients with ulcerative colitis // Dig. Dis. Sci. - 2013. - 58. - P. 88-96.
7. de Ruijter T.C., Veeck J., de Hoon J. P. J., van EngelandM. Characteristics of triple-negative breast cancer // J Cancer Res. Clin.Oncol. - 2011. - 137 - P. 183-92.
8. Filaci G., Fenoglio D., Fravega M. CD8+CD28- T regulatory lymphocytes inhibiting T cell proliferative and cytotoxic functions infiltrate human cancers // J. Immunol. - 2007. - 179. - P. 4323-34.
9. Karagoz B., Bilgi O., Gumus M. et al.CD8+CD28- cells and CD4+CD25+ regulatory T cells in the peripheral blood of advanced stage lung cancer patients // Med.Oncol.- 2010.- 27.- P. 29-33
10. Kim R., Emi M., Tanabe K. Cancer immunosuppression and autoimmune disease: beyond immunosuppressive networks for tumour immunity // Immunology.- 2006.- 119.-P. 254-64.
11. Ladoire S., Martin F., Ghiringhelli F. Prognostic role of FOXP3+ regulatory T cells infiltrating human carcinomas: the paradox of colorectal cancer // Cancer Immunol. Immunother. - 2011. - 60. - P. 909-18.
12. Liu Z., Huang Q., Liu G. et al. Presence of FOXP3+Treg cells is correlated with colorectal cancer progression // Int. J. Clin. Exp. Med. - 2014. - 7. - P. 1781-85.
13. Meloni F., Morosini M., Solari N. et al. Foxp3 expressing CD4+CD25+ and CD8+CD28- T regulatory cells in the peripheral blood of patients with lung cancer and pleural mesothelioma // Hum. Immunol. - 2006. - 67. - P. 1-12.
14. Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assay // J. Immunol. Meth. - 1983. - 65. - P. 55-63.
15. Nagorsen D., Scheibenbogen C., Marincola F.M.et al. Natural T Cell Immunity against Cancer // Clin. Cancer Res. - 2003. - 9. - P. 4296-03.
16. Quezada S.A., Peggs K.S., Simpson T.R., Allison J.P. Shifting the equilibrium in cancer immunoediting: from tumor tolerance to eradication // Immunol. Rev. - 2011. - 241. - P. 104-18.
17. Shevach E.M. Mechanisms of Foxp3+ T regulatory cell-mediated suppression // Immunity. - 2009. - 30. - P. 636-45.
18. Urbaniak-Kujda D., Kapelko-Siowik K., Woiowiec D. et al. Increased percentage of CD8+CD28- suppressor lymphocytes in peripheral blood and skin infiltrates correlates with advanced disease in patients with cutaneous T-cell lymphomas // Postepy Hig. Med. Dosw. - 2009. - 63. - P. 355-59.
