CC BY
18ПРИМЕНЕНИЕ СОВРЕМЕННЫХ МЕТОДОВ АНАЛИЗА ПРИ СТАНДАРТИЗАЦИИ ПЫЛЬЦЕВЫХ АЛЛЕРГЕНОВ И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ НА ИХ ОСНОВЕ
Боков Д.О., Смирнов В.В., Морохина С.Л., Луферов А.Н.
ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России, г. Москва
Введение
В настоящее время от 17 до 35% населения РФ страдает различными формами аллергии согласно статистическим данным, предоставленным Институтом иммунологии ФМБА России. Аллергенспеци-фическая иммунотерапия (АСИТ) является сегодня единственным патогенетически обоснованным методом терапии IgE-зависимых аллергических заболеваний. Для оценки качества водно-солевых экстрактов пыльцевых аллергенов, применяемых при АСИТ, и природного сырья, используемого для их производства, требуется проведение соответствующих процедур стандартизации.
Цель. На примере водно-солевого аллергенного экстракта пыльцы березы повислой (Betula pendula Roth.) рассмотреть альтернативные методики стандартизации данной группы иммунобиологических препаратов; изучить анатомо-морфологические и метрологические признаки пыльцы берёзы, химический состав экстракта, разработать и валидировать методику его стандартизации по методу LC-MS.
Материалы и методы. Изучение анатомо-морфо-логических признаков пыльцевых зерен осуществляли в соответствии с требованиями Европейской фармакопеи 7-го издания ("Allergen products — Pollens"). Исследования и фотоснимки выполнялись на микроскопе «Altami 139T» (окуляр 10х и объективы: 4х, 10х, 40х, 100х) с помощью цифровой окулярной камеры UCMOS05100KPA. Анализ экстракта проводился на жидкостном хроматографе Shimadzu с тандемным масс-селективным детектором. Реактивы: ацетонитрил и этанол для ВЭЖХ; вода деионизированная Milli-Q. Пробоподготовка: экстракт пыльцы берёзы (10 мг) помещали в мерную колбу объемом 100 мл, растворяли в воде деионизи-рованной и доводили объем до метки тем же растворителем. 2 мл полученного раствора пропускали через фильтр с размером пор 0,4 мкм. Фильтрат по-
мещали во флакон объемом 2 мл. Условия хромато-графирования: в качестве подвижной фазы использовали смесь 0,1 % раствора муравьиной кислоты в воде с ацетонитрилом (55:45); колонка — Agilent XDB-C18 4.6 x 150 мм, 5,0 мкм; ^олонки - 30 °C; объем вводимой пробы — 10 мкл; скорость потока 0,3 мл/ мин. Условия МС: тип ионизации — DUIS (ESI + APCI); режим — Product ion mode в положительной полярности; Qt в SIM режиме при /z — 876,10; энергия ионизации в калюзионной ячейке--35 В; Q3 в
режиме SCAN с диапазоном /z от 123,2 — 876,1. Для количественного определения белка Bet v 1 использовался метод абсолютной калибровки.
Результаты
Установлены морфологические особенности пыльцевых зерен берёзы повислой: одиночные, 3-х, реже 4-х поровые, радиально-симметричные, изо-полярные, сплюснуто-сфероидальные. При рассмотрении с одного полюса: от округло-треугольных до треугольных, а с экваториальной оси — эллиптической формы. Размер пыльцевых зёрен в диаметре — 14-35 мкм. Поры расположены экваториально (зонально), имеют сложное, камерное строение. В результате исследования полного экстракта пыльцы берёзы была разработана чувствительная и селективная методика количественного определения белка Bet v 1, которая может быть использована для стандартизации экстрактов пыльцы берёзы. Проведена валидация методики по показателям селективность, прецизионность, точность, линейность, предел обнаружения и предел определения.
Выводы
Определены критерии стандартизации пыльцы берёзы повислой, полного аллергенного экстракта на ее основе; разработана универсальная методика ВЭЖХ детектирования мажорного белка Bet v 1. Полученные данные будут использованы при разработке соответствующей фармакопейной статьи.
СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ АЛЛОПАТИЧЕСКИХ И ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ НАСТОЕВ И ОТВАРОВ
Боровикова НА.1, Попов Д.М.2
'ГБОУ ВПО Рязанский государственный медицинский университет им. И.П. Павлова, г. Рязань 2ГБОУВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России, г. Москва
Изготовление гомеопатических настоев и отваров существенно отличается от приготовления аллопатических водных извлечений: 1). В качестве
растворителя в гомеопатических настоях и отварах используют не только очищенную воду, но и воду для инъекций в зависимости от дальнейшего ис-
пользования их; 2). Для изготовления гомеопатических водных извлечений воду берут не по объему, а по весу; 3). При изготовлении гомеопатических настоев и отваров имеются отличия от аллопатических по температурному режиму и времени нагревания и настаивания; 4). Гомеопатические настои и отвары анализируют по показателям «Подлинность» и «Микробиологическая чистота»; 5). Настои и отвары гомеопатические из высушенного лекарственного растительного сырья изготавливаются по массе в соотношении 1 часть сырья и 10 частей воды/
В связи с изложенным выше, представляет определенный интерес, проанализировать гомеопатические настои и отвары с помощью разработанных нами методик, сравнить результаты с данными полученными при анализе аллопатических настоев и отваров.
В качестве объектов исследования были взяты: высушенные цветки липы, листья подорожника, корневища и корни девясила. Сырье отвечало требованиям нормативной документации.
Аллопатические настои из цветков липы, листьев подорожника и отвар корневищ и корней девясила готовили по методам ГФ Х1 изд. 1:20 (по объему).
Гомеопатические настои из цветков липы и листьев подорожника.
Отвешивают 10 г, измельченных цветков липы или листьев подорожника и 100 г очищенной воды. Сырье помещают в инфундирный аппарат, прибавляют 50 мл очищенной воды комнатной температуры, тщательно перемешивают и оставляют на 15 мин при комнатной температуре. Затем к смеси в инфундирном аппарате добавляют оставшуюся часть воды, предварительно нагретую до кипения и настаивают в течение 5 мин при частом перемешивании. После этого смесь оставляют при комнатной температуре до полного охлаждения. Затем настой
фильтруют через двойной слой марли, мягко отжимают и взвешивают. К остатку растительного сырья в инфундирном аппарате прибавляют необходимое количество кипящей воды перемешивали и сырье вновь отжимали. Отжатым извлечением доводили настой до массы 100 г.
В аллопатических и гомеопатических настоях определяли восстанавливающие сахара.
В аллопатическом настое из цветков липы содержание восстанавливающих сахаров от 0,105 до 0,137 %, в гомеопатических — 0,127 — 0,152 %.
В аллопатическом настое из листьев подорожника восстанавливающих сахаров 0,220 — 0,315 %, в гомеопатических — 0,125 — 0,170 %.
Концентрация восстанавливающих сахаров в аллопатических и гомеопатических настоях разнится незначительно.
Гомеопатический отвар из корневищ с корней девясила. Отвешивали 10 г измельченных корневищ и корней девясила и 100 г очищенной воды.
Измельченные корневища и корни помещают в круглодонную колбу с притертой пробкой, заливают 100 г кипящей воды, присоединяют к обратному холодильнику и настаивают на кипящей водяной бане в течение 30 мин при частом помешивании. Горячий отвар фильтруют через двойной слой марли и после охлаждения взвешивают. До требуемой массы отвар доводят аналогично настоям. Содержание фруктозанов в аллопатическом отваре 1,11 — 1,22 %, в гомеопатическом — 1,78 — 1,84 %.
Получены сопоставимые результаты, следовательно, за неимением колбы с обратным холодильником гомеопатический отвар можно приготовить в инфундирном аппарате, а разработанные методики могут быть использованы для анализа гомеопатических водных извлечений.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОДЕРЖАНИЯ РАЗЛИЧНЫХ ГРУПП БАВ В ПЛОДАХ РЯБИНЫ ЧЕРНОПЛОДНОЙ
Брежнева Т.А., Логвинова Е.Е., Берест И.С.
Воронежский Государственный Университет, г. Воронеж
Арония — широко распространенное растение, часто применяющиеся в народной и научной медицине для ускорения восстановления родопсина, улучшения кровоснабжения глаза при диабетической ретинопатии[1].Лекарственным растительным сырьем рябины черноплодной являются плоды, обладающие гипотензивным действием, а так же широкой поливитаминной активностью. Есть данные о содержании в плодах аронии флавонои-дов, антоцианов, лейкоантоцианов, органических кислот, витамина С, каротина, никотиновой кислоты, дубильных веществ, а так жесахаров: глюкозы, фруктозы, сахарозы.
Поскольку при получении водных и спиртовых извлечений из плодов аронии многие из этих БАВ войдут в состав извлечений и могут вносить свой вклад в проявляемую ими активность, оценка содержания данных групп БАВ в сырье и препаратах аронии является актуальной.
В связи с вышесказанным, целью нашего исследования являлось количественное определение некоторых групп БАВ, содержащихся в плодах аронии.
Спецификой сырья аронии является густая окраска, придаваемая сырью содержащимися в нем антоцианами и сохраняющаяся в получаемых из сырья извлечениях. Фоновая окраска извлечений
