CC BY
234
Химия растительного сырья. 2013. №1. С. 205-208.
УДК 615.32:547.972+543.544
СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ КОМПОНЕНТНОГО СОСТАВА ТРАВЫ ФАРМАКОПЕЙНЫХ ВИДОВ ЗВЕРОБОЯ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
© Л.Н. Зимина, В.А. Куркин , В.М. Рыжов
Самарский государственный медицинский университет, ул. Чапаевская, 89, Самара, (Россия), e-mail: vakur@samaramail.ru
Проведено сравнительное фитохимическое исследование с использованием метода ВЭЖХ образцов травы зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.) и зверобоя пятнистого (Hypericum maculatum Grantz). Установлено, что доминирующим флавоноидом травы зверобоя пятнистого является гиперозид, обладающий антидепрессантной активностью. Выявлены отличия химического состава сравниваемых видов. Установлено, что содержание гиперозида в траве зверобоя пятнистого в три раза больше, чем в зверобое продырявленном.
Ключевые слова: зверобой продырявленный, зверобой пятнистый Hypericum maculatum Grantz., Hypericum perforatum L., антидепрессантная активность, гиперозид, рутин, флавоноиды, стандартизация.
Введение
В настоящее время в качестве источника антидепрессантных лекарственных препаратов служит трава зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.). Однако на фармацевтическом рынке Российской Федерации имеются только импортные дорогостоящие препараты («Деприм» и др.) [1, 2].
В России фармакопейными видами являются зверобой продырявленный и зверобоя пятнистый, причем данные виды рассматриваются как равноценные с точки зрения получения антисептических и вяжущих средств. Однако по последним литературным данным обнаружены некоторые отличия в химическом составе фармакопейныхвидов [3].
Учитывая тот факт, что антидепрессантные свойства обусловлены несколькими группами действующих веществ (антраценпроизводными, некоторыми флавоноидами, флороглюцинами), представляется актуальным изучение особенностей химического состава биологически активных соединений (БАС) травы зверобоя пятнистого в плане оценки перспективы использования данного вида как источника импортозамещающих антидепрессантов.
Цель настоящей работы - сравнительное изучение флавоноидного состава травы зверобоя проды-рявленного и зверобоя пятнистого с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматогра -фии (ВЭЖХ).
—------- Тт-----------------------;-------------- Экспериментальная часть
Зимина Любовь Николаевна - аспирант кафедры
фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии, Исследованию подвергались воздушно-
тел^ (846) 260-33-59, факс: (846) 333-29-76, сухие образцы травы зверобоя пятнистого и зверо-
e-mail: zymynal@gmail.com _ ,
, боя продырявленного, заготовленные в фазу цве-
КуркинВлаоимир Александрович - заведующий кафедрой гг т j
фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии, тения (июль 2008 г.). Заготовку осуществляли
докторфармацевтическихнаук, профессор, тел.: (846) в Республике Марий Эл (Медведевский район)
260-33-59, факс: (846) 333-29-76, e-mail:
Kurkinvladimir@yandex.ru; vakur@samaramail.ru Рыжов Виталий Михайлович - ассистент кафедры
и Самарской области. В качестве веществ сравнения использовали достоверно известные рабочие фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии, стандартные образцы (РСО) гиперозида, рутина,
кандидатфармацевтическихнаук, тел.: (846) 260-33-59, кверцетина и бисапигенина, полученные нами ра-
факс: (846) 333-29-76, e-mail: lavr_rvm@mail.ru
нее из сырья зверобоя продырявленного.
* Автор, с которым следует вести переписку.
В ходе сравнительных исследований качественного и количественного флавоноидных составов методом ВЭЖХ использовали водно-спиртовые извлечения, полученные из травы зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного с использованием 70% этилового спирта.
Сравнительный фитохимический анализ осуществляли методом обращенно-фазовой ВЭЖХ на хроматографе «Милихром-5» в изократическом режиме (колонка КАХ 6-80-4 №6 25.01.99, стационарная фаза
- «Seporon C18»). В качестве подвижной фазы использовали смесь ацетонитрила и воды в различных соотношениях с добавлением 1% ледяной уксусной кислоты. Скорость потока элюента в анализе составляла 0,1 мкл/мин. Детекцию осуществляли при аналитической длине волны Xmax= 360 нм. Для обнаружения возможных сопутствующих веществ использовали дополнительные длины волн: 254; 270; 290; 330 нм.
Результаты и обсуждение
Предварительные исследования по подбору оптимальных условий разделения показали, что элюирующая система растворителей в соотношении 25 : 75 ацетонитрила и воды с добавлением 1% уксусной кислоты позволяет разделять и детектировать в сравниваемых объектах три флавоноидных структуры: рутин гиперозид и кверцетин (рис. 1 и 2).
Известно, что для травы зверобоя продырявленного характерно наличие флавоноида бисапигенина [2], однако в условиях системы растворителей ацетонитрила и воды (25 : 75) с добавлением 1% уксусной кислоты бисапигенин не обнаруживается ни в зверобое продырявленном, ни в зверобое пятнистом (рис. 1 и 2).
В этой связи проведены дополнительные исследования по подбору оптимальных условий хроматографирования, позволяющих детектировать наличие бисапигенина в траве зверобоя продырявленного (рис. 3). Однако в случае зверобоя пятнистого бисапигенин не обнаружен (рис. 4). Следовательно, наличие бисапигенина характерно лишь для травы зверобоя продырявленного.
Установлено, что доминирующим флавоноидом извлечений из травы зверобоя пятнистого является гиперозид (пик № 2) (рис. 1), тогда как рутин определен лишь в следовых количествах.
Что касается зверобоя продырявленного, то в извлечениях из сырья данного растения преобладает рутин (пик 1) на фоне достаточно высокого содержания гиперозида (пик № 2) (рис. 2).
Кверцетин (пик № 3) обнаружен в обоих видах (рис. 1 и 2), однако содержание данного компонента невысокое.
Достоверность идентификации пиков на хроматограммах подтверждали использованием в методиках анализа соответствующего внутреннего стандартного вещества. Значения времени удерживания пиков индивидуальных веществ представлены в таблицах 1 и 2, а также на хроматограммах извлечений (рис. 1-4).
В области соответствующего времени удерживания для РСО рутина (пик № 1) в аналогичных условиях хроматографирования в траве зверобоя пятнистого обнаружен незначительный пик данного вещества (рис. 1).
Принимая во внимание то обстоятельство, что флавоноидный состав зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого имеет некоторые различия, представляет интерес количественная оценка уровня содержания флавоноидов в исследуемых видах зверобоя.
Рис. 1. Хроматограмма извлечения из травы зверобоя пятнистого (подвижная фаза: ацетонитрил - вода (25 : 75) с добавлением 1% ледяной уксусной кислоты)
Рис. 2. Хроматограмма извлечения из травы зверобоя продырявленного (подвижная фаза: ацетонитрил - вода 25 : 75 с добавлением 1% ледяной уксусной кислоты)
Рис. 3. Хроматограмма извлечения из травы зверобоя продырявленного (подвижная фаза: ацетонитрил - вода (30 : 70) с добавлением 1% ледяной уксусной кислоты)
Рис. 4. Хроматограмма извлечения из травы зверобоя пятнистого (подвижная фаза: ацетонитрил - вода (30 : 70) с добавлением 1% ледяной уксусной кислоты)
Таблица 1. Время удерживания пиков веществ травы зверобоя продырявленного
Вещество № пика на хроматограмме Соотношение ацетона и воды (подвижная фаза) Время удерживания на хроматограмме извлечения Время удерживания РСО
Рутин 1 25 75 2,922 3,121
30 70 2,819 2,716
Гиперозид 2 25 75 3,878 3,994
30 70 2,819 3,016
Кверцетин 3 25 75 15,805 14,237
30 70 9,563 9,905
Бисапигенин 4 25 75 - -
30 70 23,150 22,357
Таблица 2. Время удерживания пиков веществ травы зверобоя пятнистого
Вещество № пика на хроматограмме Соотношение ацетона и воды (подвижная фаза) Время удерживания на хроматограмме извлечения Время удерживания РСО
Рутин 1 25 75 3,12 3,121
30 70 2,819 2,716
Гиперозид 2 25 75 3,919 3,994
30 70 2,819 3,016
Кверцетин 3 25 75 14,395 14,237
30 70 8,607 9,905
Бисапигенин - - -
С целью количественного определения содержания отдельных флавоноидов разработана методика ВЭЖХ-анализа.
Методика количественного определения содержания флавоноидов в траве зверобоя пятнистого и зверобоя продырявленного. Около 1 г (точная навеска) воздушно-сухого образца измельченного сырья с размером частиц, проходящих через сито с отверстиями диаметром 1 мм, помещали в колбу с притертой крышкой емкостью 100 мл, добавляли 40 мл 70% этилового спирта. Колбу взвешивали на тарирных весах с точностью до ± 0,01 г и присоединяли к обратному холодильнику. Экстракцию осуществляли при нагревании на кипящей водяной бане в течение 60 мин. Извлечение охлаждали, доводили на тарирных весах до первоначальной массы 70% этиловым спиртом и фильтровали через бумажный фильтр с красной полосой.
5 мкл полученного извлечения вводили в хроматограф «Милихром-5» и хроматографировали со скоростью потока 0,1 мл/мин. Детекцию анализируемых веществ проводили при аналитической длине волны Xmax 360 нм. Анализ осуществляли в трех повторностях. Параллельно осуществляли анализ растворов РСО рутина, кверцетина, гиперозида, бисапигенина при длине волны 360 нм.
Содержание флавоноидов в процентах (X) в траве зверобоя пятнистого в пересчете на абсолютно сухое сырье и соответствующий стандарт вычисляли по формуле:
Н х mPCO xVK х Vn х 100 х 100
X. —-----------------------------,
HРСО х m х Vn x VK x (100 - W)
где H - значение высоты пика определяемого флавоноида на хроматограмме испытуемого раствора; НРСо -значение высоты пика на хроматограмме раствора соответствующего РСО; VK - объем разведения пробы, мл; Vn - объем пробы раствора, вводимого в колонку, мкл; ш - масса сырья, г; шРСо - масса РСО, г.
Установлено, что содержание доминирующего флавоноида - гиперозида в траве зверобоя пятнистого составляет 6,50%, в траве зверобоя продырявленного - 2,50%. Рутин присутствует в следовых количествах в траве зверобоя пятнистого, тогда как в зверобое продырявленном его содержание достигает 1,30%. Содержание кверцетина в обоих видах невысокое и составляет для зверобоя продырявленного - 0,40%, для зверобоя пятнистого - 0,23%. Бисапигенин не выявлен в образце травы зверобоя пятнистого, тогда как в траве зверобоя продырявленного его содержание составляет 1,05%.
Выводы
1. Проведено сравнительное фитохимическое исследование фармакопейных видов зверобоя с использованием метода ВЭЖХ. Установлено наличие и определено содержание трех фармакологически активных флавоноидов (гиперозида, рутина и кверцетина) в траве зверобоя пятнистого и четырех действующих веществ флавоноидной природы (гиперозид, рутин, бисапигенин и кверцетин) в зверобое продырявленном.
2. Гиперозид является доминирующим флавоноидом травы зверобоя пятнистого (6,50%), а бисапигенин характерен лишь для зверобоя продырявленного.
3. Показана перспективность использования метода ВЭЖХ в анализе сырья и препаратов фармакопейных видов зверобоя.
Список литературы
1. Государственный реестр лекарственных средств. М., 2008. Т. 1. 1398 с.
2. Куркин В.А. Фармакогнозия : учебник для студентов фармацевтических вузов (факультетов). 2-е изд., пере-раб. и доп. Самара, 2007. 1239 с.
3. Зимина Л.Н. Сравнительное химико-фармацевтическое исследование сырья и препаратов зверобоя продырявленного и зверобоя пятнистого // Сборник научных трудов «II Российский фитотерапевтический съезд». М., 2010. С. 132-135.
Поступило в редакцию 4 июля 2011 г.
Zimina L.N., Kurkin V.A.*, Ryzhov V.M. THE COMPARATIVE STUDY OF CHEMICAL COMPOSITION OF HERBS OF PHARMACOPOEIAL SPECIES OF HYPERICUM L. WITH THE USING OF HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY
Samara State Medical University, st. Chapaevskaia, 89, Samara, (Russia), e-mail: vakur@samaramail.ru
The comparative phytochemical study with the using of high performance liquid chromatography of the herbs of Hypericum perforatum L. and Hypericum maculatum Grantz. was carried out. There were observed the differences in the studied species. It was established that predominant flavonoid of Hypericum maculatum Grantz. is hyperoside, which has antidepressive activity. It was shown that content of hyperoside in Hypericum maculatum Grantz. herbs is almost three times higher than in Hypericum perforatum L. (respectively 6,50% and 2,50%). It was determined, that the presence of bisapigenin is characteristic only for Hypericum perforatum L.
Keywords: Hypericum maculatum Grantz., Hypericum perforatum L., herbs, antidepressive activity, flavonoids, hyperoside, rutin, standardization, HPLC.
References
1. Gosudarstvennyi reestr lekarstvennykh sredstv. [State register of medicines]. Moscow, 2008, vol. 1, 1398 p.
(in Russ.).
2. Kurkin V.A. Farmakognoziia. [Pharmacognosy]. Samara, 2007, 1239 p. (in Russ.).
3. Zimina L.N. II Rossiiskii fitoterapevticheskii s"ezd: sbornik nauchnykh trudov. [II Congress of Russian
phytotherapeutic: collection of scientific papers]. Moscow, 2010, pp. 132-135. (in Russ.).
Received July 4, 2011
* Corresponding author.
