CC BY
303
Татьяна Николаевна Заботина1, Ольга Витальевна Короткова2,
Анна Анатольевна Борунова3, Наталья Юрьевна Очеева4,
Иван Игоревич Бокин5, Кирилл Иосифович Жорданиа6,
Игорь Валерианович Паниченко7, Владимир Юрьевич Сельчук8,
Виктор Васильевич Кузнецов9, Заира Григорьевна Кадагидзе10
СУБПОПУЛЯЦИОННАЯ СТРУКТУРА ЛИМФОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКОВ
‘Д. б. н., ведущий научный сотрудник, лаборатория клинической иммунологии опухолей НИИ клинической онкологии РОНЦ им.. Н. Н. Блохина РАМН (‘‘5478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24) 2К. б. н., старший научный сотрудник, лаборатория клинической иммунологии опухолей НИИ клинической онкологии РОНЦ им.. Н. Н. Блохина РАМН (‘‘5478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24) 3К. м. н., старший научный сотрудник, лаборатория клинической иммунологии опухолей НИИ клинической онкологии РОНЦ им.. Н. Н. Блохина РАМН (‘‘5478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24) 4Врач клинической лабораторной диагностики, лаборатория клинической иммунологии опухолей НИИ клинической онкологии РОНЦ им.. Н. Н. Блохина РАМН (‘‘5478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24) 5Аспирант, кафедра онкологии РМАПО (‘23995, РФ, г. Москва, ул. Баррикадная, д. ‘/2)
6Д. м.. н., профессор, ведущий научный сотрудник, гинекологическое отделение НИИ клинической онкологии РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН (‘‘5478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)
7Д. м.. н., старший научный сотрудник, отделение радиохирургии НИИ клинической онкологии РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН (‘‘5478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)
8Д. м.. н., профессор, главный врач. РОНЦ им.. Н. Н. Блохина РАМН (‘‘5478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)
9Д. м.. н., профессор, заведующий, гинекологическое отделение НИИ клинической онкологии РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН (‘‘5478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)
‘0Д. м.. н., профессор, заведующая, лаборатория клинической иммунологии опухолей НИИ клинической онкологии РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН (‘‘5478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)
Адрес для переписки: 115478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24, РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, лаборатория клинической иммунологии опухолей, Заботина Татьяна Николаевна;
e-mail: [email protected]
Проанализированы результаты иммунофенотипирования лимфоцитов периферической крови у 35 первичных больных раком яичников до и после хирургического лечения. Выявлено нарушение линейной структуры лимфоцитов периферической крови у больных по сравнению с донорской группой. Хирургическое лечение не влияло на динамику распределения основных популяций лимфоцитов при анализе общей группы больных. Разделение больных на подгруппы и анализ результатов в зависимости от исходного уровня CD3 позволили выявить, что только у 42,9% пациенток содержится исходно нормальное количество Т-клеток CD3+ (1-я подгруппа), у 35,7% (2-я подгруппа) — исходно сниженное и у 21,4% (3-я подгруппа) — исходно повышенное. После хирургического лечения у больных 2-й и 3-й подгрупп обнаружена статистически значимо положительная динамика, ведущая к нормализации показателей как в NK-, так и в Т-клеточном звеньях иммунитета. Однако такие изменения не выявлены при анализе структурных особенностей лимфоидных клеток в целом по группе. Кроме того, у 78,5% первичных больных раком яичников баланс CD4/CD8 был нарушен еще до начала специфического лечения. При анализе субпопуляционной структуры Т-клеточного звена иммунитета в зависимости от исходного уровня Т-лимфоцитов CD3 констатирована разнонаправленная динамика параметров у больных 2-й (^CD3) и 3-й (TCD3) подгрупп до и после хирургического лечения в зависимости от исходных субпопуляционных нарушений. Активированный (CD3 + HLA-Dr + ) Т-клеточный фенотип обнаружен у больных во всех подгруппах, однако он наиболее выражен у пациенток с нормальным содержанием клеток CD3, а у больных с исходно повышенным уровнем CD3 оказался лишь незначительно выше, чем у доноров.
Ключевые слова: первичный рак яичников, клеточный иммунитет.
Иммунная система играет решающую роль в противоопухолевой защите организма. До недавнего времени полагали, что угнетение клеточно-опосредуемой специфической реакции иммунной системы у онкологических больных с солидными новообразованиями коррелирует со степенью распространенности опухолевого заболевания. Однако оказалось, что практически у 50% пациенток с диссеминированным опухолевым процессом отсутствуют нарушения показателей клеточного или гуморального иммунитета. В то же время клиническое течение заболевания, продолжительность жизни онкологических больных напрямую зависят от степени нарушений параметров именно клеточного, а не гуморального иммунитета и не всегда определяются стадией онкологического заболевания. Так, ранее нами было показано, что больные раком молочной железы с нормальными показателями клеточного иммунитета достигают полную или частичную ремиссию значительно чаще, чем пациенты со сниженными показателями [1—3]. Аналогичная закономерность выявлена в группах больных с такими иммуногенными формами заболеваний, как рак почки и меланома кожи [4; 5]. Таким образом, результаты анализа взаимосвязи между показателями клеточного иммунитета больных с солидными опухолями и отдаленными клиническими результатами лечения свидетельствуют о целесообразности изучения линейной структуры имму-нокомпетентных клеток у первичных больных для назначения адекватной специфической терапии.
Цель работы заключалась в оценке состояния линейных маркеров клеточного звена иммунитета и выявлении структурных нарушений лимфоцитов у первичных больных раком яичников (РЯ).
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В исследование включены 35 первичных больных РЯ, находившихся в гинекологическом отделении для выполнения планового хирургического лечения. Средний возраст по группе составил 53,9 года. В зависимости от гистологической структуры опухоли больные распределились следующим образом: серозный рак — 62,1%, му-цинозный рак — 13,8%, эндометриоидный рак — 20,7%, светлоклеточный рак — 3,4%. В качестве контрольных образцов использовали периферическую кровь 11 практически здоровых женщин в возрасте от 25 до 58 лет.
Иммунофенотипирование лимфоцитов периферической крови проводили до хирургического лечения и через 2 нед после него. Окрашивание клеток осуществляли в модификации прямой реакции иммунофлуоресценции с применением моноклональных антител МКА, конъюгированных FITC, PE, PE-Cy5, PC5, Per-CP («Beckman Coulter», «BD Biosciences»). Специфичность МКА представлена в табл. 1.
Использовали следующие двухцветные реагенты: CD3/CD4, CD3/CD8, CD3/CD19, CD3/CD16 + 56, CD3/HLA-Dr. Готовые образцы анализировали мето-
© Заботина Т. Н., Короткова О. В., Борунова А. А., Очеева Н. Ю., Бокин И. И., Жорданиа К. И., Паниченко И. В., Сельчук В. Ю., Кузнецов В. В., Кадагидзе З. Г., 2010 УДК 618.11-006.6-071:612.42:612.017.1
Таблица 1
Специфичность МКА, использованных в работе
Кластер дифферен-цировки (CD), антиген Клетки-мишени
CD3 Зрелые Т-лимфоциты
CD4 Субпопуляция Т-лимфоцитов
CD8 Субпопуляция Т-лимфоцитов, субпопуляция NK-клеток
CD19 В-лимфоциты
CD16 Субпопуляция NK-клеток
CD56 Субпопуляция NK-клеток
HLA-Dr (антиген гистосовместимости II класса) Активированные Т-лимфоциты, В-лимфоциты
CD45 Все лейкоциты
CD14 Моноциты
дом проточной цитометрии на приборе «FACSCalibur» с применением коммерческого пакета сбора и анализа «CellQuest» («Becton Dickinson», США). Выделение гейта лимфоидных клеток осуществляли с учетом параметров прямого и малоуглового светорассеяния FSCvsSSC, при этом количество клеток с фенотипом CD45 + / CD14— составляло не менее 95—97%, что соответствует требованиям контроля качества Федеральной системы внешней оценки качества РФ [6; 7]. Для дискриминации неспецифического связывания использовали конъюгат IgG1FITC/IgG2aPE. В каждом образце накапливали и анализировали не менее 5000 событий в гейте лимфоцитов. Использовали анализ Dotplot, учитывали относительное число позитивных клеток (в процентах).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Мониторинг состояния иммунной системы больных с солидными новообразованиями включает суб-популяционный анализ иммунокомпетентных клеток (ИКК), основанный на изучении экспрессии поверхностных антигенов и внутриклеточных структур, и анализ функциональной активности ИКК. При оценке клеточного звена иммунитета у онкологических больных анализу подвергаются, как правило, именно лимфоидные клетки СБ45 + /СБ14 — , поскольку анализ других популяций лейкоцитов не нашел практического применения из-за отсутствия клинической значимости. Спектр изучаемых поверхностных маркеров ИКК может варьировать в зависимости от их информативности и от цели исследований, однако основной набор МКА для оценки клеточного иммунитета обязательно включает антитела к линейным антигенам лимфоци-
тов — Т, В, ЫК. Анализ является корректным только в случае получения контрольной суммы основных популяций 100 ± 5%, при этом Т-сумма должна составить %СБ4 + %СБ8 = %СБ3 ± 5% [8; 9].
Анализ линейных маркеров, характеризующих основную структуру лимфоидных клеток у первичных больных РЯ, позволил выявить, что в среднем по группе количество Т-лимфоцитов СБ3+ статистически значимо снижено по сравнению с показателями у доноров. Уровень ЫК-клеток (СБ3 — СБ16 + 56 + ), напротив, в группе больных РЯ статистически значимо выше, чем в группе практически здоровых доноров. Следует отметить, что хирургическое лечение не влияло на динамику распределения этих показателей. В то же время среднее количество В-лимфоцитов (СБ19 + ) в исследуемой группе больных как до, так и после лечения практически не отличалось от такового в донорской группе (табл. 2).
Таким образом, на первом этапе исследования мы выявили нарушение линейной структуры лимфоцитов периферической крови у больных РЯ. Хирургическое лечение не влияло на уровень основных популяций лимфоцитов при анализе общей группы больных. В то же время разброс минимальных и максимальных значений (М ± 5) в Т-клеточном (до лечения 62,5 ± 16,5%, после — 61,8 ± 14,4%) и ЫК-клеточном (до лечения 25,9 ± 12,3%, после — 23,2 ± 11,6%) звеньях иммунитета свидетельствовал о неоднородности анализируемых больных по уровню основных популяций иммунокомпетентных клеток. Это послужило поводом для разделения больных на подгруппы в зависимости от направленности нарушений.
Поскольку основной пул лимфоцитов представлен Т-лимфоцитами СБ3+ (65—75%), дальнейший анализ полученных данных мы проводили в зависимости от исходного уровня антигенположительных Т-клеток СБ3. Так, нами было выявлено, что в периферической крови первичных больных РЯ только в 42,9% случаев содержится исходно нормальное количество Т-клеток СБ3+ (1-я подгруппа), в 35,7% (2-я подгруппа) обнаружено исходно сниженное их количество и в 21,4% (3-я подгруппа) — исходно повышенное. Закономерным оказалось, что при нормальном содержании В-лимфоцитов СБ19+ во всех подгруппах больных по сравнению с донорами даже незначительный Т-клеточный дефицит компенсировался повышенным содержанием ЫК-клеток, и наоборот, при
Таблица 2
Структура линейных популяций лимфоцитов периферической крови у первичных больных РЯ до и после хирургического лечения, % антигенположительных клеток ДО ± m)
Маркер До операции После операции Доноры
СD3 + 62,5 ± 3,1а 61,8 ± 2,7а 73,9 ± 2,5
CD3-CD16+56+ 25,9% ± 2,3а 23,2 ± 2,1а 16,5 ± 2,0
CD19+ 6,9 ± 0,9 8,4 ± 1,2 7,5 ± 1,4
а Статистически значимые различия по сравнению с показателями доноров (р < 0,05).
исходно высоких уровнях Т-клеток СБ3+ уровень ЫК-лимфоцитов был ниже, чем у доноров.
При анализе линейных популяций лимфоцитов после хирургического лечения у больных 2-й и 3-й подгрупп была зафиксирована статистически значимая положительная динамика, ведущая к нормализации показателей как в Т-клеточном, так и в ЫК-клеточном звеньях иммунитета. Однако при анализе структурных особенностей лимфоидных клеток в целом по группе больных такие изменения не выявлены (табл. 3).
Важнейшим иммунологическим показателем является соотношение лимфоцитов СБ4+ и СБ8+ — им-мунорегуляторный индекс (ИРИ), характеризующий субпопуляционную структуру Т-клеток СБ3 [10—12]. В норме практически все клетки СБ4 являются СБ3-позитивными, однако, согласно современным представлениям, субпопуляция клеток СБ8 оказалась и фенотипически, и функционально гетерогенной и представлена как цитотоксическими Т-лимфоцитами СБ3 + /СБ8 + , так и эффекторными лимфоцитами СБ8 + , не экспрессирующими на своей поверхности антиген СБ3 [13—15]. Уровень этих клеток в структуре СБ8 в норме не превышает 5—10% и, как правило, не влияет на значения ИРИ [16]. Однако нами было выявлено, что у 78,5% первичных больных РЯ баланс СБ4/СБ8 нарушен еще до начала специфического лечения (см. рисунок).
Статистически значимо сниженное количество Т-кле-ток СБ3 в среднем по группе сопровождалось статистически значимо сниженным количеством лимфоцитов СБ3 + /СБ4 + , но не СБ3 + /СБ8 + . В результате соотношение СБ4/СБ8 у первичных больных РЯ до операции было ниже, чем в контрольной группе. Однако даже незначительные, статистически незначимые увеличение количества клеток СБ4 и уменьшение количества клеток СБ8 привели к нормализации субпопуляционной структуры Т-клеток после лечения. При этом уровень лимфоцитов СБ3 — /СБ8+ как до, так и после операции был незначительно выше, чем в донорской группе, однако различия оказались статистически незначимыми (табл. 4).
Мы проанализировали субпопуляционную структуру Т-клеточного звена иммунитета у больных РЯ до и после операции в зависимости от исходного уровня Т-лимфоцитов СБ3 (табл. 5).
В подгруппе больных с исходно нормальным уровнем клеток СБ3+ за счет повышенного уровня лимфоцитов СБ8 соотношение СБ4/СБ8 оказалось ниже нормы как до, так и после операции. При этом необходимо подчеркнуть, что нормализация числа клеток СБ8+ у больных этой подгруппы оказалась статистически значимой, однако сокращение общего пула клеток СБ8 в послеоперационном периоде происходило преимущественно за счет цитотоксических лимфоцитов СБ3 + /СБ8+ (различия статистически незначимы).
Наиболее выраженная динамика показателей оказалась характерной для больных 2-й подгруппы, у которых уже через 2 нед после удаления опухолевого субстрата статистически значимо повысилось число Т-клеток, причем за счет как субпопуляций СБ3 + /СБ4 + , так и СБ3 + /СБ8 + . Однако, по нашему мнению, исходная степень нарушений структуры Т-лимфоцитов СБ3 + не позволила компенсировать существенный дефицит
Таблица 3
Относительное содержание линейных популяций лимфоцитов периферической крови первичных больных РЯ до и после операции в зависимости от исходного количества Т-клеток CD3+, % (М ± т)
Маркер Подгруппы
1-я ^ CD3) 2-я (ІCD3) 3-я (tCD3) доноры
Т-клетки CD3 + до операции 68,5 ± 1,2 44,4 ± 3,9а 80,3 ± 2,2 73,9 ± 2,5
после операции 64,2 ± 3,4а 54,5 ± 4,4а, б 72,2 ± 4,8
NK-клетки CD3-CD16+56 + до операции 22,9 ± 1,3а 37,7 ± 3,6а 12,4 ± 1,8 16,5 ± 2,0
после операции 19,5 ± 1,8 30,7 ± 3,7а 15,0 ± 3,0
В-клетки CD19 + до операции 4,9 ± 0,6 10,2 ± 2,1 5,7 ± 0,4 7,5 ± 1,4
после операции 7,8 ± 1,7 9,5 ± 2,6 7,8 ± 1,0
а Статистически значимые различия по сравнению с показателями доноров (р < 0,05). б Статистически значимые различия в сравниваемых подгруппах до и после операции (р < 0,05).
Т-клеток за данный период времени, и их уровень оставался ниже нормы и после лечения. Характер динамики соотношения СБ4/СБ8 был аналогичным таковому в 1-й подгруппе. Количество клеток с фенотипом СБ3-/ СБ8+ практически не менялось, однако превышало норму более чем в 2 раза как до, так и после операции, обеспечивая при этом общий уровень клеток СБ8+ в пределах показателей, соответствующих таковым у доноров. О неспецифической клеточной реакции иммунной системы свидетельствуют наличие у больных этой
подгруппы высокого уровня NK-клеток( не обладающих иммунологической памятью, а также то, что клетки CD8 без коэкспрессии CD3-антигена не являются Т-лимфоцитами. Возможно, именно этой категории больных РЯ с целью повышения уровня Т-клеток и активации специфических цитотоксических Т-лимфоцитов в плане комплексного лечения может быть показана иммунокорригирующая терапия препаратами, нормализующими количественные и функциональные показатели Т-системы иммунитета.
Рисунок. Данные анализа DotPlot коэкспрессии антигенов CD3 и CD8 на лимфоцитах периферической крови больных РЯ.
А. Данные больной с нормальным содержанием общего пула лимфоцитов CD8, CD3+/CD8+, CD3-/CD8+. Б. Данные больной с высоким содержанием общего пула лимфоцитов CD8, нормальным CD3+/CD8+, высоким CD3-/CD8+.
ляций Т-клеточного звена до показателей контрольной группы, хотя различия оказались статистически незначимыми.
В то же время обращает внимание разнонаправленная динамика параметров в Т-клеточном звене лимфоцитов у больных во 2-й (^CD3) и в 3-й (Î CD3) подгруппах до и после хирургического лечения в зависимости от исходных субпопуляционных нарушений. Полученные нами результаты в очередной раз свидетельствует об адекватности дифференцированного подхода и разделения больных на подгруппы при анализе данных, что неизбежно нивелируется при оценке всей группы пациентов.
Дополнительным иммунологическим маркером, характеризующим функциональный статус Т-клеток, является экспрессия на мембране Т-лимфоцитами CD3 антигена гистосовместимости II класса HLA-Dr [17]. Оказалось, что количество активированных CD3 + HLA-Dr+ Т-лимфоцитов в целом по группе статистически значимо превышает таковое в контрольной группе и до, и после операции — 5,2 ± 0,9, 10,1 ± 1,2 и 12,6 ± 1,5% соответственно. Анализ в подгруппах позволил выявить, что активированный Т-клеточный фенотип имеется у больных во всех подгруппах, однако он наиболее выражен у пациенток с нормальным содержанием клеток CD3 до хирургического лечения — 12,8 ± 2,3%; после хирурги-
Таблица 5
Субпопуляционная структура Т-клеточного звена иммунитета первичных больных РЯ до и после хирургического лечения в зависимости от исходного количества Т-клеток CD3 + , % (М ± т)
Маркер Подгруппы
1-я (N CD3) 2-я (ÍCD3) 3-я (ÎCD3) доноры
Т-клетки CD3+ до операции 68,5 ± 1,2 44,4 ± 3,9а 80,3 ± 2,2 73,9 ± 2,5
после операции 64,2 ± 3,4 54,5 ± 4,4а, б 72,2 ± 4,8
CD3+^D4+ до операции 32,4 ± 2,2а 23,2 ± 3,1а 46,2 ± 5,3 41,7 ± 2,9
после операции 32,9 ± 3,6 29,6 ± 3,8а 42,7 ± 7,5
CD3+/CD8+ до операции 29,8 ±3,0 13,3 ± 2,6а 28,6 ± 2,7 26,5 ± 1,4
после операции 25,1 ± 2,3 18,1 ± 3,2а 25,0 ± 3,2
CD3-/CD8+ до операции 10,1 ± 1,0 17,5 ± 2,5а 6,2 ± 1,4 7,5 ± 0,7
после операции 9,7 ± 1,1 14,6 ± 2,6а 9,0 ± 2,6
CD8+ до операции 40 ± 2,5а 30,8 ± 2,5 34,8 ± 3,7 34,0 ± 1,2
после операции 34,9 ± 2,2б 32,7 ± 3,2 34,1 ± 5,2
CD4/CD8 до операции 0,86 ± 0,1а 0,8 ± 0,1а 1,5 ± 0,3 1,2 ± 0,1
после операции 1,0 ± 0,1 1,0 ± 0,1 1,6 ± 0,4
а Статистически значимые различия по сравнению с показателями доноров (р < 0,05). б Статистически значимые различия в сравниваемых подгруппах до и после операции (р < 0,05).
Таблица 4
Субпопуляционная структура Т-клеточного звена иммунитета у первичных больных РЯ до и после хирургического лечения, % антигенположительных клеток (М ± т)
Маркер До операции После операции Доноры
СD3 + 62,5 ± 3,1а 61,8 ± 2,7а 73,9 ± 2,5
CD3+/СD4+ 32,0 ± 2,4а 34,5 ± 2,8а 41,7 ± 2,9
CD3+/CD8+ 23,7 ± 2,2 21,5 ± 1,7 26,5 ± 1,4
CD3-/CD8+ 11,9 ± 1,3 11,6 ± 1,2 7,5 ± 0,7
CD8+ 35,6 ± 1,7 33,1 ± 1,7 34,0 ± 1,2
CD4/CD8 0,97 ± 0,1 1,2 ± 0,1 1,2 ± 0,1
а Статистически значимые различия по сравнению с показателями доноров (р < 0,05).
В 3-й подгруппе больных с исходно повышенным количеством Т-лимфоцитов CD3 через 2 нед после операции наблюдалось снижение уровня маркеров субпопу-
ческого лечения — 14,5 ± 2,8%), а у больных с исходно повышенным уровнем CD3 данные оказались лишь незначительно выше показателей у доноров (до хирургического лечения — 6,5 ± 2,0%; после хирургического лечения — 8,0 ± 1,6%).
Таким образом, полученные нами результаты свидетельствуют о значимости оценки уровня линейных маркеров лимфоидных клеток и субпопуляционной структуры Т-клеточного звена иммунитета у больных первичным РЯ. Результаты использования дифференцированного анализа в подгруппах больных в зависимости от исходного уровня линейных показателей отражают целесообразность и оправданность данного приема, что особенно важно в случаях значительного разброса границ минимальных и максимальных значений, а также при анализе данных о немногочисленных пациентках.
ЛИТЕРАТУРА
1. Результаты применения полиоксидония у больных раком молочной железы / Артамонова Е. В., Короткова О. В., Заботина Т. Н., Феденко А. А., Кадагидзе З. Г., Манзюк Л. В. // Матер. Всерос. науч.-практ. конф. «Отечественные противоопухолевые препараты». — М., 2005. — Т. 4, № 1. — С. 96—97.
2. T-Cell Immunity to the Folate Receptor Alpha Is Prevalent in Women With Breast or Ovarian Cancer / Knutson K. L., Krco C. J, Erskine C. L., Goodman K., Kelemen L. E., Wettstein P. J., Low P. S., Hartmann L. C., Kal-li K. R. // J. Clin. Oncol. — 2006. — Vol. 24. — P. 4254—4261.
3. Jewett1 A., Head C., Cacalano N. A. Emerging Mechanisms of Immunosuppression in Oral Cancers // J. Dent. Res. — 2006. — Vol. 85, N 12. — P. 1061—1073.
4. Spontaneous apoptosis of CD8+ T lymphocytes in peripheral blood of patients with advanced melanoma / Saito T., Dworacki G., Gooding W., Lotze M. T., Whiteside T. L. // Clin. Cancer. Res. — 2000. — Vol. 6. — P. 1351—1364.
5. Frey A. B., Monu N. Effector-phase tolerance: another mechanism of how cancer escapes antitumor immune response // J. Leukoc. Biol. — 2006. — Vol. 79. — P. 652—662.
6. Canadian Guidelines for Flow Cytometric Immunophenotyp-ing // Cytometry. — 2001. — Vol. 46. — P. 121—214.
7. Keeney M., Barnett D., Gratama J. W. Impact of standartization on clinical cell analysis by flow cytometry // J. Biol. Regul. Homeost. Agents. — 2004. — Vol. 18, N 3—4. — P. 305—312.
8. ВИЧ-инфекция // Информ. бюл. — М., 2006. — № 28. — С. 24.
9. An Italian national multicenter study for the definition of reference ranges for normal values of peripheral blood lymphocyte subsets in healthy adults / Santagostino A., Garbaccio G., Pistorio A., Bolis V., Camisasca G., Pagliaro P., Girotto M. // Haematologica. — 1999. — Vol. 84, N 6. — P. 499—504.
10. Фрейдлин И. С. Как читать иммунограмму // Соросовский образовательный журн. — 1997. — № 7. — С. 25—31.
11. The role of B7 costimulation in CD4/CD8 T cell homeostasis / Yu X., Fournier S., Allison J. P., Sharpe A. H., Hodes R. J. // J. Immunol. — 2000. — Vol. 164. — P. 3543—3553.
12. Hernberg M., Muhonen T., Pyrhonen S. Can the CD4+/CD8+ ratio predict the outcome of interferon-a therapy for renal cell carcinoma? // Ann. Oncol. — 1997. — Vol. 8. — P. 71—77.
13. Selective expansion and partial activation of human NK cells and NK receptor-positive T-cells by IL-2 and IL-15 / Dunne J., Lynch S., O'Farrelly C., Todryk S., Hegarty J. E., Feighery C., Doherty D. G. // J. Immunol. — 2001. — Vol. 167, N 6. — P. 3129—3138.
14. LFA-1 signaling through p44/42 is coupled to perforin degranulation in CD56 + CD8+ natural killer cells / Perez O. D., Mitchell D., Jager G. C., Nolan G. P. // Blood. — 2004. — Vol. 104. — P. 1083—1093.
15. Influence of interleukin-15 on CD8+ natural killer cells in human immunodeficiency virus type 1-infected chimpanzees / Rodriguez A. R., Arulanandam B. P., Hodara V. L., McClure H. M, Cobb E. K., Salas M. T., White R., Murthy R. R. // J. Gen. Virol. — 2007. — Vol. 88. — P. 641—651.
16. Use of human CD3 monoclonal antibody for accurate CD4+ and CD8+ lymphocyte determinations in macaques: phenotypic characterization of the CD3-CD8+ cell subset / Ibegbu C., Brodie-Hill A., Kour-tis A. P., Carter A., McClure H., Chen Z. W., Nahmias A. J. // J. Med. Pri-matol. — 2001. — Vol. 30, N 6. — P. 291—298.
17. Хаитов Р. М., Алексеев Л. П. Система генов HLA и регуляция иммунного ответа // Аллерг. астма и клин. иммунол. — 2002. — № 8. — С. 7—16.
Поступила 14.09.2009
Tatiana Nikolayevna Zabotina1, Olga Vitalievna Korotkova2,
Anna Anatolievna Borunova3, Natalia Yurievna Ocheyeva4, Ivan Igorevich Bokin5, Kirill Iosifovich Zhordania6, Igor Valerianovich Panichenko7,
Vladimir Yurievich Selchuk8, Victor Vasilievich Kuznetsov9,
Zaira Grigorievna Kadagidze10
LYMPHOCYTE SUBSET STRUCTURE IN PATIENTS WITH OVARIAN CANCER
1 MD, PhD, DSc, Leading Researcher, Tumor Clinical Immunology Laboratory, Clinical Oncology Research Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, 115478, Russian Federation)
2 MD, PhD, DSc, Senior Researcher, Tumor Clinical Immunology Laboratory, Clinical Oncology Research Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, 115478, Russian Federation)
3 MD, PhD, Senior Researcher, Tumor Clinical Immunology Laboratory, Clinical Oncology Research Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, 115478, Russian Federation)
4 Clinical Laboratory Diagnosis Physician, Tumor Clinical Immunology Laboratory, Clinical Oncology Research Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, 115478, Russian Federation)
5 Postgraduate Student, Chair of Oncology, RMAPE (1/2, Barrikadnaya ul., Moscow, 123995, Russian Federation)
6 MD, PhD, Professor, Leading Researcher, Gynecology Department, Clinical Oncology Research Institute,
N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, 115478, Russian Federation)
7 MD, PhD, Senior Researcher, Radiosurgery Department, Clinical Oncology Research Institute,
N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, 115478, Russian Federation)
8 MD, PhD, Head. Physician, N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, 115478, Russian Federation.)
9 MD, PhD, Head, Gynecology Department, Clinical Oncology Research Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, 115478, Russian Federation.)
10 MD, PhD, Head, Tumor Clinical Immunology Laboratory, Clinical Oncology Research. Institute,
N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, 115478, Russian Federation)
Address for correspondence: Zabotina Tatiana Nikolayevna, Tumor Clinical Immunology Laboratory, Clinical Oncology Research Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS,
24, Kashirskoye sh., Moscow, 115478, Russian Federation; e-mail: [email protected]
The paper analyses results of immunophenotyping peripheral blood lymphocyte subsets in 35 patients with primary ovarian cancer before and after surgical treatment. The patients presented with impaired linear structure of peripheral lymphocytes as compared to healthy donors. Surgical treatment had no effect on changes in distribution of principal lymphocyte subsets in general patient population. Patient grouping and analysis of results with respect to baseline CD3 levels discovered that only 42.9% of patients had normal counts of CD3 T-cells (group 1) at baseline, the baseline counts were decreased in 35.7% (group 2) and increased in 21.4% (group 3). Following surgical treatment patients from groups 2 and 3 demonstrated a statistically significant changes leading to normal levels of both NK- and T-cells. However, analysis of lymphoid cell structural characteristics in general patient population failed to find such changes. Besides, 78.5% of primary ovarian cancer patients had their CD4/CD8 balance impaired already before start of specific treatment. Analysis of T-cell subsets with respect to baseline CD3 levels found differently directed changes in group 2 (^CD3) vs. group 3 (TCD3) before and after surgical treatment with respect to baseline subset abnormalities. Activated (CD3 + HLA-Dr + ) T-cell phenotype was found in all patient groups though was more marked in patients with normal CD3 levels, while in patients with initially increased CD3 levels it was slightly higher than that in donors.
Key words: primary ovarian cancer, cellular immunity.
