Эффекторные и регуляторные Т-лимфоциты периферической крови больных раком молочной железы с тройным негативным фенотипом: связь с клиническим эффектом химиотерапии Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УДК 618.19-006.6:612.42:615.277.3

Черткова А.И., Славина Е.Г., Окружнова М.А., Жукова Л.Г., Шоуа Э.К.,

Нуртдинова В.А., Борунова А.А., Кадагидзе З.Г.

ЭФФЕКТОРНЫЕ И РЕГУЛЯТОРНЫЕ Т-ЛИМФОЦИТЫ

ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

С ТРОЙНЫМ НЕГАТИВНЫМ ФЕНОТИПОМ:

СВЯЗЬ С КЛИНИЧЕСКИМ ЭФФЕКТОМ ХИМИОТЕРАПИИ

ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н.Блохина» Минздрава России, Москва

Контактная информация:

115478 РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24, «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, централизованный клинико-лабораторный отдел, лаборатория клинической иммунологии опухолей, ведущий научный сотрудник Славина Елена Григорьевна; e-mail: elena.slavina@gmail.com

Статья поступила 25.12.2016, принята к печати 14.06.2016. Резюме

Целью настоящей работы явилось определение связи основных показателей иммунитета и их изменений под влиянием химиотерапии с эффективностью лечения у больных месгаораспространенным раком молочной железы с тройным негативным фенотипом. У 26 пациенток до начала лечения и после ХТ доксорубицином и цисплатиной проводилось им-мунофенотипирование лимфоцитов периферической крови и определение цитотоксической активности МК-клеток в отношении клеток К-562. Обнаружена связь между количеством эффекторных и регуляторных Т-лимфоцитов до и после химиотерапии и степенью лечебного патоморфоза в первичной опухоли, а также отдаленными результатами лечения.

Ключевые слова: ТН РМЖ, химиотерапия, субпопуляции лимфоцитов, лечебный патоморфоз опухоли, отдаленные результаты лечения

A.I. Chertkova, E.G.Slavina, M.A. Okruzhnova, L.G. Zhukova, E.K.Shoua, V.A. Nurtdinova, AA.Borunova, Z.G. Kadagidze PERIPHERAL BLOOD EFFECTOR

AND REGULATORY T-LYMPHOCYTES OF BREAST CANCER PATIENTS WITH TRIPLE-NEGATIVE PHENOTYPE:

RELATION TO THE CLINICAL EFFECT OF CHEMOTHERAPY

FSBI «N.N. Blokhin RCRC» Russian Ministry of Health, Moscow

Abstract

The aim of this work was to determine the relation of basic immunological parameters and their changes under the influence of chemotherapy with the effect of treatment in patients with locally advanced triple negative breast cancer. In 26 patients before treatment and after chemotherapy doxorubicin and cisplatin conducted Immunophenotyping of peripheral blood lymphocytes and the determination of cytotoxic activity NK-cells against K-562 cells. The connection between the number of effector and regulatory T-lymphocytes before and after chemotherapy, and degree of therapeutic pathomorphosis primary tumor and long-term outcomes of treatment was detected.

Key words: triple negative BC, chemotherapy, lymphocyte subpopulations, medical pathomorphosis of tumor, long-term outcomes.

Введение

РМЖ характеризуется клинической и молекулярной гетерогенностью. Приблизительно в 10-24 % случаев диагностируется ТН РМЖ, который характеризуется отсутствием или минимальной экспрессией рецепторов эстрогенов и прогестерона, а также отсутствием гиперэкспрессии ИБИ2. Прогноз при этой форме РМЖ менее благоприятный, чем при других вариантах опухоли [1]. Значительное влияние на эффективность противоопухолевой терапии и прогноз заболевания оказывает состояние иммунной системы пациента [8; 16]. Доказано, что иммунная система способна распознавать опухоль и ге-

нерировать как локальный, так и системный иммунный ответ, направленный на подавление опухолевого роста. В настоящее время достаточно большое число клинических исследований продемонстрировало достоверную зависимость между количеством определенных популяций им-мунокомпетентных клеток в опухолевом узле и периферической крови и общей продолжительностью жизни и продолжительностью безрецидивного периода у пациентов со злокачественными новообразованиями [9]. В то же время различные клеточные и молекулярные механизмы опухолеассоциированной иммуносупрессии защищают опухоль от иммунной атаки и обеспечивают толерантность к антигенам опухолевых клеток [17; 19].

Важную роль в модуляции иммунного ответа на опухоль играют различные популяции регулятор-ных Т-клеток. [7; 11; 17]. В последние годы установлено, что некоторые противоопухолевые препараты, широко используемые при лечении различных форм злокачественных новообразований, могут стимулировать иммуногенную гибель клеток. Эта способность обнаружена у циклофосфамида, доксорубици-на, оксалиплатины, митоксантрона и некоторых других агентов. По-видимому, иммуномодулирующие свойства этих препаратов вносят вклад в их терапевтическую эффективность [15].

В статье представлены результаты исследования влияния ХТ доксорубицином и цисплатиной на основные показатели противоопухолевого иммунитета у больных ТН РМЖ. Определялась связь между количеством эффекторных и регуляторных Т-клеток до и после химиотерапевтического лечения и непосредственными (степень ЛПО), и отдаленными результатами лечения.

Характеристика пациенток

и методы исследования

В исследование были включены данные больные местнораспространенным ТН РМЖ (n = 26). Контролем служили здоровые женщины (n = 22). Все включенные в исследование пациентки после ХТ получали оперативное лечение, и в операционном материале определялась степень ЛПО. В соответствии со степенью ЛПО пациенток делили на 2 группы:

• группа А (n = 8) - пациентки с ЛПО 0-2 степени

• группа Б (n = 18) - пациентки с ЛПО 3-4 степени.

Состояние иммунной системы больных определяли до начала лечения и после окончания ХТ. Проводилось иммунофенотипирование лимфоцитов ПК методом проточной цитометрии с использованием панели моноклональных антител производства компаний «Сорбент» (Россия) и eBiocsience (USA) к поверхностным маркерам лимфоцитов и внутриклеточному антигену FOXP3. В ПК определяли процентное содержание следующих популяций лимфоцитов: Т-клетки (CD3+,

CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD8+CD28+, CD8+28-), активированные Т-лимфоциты (CD3+HLA-DR+, CD3+CD38+, CD4+CD25+), NKT- (CD3+CD16+CD56+) и NK-клетки

(CD3-CD16+CD56+), В-клетки и CD50+ и CD95+ лимфоциты, а также регуляторные CD4+CD25+FOXP3+ Т-клетки (Трег). В табл. и рис. в основном включены популяции лимфоцитов, для которых были обнаружены статистически значимые различия между точками «до» и «после» лечения и по сравнению с контролем. Определялась ЦТА естественных киллеров (NK-клеток) с помощью МТТ-теста в отношении клеток К-562 [14].

Для статистической обработки результатов использовали пакеты статистических программ «Статистика 7» и «SPSS». Различия между средними значениями показателей определяли с помощью U-критерия Манна-Уитни и t-критерия Стьюдента. Для определения связи между изучаемыми признаками проводился непараметрический корреляционный анализ Спирмена.

Различия между показателями считали статистически значимыми при Р < 0,05. Влияние показателей на выживаемость определяли с использованием критерия кривых выживаемости Каплана-Майер.

Результаты и обсуждение

В результате проведенного лечения у 8 из 26 (30,77 %) пациенток с ТН РМЖ отмечался ЛПО 0-2 степени (группа А), а у 18 из 26 (69,23 %) - ЛПО 3-4 степени (группа Б). Изучение связи основных иммунологических показателей с непосредственными результатами лечения (степенью ЛПО) показало, что статистически значимые отклонения субпопуляци-онного состава лимфоцитов от контрольных значений как до, так и после х/т наблюдались, главным образом, у пациенток (группа Б) с ЛПО 3-4 степени (табл. 2). После проведенного лечения у пациенток этой группы повышалось количество Т-лимфоцитов, экспрессирующих маркеры СБ3+ (Т-клетки) и СБ3+СБ4+ (Т-хелперы). В результате увеличения количества СБ4+ Т-клеток после лечения возрастала величина иммунорегуляторного индекса СБ4+/СБ8+ (табл. 2). Следует отметить, что количество СБ3+СБ4+ лимфоцитов до лечения у больных с ЛПО 3-4 степени было выше, чем у пациенток в группе А (49,1±11,2 % и 38,0±5,0 %, соответственно; Р = 0,036). У пациенток группы Б после лечения наблюдалось также снижение процентного содержания лимфоцитов, экспрессирующих СБ50 (молекула адгезии 1САМ-3), и СБ19+ В-клеток. У больных этой группы ЦТА КК-клеток до лечения превышала контрольные значения, а после проведенной терапии снижалась до нормы (табл. 2). В то же время ХТ не повлияла (табл. 1) ни на одну из изученных популяций у пациенток с низкой степенью ЛПО (статистически значимых различий между показателями до и после лечения, а также по отношению к контролю не отмечалось).

Значительную роль в подавлении противоопухолевого иммунного ответа играют различные популяции регуляторных Т-клеток. Наиболее хорошо изучены регуляторные СБ4+ Т-лимфоциты, экс-прессирующие высоко-аффинный рецептор ГЬ-2 (1Ь-2Яб - СБ25) и транскрипционный фактор БОХР3 (СБ4+СБ25+РОХР3+). При многих вариантах злокачественных опухолей повышение количества Трег в опухолевом узле и периферической крови коррелирует с плохим прогнозом заболевания [3]. Однако имеются сообщения и о благоприятном прогностическом значении этих клеток [11]. Проведенное в работе изучение влияния х/т на популяцию регулятор-ных Т-лимфоцитов с фенотипом СВ4+СВ25+РОХР3+ показало, что динамика изменения их количества в группах А и Б различна (рис. 1). В группе с высокой степенью ЛПО количество этих клеток до лечения не отличалось от контроля, а после лечения снизилось более чем в 2 раза по сравнению с исходным значением. В то же время в группе с низкой степенью ЛПО количество Трег до лечения было статистически значимо ниже контроля и в 3,6 раза ниже, чем в группе Б, и после терапии оно практически не изменилось (рис. 1).

А

0,7 ЕНДо лечения И После х/т

0,6

0,5

0,4

0,3

0,2 *

0,1

Патоморф 0-2 степени Патоморф 3-4 степени Контроль

< 0,05 по сравнению с контро-

0

ЛПО 0-2 степени ЛПО 3-4 степени Контроль

Р2,4 = 0,042

Рис. 1. Количество СБ4+СБ25+РОХР3+ Т рег у пациенток с различной степенью лечебного патоморфоза опухоли до и после химиотерапии.

А

Вели

чина

соот-

ноше

ния

СЭ4+

СЭ28 +

/СЭ8 +СЭ2

8-

1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0

□ До лечения 5 И После х/т

ЛПО 0-2 степени ЛПО 3-4 степени Контроль

Р3,5 = 0,037

пониженный уровень

СЮ+

повышенный уровень

С03+

пониженный уровень С03СМ+

повышенный уровень С£)ЗСМ+

смерть

месяцы

Рис. 2. Количество СБ8+СБ28- Т-клеток (а) и величина соотношения СБ8+СВ28+/СВ8+СБ28- Т-клеток (б) у пациенток с различной степенью лечебного патоморфоза опухоли до и после химиотерапии.

Рис. 3. Безрецидивная выживаемость больных ТН РМЖ в зависимости от исходного уровня CD3 и CD3 CD4 Т-клеток.

Количество СБ4+СБ25+ Т-лимфоцитов до и после лечения было на одном уровне в обеих группах. Таким образом, снижение количества СБ4+СБ25+РОХР3+ Трег в составе СБ4+СБ25+ Т-лимфоцитов в результате проведенной терапии наблюдалось только у пациенток с высокой степенью ЛПО. Ранее при ИБЯ2+ РМЖ мы обнаружили сходную динамику изменения количества Трег. Количество этих клеток у пациенток с ЛПО 0-2 степени до лечения было ниже в 3,26 раза, чем в группе с высокой степенью ЛПО.

После соответствующего лечения количество Трег в группе с ЛПО 3-4 степени снижалось в 5 раз, а в группе с ЛПО 0-2 степени - лишь в 2,3 раза [4].

Особый интерес представляет популяция СБ8+ Т-клеток, не экспрессирующая основной коак-тивационный рецептор СБ28 (СБ8+СБ28-). Эта популяция является гетерогенной и включает в себя как клетки-супрессоры, так и клетки-эффекторы [7].

Ряд авторов продемонстрировал, что у пациентов со злокачественными опухолями эти клетки проявляют главным образом супрессорную активность, и повышение их количества в опухолевой ткани и ПК может коррелировать с плохим прогнозом заболевания [7; 10; 13; 18].

Результаты исследования изменений процентного содержания в ПК СБ8+СБ28- Т-лимфоцитов под влиянием проведенной терапии в группах А и Б представлены на рис. 2 А.

В группе с высокой степенью ЛПО процент этих клеток после лечения снижался по сравнению с исходным уровнем (15,0±8,3 % и 12,6±8,7 % соот-

ветственно, P = 0,032). При этом количество CD8+CD28+ возрастало. В группе с ЛПО 0-2 степени отмечалось незначительное возрастание количества CD8+CD28- клеток, и после лечения различие между группами А и Б было статистически значимым (табл. 1 и 2; рис. 2 А).

При различных патологических состояниях большое значение имеет баланс между CD8+CD28+ и CD8+CD28- Т-клетками. Повышение величины соотношения CD8+CD28+/CD8+CD28- рассматривается как благоприятный признак [6; 12]. В нашем исследовании изменение величины этого соотношения в группах А и Б имело разнонаправленный характер (рис. 2 Б).

У пациенток с низкой степенью ЛПО отмечалась тенденция к снижению этого соотношения после лечения. В то же время, в группе с высокой степенью ЛПО, сниженная до лечения по сравнению с контролем величина соотношения, после х/т возрастала практически до контрольного уровня (ibid.). Непараметрический корреляционный анализ Спир-мена выявил умеренную статистически значимую положительную связь между величиной соотношения CD8+CD28+/CD8+CD28- после проведенного лечения и степенью ЛПО (коэффициент корреляции r = 0,462; Р = 0,02).

Ранее при обследовании больных HER2+ РМЖ нами обнаружено, что до лечения величина данного показателя также была ниже у больных с 3-4 степенью ЛПО, чем у больных с ЛПО 0-2 степени и по сравнению с контролем (0,32±0,20; 0,76±0,57 и 1,15±0,88, соответственно; P=0,007 и 0,0004; [5]).

СР4/С025/Р0ХРЗ

-ппониженный уровень повышенный уровень -+- смерть -+- смерть

месяцы

С04/С025/Р0ХРЗ

—ппониженный уро5емъ повышенный уровень * прогрессироазние ■ прогрессмрование

10,00

20.00 30,00

месяцы

40,00

50.00

Рис. 4. Общая (а) и безрецидивная (б) выживаемость больных ТН РМЖ в зависимости от исходного уровня СВ4+СВ25+РОХР3+ Т рег.

Анализ влияния величины иммунологических показателей на отдаленные результаты лечения показал, что благоприятным прогностическим фактором у пациенток с местнораспространенным ТН РМЖ может служить повышение количества СБ3+ и СБ3+СБ4+ Т-клеток ПК до лечения. Так в группе больных с повышенным до лечения по отношению к контролю процентом СБ3+и

СБ3+СБ4+ Т-клеток ПК отмечено статистически значимое увеличение общей и безрецидивной выживаемости и выживаемости до прогрессирования. Медиана общей выживаемости в группе больных с пониженным уровнем СБ3+ и СБ3+СБ4+ Т-лимфоцитов составила 23,8 мес и не была достигнута в группе с повышенным уровнем этих клеток (табл. 3, рис. 3 А-Б).

Таблица 1

Основные показатели иммунитета у больных ТН РМЖ с лечебным патоморфозом опухоли 0-2 степени до и после лечения

Показатель Патоморфоз 0-2 степени (группа А) Контроль *

До лечения * После химиотерапии * (ш±8Шеу.) % п = 22

(ш±8Шеу.) % п = 8 (ш±8Шеу.) % п = 8

1 2 3

СБ3+ 69,6±1,3 81,1±12,5 74,6±6,1

СБ3+СБ4+ 38,0±5,0 42,8±8,2 43,29±10,6

СБ3+СБ8+ 17,8±14,2 21,6±12,1 19,9±7,8

СБ4/СБ8 2,05±0,89 2,0±0,59 1,96±0,97

СБ50 97,4±2,1 94,9±9,7 97,5±2,2

СБ8+СБ28+ 9,6±7,5 8,0±3,9 11,6±5,3

СБ8+СБ28- 16,7±12,7 18,0±5,8 15,8±9,8

СБ4+СБ25+ 6,6±3,4 8,4±6,3 9,2±3,6

ЦТА Ж-клеток 48,8±22,9 50,9±14,9 40,8±13,8 (п = 16)

*Р > 0,05

Таблица 2

Основные показатели иммунитета у больных ТН РМЖ с лечебным патоморфозом опухоли 3-4 степени до и после лечения.

Показатель Патоморфоз 3-4 степени (группа Б) Контроль Р

До лечения После химиотерапии (ш±8Шеу.) % п = 22

(ш±8Шеу.) % п = 18 (ш±8Шеу.) % п = 18

1 2 3

СБ3+ 73,7±10,9 78,8±10,9 74,6±6,1 Р2,3 = 0,025

СБ4+ 46,1±11,1 49,9±12,4 44,3±10,5 Р2,3 = 0,038

СБ3+СБ4+ 49,1±11,2 53,0±10,2 43,29±10,6 Р2,з = 0,018

СБ3+СБ8+ 14,0±7,6 14,0±6,6 19,9±7,8 Р],з = 0,035 Р23 = 0,042

СБ4/СБ8 2,64±1,62 3,05±1,85 1,96±0,97 Р2,3 = 0,047

СБ50 97,7±2,4 91,6±11,7 97,5±2,2 Р2,3 = 0,015

СБ19+ 7,8±4,7 3,2±4,4 7,7±5,9 Р],2 = 0,0005 Р2,3 = 0,002

СБ8+СБ28+ 7,37±4,1 8,8±4,1 11,6±5,3 Р13 = 0,005

СБ8+СБ28- 15,0±8,3 12,6±8,7 15,8±9,8 Р12 = 0,032

СБ4+СБ25+ 7,5±9,3 8,8±5,8 9,2±3,6 Р > 0,05

ЦТА К1К-клеток 58,2±23,9 38,9±14,9 40,8±13,8 (п = 16) Ри = 0,045 Ри = 0,038

Таблица 3

Выживаемость больных ТН РМЖ в зависимости от количества СБ3+ и СБ3+СБ4+ Т-лимфоцитов периферической крови до лечения_

До лечения

Субпопуляции лимфоцитов (по отношению к контролю) 2-летняя ОВ % 2-летняя БРВ % 2-летняя ВДП %

Количество СБЗ+Т-клеток Ниже (п=14) Выше (п=19) 44,9 94,1 (р=0,04) 34,2 75,6 (р=0,017) 39,3 71,6 (р=0,014)

Количество СВ3+СВ4+ Т-клеток Ниже (п=12) Выше (п=11) 40,9 88,9 (р=0,037) 27,3 68,6 (р=0,115) 37,0 68,2 (р=0,046)

Увеличение БРВ и ВБП было обнаружено в группе больных с повышенным уровнем клеток, экспрессирующих молекулу адгезии СБ50, в то же время существенного влияния на ОВ отмечено не было. В группе больных с более высоким уровнем СБ4+СБ25+РОХР3+ Трег до лечения 2-летняя ОВ и БРВ составила 100,0 % по сравнению с 58,2 % (Р = 0,206) и 75,0 % (Р = 0,308) соответственно, в группе больных с низкими значениями показателя (рис. 3 А, Б). Следует отметить, что прогностическое значение Трег при РМЖ в различных исследованиях варьировало, и было неблагоприятным, благоприятным или незначимым [11]. Относительный уровень СБ3+СБ8+ Т-клеток - эффекторов не оказал статистически значимого влияния на ЛПО, однако была продемонстрирована тенденция к увеличению как БРВ, так и ВДП в группе больных с повышенным до лечения количеством этих клеток. Так 2-летняя БРВ и ВДП составила 42,6 % в группе больных с низким по отношению к контролю уровнем показателя (п = 14) и 62,0 % (р = 0,62) и 55,6 % (Р = 0,777) в группе с высоким значением показателя (п = 8). Однако ОВ в обеих группах была сравнима: медиана ОВ составила 31,7 и 30,1 мес соответственно. Тенденция к увеличению ОВ и БРВ наблюдалась у пациенток с повышенным после проведенной ХТ количеством СБ3+СБ8+ Т-клеток-эффекторов и активированных СБ3+СБ38+Т-лимфоцитов.

Заключение

Исследование взаимосвязи количества клеток основных популяций лимфоцитов до и после лечения с непосредственными (степень ЛПО) и отдаленными результатами ХТ пациенток с местнораспрост-раненным ТН РМЖ показало, что, в отличие от больных с ЛПО 3-4 степени, ХТ практически не повлияла на субпопуляционный состав лимфоцитов у больных с низкой степенью ЛПО. Только у пациенток с высокой степенью ЛПО после химиотерапии повышалось количество СБ3+ и СБ3+СБ4+ Т-лимфоцитов и снижалось количество СВ4+СВ25+РОХР3+ и СБ8+СБ28-Т -клеток и повышалась величина соотношения СБ8+СВ28+/СВ8+СБ28- Т-лимфоцитов. Можно предположить, что способность иммунной системы пациенток с ТН РМЖ в той или иной степени реаги-

-ровать на проводимое лечение является благоприятным фактором. Однако изменение этих показателей после лечения не имело значения для отдаленных результатов терапии. По данным Жуковой Л.Г. полный лечебный патоморфоз не всегда транслируется в улучшение отдаленных результатов лечения [2]. В связи с этим можно предположить, что обнаруженное нами снижение количества клеток регуляторных популяций СБ4+СБ25+РОХР3+ и СБ8+СБ28- и повышение величины соотношения СБ8+СВ28+/СВ8+СБ28- после х/т имело значение главным образом для непосредственных результатов лечения - эффективного воздействия на первичный опухолевый узел. В то же время мы обнаружили, что для отдаленных результатов лечения значение имел исходный уровень некоторых популяций лимфоцитов. Так у больных с более высоким исходным уровнем Трег наблюдалась тенденция к увеличению 2-летней ОВ и БРВ. Различное значение количества клеток определенных популяций лимфоцитов и их изменений для непосредственных и отдаленных результатов лечения подтверждается и тем, что относительный уровень СБ3+СБ8+ Т-клеток-эффекторов не имел значения для ЛПО. Однако продемонстрирована тенденция к увеличению БРВ и ВДП в группе больных с повышенным до лечения количеством этих клеток. Благоприятным прогностическим фактором у больных местнораспространенным ТН РМЖ, получающих лечение доксорубицином в сочетании с цисплатиной, может являться увеличенное до начала лечения количество СБ3+ и СБ3+СБ4+ Т-лимфоцитов ПК: у пациенток отмечалось статистически значимое увеличение ОВ, БРВ и ВДП. Следует отметить, что количество СБ3+СБ4+ Т-клеток до лечения было статистически значимо выше у больных с высоким ЛПО, по сравнению с пациентками с ЛПО 0-2 степени. Выявление связи определенных популяций иммунокомпетентных клеток и характера их количественных изменений в процессе противоопухолевой терапии с эффективностью проводимого лечения может помочь в установлении прогностических иммунологических маркеров, разработке индивидуальных подходов к лечению больных ТН РМЖ и повышению его эффективности.

Работа поддержана грантом РФФИ № 14-0400867

Список литературы

1. Жукова Л.Г. Рак молочной железы с тройным негативным фенотипом у российской популяции больных. Клинико-морфологические особенности // Вопр. онкол. - 2015. - 61, № 2. - С. 189-194.

2. Жукова Л.Г. «Клинические и фундаментальные аспекты прогноза и рационального лечения рака молочной железы с тройным негативным фенотипом» // Авторефер. дис. на соискание уч. степени д.м.н., Москва 2015. - C. 28-34.

3. Кадагидзе З.Г., Черткова А.И., Славина Е.Г. Регуляторные Т-клетки и их роль в противоопухолевом иммунном ответе // Вопр. Онкол. - 2009. - 55 - С. 269 - 277.

4. Черткова А.И., Славина Е.Г., Ганьшина И.П. и соавт. Популяционный состав лимфоцитов периферической крови больных РМЖ с гиперэкспрессией HER-2 в процессе таргетной терапии трастузумабом и лапатинибом. // Вестник «РОНЦ им. Н.Н.Блохина». - 2014. - 25 (3-4). - С. 59-63

5. Черткова А.И., Славина Е.Г., Жукова Л.Г. и соавт. Субпопуляционный состав лимфоцитов при HER2-положительном и Трижды-негативном раке молочной железы // РБЖ. - 2015. - 14 (2). - С. 47-52.

6. Dai S.X., Wu G., Zou Y. et al. Balance of CD8+CD28+/CD8+ CD28- T lymphocytes is vital for patients with ulcerative colitis // Dig. Dis. Sci. - 2013. - 58. - P. 88-96.

7. Filaci G., Fenoglio D., Fravega M. CD8+CD28- T regulatory lymphocytes inhibiting T cell proliferative and cytotoxic functions infiltrate human cancers // J. Immunol. - 2007. - 179. - P. 4323-4334.

8. Gerloni M., Zanetti M. CD4 T cells in tumor immunity // Springer Semin. Immunopathol. - 2005. - 27(1). - P. 37-48.

9. Gooden M.J., de Bock G.H., Leffers N.et al. The prognostic influence of tumour-infiltrating lymphocytes in cancer: a systematic review with meta-analysis // Br. J. Cancer. - 2011. - 105. - P. 93 - 103.

10. Karag^ B., Bilgi O., Gbmbs M. et al. CD8+CD28- cells and CD4+CD25+ regulatory T cells in the peripheral blood of advanced stage lung cancer patients // Med. Oncol. - 2010. - 27. - P. 29 -33.

11. deLeeuw R.J., Kost S.E., Kaka J.A., Nelson B.H. The prognostic value of FoxP3+ tumor-infiltrating lymphocytes in cancer: a critical review of the literature // Clin. Cancer Res. - 2012. - 18. - P. 3022-3029.

12. Li X., Kong H., Tian L. et al. Changes of costimulatory molecule CD28 on circulating CD8+ T cells correlate with disease pathogenesis of chronic hepatitis B // Biomed. Res. Int. - 2014. - 423181.

13. Meloni F., Morosini M., Solari N. et al. Foxp3 expressing CD4+CD25+ and CD8+CD28- T regulatory cells in the peripheral blood of patients with lung cancer and pleural mesothelioma // Hum. Immunol. - 2006. - 67. -P. 1-12.

14. Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assay // J. Immunol. Meth. - 1983. - 65, - P. 55-63.

15. Pol J., Vacchelli E., Aranda F. et al. Trial Watch: Immunogenic cell death inducers for anticancer chemotherapy // Oncoimmunol. - 2015. - 4. - e1008866.

16. Quezada S.A., Peggs K.S., Simpson T.R., Allison J.P. Shifting the equilibrium in cancer immunoediting: from tumor tolerance to eradication // Immunol. Rev. - 2011. - 241. - P. 104 - 118.

17. Roychoudhuri R., Eil R.L., Restifo N.P. The interplay of effector and regulatory T cells in cancer // Curr. Opin. Immunol. - 2015. - 33. - P. 101-111.

18. Song G., Wang X., Jia J.et al. Elevated level of peripheral CD8(+)CD28(-) T lymphocytes are an independent predictor of progression-free survival in patients with metastatic breast cancer during the course of chemotherapy // Cancer Immunol. Immunother. - 2013. - 62. - P. 1123-1130.

19. Whiteside T.L. The tumor microenvironment and its role in promoting tumor growth // Oncogene. - 2008. -27. - P. 5904-5912.