CC BY
10НАУЧНАЯ ЖИЗНЬ
ПРИМЕНЕНИЕ СОВРЕМЕННЫХ МЕТОДОВ АНАЛИЗА ПРИ СТАНДАРТИЗАЦИИ ПЫЛЬЦЕВЫХ АЛЛЕРГЕНОВ И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ НА ИХ ОСНОВЕ
Боков Д.О., Смирнов В.В., Морохина С.Л., Луферов А.Н.
ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России, г. Москва
Введение
В настоящее время от 17 до 35% населения РФ страдает различными формами аллергии согласно статистическим данным, предоставленным Институтом иммунологии ФМБА России. Аллергенспеци-фическая иммунотерапия (АСИТ) является сегодня единственным патогенетически обоснованным методом терапии IgE-зависимых аллергических заболеваний. Для оценки качества водно-солевых экстрактов пыльцевых аллергенов, применяемых при АСИТ, и природного сырья, используемого для их производства, требуется проведение соответствующих процедур стандартизации.
Цель. На примере водно-солевого аллергенного экстракта пыльцы березы повислой (Betula pendula Roth.) рассмотреть альтернативные методики стандартизации данной группы иммунобиологических препаратов; изучить анатомо-морфологические и метрологические признаки пыльцы берёзы, химический состав экстракта, разработать и валидировать методику его стандартизации по методу LC-MS.
Материалы и методы. Изучение анатомо-морфо-логических признаков пыльцевых зерен осуществляли в соответствии с требованиями Европейской фармакопеи 7-го издания ("Allergen products — Pollens"). Исследования и фотоснимки выполнялись на микроскопе «Altami 139T» (окуляр 10х и объективы: 4х, 10х, 40х, 100х) с помощью цифровой окулярной камеры UCMOS05100KPA. Анализ экстракта проводился на жидкостном хроматографе Shimadzu с тандемным масс-селективным детектором. Реактивы: ацетонитрил и этанол для ВЭЖХ; вода деионизированная Milli-Q. Пробоподготовка: экстракт пыльцы берёзы (10 мг) помещали в мерную колбу объемом 100 мл, растворяли в воде деионизи-рованной и доводили объем до метки тем же растворителем. 2 мл полученного раствора пропускали через фильтр с размером пор 0,4 мкм. Фильтрат по-
мещали во флакон объемом 2 мл. Условия хромато-графирования: в качестве подвижной фазы использовали смесь 0,1 % раствора муравьиной кислоты в воде с ацетонитрилом (55:45); колонка — Agilent XDB-C18 4.6 x 150 мм, 5,0 мкм; ^олонки - 30 °C; объем вводимой пробы — 10 мкл; скорость потока 0,3 мл/ мин. Условия МС: тип ионизации — DUIS (ESI + APCI); режим — Product ion mode в положительной полярности; Qt в SIM режиме при /z — 876,10; энергия ионизации в калюзионной ячейке--35 В; Q3 в
режиме SCAN с диапазоном /z от 123,2 — 876,1. Для количественного определения белка Bet v 1 использовался метод абсолютной калибровки.
Результаты
Установлены морфологические особенности пыльцевых зерен берёзы повислой: одиночные, 3-х, реже 4-х поровые, радиально-симметричные, изо-полярные, сплюснуто-сфероидальные. При рассмотрении с одного полюса: от округло-треугольных до треугольных, а с экваториальной оси — эллиптической формы. Размер пыльцевых зёрен в диаметре — 14-35 мкм. Поры расположены экваториально (зонально), имеют сложное, камерное строение. В результате исследования полного экстракта пыльцы берёзы была разработана чувствительная и селективная методика количественного определения белка Bet v 1, которая может быть использована для стандартизации экстрактов пыльцы берёзы. Проведена валидация методики по показателям селективность, прецизионность, точность, линейность, предел обнаружения и предел определения.
Выводы
Определены критерии стандартизации пыльцы берёзы повислой, полного аллергенного экстракта на ее основе; разработана универсальная методика ВЭЖХ детектирования мажорного белка Bet v 1. Полученные данные будут использованы при разработке соответствующей фармакопейной статьи.
СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ АЛЛОПАТИЧЕСКИХ И ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ НАСТОЕВ И ОТВАРОВ
Боровикова НА.1, Попов Д.М.2
'ГБОУ ВПО Рязанский государственный медицинский университет им. И.П. Павлова, г. Рязань 2ГБОУВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России, г. Москва
Изготовление гомеопатических настоев и отваров существенно отличается от приготовления аллопатических водных извлечений: 1). В качестве
растворителя в гомеопатических настоях и отварах используют не только очищенную воду, но и воду для инъекций в зависимости от дальнейшего ис-
СЕЧЕНОВСКИЙ ВЕСТНИК № 1(15) 2014 г.
117
