CC BY
272
IVh
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
УДК 615.32:547.9:543.544
ИССЛЕДОВАНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА НАДЗЕМНОЙ ЧАСТИ HYPERICUM PERFORATUM L.
О.Е. Правдивиева, В.А. Куркин,
ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет»
Куркин Владимир Александрович - e-mail: vakur@samaramaii.ru
Методом колоночной хроматографии из надземной части травы зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.) впервые в РФ выделены 9 компонентов: 3,811-бисапигенин, кверцетин,
6,811-дикверцетин, гиперозид, рутин, хлорогеновая кислота, гиперфорин, p-ситостерин и эргостерин. Выделенные вещества идентифицированы с помощью УФ-, ЯМР-спектроскопии, масс-спектрометрии, ТСХ и непосредственным сравнением с достоверно известными образцами веществ.
Ключевые слова: зверобой продырявленный, колоночная хроматография, флавоноиды, флороглюцины, бисапигенин, рутин, гиперозид, кверцетин,
гиперфорин, p-ситостерин, эргостерин.
By means of column chromatography from the aerial parts of Hypericum perforatum L. there were isolated for the first time in Russian Federation the nine compounds, namely: rutin, hyperoside, quercetin, hyperforin, 6,8"-diquercetin, 3,8"-biapigenin, ergosterol, p-sitosterol. The isolated components were identified by means of UV-, NMR-spectroscopy, mass spectrometry, TLC and of the comparison with the authentic samples of compounds.
Key words: Hypericum perforatum L., column chromatography, flavonoids, phloroglucinols, rutin, hyperoside, quercetin, hyperforin, diquercetin,
biapigenin, ergosterol, p-sitosterol.
Введение
Лекарственные препараты на основе травы зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L., сем. Зверобойные - Hypericaceae) широко применяются в медицинской практике в качестве противовоспалительных, ранозаживляющих, бактерицидных и вяжущих средств [1-3]. В то же время, за рубежом на основе зверобоя получают антидепрессантные средства, такие как «Деприм», «Негрустин» и «Гелариум Гиперикум», разрешенные к применению в РФ, тогда как в нашей стране не производятся антидепрессантные препараты на основе лекарственного растительного сырья. При этом в литературных источниках неоднозначно трактуется нейротропный эффект травы зверобоя: сообщается о седативных, антидепрессивных, а в некоторых случаях о стимулирующих ЦНС свойствах [1, 2]. Это является следствием того, что химический состав травы зверобоя до сих пор остается недостаточно изученным. Как известно, трава зверобоя содержит большой набор разнообразных биологически активных соединений (БАС). К ним относятся флавоноиды (рутин, гиперозид, бисапиге-нин), антраценпроизводные (гиперицин, псевдогипери-цин), флороглюцины (гиперфорин), дубильные вещества, эфирное масло и др. [1, 3]. Именно поэтому до сих пор остается нерешенным в полной мере вопрос относительно стандартизации сырья и препаратов зверобоя. Ранее нами разработан новый подход к стандартизации сырья и препаратов зверобоя, который заключается в сочетанном определении двух групп БАС - флавоноидов (в пересчете на рутин) и антраценпроизводных (в пересчете на гиперицин) [2, 4].
Кроме того, актуальными являются аспекты рационального применения препаратов зверобоя. Так, содержание основной субстанции - зверобоя сухого экстракта - в зару-
бежных лекарственных формах существенно колеблется: от 60 мг (Деприм) в одной таблетке до 285 мг (Гелариум гиперикум) в 1 драже и 425 мг (Негрустин) в одной капсуле [2]. Совершенно очевидно, что превышение терапевтической дозировки может привести к нежелательным последствиям. Наиболее распространенным побочным действием применения являются нарушения баланса половых гормонов. Данные нарушения могут быть связаны с тем обстоятельством, что надземная часть зверобоя продырявленного содержит БАС, обладающие гормональной активностью. Известно, что гормональное действие характерно для стероидов [3], однако сведения о содержании терпеноид-ных компонентов в траве зверобоя продырявленного в научной литературе крайне ограничены.
Целью настоящей работы является исследование химического состава надземной части Hypericum perforatum L.
Материал и методы
Сырьем для исследования являлись надземные части зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.), заготовленные в Самарской области в 2006 и 2008 гг. Выделение веществ из травы зверобоя продырявленного осуществляли экстракцией водным спиртом с последующей колоночной хроматографией. Идентификацию выделенных БАС проводили с помощью УФ-спектроскопии (спектрофотометр «Specord 40», Analytik Jena), 1Н-ЯМР-спектроскопии, масс-спектрометрии, тонкослойной хроматографией (ТСХ).
Результаты и их обсуждение
Для исследования нами был получено с помощью 90% этилового спирта извлечение из травы зверобоя продырявленного. Полученное извлечение упаривали под вакуумом и наносили на силикагель L 40/100. Разделение веществ
ТАБЛИЦА.
Физико-химические константы соединений, выделенных из надземной части зверобоя продырявленного
№ п/п Название, химическая структура Физико-химичсскис константы
1. 3,8й - Бисапигенин ° \ оя о С30Ні8Оі0 с Т.ІШ. 233-235иС, М+ 302 (100 %), УФ-спектр: А™* 270, 330 нм. 111-ЯМР-спектр в дейтероацетоне (8, м.д.): 13,15 (с, 5-ОН), 12,99 (с, 5и-ОН), 7,71 (д, 9 Гц, 2Н, Н-2 ,61), 7,51 (д, 9 Гц, 2Н, Н-21И,6ІП),), 6,90 (д, 9 Гц, 2Н, Н-3',51), 7,79 (д, 9 Гц, 2Н, Н-31и,51и), 6,61 (с, Н-311), 6,60 (д, 2,5 Гц, Н-8), 6,35 (д, 2,5 Гц, Н-6), 6,34 (с, Н-611).
2. 6,8і 1 - Дикверцетин оя ОН О он Т"”]\^~он ОН 0 СзоНібОн, УФ-спектр в этаноле: 257, 268 пл, 374 нм. ‘Н-ЯМР-спектр в дейтероацетоне (б, м.д.): 7,83 (д, 9 Гц, Н-21), 7,70 (дд, 2 и 9 Гц, Н-61), 7,53 (д, 9 Гц, Н-2111), 7,48 (дц, 2 и 9 Гц, Н-6111), 6,98 (а, 9 Гц, Н-51), 6,89 (д, 9 Гц, Н-5111), 6,53 (утл. с, Н-8), 6,27 (уш. с, Н-6).
3. Кверцетин ОН НО 0 Сі5Н10О7 с т.пл. 312-314 “С, М 302 (100 %), УФ-спектр в этаноле: 257, 268 пл, 372 нм. ^-ЯМР-спектр в дейтероацетоне (5, м.д.): 12,20 (с, 5-ОН), 7,83 (д, 9 Гц, Н-2’), 7,70 (дд, 2 и 9 Гц, Н-6’), 6,99 (д, 9 Гц, Н-5’), 6,53 (д, 2,5 Гц, Н-8), 6,26 (д, 2,5 Гц, Н-6).
4. Гиперозид он А/°н у^п^Чї-ваІ ОН 0 С21Н20О12 с Т.ІШ. 233-235иС (водный ацетон); УФ-спектр в этаноле: 258, 266 пл, 362 нм. ^-ЯМР-спектр в смеси дейтероацетона и дейтероводы (8, м.д.): 12,30 (с, 5-ОН), 7,92 (д, 2,5 Гц, Н-21), 7,55 (дд, 2,5 и 9 Гц, Н- 6і), 6,88 (д, 9 Гц, Н-51), 6,45 (д, 2,5 Гц, Н-8), 6,21 (д, 2,5 Гц, Н-6), 5,20 (д, 7,5 Гц, Н-111 галактозы), 3,5-4,0 (м, 6Н галактозы).
5. Рутин ОН А/°н у^ІІ^^О-СІс— гаїа он 0 С27Н30О16; т.пл. 192-194 °С (водный спирт) УФ-спектр: 5іпшх 258, 266 пл, 362 нм. 1Н-ЯМР-спектр в смеси дейтероацетона и дейтероводы, 2:1 (8, м.д.): 7,74 (д 9 Гц, Н-21), 7,68 (дц, 2,5 и 9 Гц, Н-61), 6,94 (д, 9 Гц, Н-51), 6,50 (д, 2,5 Гц, Н-8), 6,27 (д, 2,5 Гц, Н-6), 5,13 (д, 7 Гц, Н-111 глюкозы), 4,55 (д, 2 Гц, Н-1111 рамнозы), 3,70-3,25 (м, 6Н глюкозы + 4Н рамнозы), 1,08 (д, 6 Гц, ЗН, СНз рамнозы).
6. Хлорогеновая кислота оя ,0 тос~~^/ ' , / ОТІ ох | ояг СібНіаО,. Т. пл. 203-205“ (вода). УФ-спектр в спирте этиловом: 243, 300 пл, 330 нм. 'Н-ЯМР-спектр в ДМСО-(іб (100 МГц, м.д.): 7.45 (д, 16 Гц, Н-7), 7.06 (д, 2 Гц, Н-21), 7.01 (дд, 2 и 8 Гц, Н-6і), 6.80 (д, 8 Гц, Н-51), 6.18 (д, 16 Гц, Н-8), 5.10 (дг, 5 и 9 Гц, Н-5), 4.00 (кв, 3 Гц, Н-3), 3.62 (дц, 3 и 9 Гц, Н-4).
7. Гиперфорин 0 С35Н54О4; УФ-спектр в этаноле: Хшах 275 нм. ^-ЯМР-спектр в дейтерохлороформе (8, м.д.): 4,85,3 (м, 4Н, Н-15, Н-22, Н-27, Н-32), 4,2-4,3 (м, 2Н, Н-14), 3,20 (м, 1Н, Н-11), 1,8-2,5 (м, ЮН, Н-6, Н-7, 2Н-19, 2Н-21, 2Н-26, 2Н-31), 1,5-1,8 (м, 28Н, СНз-17, 18, 24, 25, 29, ЗО, 34, 35), 1,20 (с, 6Н, СН3-12, СНз-13), 1,00 (с, ЗН, СНз-20).
осуществляли методом колоночной хроматографии на силикагеле, где в качестве элюентов использовали хлороформ, спирто-хлороформные смеси в различных сочетаниях и спирт этиловый. Элюаты делили на фракции, примерно одинакового объема (по 200 мл), затем упаривали под вакуумом. Индивидуальные вещества получали методом рехроматографии на колонках, где в качестве сорбента использовали полиамид и сефадекс LH-20. Контроль за разделением веществ осуществлялся с помощью ТСХ на пластинках «Silufol UV 254», «Сорбфил-ПТСХ-П-А-УФ» и «Сорбфил-ПТСХ-АФ-А-УФ» в системах хлороформ-спирт (2:1) и (9:1), а также специально разработанной нами системе хлороформ-этанол-вода (26:16:3). При этом были выделены следующие компоненты: З^-бисапигенин, кверцетин, 6,811-дикверцетин, гиперозид, рутин (флавоноиды), хлорогеновая кислота (фенилпропаноид), гиперфорин (флороглюцин), р-ситостерин и эргостерин.
Выделенные вещества были исследованы с помощью УФ-, 1Н-ЯМР-спектроскопии, масс-спектрометрии, различных химических превращений, ТСХ. В результате проведенного исследования установлено химическое строение следующих компонентов: З^-бисапигенин, кверцетин,
6,811-дикверцетин, гиперозид, рутин (флавоноиды), хлорогеновая кислота (фенилпропаноид) и гиперфорин (флороглюцин), р-ситостерин и эргостерин (стерины). Физикохимические и спектральные характеристики выделенных веществ представлены в таблице.
Соединения 1-9, представленные в таблице 1, являются большей частью флавоноидами и идентифицированы как З^-бисапигенин, кверцетин, 6,811-дикверцетин, гиперозид, рутин. Кроме того, выделены хлорогеновая кислота, гиперфорин, р-ситостерин и эргостерин. Следует отметить, что гиперфорин, З^-бисапигенин, р-ситостерин и эргостерин впервые выделены из травы зверобоя продырявленного, произрастающего в РФ. Вещество 2, выделенное нами в минорном количестве и идентифицированное как 6,B11- дикверцетин, является новым природным соединениям и впервые описано для рода Hypericum L. Установлено, что доминирующими флавоноидами травы зверобоя являются рутин, гиперозид и З^^-бисапигенин.
Работа выполнена при поддержке проекта 02.740.11.0650 ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-201З годы.
Р-Ситостерин С29Н50О; т.пл. 132-133, 'Н-ЯМР-
8. спектр 200 МГц в дейтерохлороформе (8, м.д.): 5,32 (м, 1Н, Н-6), 3,73 (м, 1Н, Н-3), 0,82,2 (м, 47Н, в том числе 6 СНз). Масс-спектр (70 еУ, 200 °С, т/г, %): 414 (М4-, 32), 255 (32), 231 (19), 213 (27), 145 (34), 135 (37),
119 (60), 105 (43), 97 (58), 71 (63),
#0 69 (65), 43 (50).
9. Эргостерин С28Н«0, т.пл. 163-165 °С. УФ-
спектр (ЕЮН, ^щах): 271 нм. 1Н-
іґ ЯМР-спекгр 200 МГц в дейтерохлороформе (8, м.д.): 5,35 (м, 2Н, Н-6, Н-7), 4,37 (д, 2Н, 7,7, Н-22, Н-23), (м, 1Н, Н-3), 3,1-3,4 (м, 2Н, Н-9, Н-14), 0,65-2,4 (м, 47Н, в том числе 6 СНз). Масс-
ЯО спектр (70 сУ, 200 °С, т/2, %): 396 (М*, 100), 255 (7), 213 (13), 147 (28), 80 (34), 57 (52), 43 (68).
IVh
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
Выводы
1. Углубленное исследование химического состава травы зверобоя позволило выделить 9 индивидуальных соединений, относящихся к флавоноидам, флороглюцинам, фенил-пропаноидам и стеринам.
2. На основе изучения данных ЯМР-спектроскопии, УФ-спектроскопии, масс-спектрометрии, ТСХ-анализа установлено химическое строение выделенных веществ, среди которых 3,811-бисапигенин, p-ситостерин и эргостерин и гиперфорин выделены впервые в РФ, а 6,811-дикверцетин является новым природным соединением и впервые описан для рода Hypericum L.
ЛИТЕРАТУРА
1. Китанов Г.М., Блинова К.Ф. Современное состояние химического изучения видов рода Hypericum. Химия природных соединений. 1987. № 2. С. 185-203.
2. Куркин В.А., Правдивцева О.Е. Зверобой: итоги и перспективы создания лекарственных средств. Самара: ГОУ ВПО СамГМУ; ООО «Офорт». 2008. 127 с.
3. Куркин В.А. Фармакогнозия: учебник для фармац. вузов. 2-е изд., перераб. и доп. Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО СамГМУ Росздрава. 2007. 1239 с.
4. Куркин В.А., Правдивцева О.Е., Дубищев А.В., Кадацкая Д.В., Запесочная Г.Г., Жданов И.П. Исследование сырья и препаратов зверобоя. Фармация. 2005. Т. 53. № 3. С. 23-25.
