CC BY
95
4. Земсков В.М., Земсков А.М. Принципы дифференцированной иммунокоррекции // Иммунология. -1996. - №3. - С.4-6.
5. Лазарева Д.Н., Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета. -М., 1985.-256 с.
6. Петров Р.В., Хаитов P.M., Чередеев А.Н. и др. Иммунофармакологические подходы к оценке иммуномодуляторов // Иммуномодуляторы. - М., 1987. - С.9-10.
7. Фрейдлин И.С. Использование культуры мышиных перитонеальных макрофагов в качестве модели для изучения клеток мононуклеарной фагоцитарной системы организма и их изменений под влиянием биологически активных веществ / Методические рекомендации. - Л., 1976. - С.8-10.
8. Cunningham A.J. A method of increased sensitivity for detecting single antibodyforming cells // Nature. -1965. - Vol.207. -N.5001. - P. 1106-1107.
G ФЕДОСЕЕВА Г.М., ЛАВРУШИНА Д.А., КАХЕРСКАЯ Ю.С., ФЕДОСЕЕВ А.П., МИРОВИЧ В.М. -УДК 581.6:582.912.3:581.9
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ ФИТОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ РАСТЕНИЙ СЕМЕЙСТВА ГРУШАНКОВЫХ, ПРОИЗРАСТАЮЩИХ В ВОСТОЧНОЙ СИБИРИ НА СОДЕРЖАНИЕ ПОЛИФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ
Г. М. Федосеева, Д. А. Ааврушшш, Ю.С. Кахерская, А.П. Федосеев, В.М. Мирович.
(Иркутский государственный медицинский университет, ректор - акад. МТА и АН B1I1 д.м.п., проф. A.A. Майборода, кафедра фармакогнозии и ботаники, зав. каф. - проф. Г.М. Федосеева.)
Резюме. Изучен качественный состав суммы полифенольных соединений Pyrola rotundifolia L. и Orthilia secunda L. Выделены и идентифицированы флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты и дубильные вещества.
Растения семейства грушанковых (Pyrolaceae) широко распространены на территории Восточной Сибири, в том числе и Иркутской области. Наиболее популярными из них и издавна используемыми в тибетской и народной медицине являются грушанка круглолистная (Pyrola rotundifolia L.) и ортилия однобокая (Orythilia secunda L.).
Оба растения используются в народной медицине в качестве противовоспалительных, кровоостанавливающих и ранозаживляющих средств при гинекологических заболеваниях, заболеваниях почек, мочевого пузыря, воспалениях полости рта, гингивитах, стоматитах, а также как камнерастворяющие средства [6,7,13,14].
Исследованиями, проведёнными в ИГМУ, Алтайском государственном медицинском университете, Отделе тибетской медицины Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (г. Улан-Удэ) выявлена антимикробная активность, а также диуретическое и противовоспалительное действие водных и водно-спиртовых извлечений (в виде отваров, настоек и экстрактов) из указанных растений [2,5,8,9,10,11].
Предварительный фитохимический анализ показал, что в надземных органах грушанки и орти-лии содержатся биологически активные соединения полифенольного характера (флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, дубильные вещества, простые фенолы и др.), которые являются основными действующими веществами этих растений. [12].
Литературные данные свидетельствуют о том, что состав суммы полифенолов растений семейства грушанковых значительно варьирует в зависимости от географического распространения и мест обитания растений [1,3,8,10].
В связи с вышеизложенным целью настоящей работы явилось сравнительное исследование качественного состава суммы полифенольных соединений грушанки круглолистной и ортилии однобокой, произрастающих в Иркутской области.
Материалы и методы
Материалом для изучения служила надземная часть указанных растений (трава), собранная в сентябре месяце в окрестностях с.Рязанщина и п.Ново-Грудинино Иркутской области. Собранное сырьё подвергали сушке, измельчали до частиц размером 1-3 мм и из него получали извлечение, содержащее сумму биологически активных веществ (БАВ) полифенольного характера.
Опытным путём было установлено, что поли-фенольные соединения грушанки и ортилии полностью извлекаются с помощью 60% этанола при нагревании на кипящей водяной бане, трёхкратно по 30 минут, при соотношении сырья и экстрагента- 1:50.
Извлечения, полученные из 500,0 г сырья объединяли, сгущали под вакуумом и очищали от пигментов и смол с помощью хлороформа.
Одну половину очищенного извлечения разбавляли водой и последовательно экстрагировали в делительной воронке этилацетатом и бутанолом. Полученные фракции разделяли на колонках с силикагелем с использованием различных систем растворителей. Окончательную очистку индивидуальных соединений проводили кристаллизацией.
Выделенные вещества идентифицировали бумажно-хроматографическим методом, на основании спектральных данных и прямым сравнением с известными образцами ("свидетелями") флавоно-идных соединений и фенолкарбоновых кислот.
Вторую половину извлечения исследовали на содержание дубильных веществ и простых фенолов.
Качественный анализ дубильных веществ проводили с помощью общепринятых методик [12]. При этом использовали качественные реакции, позволяющие не только установить наличие этих веществ в растении, но и определить к какой группе они относятся (осаждение желатином, реакции с 1% раствором квасцов железо-аммоние-вых, с бромной водой и 10% раствором кислоты уксусной, солыо свинца ацетата среднего и др.). Наличие простых фенолов в виде фенологликози-дов было установлено в грушанке и ортилии с помощью качественных реакций и методом тонкослойной хроматографии. Качественными реакциями на простые фенолы являются реакции с железа закисного сульфатом и натрием фосфорно-молибденовокислым.
В дальнейшем для установления природы фе-нологликозида была использована тонкослойная хроматография. Для проведения хроматографического исследования извлечение из сырья обрабатывали свинца ацетатом основным для осаждения флавоноидов и дубильных веществ. Хроматографирование проводили на пластинках "8Пи1о1" в системе хлороформ-этанол в соотношении (7:3) с последующей обработкой 10% спиртовым раствором натрия хлорида и раствором Паули (свежеприготовленный диазореактив). Фенологликозиды окрашивались в малиновый цвет. В качестве "свидетелей" использовали арбутин - стандарт и водно-спиртовое извлечение из толокнянки, содержащей арбутин и другие фенологликозиды [4, ' 12].
УФ - спектральная характеристика
Исследование и идентификацию флавоноидов и фенолкарбоновых кислот осуществляли с помощью бумажной и колоночной хроматографии, а также УФ и ИК - спектроскопии, кислотного гидролиза, по температуре плавления выделенных веществ в сравнении с их достоверными образцами.
Результаты и обсуждение
Результаты проведённого качественного анализа показали, что в грушанке круглолистной и ортилии однобкой присутствуют как гидролизуемые, так и конденсированные дубильные вещества, относящиеся к группе смешанных танидов.
Из простых фенольных соединений в надземных органах этих растений обнаружены арбутин и метиларбутин.
С помощью бумажной и колоночной хроматографии из надземной части грушанки круглолистной было выделено 7 веществ флавоноидной природы и одна фенолокислота (галловая), а из ортилии однобокой 5 флавоноидов и 2 кислоты (галловая и синаповая).
В ИК - спектрах выделенных флавоноидов обнаружены полосы поглощения, характерные для ароматической части флавоноидных соединений: 1628-1495 см"1 (скелетные колебания ароматических колец); 3540-3250 см"1 (фенольные гидроксилы); 1685-1615 см"1 (карбонильная группа пирона). При помощи качественных реакций с алюминия хлоридом и кислотой лимонной, по окраске пятен на хроматограммах, флюорисценции их в УФ - свете до- и после проявления различными хромогенными реактивами была установлена принадлежность выделенных веществ к группе флавонолов [4].
Таблица 1.
флавоноидов грушанки круглолистной
2x10 5 М раствор в абсолютном этаноле
Вещества Полосы поглощения без реактива +ацетат натрия +борная кислота и ацетат натрия +этилат натрия +ашоминия хлорид алюминия хлорид и хлористоводородная кислота
Хтак АХ Хтак АХ Хтак АХ Хтак М. Хтак АХ Хтак АХ
А- 1 I 380 395 15 405 25 300 -80 466 86 465 85
II 255 270 пл. 260 5 256 1 255 0 280 25 280 25
А - 2 I 367 383 16 383 16 317 -50 403 36 419 52
II 265 270 5 270 5 270 5 279 14 288 23
Ф- 1 I 368 388 20 395 27 428 60 413 40 368 0
II 258 270 пл. 260 2 260 2 260 2 260 11 259 1
Ф - 2 I 360 360 0 375 15 408 48 405 45 362 2
II 258 298 пл. 265 пл. 269 11 262 4 271 13 272 14 259 1
Ф - 3 I 350 359 9 350 405 55 400 50 350
II 257 271 14 257 277 20 266 9 265 8
Ф - 4 I 355 380 25 373 18 299 пл. -56 430 75 355
II 258 298 пл. 272 14 261 298 пл. 3 260 2 270 310 пл. 12 259 1
Ф - 5 I 355 262 7 364 9 414 59 405 50 355
II 255 270 15 269 14 282 12 257 2 252 -3
Таблица 2.
УФ - спектральная характеристика флавоноидов ортилии однобокой
2x10 " М раствор в абсолютном этаноле
Вещества Полосы поглощения без реактива +ацетат натрия +борная кислота и ацетат натрия +этилат натрия +ашоминия хлорид алюминия хлорид и хлористоводородная кислота
X шах АХ X max АХ X max АХ /апах АХ Хтах АХ X max АХ
А- 1 I п 372 255 268 пл. 392 257 20 2 395 256 23 1 317 257 -70 414 42 264 9 307 255 42
А - 2 I II 367 265 307 269 10 4 367 265 307 -60 407 40 267 14 407 267 40 14
А - 3 I II 371 257 298 пл. 394 264 325 пл. 274 пл. 23 7 388 262 17 5 317 263 -54 6 451 80 272 15 451 257 80
Ф- 1 I II 357 258 269 пл. 369 273 12 15 385 273 28 15 396 288 39 30 412 55 287 29 412 287 55 29
Ф - 2 I II 356 264 369 267 13 3 356 264 421 276 61 12 388 32 276 12 388 276 32 12
Результаты изучения физико-химических свойств, спектральных характеристик и хроматографического поведения выделенных соединений представлены в таблицах 1 и 2. Как свидетельствуют данные таблиц, в составе суммы флавоноидов грушанки круглолистной присутствуют агли-коны А1 - кверцетин и А2 - кемпферол, а также гликозиды Ф1 - гиперозид (кверцетин-З - о-(3-0 -галактопиранозид); Ф2 - кверцетин-7 - о-й-Б -ксилопиранозид; ФЗ - астрагаліні (кемпферол-3 -о-р-Б - глюкопиранозид); Ф4 - мирицетин-З - о-а-Ь - рамнофуранозид и Ф5 - изорамнетин-3 - о-а-Ь - глюкопиранозид.
В ортилии однобокой обнаружены агликоны кверцетин, кемпферол и мирицетин, а флавоноид-ные гликозиды идентифицированы как Ф1 - кверцитрин (3- о-а-Ь - рамнозид кверцетина) и Ф2 -астрагалин (3 - О-Р-Б - глюкопиранозид кемпфе-рола).
Таким образом, отличие состава суммы флавоноидов исследуемых растений заключается в том, что в грушанке круглолистной содержится больше по количеству компонентов флавоноид-ных гликозидов, отличающихся по своей структуре и являющихся производными агликонов квер-
цетина, кемпферола, изорамнетина и мирицетина. В ортилии же однобокой кроме агликонов кверцетина и кемпферола обнаружен третий агликон (АЗ - мирицетин).
Несмотря на отличие компонентного состава суммы флавоноидов грушанки круглолистной и ортилии однобокой структура этих компонентов во многом идентична. Почти все они являются производными агликонов кверцетина и кемпферола.
В заключение необходимо отметить, что наряду с дубильными веществами, фенолкарбоновыми кислотами, простыми фенолами и другими полифенолами флавоноидные соединения, установленной нами структуры являются активными антиоксидантами растительного происхождения обладающие антимикробным, противовоспалительным, кровоостанавливающим и ранозаживляющим действием.
Следовательно, применение в народной медицине грушанки круглолистной и ортилии однобокой вполне обосновано, что подтверждается фармакологическими и клиническими исследованиями, проводимыми ранее и в настоящее время [2,3, 8,9,10,11].
THE COMPARATIVE PHYTOCHEMTCAL ANALYSTS OF THE CONTENT OF POLYPHENOL COMPOUNDS TN THE PLANTS OF THE FAMTLY PYROLA ROTUNDTFOLTA L,
GROWTNG TN EAST STBERTA
G.M. Fedoseeva. D.A. Lavrushina, U.S. Kakherskaya, A.P. Fedoseev, V.M. Mirovich.
(Irkutsk Slate Medical University)
Studied are the quality & components of Polyphenols bond Pyrola rotundifolia L. and Orthilia secunda L. There have been identified flavonoids, fenolcarbolic acid and tanids.
Литература
І.Баясгалан Б., Одонтуяа Г., Цэцэгмаа С., Дунгэр-дорж Д., Дариймаа X., Цэндээхуу Д. Фармакогно-стическое и фитохимическое исследование гру-
шанки красной (Pyrola incarnata (DC. Freyn), произрастающей в Монголии // Сиб. мед. журнал. -2002. - Т.34, №5. - С.76-78.
2. Ботоева Е.А., Баханова Е.М. Антимикробная активность экстракта ортилии однобокой // Сб. статей молодых учёных и специалистов. - Томск, СГМУ, 2002. - С.204-205.
3. Кулеш Н И., Красовская Н.П., Горовой П.Г., Максимов О.Б. Особенности химического состава двух видов Р. Руго1а Ь. на северных границах ареалов // Растительные ресурсы. - 1988. - Т.XXIV, Вып.З. -С.420-424.
4. Максютина Н.П., Литвиненко В.И. Методы выделения и иследования флавоноидных соединений // Фенольные соединения и их биологические функции. - М.: Наука, 1968. - С.7-26.
5. Пензина Т.Н. Фармакологическая активность некоторых растений семейства грушанковых: Автореферат дисс. ... канд. биол. наук/Т.Н. Пензина. -Барнаул, 1999.-24 с.
6. Телятьев В В. Полезные растения Центральной Сибири / ВВ. Телятьев. - Иркутск: Вост. Сиб. кн. изд-во, 1987. - С. 188-191.
7. Тахтаджян А.П. Систематика и филогения цветковых растений. - М.-Л.: Наука, 1966. - С.221-223.
8. Федосеева Г.М., Куклина Л.Б., Изатулин В.Г., Красникова И.М. Фармакологическое и химическое исследование ортилии однобокой // Тез. докл. науч. практ. конф. - Улан-Удэ, 1997. - С.57-58.
9. Федосеева Г.М., Куклина Л.Б., Четверякова Т.Д. и др. Терапия инфекционного и асептического воспалительного процесса в эксперименте // Жур. ин-фек. патологии. - Иркутск, 1998. - Т.5, №1. - С.24-25.
10. Федосеева Г.М., Мирович В.М., Федосеев А.П., Дроздова Н.В. Фитохимическое и биологическое исследование грушанки круглолистной // Сб. науч. тр. НИМФ. - М., 2000. - Т.XXXIX, 4.2. - С.285-
288.
11. Федосеева Г.М., Дроздова Н.В., Федосеев А.П. и др. Сравнительное биолого-фитохимическое исследование растении семейства грушанковых как перспективных источников новых лекарственных средств растительного происхождения // Матер, межд. науч. конф. - Томск, 2000. - С.64-65.
12. Химический анализ лекарственных растений / Под редакцией Н.И. Гринкевич и Л.Н. Сафронич. - М.: Высшая школа, 1983. - 176 с.
13. Шретер А.И. Лекарственная флора Советского Дальнего Востока. - М.: Медицина, 1975. - С.212-213.
14. Шретер А.И. Поиск и изучение новых лекарственных растений. - М.: Знание, 1980. - С.67.
© НИКОЛАЕВ С.М., САМБУЕВА З.Г., ЦЫРЕНЖАПОВ A.B., ЧЕХИРОВА Г.В. -УДК 616.36-002.1:615.32
ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ ВЛИЯНИЕ "ГЕПАТОФИТА" ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ГЕПАТИТЕ
С.М. Николаев, З.Г. Самбуева, A.B. Цыренжапов, Г.В. Чехирова.
(Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, г.Улан-Удэ, директор - чл.-корр. РАН, проф. В.М. Корсунов)
Резюме. В экспериментах на белых крысах-самцах линии Wistar при CCL, - гепатите установлена выраженная фармакотерапевтическая эффективность сухого экстракта, полученного из фитосбора "7 драгоценных" ("нор-бу-дун-тан"), применяемого в практике тибетской медицины при заболеваниях печени, и условно названного "гепатофитом". Курсовое лечебно-профилактическое введение "гепатофита" в экспериментально-терапевтической дозе 0,1 г/кг массы при экспериментальном гепатите сопровождается ингибированием процессов ПОЛ, уменьшением явлений цитолиза и холестаза, а также стимуляцией дезинтоксикационной и желчевыделительной функции печени.
Ключевые слова: экспериментальный гепатит, (токсический гепатит, ССЦ), ПОЛ, цитолиз, хо-лестаз, желчь, "гепатофит".
По данным письменных источников традиционной медицины [7,12,13] многокомпонентный фитосбор "7 драгоценных" ("нор-бу-дун-тан"), состоящий из девясила высокого, софоры желтоватой, имбиря лекарственного, бузины сибирской, кровохлебки лекарственной, боярышника кроваво-красного и яблони ягодной, применяется при заболеваниях печени. Учитывая популярность и выраженную эффективность данного средства при заболеваниях печени, из указанного сбора с использованием экстракционной технологии получен сухой экстракт [11], условно названный "гепатофитом". Последние три вида из сбора являются заменителями тибетского растительного сырья - миробалана хебула, миробалана беллерического и эмблики лекарственной соответственно. Обоснование правомерности замены тибетских лекарственных растений видами местной флоры проводилось экспериментально, для чего ис-
пользовали правило подобия, а именно: подобия химического состава и фармакологической активности извлечений или препаратов из указанных растений.
Материалы и методы Эксперименты проведены на белых крысах линии \Vistar обоего пола с массой 180-210 г, которые были разделены на 4 группы. Токсическое повреждение печени у крыс трех групп вызывали подкожным введением 50% (у/у) масляного раствора четыреххлористого углерода (СС14)в объеме 0,4 мл на 100 г массы крыс 1 раз в сутки в течение 4 дней. С лечебно-профилактической целью крысам первой группы интрагастрально вводили "гепатофит" в дозе 0,1 г/кг массы (экспериментально-терапевтическая доза) в виде водного раствора 1 раз в сутки в течение 10 дней, начиная со 2-го дня опыта. В аналогичном режиме крысам 2-ой группы вводили холосас
