CC BY
184
№ 4 (8), 2014
Естественные науки. Биология
УДК 574:582.251.62:615.322:633.8
А. В. Митишев, Е. В. Преснякова, Е. Ф. Семенова, М. А. Гурина
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ШТАММОВ ПРОДУЦЕНТА И ИННОВАЦИОННОГО ПРОДУКТА КАК ОСНОВНЫХ ЭЛЕМЕНТОВ БИОТЕХНОЛОГИИ РЕЗИНОИДА ХЛОРЕЛЛЫ
Аннотация.
Актуальность и цели. Цель - исследование перспективных в отношении накопления биомассы штаммов СЫогвПа yu^ns и анализ инновационного ароматического продукта в сравнении с существующими стандартами.
Материалы и методы. Объектом исследования являлись суспензионные культуры СМоггИа yu^ns: штаммы ИФР С-66, ИФР С-111 и BIN. Материалом служила биомасса трех изучаемых штаммов в динамике роста. Использованы общепринятые методики анализа микроводорослей и аромапродуктов.
Результаты. Исследования с культурами СЫогвПа yu^ns ИФР С-111, С-66 и BIN позволили выявить наиболее продуктивный штамм. Сравнительная характеристика резиноидов различного происхождения показала, что практически по всем нормативным показателям они сходны между собой и соответствуют критериям качества, приведенным в ОСТ 18-229-75, СА8 №. 9000-50-4; 68606-93-9.
Выводы. Выявлено, что штамм СЫогвПа yulgагis BIN обладает наибольшей биосинтетической активностью: при культивировании в лабораторных условиях в 2-4 раза быстрее накапливает биомассу по сравнению со штаммами ИФР С-66, ИФР С-111. Комплексный анализ аромапродукта свидетельствует о возможности замены резиноида дубового мха резиноидом хлореллы по всем существующим в настоящее время направлениям его применения.
Ключевые слова: резиноид дубового мха, ароматический продукт, штаммы СЫогвПа уи^ат\ суспензионная альгокультура, ВЭЖХ-анализ, спектрофотометрический метод.
A. V. Mitishey, E. V. Presnyakova, E. F. Semenova, M. А. Gurina
COMPARATIVE ANALYSIS OF PRODUCER STRAINS AND INNOVATIVE PRODUCTS AS THE MAIN ELEMENTS OF THE BIOTECHNOLOGY OF CHLORELLA RESINOID
Absract.
Background. The main aim of the research is to investigate Ch^reth vulgaris strains, which are perspective for biomass accumulation, and to analyze an innovative fragrant product in comparison with functional standards.
Materials and methods. The suspension cultures of СЫокИа vulgaris strains IPP S-66, IPP S-111 and BIN were studied. The biomasses of these 3 strains were studied in dynamics. The methods common for the analysis of suspension microalgal cultures and fragrant products were used.
Results. The study of ^lorel1а vulgaris cultures IPP S-66, IPP S-111 and BIN enables to select the most productive strain. The comparative characteristics of resi-noids of different origins show that they are almost similar in accordance with all regulatory parameters, mentioned in OST 18-229-75, CАS №. 9000-50-4; 68606-93-9.
Conclusions. It was revealed that the ^lorel^ vulgaris strain BIN has the highest biosynthetical activity as in the process of its cultivation in laboratory conditions it accumulates the biomass 2-4 times quicker than strains IPP S-66, IPP S-111.
Natural Sciences. Biology
19
Известия высших учебных заведений. Поволжский регион
The complex analysis of fragrant products is the evidence of the possibility of the oakmoss resinoid replacement by the chlorella resinoid in all current directions of its application.
Key words: oakmoss resinoid, fragrant product, Chlorella vulgaris strains, suspension algal culture, HPLC-analysis, spectrophotometric method.
Введение
Резиноиды - душистые фиксаторы, используемые в качестве отдушек и красителей для пищевых, парфюмерных, косметических продуктов и товаров бытовой химии. Традиционным источником резиноида является «дубовый мох» или виды рода Evernia из семейства Usneaceae, относящегося к лишайникам Lichenes [1]. «Дубовый мох» является малотоннажным видом эфиромасличного и лекарственного растительного сырья. Получение резиноида в мире, в частности в России, по сравнению с концом XX в. снизилось втрое. Причина в том, что ресурсы лишайника в доступных местах быстро исчерпались. В связи с растущим спросом на этот натуральный продукт увеличивается интерес к альтернативным источникам его получения, а именно с применением биотехнологий.
Сравнительная оценка биохимического состава лишайников и микроводорослей указывает на то, что фенольные соединения этих организмов близки по составу [2], и микроводоросли могут являться источником рези-ноидов. На основе проведенных исследований с культурами микроскопических водорослей представляются особо важными дальнейшее изучение и внедрение в производство видов рода Chlorella как экономически целесообразных продуцентов [3, 4].
Виды и формы водорослей, относящиеся к роду Chlorella, в основном одноклеточные, мелкие, шаровидные или эллипсоидные. В 1890 г. датским ученым М. У. Бейеринком (Beijerinck) была открыта и классифицирована хлорелла. Некоторые исследователи отмечают 18 видов и форм рода Chlorella [5]. В лабораторных условиях в культуре изучены почти все формы и виды, однако в массовой культуре в полупроизводственных и производственных установках испытаны штаммы в основном двух видов, а из них чаще используется вид Chlorella vulgaris [6]. Однако не всегда исследователи пользуются штаммами, полученными из той или иной коллекции, в отдельных случаях предпочитают использовать изоляты непосредственно из природы. В окружающей среде представители рода Chlorella широко распространены. Их можно обнаружить в водоемах, почве и на коре деревьев. Далеко не все выделенные из природы виды, разновидности или штаммы могут отвечать требованиям производственного культивирования [7]. Для массового культивирования выгодно использовать виды и штаммы с широким экологическим диапазоном и высоким уровнем биосинтетической активности. В связи с этим цель нашей работы: исследование перспективных в отношении накопления биомассы штаммов Chlorella vulgaris и анализ инновационного ароматического продукта в сравнении с существующими стандартами.
Материалы и методы
Объектом изучения являлись суспензионные культуры и альгомасса штаммов Chlorella vulgaris ИФР С-66, ИФР С-111 и BIN, предварительно высушенная и измельченная.
20
University proceedings. Volga region
№ 4 (8), 2014
Естественные науки. Биология
Особенности формирования альго- и цитоструктур изучали на временных препаратах в соответствии с общепринятыми методиками [8]. Количество клеток определяли в камере Горяева и нефелометрическим методом с использованием фотоколориметра КФК-3.01 (в качестве контроля служит прозрачная жидкая питательная среда для культивирования хлореллы). Мутность суспензии измеряли при длине волны 500 нм (зеленый светофильтр) в 11 последовательных разведениях. Морфологию поверхностных и глубинных культур исследовали под микроскопом БИОМЕД-3 (кратность увеличения 10, 40, 100). Заготовку и сушку сырья проводили в соответствии с общими требованиями Государственной фармакопеи и специальными требованиями для отдельного вида сырья. Его хранили при комнатной температуре (15...25 °C) в соответствии с требованиями ГФ XII [9]. Химический состав сырья и биотехнологические показатели альгокультуры на средах Тамия и Хогланда анализировали общепринятыми методиками [8, 10].
Получение резиноида осуществляли согласно а. с. 1638157 (СССР) [11]. Для количественной оценки аромапродукта использовали методику, изложенную в ГФ XI [12]. Стеролы, триацилглицеролы, жирные кислоты определяли на спектрофотометре СФ-201, хлорофилл - при длинах волн 662 и 642 нм, каротиноиды - при длине волны 452 нм. Глико- и фосфолипиды, витамины анализировали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на приборе фирмы «Shimаdzu» с УФ-фотометрической детекцией [13-16].
Математическая обработка данных проводилась по В. М. Шмидту (1984) и Г. Ф. Лакину (1990), уровень значимости р = 0,95 [17, 18].
Результаты и обсуждение
1. Скрининг штаммов Chlorella vulgaris, обладающих наибольшей биосинтетической активностью.
Штаммы хлореллы, выделенные из природы, постоянного цикла развития не имеют, в культуре клетки развиваются, как правило, асинхронно. Проведенное сравнительное исследование показало, что цикл развития клеток штамма ИФР № С-111 состоит из следующих фаз. В светлое время суток идет активный процесс фотосинтеза, в результате чего происходит увеличение размеров клеток от 1,7 до 9,2 мкм (с 6 ч утра до 21 ч). Накопление биомассы происходит интенсивно также в световую фазу, взрослые клетки хлореллы шаровидной формы диаметром 5.8 мкм составляют ее основу. Уровень синхронизации деления клеток высок в темновую фазу, как правило, с 22 ч до 4 ч утра. В основном клетки делятся на 2.8 автоспор, очень редко на 16. Утром молодые клетки шаровидной или слабоэллипсоидной формы, размером от 2 до 4 мкм, готовы к фотосинтезу. Указанный цикл развития достаточно стабильный. Развитие не зависит от сезона года или источника освещения. Визуально рост наблюдается на третьи сутки культивирования (рис. 1). Плотность культуры штамма в жидкой питательной среде Хогланда на десятые сутки при естественном освещении, 15-часовом фотопериоде и температуре 25 ± 2 °С составила 20 млн клеток/мл при плотности исходной суспензии in vitro после инокулирования 0,9 млн клеток/мл (табл. 1).
Natural Sciences. Biology
21
Известия высших учебных заведений. Поволжский регион
Рис. 1. Кривая роста суспензионной культуры штамма ИФР № С-111
Таблица 1
Плотность клеток штамма ИФР № С-111 в динамике роста и развития
Показатели Исходная культура 4-суточная культура 10-суточная культура
Количество, 106 клеток /мл 0,9 6,1 20
Оптическая плотность, ед. 0,1 0,74 1,25
Штамм ИФР № С-66 также автотрофный. Клетки хлореллы меняют размеры в процессе онтогенеза: в начале фазы ускоренного роста они мелкие и плотные (1,5...2,0 мкм), в фазе М-концентрации они сильно увеличиваются в размерах и могут достигать 8 мкм. Клетка микроводоросли содержит широкий, поясковидный, незамкнутый хлоропласт, представляющий собой чашевидный хроматофор. На рис. 2 представлена кривая роста культуры в течение 12 сут. В условиях in vitro на четвертые сутки плотность клеток достигает 3 млн/мл при исходном количестве 2 млн/мл. На девятые сутки плотность клеток достигает 10 млн/мл (табл. 2).
у
Рис. 2. Кривая роста суспензионной культуры штамма ИФР № С-66
22
University proceedings. Volga region
№ 4 (8), 2014
Естественные науки. Биология
Таблица 2
Плотность клеток штамма ИФР № С-66 в динамике роста и развития
Показатели Исходная культура 4-суточная культура 10-суточная культура
Количество 106 клеток /мл 2,1 3,3 10,1
Оптическая плотность, ед. 0,23 0,36 1,25
Значительный рост штамма Chlorella vulgaris BIN при периодическом режиме накопительного выращивания наблюдается на вторые сутки (рис. 3). Штамм не имеет стойкого цикла развития, в культуре развивается асинхронно. Клетки штамма BIN делятся на 4.. .16, чаще на 4.. .8 автоспор. Устойчивое развитие не зависит от времени года или источника освещения. В стеклянных сосудах на четвертые сутки плотность клеток достигает 7 млн/мл при исходной плотности 2 млн/мл. На девятые сутки плотность клеток достигает 22 млн/мл (табл. 3).
v
Рис. 3. Кривая роста суспензионной культуры штамма BIN
Таблица 3
Плотность клеток штамма BIN в динамике роста и развития
Показатели Исходная культура 4-суточная культура 10-суточная культура
Количество 106 клеток /мл 2,0 7,3 22,0
Оптическая плотность, ед. 0,23 0,9 2,75
На основе данных нефелометрии суспензионных альгологически чистых культур и их серийных разведений с параллельным подсчетом клеток хлореллы в суспензии была построена калибровочная кривая для изученных штаммов (рис. 4). Данная калибровочная кривая может быть использована для экспресс-анализа количества клеток разных штаммов хлореллы, стандартизации суспензионных культур, полуколичественного определения биомассы с целью прогнозирования выхода ароматического продукта - резиноида хлореллы.
Natural Sciences. Biology
23
Известия высших учебных заведений. Поволжский регион
Рис. 4. Калибровочная кривая для определения плотности клеток хлореллы в суспензионной культуре:
1 - исходные культуры штаммов ИФР № С-66 и BIN; 2 - 4-суточная, 3 - 9-суточная культуры штамма ИФР № С-66; 4 - 4-суточная, 5 - 9-суточная культуры штамма BIN; 6 - исходная, 7 - 4-суточная, 8 - 10-суточная культуры штамма ИФР № С-111
2. Анализ инновационного ароматического продукта - резиноида хлореллы.
Как уже отмечалось, инновационный ароматический продукт - резино-ид хлореллы - содержит биологически активные соединения. Проведенные исследования показали, что содержание липофильных соединений составляет около 60 %, в том числе глико- и фосфолипиды - 52,40 %, стеролы - 0,03 %, триацилглицеролы - 2,40 %, жирные кислоты - 2,10 %. Содержание витаминов относительно велико, в частности, водорастворимых группы В (Вь В2, В6) -0,2 %, каротиноидов - до 1,0 %. Содержание растительных пигментов - хлорофиллов а и b находится в пределах 0,9...2,4 %. Таким образом, впервые показано наличие в компонентном составе резиноида хлореллы комплекса биологически активных липофильных соединений, которое свидетельствует о ценности инновационного ароматического продукта как фармацевтической субстанции.
Ароматический продукт, полученный экстракцией биомассы водорослей, по основным показателям соответствует стандартам: ОСТ 18-229-75, Оаkmоss-resmоid CАS ^. 9000-50-4; 68606-93-9 (табл. 4).
Таблица 4
Сравнительная характеристика резиноидов различного происхождения
Наименование показателей Данные анализа
резиноида хлореллы резиноида «дубового мха» (Оаkmоss-resinоid)
ОСТ 18-229-75 CАS №>. 9000-50-4; 68606-93-9
1 2 3 4
1. Внешний вид, цвет Густая, смолянистая жидкость от темно-зеленого до коричневого цвета Густая жидкость темно-коричневого цвета Твердая или вязкая масса темнокоричневого цвета
24
University proceedings. Volga region
№ 4 (8), 2014
Естественные науки. Биология
Окончание табл. 4
1 2 3 4
2. Запах Приятный смолянистый запах с табачно-травянистой нотой Сложный приятный смолянистый запах с древесной нотой Глубокий, древесный, запах мха
3. Кислотное число, КОН мг/г 20...25 20.30 -
4. Эфирное число, КОН мг/г 14...15 15.20 -
5. Сухое вещество, % 30,95 - -
6. Плотность, г/см3 0,988 0,980.0,998 -
7. Содержание нерастворимого (в 96 %-м этиловом спирте) осадка, %, не более 6 8 -
8. Содержание смеси воды и этилового спирта, %, не более 17 20 -
9. Содержание летучей части, %, не менее 7 5 -
Заключение
Сравнительный анализ штаммов продуцента и аромапродукта как основных элементов инновационной биотехнологии выявил перспективы развития производства и переработки альгомассы для получения резиноида на основе хлореллы [19, 20].
Результаты исследования с культурами Chlorella vulgaris ИФР С-111, ИФР С-66 и BIN дают основание рекомендовать для разрабатываемой технологии наиболее продуктивный штамм в отношении накопления биомассы. Штамм Chlorella vulgaris BIN обладает наибольшей биосинтетической активностью, так как при культивировании в лабораторных условиях в 2-4 раза быстрее накапливал биомассу по сравнению со штаммами ИФР С-66, ИФР С-111. Растущие клетки зеленой микроводоросли характеризовались примитивными морфофизиологическими чертами и были лишены узкой функциональной специализации. В экспоненциальной фазе роста их биосинтетическая активность интенсифицировалась. В логарифмической фазе роста доминировали липофильные соединения, в частности, глико- и фосфолипиды. Этот факт заслуживает особого внимания, поскольку хлореллу можно использовать в качестве возобновляемого источника питательных веществ в замкнутой экологической системе [21].
Анализ ароматического продукта современными методами позволил определить количественный и качественный составы биологически активных компонентов резиноида хлореллы. Сравнительная характеристика резинои-дов различного происхождения показывает, что практически по всем нормативным показателям они сходны между собой, т.е. резиноид хлореллы соответствует показателям качества, приведенным в ОСТ 18-229-75, и не противоречит данным Оаkmоss-resinоid СА5 ^. 9000-50-4; 68606-93-9. Это свиде-
Natural Sciences. Biology
25
Известия высших учебных заведений. Поволжский регион
тельствует в пользу возможности замены резиноида дубового мха резинои-дом хлореллы по всем существующим в настоящее время направлениям его применения.
Список литературы
1. Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения / под ред. Г. П. Яковлева, К. Ф. Блиновой. - СПб. : СпецЛит, Изд-во СПХФА, 2002. - 407 с.
2. Мельников, С. С. Хлорелла: физиологически активные вещества и их использование / С. С. Мельников, Е. Е. Мананкина. - Киев : Наука i тэхшка, 1991. - 79 с.
3. Семенова, Е. Ф. Некоторые результаты биотехнологии ароматических продуктов / Е. Ф. Семенова, Н. И. Богданов // Инновационные технологии и продукты : сб. тр. - Новосибирск, 2000. - Вып. 4. - С. 9-13.
4. Шпичка, А. И. Сравнительная характеристика микроорганизмов, синтезирующих de novo летучие душистые вещества / А. И. Шпичка, Е. Ф. Семенова // Фундаментальные исследования. - 2013. - № 8 (часть 5). - С. 1113-1124.
5. Андреева, В. М. Род CLОRELLА. Морфология, систематика, принципы классификации / В. М. Андреева. - Л. : Наука, Ленингр. отд., 1975. - 110 с.
6. Музафаров, А. М. Культивирование и применение микроводорослей / А. М. Музафаров, Т. Т. Таубаев. - Ташкент : Фан УзССР, 1984. - 136 с.
7. Владимирова, М. Г. Интенсивная культура одноклеточных водорослей / М. Г. Владимирова, В. Е. Семененко. - М. : АН СССР, 1962. - 59 с.
8. Сиренко, Л. А. Методы физиолого-биохимического исследования водорослей в гидробиологической практике / Л. А. Сиренко, А. И. Сакевич, Л. Ф. Осипов [и др.]. - Киев : Наукова думка, 1975. - 247 с.
9. Государственная фармакопея Российской Федерации. Изд. XII. Вып. 1 / Министерство здравоохранения Российской Федерации. - М. : Научный центр экспертизы средств медицинского применения, 2008. - 704 с.
10. Беляков, К. В. Методологические подходы к определению биологически активных веществ в лекарственном растительном сырье спектрофотометрическим методом / К. В. Беляков. - М. : Медицина, 2004. - 186 с.
11. А. с. 1638157 СССР. Способ получения резиноида микроводорослей / Бугор-ский П. С., Родов В. С., Семенова Е. Ф., Клячко-Гурвич Г. Л. (СССР). - Заявл. 22.03.89 (заявка № 4665003 с датой приоритета изобретения 22.03.1989). Зарегистрировано в Государственном реестре изобретений СССР 01.12.1990. Опубл. 30.03.91, БИ № 12.
12. Государственная фармакопея СССР XI издания. - М. : Медицина, 1989. -Вып. 1. - 336 с.
13. Практикум по микробиологии / под ред. А. И. Нетрусова. - М. : Академия, 2005. -608 с.
14. Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов. -М., 1998. - С. 84-93.
15. Сливкин, А. И. Контроль качества экстемпоральных лекарственных форм / А. И. Сливкин, Н. П. Садчикова. - Воронеж : Изд-во Воронеж. гос. ун-та, 2003. -264 с.
16. Сливкин, А. И. Физико-химические и биологические методы оценки качества лекарственных средств / А. И. Сливкин, В. Ф. Селеменев, Е. А. Суховерхова. -Воронеж : Изд-во Воронеж. гос. ун-та, 1999. - 368 с.
17. Шмидт, В. М. Математические методы в ботанике / В. М. Шмидт. - Л. : Изд-во Ленингр. ун-та, 1984. - 288 с.
18. Лакин, Г. Ф. Биометрия / Г. Ф. Лакин. - М. : Высш. шк., 1990. - 352 с.
19. Богданов, Н. И. Перспективы культивирования хлореллы в Таджикистане / Н. И. Богданов // Микробиология и генетика - теоретическая основа научно-технического прогресса : тез. докл. конф. - Душанбе : Дониш, 1984. - С. 5-6.
26
University proceedings. Volga region
№ 4 (8), 2014
Естественные науки. Биология
20. Карпов, А. М. Разработка промышленных линий для производства и переработки микроводорослей / А. М. Карпов, О. Н. Альбицкая // Биотехнология. -1989. - Т. 5, № 3. - С. 376-380.
21. Верещагин, А. Г. Липиды в жизни растений (66-е Тимирязевские чтения) / А. Г. Верещагин. - М. : Наука, 2007. - 78 с.
References
1. Entsiklopedicheskiy slovar’ lekarstvennykh rasteniy i produktov zhivotnogo proiskhozh-deniya [Encyclopedic dictionary of medicinal plants and products of natural origin]. Eds. by G. P. Yakovlev, K. F. Blinova. Saint Petersburg: SpetsLit, Izd-vo SPKhFA, 2002, 407 p.
2. Mel'nikov S. S., Manankina E. E. Khlorella: fiziologicheski aktivnye veshchestva i ikh ispol’zovanie [Chlorella: autacoids and application thereof]. Kiev: Nauka i tekhnika, 1991, 79 p.
3. Semenova E. F., Bogdanov N. I. Innovatsionnye tekhnologii i produkty: sb. tr. [Innovative technologies and products: collected papers]. Novosibirsk, 2000, iss. 4, pp. 9-13.
4. Shpichka A. I., Semenova E. F. Fundamental’nye issledovaniya [Fundamental research]. 2013, no. 8 (part 5), pp. 1113-1124.
5. Andreeva V. M. Rod CLORELLA. Morfologiya, sistematika, printsipy klassifikatsii [Cholrella genus. Morphology, taxonomy, classification]. Leningrad: Nauka, Leningr. otd., 1975, 110 p.
6. Muzafarov A. M., Taubaev T. T. Kul’tivirovanie i primenenie mikrovodorosley [Cultivation and application of algae]. Tashkent: Fan UzSSR, 1984, 136 p.
7. Vladimirova M. G., Semenenko V. E. Intensivnaya kul’tura odnokletochnykh vodoros-ley [Intensive culture of monocelled algae]. Moscow: AN SSSR, 1962, 59 p.
8. Sirenko L. A., Sakevich A. I., Osipov L. F. et al. Metody fiziologo-biokhimicheskogo issledovaniya vodorosley v gidrobiologicheskoy praktike [Methods of physiological-biochemical research of algae in hydrobiological practice]. Kiev: Naukova dumka, 1975, 247 p.
9. Gosudarstvennaya farmakopeya Rossiyskoy Federatsii. Izd. XII. Vyp. 1 [State pharmacopoeia of the Russian Federation. XII edition. Issue 1]. Ministry of healthcare of the Russian Federation. Moscow: Nauchnyy tsentr ekspertizy sredstv meditsinskogo prime-neniya, 2008, 704 p.
10. Belyakov K. V. Metodologicheskie podkhody k opredeleniyu biologicheski aktivnykh veshchestv v lekarstvennom rastitel’nom syr’e spektrofotometricheskim metodom [Methodological approaches to determining bioactive substances in medicinal raw plant materials by the spectrophotometric method]. Moscow: Meditsina, 2004, 186 p.
11. A. s. 1638157 SSSR. Sposob polucheniya rezinoida mikrovodorosley [Method of microalga resinoid obtainment]. Bugorskiy P. S., Rodov V. S., Semenova E. F., Klyachko-Gurvich G. L. (SSSR). Appl. 22 March 1989, publ. 30 March 1991, Bull. no. 12.
12. Gosudarstvennaya farmakopeya SSSR XI izdaniya [State pharmacopoeia of USSR. XII edition.]. Moscow: Meditsina, 1989, iss. 1, 336 p.
13. Praktikum po mikrobiologii [Microbiology practical work]. Eds. by A. I. Netrusov. Moscow: Akademiya, 2005, 608 p.
14. Rukovodstvo po metodam analiza kachestva i bezopasnosti pishchevykh produktov [Guide on methods of quality and safety analysis of food products]. Moscow, 1998, pp. 84-93.
15. Slivkin A. I., Sadchikova N. P. Kontrol’ kachestva ekstemporal’nykh lekarstvennykh form [Extemporary medicinal forms’ quality control]. Voronezh: Izd-vo Voronezh. gos. un-ta, 2003, 264 p.
16. Slivkin A. I., Selemenev V. F., Sukhoverkhova E. A. Fiziko-khimicheskie i biologi-cheskie metody otsenki kachestva lekarstvennykh sredstv [Physical-chemical and biological methods of drugs’ quality assessment]. Voronezh: Izd-vo Voronezh. gos. un-ta, 1999, 368 p.
Natural Sciences. Biology
27
Известия высших учебных заведений. Поволжский регион
17. Shmidt V. M. Matematicheskie metody v botanike [Mathematical methods in botany]. Leningrad: Izd-vo Leningr. un-ta, 1984, 288 p.
18. Lakin G. F. Biometriya [Biometrics]. Moscow: Vyssh. shk., 1990, 352 p.
19. Bogdanov N. I. Mikrobiologiya i genetika - teoreticheskaya osnova nauchno-tekhni-cheskogo progressa: tez. dokl. konf [Microbiology and genetics - theoretical basis of scientific and technological progress: conference reports’ theses]. Dushanbe: Donish, 1984, pp. 5-6.
20. Karpov A. M., Al'bitskaya O. N. Biotekhnologiya [Biotechnology]. 1989, vol. 5, no. 3, pp. 376-380.
21. Vereshchagin A. G. Lipidy v zhizni rasteniy (66-e Timiryazevskie chteniya) [Lipids in plant life (66th Timiryazevsky readings)]. Moscow: Nauka, 2007, 78 p.
Митишев Александр Владимирович
студент, Пензенский государственный университет (Россия, г. Пенза, ул. Красная, 40)
E-mail: span2361@rambler.ru
Преснякова Елена Викторовна
кандидат биологических наук, доцент, кафедра медицинских информационных систем и технологий, Пензенский государственный университет (Россия, г. Пенза, ул. Красная, 40)
E-mail: spl7@mail.ru
Семенова Елена Федоровна кандидат биологических наук, профессор, старший научный сотрудник, кафедра общей и клинической фармакологии, Пензенский государственный университет
(Россия, г. Пенза, ул. Красная, 40) E-mail: sef1957@mail.ru
Гурина Марина Анатольевна
студентка, Пензенский государственный университет (Россия, г. Пенза, ул. Красная, 40)
E-mail: besyakina.marina@yandex.ru
Mitishev Alexandr Vladimirovich
Student, Penza State University (40 Krasnaya street, Penza, Russia)
Presnyakova Elena Viktorovna Сandidate of biological sciences, аssociate professor, sub-department of medical information systems and technologies, Penza State University (40 Krasnaya street, Penza, Russia)
Semenova Elena Fedorovna Candidate of biological sciences, professor, senior staff scientist, sub-department of general and clinical pharmacology, Penza State University (40 Krasnaya street, Penza, Russia)
Gurina Marina Anatoljevna
Student, Penza State University (40 Krasnaya street, Penza, Russia)
УДК 574:582.251.62:615.322:633.8 Митишев, А. В.
Сравнительный анализ штаммов продуцента и инновационного продукта как основных элементов биотехнологии резиноида хлореллы /
А. В. Митишев, Е. В. Преснякова, Е. Ф. Семенова, М. А. Гурина // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Естественные науки. -2014. - № 4 (8). - С. 19-28.
28
University proceedings. Volga region
