CC BY
67
Лекарственные растения
О НИКОЛАЕВ С.М., ХОВРАХОВА В.Б.. ДАМБЫН Ц.-А., ТИМУРБААТОР Н„ БУРАЕВА Л.Б. -УДК 615.32: 612.017.1
ИММУННОМОДУЛИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА НАСТОЯ ЦВЕТКОВ ЛИЛИИ МАЛОРОСЛОЙ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ИММУНОДЕПРЕССИИ
С.М. Николаев, В.Б. Хобракова. Ц.-Л. Дачбын.', Н. Тимурбаатор'. Л.Б. Бураева.
(Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, г.Улан-Удэ, директор - чл.-корр. РАН, проф. В.М. Корсунов; 1 - Монгольский государственный медицинский университет, г. Улан-Батор, ректор - проф. Ц. Лхагвасурэн)
Резюме. В опытах на мышах линий СВА и Рі (СВАхС57В1/6) установлена иммунокорригирующая активность настоя цветков лилии малорослой в объеме 10 мл/кг в условиях азатиоприно-вой иммунодепрессии, которая выражалась в повышении показателей клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунного ответа.
Ключевые слова: иммунитет, иммунодефицит,
В настоящее время вследствие воздействия неблагоприятных экологических факторов, стрессовых ситуаций, применения некоторых лекарственных препаратов (в первую очередь глюкокор-тикоидов, антибиотиков, цитостатиков) иммуно-дефицитные состояния получили широкое распространение. Поэтому восстановление функциональной активности иммунной системы является непременным условием успеха комплексной терапии различных патологических состояний, поскольку почти любое заболевание, как правило, сопровождается развитием иммунодефицитных состояний [4]. Перспективным направлением представляется поиск иммуномодуляторов среди средств растительного происхождения, поскольку они имеют ряд преимуществ перед синтетическими: мягкое иммуномодулирующее действие, низкую токсичность, активацию функций не только иммунной, но и нервной и эндокринной систем благодаря наличию комплекса биологически активных веществ.
Объектом настоящего исследования явился настой цветков лилии малорослой. Лилия малорослая (низкая) или саранка, 1л1шт РитПит Бе1йе встречается в Монголии, главным образом в Хэнтийском аймаке, реже в Хангае и Прихубсу-гулье. Лилия малорослая содержит широкий спектр биологически активных веществ: флаво-ноиды (кемпферол, трифолин, кемпферол-3-0-(3 рутинозид), следы алкалоидов, каротиноиды, дубильные вещества, витамины К, С, В,, В;, Е, углеводы, липиды, белки, а также макро- и микроэлементы. Высокая эффективность средств из лилии малорослой при воспалительных процессах и злокачественных опухолях, а также использование в тибетской медицине цветков, стеблей и луковиц лилии в качестве главных составных компонентов в общеукрепляющих сборах предполагают наличие у нее иммуномодулирующей активности [3].
Целью настоящего исследования явилось определение иммуномодулирующих свойств настоя
азатиоприн, настой лилии малорослой.
цветков лилии малорослой (НЛМ) в условиях экспериментальной иммунодепрессии, вызванной цитостатиком азатиоприном.
Материалы и методы
Эксперименты проведены на мышах обоего пола линий СВА и F] (СВАхС57В1/6) массой 1820 г. Контролем служила группа мышей с иммунодефицитом, вызванным введением азатиоприна в дозе 50 мг/кг перорально 1 раз в сутки в течение 5 дней [5]. НЛМ вводили опытной группе мышей на фоне азатиоприна в объеме 10 мл/кг перорально ежедневно в течение 14 дней. Действие испытуемого средства на состояние клеточного звена иммунного ответа оценивали в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) [6], гуморального звена - по количеству антителообразующих клеток, определяемых методом локального гемолиза [8], макрофагального звена - по фагоцитозу перитонеальных макрофагов мышей в отношении Staphylococcus aureus in vitro, при этом оценивали следующие показатели фагоцитоза: активность (процент фагоцитирующих клеток из общего числа подсчитанных клеток) и интенсивность (среднее количество St. aureus, поглощенное одной клеткой) [7]. Полученные результаты обработаны статистическим методом с помощью критерия Стыодента [2].
Результаты и обсуждение
Наиболее распространенный подход к изучению гуморального иммунитета заключается в инициации процесса антигензависимой диффе-ренцировки предшественников антителообразующих клеток до В-клеток, продуцирующих антитела. Информативным показателем такой инициации может служить уровень антителообразующих клеток (АОК).
Введение азатиоприна животным вызывает снижение как абсолютного, так и относительного числа АОК на 46% по сравнению с данными в ин-тактной группе. При введении мышам НЛМ на фоне иммунодепрессии наблюдали увеличение
количества АОК как в абсолютных значениях, так и при расчете на 106 спленопитов в 1,7 и 2,1 раза, соответственно (рис.1).
т 350
Интакгная
Аз +НЛМ
Контроль (азатиоприн)
■■Абсол.кол-во АОК -«-Относит, кол-во АОК
Рис. 1. Влияние настоя цветков лилии малорослой на антител ообразовшше
Влияние НЛМ на состояние клеточного звена иммунного ответа определяли по реакции ГЗТ. Азатиоприновая иммунодепрессия проявилась в угнетении индекса реакции ГЗТ (ИР ГЗТ) на 22% по сравнению с таковым в интактной группе. При использовании НЛМ на фоне описанной выше иммуносупрессии наблюдалось повышение ИР ГЗТ в 1,5 раза относительно контроля (табл.1).
Таблица 1.
Влияние настоя цветков лилии малорослой на выраженность реакции гиперчувствительности замедленного типа
№ п/п Группы животных ИР ГЗТ, %
1 Интактная (п=8) 23,48±1,4
2 Контроль (Азатиоприн) (п=8) 18,24+1,1
3 Азатиоприн+НЛМ (п=8) 27,07+1,7*
Примечание: здесь и далее п - количество животных в группе, * - означает, что разница существенна (р<0,05) по сравнению с контролем.
мышей в отношении Staphylococcus aureus in vitro установлено, что испытуемое средство повышает показатели фагоцитоза относительно таковых у животных контрольной группы (табл.2).
Таблица 2.
Влияние настоя цветков лилии малорослой на функциональную активность перитонеальных макрофагов
№ п/п Г руппы Актив- ность Интен- сивность
1 Интактные макрофаги (п=8) 85,3±7,1 9,4±1,2
2 Контроль (Азатиоприн) (п=8) 41,8±1,7 4,3±1,0
3 Азатиоприн+НЛМ (п=8) 69,3±5,6* 7,5± 1,1
При введении в культуру клеток азатиоприна происходило подавление как активности, так и интенсивности фагоцитоза на 51% и 54%, соответственно, по сравнению с данными в интактной группе. А при внесении в культуральную среду ПМ НЛМ на фоне азатиоприна наблюдали увеличение активности и интенсивности фагоцитоза в 1,66 и 1,74 раза, соответственно, по сравнению с контролем (табл.2).
Следовательно, НЛМ обладает выраженными иммуномодулирующими свойствами при азатио-приновой иммунодепрессии, что выражается в восстановлении показателей клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунного ответа до уровня таковых у интактных животных. Эффект испытуемого средства, по-видимому, обусловлен содержанием в его составе флавонои-дов, каротиноидов, дубильных веществ, витаминов, макро- и микроэлементов, обладающих иммуномодулирующими свойствами [1].
Таким образом, полученные данные позволяют заключить, что настой цветков лилии малорослой является эффективным иммунокорригирующим средством, что аргументирует перспективность данного вида растительного сырья для получения новых иммуномодулирующих препаратов.
При исследовании влияния НЛМ на функциональную активность перитонеальных макрофагов
TMMUNOMODULATING PROPERTIES OF THE TNFUSTON OF LIUUM PUMILUMDELITE TN
EXPERIMENTAL TMMUNODEPRESSTON
S.M. Nikolaev, V.B. Khobrakova, Tz.-A. Dambyn1, N. Timurbaator1, L.B.Buraeva
(Institute for General and Experimental Biology, Siberian Department of RAS, Ulan-Ude;
' - National Medical University ofMongolia, Ulan-Bator)
The immune correcting activity ofthe infusion ofLilium Pumilum Delite in immunodepression induced by azatioprin has been established in experiments on the CBA and F] (CBAxC57/Bl/6) mice. The infusion ofLilium Pumilum in the volume of 10 ml/kg increased indices ofthe cellular, humoral and macrophagal chains of the immune response.
Литература
1.Бакуридзе А.Д., Курцикидзе M.LLL, Писарев В.М. и др. Иммуномодуляторы растительного происхож-дения//Хим.-фармац. журн. - 1993. -№8-С.43-47.
2. Беленький МЛ. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. - Л., 1963. - 107 с.
3. Дамбын Ц.-А. Фармакологические свойства настоя цветков лилии малорослой и его влияние на систему свертывания крови при токсическом гепатите // Дис. ... канд. мед. наук. - Улан-Удэ, 2001. - 127 с.
4. Земсков В.М., Земсков А.М. Принципы дифференцированной иммунокоррекции // Иммунология. -1996. - №3. - С.4-6.
5. Лазарева Д.Н., Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета. -М., 1985.-256 с.
6. Петров Р.В., Хаитов P.M., Чередеев А.Н. и др. Иммунофармакологические подходы к оценке иммуномодуляторов // Иммуномодуляторы. - М., 1987. - С.9-10.
7. Фрейдлин И.С. Использование культуры мышиных перитонеальных макрофагов в качестве модели для изучения клеток мононуклеарной фагоцитарной системы организма и их изменений под влиянием биологически активных веществ / Методические рекомендации. - Л., 1976. - С.8-10.
8. Cunningham A.J. A method of increased sensitivity for detecting single antibodyforming cells // Nature. -1965. - Vol.207. -N.5001. - P. 1106-1107.
© ФЕДОСЕЕВА Г.М., ЛАВРУ ШИН А Д.А., КАХЕРСКАЯ Ю.С., ФЕДОСЕЕВ А.П., МИРОВИЧ В.М. -УДК 581.6:582.912.3:581.9
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ ФИТОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ РАСТЕНИЙ СЕМЕЙСТВА ГРУШАНКОВЫХ, ПРОИЗРАСТАЮЩИХ В ВОСТОЧНОЙ СИБИРИ НА СОДЕРЖАНИЕ ПОЛИФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ
Г.М. Федосеева. Д. Л. Лавруишна. Ю.С. Кахерская. Л.П. Федосеев. В.М. Мирович.
(Иркутский государственный медицинский университет, ректор - акад. МТА и АН В1Л д.м.п., проф. А.А. Майборода, кафедра фармакогнозии и ботаники, зав. каф. - проф. Г.М. Федосеева.)
Резюме. Изучен качественный состав суммы полифенольных соединений Руго1а гоШшНГоНа Ь. и ОпЫНа 8есиш1а Ь. Выделены и идентифицированы флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты и дубильные вещества.
Растения семейства грушанковых (Руго1асеае) широко распространены на территории Восточной Сибири, в том числе и Иркутской области. Наиболее популярными из них и издавна используемыми в тибетской и народной медицине являются грушанка круглолистная (Руго1а гоШжНГоНа Ь.) и ортилия однобокая (ОгуйпНа 8есиш1а Ь.).
Оба растения используются в народной медицине в качестве противовоспалительных, кровоостанавливающих и ранозаживляющих средств при гинекологических заболеваниях, заболеваниях почек, мочевого пузыря, воспалениях полости рта, гингивитах, стоматитах, а также как камнерастворяющие средства [6,7,13,14].
Исследованиями, проведёнными в ИГМУ, Алтайском государственном медицинском университете, Отделе тибетской медицины Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (г. Улан-Удэ) выявлена антимикробная активность, а также диуретическое и противовоспалительное действие водных и водно-спиртовых извлечений (в виде отваров, настоек и экстрактов) из указанных растений [2,5,8,9,10,11].
Предварительный фитохимический анализ показал, что в надземных органах грушанки и орти-лии содержатся биологически активные соединения полифенольного характера (флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, дубильные вещества, простые фенолы и др.), которые являются основными действующими веществами этих растений. [12].
Литературные данные свидетельствуют о том, что состав суммы полифенолов растений семейства грушанковых значительно варьирует в зависимости от географического распространения и мест обитания растений [1,3,8,10].
В связи с вышеизложенным целью настоящей работы явилось сравнительное исследование качественного состава суммы полифенольных соединений грушанки круглолистной и ортилии однобокой, произрастающих в Иркутской области.
Материалы и методы
Материалом для изучения служила надземная часть указанных растений (трава), собранная в сентябре месяце в окрестностях с.Рязанщина и п.Ново-Грудинино Иркутской области. Собранное сырьё подвергали сушке, измельчали до частиц размером 1-3 мм и из него получали извлечение, содержащее сумму биологически активных веществ (БАВ) полифенольного характера.
Опытным путём было установлено, что поли-фенольные соединения грушанки и ортилии полностью извлекаются с помощью 60% этанола при нагревании на кипящей водяной бане, трёхкратно по 30 минут, при соотношении сырья и экстрагента- 1:50.
Извлечения, полученные из 500,0 г сырья объединяли, сгущали под вакуумом и очищали от пигментов и смол с помощью хлороформа.
Одну половину очищенного извлечения разбавляли водой и последовательно экстрагировали в делительной воронке этилацетатом и бутанолом. Полученные фракции разделяли на колонках с силикагелем с использованием различных систем растворителей. Окончательную очистку индивидуальных соединений проводили кристаллизацией.
Выделенные вещества идентифицировали бумажно-хроматографическим методом, на основании спектральных данных и прямым сравнением с известными образцами ("свидетелями") флавоно-идных соединений и фенолкарбоновых кислот.
