Научная статья на тему 'Исследование химического состава надземной части Hypericum perforatum L'

Исследование химического состава надземной части Hypericum perforatum L Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
856
251
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
ЗВЕРОБОЙ ПРОДЫРЯВЛЕННЫЙ / КОЛОНОЧНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ / ФЛАВОНОИДЫ / ФЛОРОГЛЮЦИНЫ / БИСАПИГЕНИН / РУТИН / ГИПЕРОЗИД / КВЕРЦЕТИН / ГИПЕРФОРИН / β-СИТОСТЕРИН / ЭРГОСТЕРИН / β-SITOSTEROL / HYPERICUM PERFORATUM L / COLUMN CHROMATOGRAPHY / FLAVONOIDS / PHLOROGLUCINOLS / RUTIN / HYPEROSIDE / QUERCETIN / HYPERFORIN / DIQUERCETIN / BIAPIGENIN / ERGOSTEROL

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Правдивцева Ольга Евгеньевна, Куркин Владимир Александрович

Методом колоночной хроматографии из надземной части травы зверобоя продырявленного ( Hypericum perforatum L.) впервые в РФ выделены 9 компонентов: 3,8 11-бисапигенин, кверцетин, 6,8 11-дикверцетин, гиперозид, рутин, хлорогеновая кислота, гиперфорин, β-ситостерин и эргостерин. Выделенные вещества идентифицированы с помощью УФ-, ЯМР-спектроскопии, масс-спектрометрии, ТСХ и непосредственным сравнением с достоверно известными образцами веществ.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Правдивцева Ольга Евгеньевна, Куркин Владимир Александрович

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

The examination of chemical composition of overground part of HYPERICUM PERFORATUM L

By means of column chromatography from the aerial parts of Hypericum perforatum L. there were isolated for the first time in Russian Federation the nine compounds, namely: rutin, hyperoside, quercetin, hyperforin, 6,8 11-diquercetin, 3,8 11-biapigenin, ergosterol, β-sitosterol. The isolated components were identified by means of UV-, NMR-spectroscopy, mass spectrometry, TLC and of the comparison with the authentic samples of compounds.

Текст научной работы на тему «Исследование химического состава надземной части Hypericum perforatum L»

IVh

МЕДИЦИНСКИЙ

АЛЬМАНАХ

УДК 615.32:547.9:543.544

ИССЛЕДОВАНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА НАДЗЕМНОЙ ЧАСТИ HYPERICUM PERFORATUM L.

О.Е. Правдивиева, В.А. Куркин,

ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет»

Куркин Владимир Александрович - e-mail: vakur@samaramaii.ru

Методом колоночной хроматографии из надземной части травы зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.) впервые в РФ выделены 9 компонентов: 3,811-бисапигенин, кверцетин,

6,811-дикверцетин, гиперозид, рутин, хлорогеновая кислота, гиперфорин, p-ситостерин и эргостерин. Выделенные вещества идентифицированы с помощью УФ-, ЯМР-спектроскопии, масс-спектрометрии, ТСХ и непосредственным сравнением с достоверно известными образцами веществ.

Ключевые слова: зверобой продырявленный, колоночная хроматография, флавоноиды, флороглюцины, бисапигенин, рутин, гиперозид, кверцетин,

гиперфорин, p-ситостерин, эргостерин.

By means of column chromatography from the aerial parts of Hypericum perforatum L. there were isolated for the first time in Russian Federation the nine compounds, namely: rutin, hyperoside, quercetin, hyperforin, 6,8"-diquercetin, 3,8"-biapigenin, ergosterol, p-sitosterol. The isolated components were identified by means of UV-, NMR-spectroscopy, mass spectrometry, TLC and of the comparison with the authentic samples of compounds.

Key words: Hypericum perforatum L., column chromatography, flavonoids, phloroglucinols, rutin, hyperoside, quercetin, hyperforin, diquercetin,

biapigenin, ergosterol, p-sitosterol.

Введение

Лекарственные препараты на основе травы зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L., сем. Зверобойные - Hypericaceae) широко применяются в медицинской практике в качестве противовоспалительных, ранозаживляющих, бактерицидных и вяжущих средств [1-3]. В то же время, за рубежом на основе зверобоя получают антидепрессантные средства, такие как «Деприм», «Негрустин» и «Гелариум Гиперикум», разрешенные к применению в РФ, тогда как в нашей стране не производятся антидепрессантные препараты на основе лекарственного растительного сырья. При этом в литературных источниках неоднозначно трактуется нейротропный эффект травы зверобоя: сообщается о седативных, антидепрессивных, а в некоторых случаях о стимулирующих ЦНС свойствах [1, 2]. Это является следствием того, что химический состав травы зверобоя до сих пор остается недостаточно изученным. Как известно, трава зверобоя содержит большой набор разнообразных биологически активных соединений (БАС). К ним относятся флавоноиды (рутин, гиперозид, бисапиге-нин), антраценпроизводные (гиперицин, псевдогипери-цин), флороглюцины (гиперфорин), дубильные вещества, эфирное масло и др. [1, 3]. Именно поэтому до сих пор остается нерешенным в полной мере вопрос относительно стандартизации сырья и препаратов зверобоя. Ранее нами разработан новый подход к стандартизации сырья и препаратов зверобоя, который заключается в сочетанном определении двух групп БАС - флавоноидов (в пересчете на рутин) и антраценпроизводных (в пересчете на гиперицин) [2, 4].

Кроме того, актуальными являются аспекты рационального применения препаратов зверобоя. Так, содержание основной субстанции - зверобоя сухого экстракта - в зару-

бежных лекарственных формах существенно колеблется: от 60 мг (Деприм) в одной таблетке до 285 мг (Гелариум гиперикум) в 1 драже и 425 мг (Негрустин) в одной капсуле [2]. Совершенно очевидно, что превышение терапевтической дозировки может привести к нежелательным последствиям. Наиболее распространенным побочным действием применения являются нарушения баланса половых гормонов. Данные нарушения могут быть связаны с тем обстоятельством, что надземная часть зверобоя продырявленного содержит БАС, обладающие гормональной активностью. Известно, что гормональное действие характерно для стероидов [3], однако сведения о содержании терпеноид-ных компонентов в траве зверобоя продырявленного в научной литературе крайне ограничены.

Целью настоящей работы является исследование химического состава надземной части Hypericum perforatum L.

Материал и методы

Сырьем для исследования являлись надземные части зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.), заготовленные в Самарской области в 2006 и 2008 гг. Выделение веществ из травы зверобоя продырявленного осуществляли экстракцией водным спиртом с последующей колоночной хроматографией. Идентификацию выделенных БАС проводили с помощью УФ-спектроскопии (спектрофотометр «Specord 40», Analytik Jena), 1Н-ЯМР-спектроскопии, масс-спектрометрии, тонкослойной хроматографией (ТСХ).

Результаты и их обсуждение

Для исследования нами был получено с помощью 90% этилового спирта извлечение из травы зверобоя продырявленного. Полученное извлечение упаривали под вакуумом и наносили на силикагель L 40/100. Разделение веществ

ТАБЛИЦА.

Физико-химические константы соединений, выделенных из надземной части зверобоя продырявленного

№ п/п Название, химическая структура Физико-химичсскис константы

1. 3,8й - Бисапигенин ° \ оя о С30Ні8Оі0 с Т.ІШ. 233-235иС, М+ 302 (100 %), УФ-спектр: А™* 270, 330 нм. 111-ЯМР-спектр в дейтероацетоне (8, м.д.): 13,15 (с, 5-ОН), 12,99 (с, 5и-ОН), 7,71 (д, 9 Гц, 2Н, Н-2 ,61), 7,51 (д, 9 Гц, 2Н, Н-21И,6ІП),), 6,90 (д, 9 Гц, 2Н, Н-3',51), 7,79 (д, 9 Гц, 2Н, Н-31и,51и), 6,61 (с, Н-311), 6,60 (д, 2,5 Гц, Н-8), 6,35 (д, 2,5 Гц, Н-6), 6,34 (с, Н-611).

2. 6,8і 1 - Дикверцетин оя ОН О он Т"”]\^~он ОН 0 СзоНібОн, УФ-спектр в этаноле: 257, 268 пл, 374 нм. ‘Н-ЯМР-спектр в дейтероацетоне (б, м.д.): 7,83 (д, 9 Гц, Н-21), 7,70 (дд, 2 и 9 Гц, Н-61), 7,53 (д, 9 Гц, Н-2111), 7,48 (дц, 2 и 9 Гц, Н-6111), 6,98 (а, 9 Гц, Н-51), 6,89 (д, 9 Гц, Н-5111), 6,53 (утл. с, Н-8), 6,27 (уш. с, Н-6).

3. Кверцетин ОН НО 0 Сі5Н10О7 с т.пл. 312-314 “С, М 302 (100 %), УФ-спектр в этаноле: 257, 268 пл, 372 нм. ^-ЯМР-спектр в дейтероацетоне (5, м.д.): 12,20 (с, 5-ОН), 7,83 (д, 9 Гц, Н-2’), 7,70 (дд, 2 и 9 Гц, Н-6’), 6,99 (д, 9 Гц, Н-5’), 6,53 (д, 2,5 Гц, Н-8), 6,26 (д, 2,5 Гц, Н-6).

4. Гиперозид он А/°н у^п^Чї-ваІ ОН 0 С21Н20О12 с Т.ІШ. 233-235иС (водный ацетон); УФ-спектр в этаноле: 258, 266 пл, 362 нм. ^-ЯМР-спектр в смеси дейтероацетона и дейтероводы (8, м.д.): 12,30 (с, 5-ОН), 7,92 (д, 2,5 Гц, Н-21), 7,55 (дд, 2,5 и 9 Гц, Н- 6і), 6,88 (д, 9 Гц, Н-51), 6,45 (д, 2,5 Гц, Н-8), 6,21 (д, 2,5 Гц, Н-6), 5,20 (д, 7,5 Гц, Н-111 галактозы), 3,5-4,0 (м, 6Н галактозы).

5. Рутин ОН А/°н у^ІІ^^О-СІс— гаїа он 0 С27Н30О16; т.пл. 192-194 °С (водный спирт) УФ-спектр: 5іпшх 258, 266 пл, 362 нм. 1Н-ЯМР-спектр в смеси дейтероацетона и дейтероводы, 2:1 (8, м.д.): 7,74 (д 9 Гц, Н-21), 7,68 (дц, 2,5 и 9 Гц, Н-61), 6,94 (д, 9 Гц, Н-51), 6,50 (д, 2,5 Гц, Н-8), 6,27 (д, 2,5 Гц, Н-6), 5,13 (д, 7 Гц, Н-111 глюкозы), 4,55 (д, 2 Гц, Н-1111 рамнозы), 3,70-3,25 (м, 6Н глюкозы + 4Н рамнозы), 1,08 (д, 6 Гц, ЗН, СНз рамнозы).

6. Хлорогеновая кислота оя ,0 тос~~^/ ' , / ОТІ ох | ояг СібНіаО,. Т. пл. 203-205“ (вода). УФ-спектр в спирте этиловом: 243, 300 пл, 330 нм. 'Н-ЯМР-спектр в ДМСО-(іб (100 МГц, м.д.): 7.45 (д, 16 Гц, Н-7), 7.06 (д, 2 Гц, Н-21), 7.01 (дд, 2 и 8 Гц, Н-6і), 6.80 (д, 8 Гц, Н-51), 6.18 (д, 16 Гц, Н-8), 5.10 (дг, 5 и 9 Гц, Н-5), 4.00 (кв, 3 Гц, Н-3), 3.62 (дц, 3 и 9 Гц, Н-4).

7. Гиперфорин 0 С35Н54О4; УФ-спектр в этаноле: Хшах 275 нм. ^-ЯМР-спектр в дейтерохлороформе (8, м.д.): 4,85,3 (м, 4Н, Н-15, Н-22, Н-27, Н-32), 4,2-4,3 (м, 2Н, Н-14), 3,20 (м, 1Н, Н-11), 1,8-2,5 (м, ЮН, Н-6, Н-7, 2Н-19, 2Н-21, 2Н-26, 2Н-31), 1,5-1,8 (м, 28Н, СНз-17, 18, 24, 25, 29, ЗО, 34, 35), 1,20 (с, 6Н, СН3-12, СНз-13), 1,00 (с, ЗН, СНз-20).

осуществляли методом колоночной хроматографии на силикагеле, где в качестве элюентов использовали хлороформ, спирто-хлороформные смеси в различных сочетаниях и спирт этиловый. Элюаты делили на фракции, примерно одинакового объема (по 200 мл), затем упаривали под вакуумом. Индивидуальные вещества получали методом рехроматографии на колонках, где в качестве сорбента использовали полиамид и сефадекс LH-20. Контроль за разделением веществ осуществлялся с помощью ТСХ на пластинках «Silufol UV 254», «Сорбфил-ПТСХ-П-А-УФ» и «Сорбфил-ПТСХ-АФ-А-УФ» в системах хлороформ-спирт (2:1) и (9:1), а также специально разработанной нами системе хлороформ-этанол-вода (26:16:3). При этом были выделены следующие компоненты: З^-бисапигенин, кверцетин, 6,811-дикверцетин, гиперозид, рутин (флавоноиды), хлорогеновая кислота (фенилпропаноид), гиперфорин (флороглюцин), р-ситостерин и эргостерин.

Выделенные вещества были исследованы с помощью УФ-, 1Н-ЯМР-спектроскопии, масс-спектрометрии, различных химических превращений, ТСХ. В результате проведенного исследования установлено химическое строение следующих компонентов: З^-бисапигенин, кверцетин,

6,811-дикверцетин, гиперозид, рутин (флавоноиды), хлорогеновая кислота (фенилпропаноид) и гиперфорин (флороглюцин), р-ситостерин и эргостерин (стерины). Физикохимические и спектральные характеристики выделенных веществ представлены в таблице.

Соединения 1-9, представленные в таблице 1, являются большей частью флавоноидами и идентифицированы как З^-бисапигенин, кверцетин, 6,811-дикверцетин, гиперозид, рутин. Кроме того, выделены хлорогеновая кислота, гиперфорин, р-ситостерин и эргостерин. Следует отметить, что гиперфорин, З^-бисапигенин, р-ситостерин и эргостерин впервые выделены из травы зверобоя продырявленного, произрастающего в РФ. Вещество 2, выделенное нами в минорном количестве и идентифицированное как 6,B11- дикверцетин, является новым природным соединениям и впервые описано для рода Hypericum L. Установлено, что доминирующими флавоноидами травы зверобоя являются рутин, гиперозид и З^^-бисапигенин.

Работа выполнена при поддержке проекта 02.740.11.0650 ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-201З годы.

Р-Ситостерин С29Н50О; т.пл. 132-133, 'Н-ЯМР-

8. спектр 200 МГц в дейтерохлороформе (8, м.д.): 5,32 (м, 1Н, Н-6), 3,73 (м, 1Н, Н-3), 0,82,2 (м, 47Н, в том числе 6 СНз). Масс-спектр (70 еУ, 200 °С, т/г, %): 414 (М4-, 32), 255 (32), 231 (19), 213 (27), 145 (34), 135 (37),

119 (60), 105 (43), 97 (58), 71 (63),

#0 69 (65), 43 (50).

9. Эргостерин С28Н«0, т.пл. 163-165 °С. УФ-

спектр (ЕЮН, ^щах): 271 нм. 1Н-

іґ ЯМР-спекгр 200 МГц в дейтерохлороформе (8, м.д.): 5,35 (м, 2Н, Н-6, Н-7), 4,37 (д, 2Н, 7,7, Н-22, Н-23), (м, 1Н, Н-3), 3,1-3,4 (м, 2Н, Н-9, Н-14), 0,65-2,4 (м, 47Н, в том числе 6 СНз). Масс-

ЯО спектр (70 сУ, 200 °С, т/2, %): 396 (М*, 100), 255 (7), 213 (13), 147 (28), 80 (34), 57 (52), 43 (68).

IVh

МЕДИЦИНСКИЙ

АЛЬМАНАХ

Выводы

1. Углубленное исследование химического состава травы зверобоя позволило выделить 9 индивидуальных соединений, относящихся к флавоноидам, флороглюцинам, фенил-пропаноидам и стеринам.

2. На основе изучения данных ЯМР-спектроскопии, УФ-спектроскопии, масс-спектрометрии, ТСХ-анализа установлено химическое строение выделенных веществ, среди которых 3,811-бисапигенин, p-ситостерин и эргостерин и гиперфорин выделены впервые в РФ, а 6,811-дикверцетин является новым природным соединением и впервые описан для рода Hypericum L.

ЛИТЕРАТУРА

1. Китанов Г.М., Блинова К.Ф. Современное состояние химического изучения видов рода Hypericum. Химия природных соединений. 1987. № 2. С. 185-203.

2. Куркин В.А., Правдивцева О.Е. Зверобой: итоги и перспективы создания лекарственных средств. Самара: ГОУ ВПО СамГМУ; ООО «Офорт». 2008. 127 с.

3. Куркин В.А. Фармакогнозия: учебник для фармац. вузов. 2-е изд., перераб. и доп. Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО СамГМУ Росздрава. 2007. 1239 с.

4. Куркин В.А., Правдивцева О.Е., Дубищев А.В., Кадацкая Д.В., Запесочная Г.Г., Жданов И.П. Исследование сырья и препаратов зверобоя. Фармация. 2005. Т. 53. № 3. С. 23-25.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.