CC BY
62
Квасова Т.М.
Аспирант, Кафедра управления и экономики фармации ГОУ ВПО «Тверская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития России», г.Тверь
ИССЛЕДОВАНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ПОЛИСАХАРИДОВ В ПРЕПАРАТАХ СБОРА АРФАЗЕТИН И ОТДЕЛЬНЫХ ЕГО КОМПОНЕНТАХ
Аннотация
Проведено исследование по изучению полисахаридов в препаратах противодиабетического сбора «Арфазетин». Установлено, что содержание полисахаридов в растворе экстракте сбора сухом превышает содержание данных веществ в настое в среднем в 10,6 раза.
Ключевые слова: полисахариды, сбор «Арфазетин», гравиметрический анализ Keywords: polysaccharides, the collection "Arfazetin", gravimetric analysis
Введение
Лекарственные растительные сборы являются наиболее популярной и широко используемой формой переработки лекарственного растительного сырья. Как правило, сборы предназначены для получения водных извлечений. Сложность применения сбора заключается в том, что водные извлечения из лекарственного растительного сырья (ЛРС) нестабильны при хранении; в них возможны явления гидролитического расщепления, окислительно-восстановительные реакции, микробная порча; их трудно стандартизировать. В связи с этим, перспективным является получение сухих водорастворимых экстрактов из ЛРС, с точно дозированными биологически активными веществами (БАВ) [6]. Кроме того, перевод сборов в сухие экстракты обеспечивает рациональное использование ЛРС и представляет интерес в плане разработки ресурсосберегающих технологий производства лекарственных средств растительного происхождения.
Одним из фитотерапевтических средств, применяемых в лечении больных сахарным диабетом (СД), является сбор Арфазетин, в состав которого входят черники побеги, фасоли обыкновенной створки плодов, элеутерококка колючего корни и корневища, шиповника плоды, хвоща полевого трава, зверобоя трава, ромашки аптечной трава. Сбор предназначен для получения водного извлечения.
Фармакологическая активность препаратов лекарственных растений обусловлена наличием в них БАВ, в том числе полисахаридов [1].
Известно, [2] что полисахариды являются необходимым компонентом растительных клеток, активируют защитные силы организма, неспецифическую иммунологическую реактивность, клеточные и гуморальные механизмы, ответственные за антимикробную и противоопухолевую защиту. Все это является немало важным при профилактике основных осложнений СД.
Новой лекарственной формой (ЛФ) сбора Арфазетин является экстракт сухой водорастворимый [6].
Целью настоящего исследования является изучение содержания полисахаридов в экстракте сухом и настое сбора Арфазетин, а так же в отдельных компонентах сбора.
Материалы и методы
Объектом исследования являлись различные лекарственные формы сбора Арфазетин (ОАО «Красногорсклексредства») и водные извлечения, полученные по методике ГФ XI, из отдельных компонентов сбора [4]. Качественный и количественный состав полисахаридов определяли в исследуемых образцах:
образец 1. Настой сбора Арфазетин (1:10) получали в соответствии с требованиями ГФ XI - 10,0 г сбора помещали в инфундирку, заливали водой очищенной 100 мл, и
настаивали в инфундирном аппарате в течение 15 минут, охлаждали при комнатной температуре 45 минут, процеживали через 4 слоя марли, объем полученного настоя доводили кипяченой водой до 100 мл.
образец 2. Настой сбора Арфазетин (1:40) получали в соответствии с инструкцией по применению - 5,0 г сбора помещали в эмалированную посуду, заливали 200 мл горячей кипяченой воды, закрывали крышкой и нагревали на кипящей водяной бане в течение 15 минут, охлаждали при комнатной температуре 45 минут, процеживали через 4 слоя марли, объем полученного настоя доводили кипяченой водой до 200 мл.
образец 3. Водный раствор экстракта сухого. Точную навеску экстракта сухого, полученного в лабораторных условиях на базе ОАО «Биохиммаш» с использованием распылительной сушилки, массой около 1,0 г взвешивали и помещали в колбу, прибавляли 50 мл горячей воды. После охлаждения фильтровали;
образец 4-9. Настой черники побегов (1:10), настой фасоли обыкновенной створок плодов (1:10), настой шиповника плодов (1:10), настой зверобоя продырявленного травы (1:10), настой ромашки аптечной цветков (1:10), настой хвоща полевого травы (1:10) получали в соответствии с требованиями ГФ XI - 10,0 г соответствующего вида сырья помещали в инфундирку, заливали водой очищенной 100 мл, и настаивали в инфундирном аппарате в течение 15 минут, охлаждали при комнатной температуре 45 минут, процеживали через 4 слоя марли, объем полученного настоя доводили кипяченой водой до 100 мл;
образец 10. Отвар элеутерококка колючего корневищ и корней (1:10). 10,0 г соответствующего вида сырья помещали в инфундирку, заливали водой очищенной 100мл, и настаивали в инфундирном аппарате 30 минут, охлаждали при комнатной температуре 15 минут, процеживали. Оставшееся сырье отжимали и объем полученного извлечения доводили водой до 100 мл.
Идентификацию полисахаридов проводили в исследуемых образцах с использованием основной качественной реакции на данную группу веществ: к 10 мл соответствующего извлечения прибавляли 30 мл 95% спирта этилового и перемешивали.
[4]
Исследования по количественному определению полисахаридов проводили согласно методике [3, 4] количественного определения полисахаридов в листьях подорожника большого гравиметрическим методом анализа: 25 мл соответствующего извлечения помещали в центрифужную пробирку, прибавляли 75 мл 95% спирта этилового, перемешивали, подогревали на водяной бане до 30СС в течение 5 минут. Через час содержимое центрифугировали с частотой вращения 5000 об/мин в течение 30 минут. Над осад очную жидкость профильтровывали под вакуумом при остаточном давлении 1316 кПа через высушенный до постоянной массы при температуре 100-105 еС стеклянный фильтр ПОР 16 диаметром 40 мм. Осадок количественно переносили на фильтр и последовательно промывали 15 мл раствора 95% спирта этилового в воде (3:1), 10 мл ацетона, 10 мл этилацетата. Фильтр с осадком высушивали сначала на воздухе, затем при температуре 100-105сС до постоянной массы. Содержание полисахаридов в процентах (X) вычисляли по формуле:
(m.-mj 100
Х" V
m1- масса фильтра, г;
m2- масса фильтра с осадком, г;
V- объем извлечения, мл.
Результаты исследования обработаны статистически с применением стандартного пакета программ Microsoft Office Excel 2003. Для ряда выборок вычисляли среднюю арифметическую и среднюю квадратическую ошибку. Определение нормальности распределения переменных проводили на основании гистограмм распределения,
величины асимметрии и эксцесса. Для оценки достоверности различий выборок, имеющих нормальное распределение, применяли параметрический ^критерий Стьюдента (парный и непарный). За достоверное принимали различие при уровне вероятности 95% и более (Р<0,05).
Результаты и их обсуждение
Анализ результатов химического исследования показал, что во всех лекарственных формах (ЛФ) присутствовали полисахариды, однако их количественное содержание в исследуемых образцах отличалось.
Результаты постановки качественной реакции со спиртом этиловым 95% позволили доказать наличие полисахаридов во всех ЛФ сбора Арфазетин, а также в настоях отдельных компонентов сбора. Так, было отмечено, что при проведении качественной реакции на полисахариды все исследуемые образцы образовывали хлопьевидные сгустки, выпадающие в осадок при стоянии.
На следующем этапе экспериментального исследования провели количественное определение содержания полисахаридов [7] в препаратах сбора и отдельных его компонентах (таблица1).
Таблица 1
Содержание полисахаридов в различных лекарственных формах сбора Арфазетин и настоях отдельных компонентов сбора
№ п/п Вид извлечения Содержание полисахаридов, %
1 Раствор экстракта сухого сбора Арфазетин 1,452±1,38*
2 Настой сбора Арфазетин (1:10) 0,1368±0,015*
3 Настой сбора Арфазетин (1:40) 0,0472±0,09*
4 Настой черники побегов по ГФ XI (1:10) 0,1392±0,021
5 Настой фасоли обыкновенной створок плодов по ГФ XI (1:10) 2,3123±0,012
6 Настой шиповника плодов по ГФ XI (1:10) 0,6125±0,029
7 Настой зверобоя продырявленного травы по ГФ XI (1:10) 0,1216±0,022
8 Настой ромашки аптечной цветков по ГФ XI (1:10) 0,0324±0,01
9 Настой хвоща полевого травы по ГФ XI (1:10) 2,7040±0,012
1 0 Отвар элеутерококка колючего корневищ и корней по ГФ XI (1:10) 0,2175±0,007
Примечание: * - различия содержания полисахаридов в водных извлечениях сбора с содержанием полисахаридов в растворе экстракта достоверны (р<0,05).
Сравнительный анализ количественного содержания полисахаридов в препаратах антидиабетического сбора Арфазетин показал, что наибольшее количество этих веществ содержится в растворе экстракта сухого. Так, содержание полисахаридов в растворе экстракта сухого было в среднем в 10,6 раза (р<0,05) выше, чем в настое сбора, приготовленном в соответствии с требованиями ГФ. Следует отметить, что в настое, изготовленном в соответствии с инструкцией по медицинскому применению, количество этих веществ было в среднем в 2,9 раза (р<0,05) ниже, чем в водном извлечении, изготовленном в соответствии с фармакопейными требованиями.
Особый интерес представляло изучение количественного содержания этих веществ в водных извлечениях отдельных компонентов сбора. Среди водных извлечений отдельных компонентов сбора Арфазетин, содержание полисахаридов преобладало в настое травы
хвоща полевого и настое створок плодов фасоли обыкновенной, и оказалось в 83,4 и 71,4 раза (р<0,05) выше, соответственно, чем в настое ромашки аптечной цветков, показавшем наименьший результат. Следовательно, суммарное содержание полисахаридов в сборе Арфазетин преимущественно связано с экстракцией этих веществ из травы хвоща полевого и створок плодов фасоли обыкновенной.
Таким образом, на содержание полисахаридов в препаратах сбора Арфазетин существенное влияние оказывал режим экстракции действующих веществ, поскольку наиболее полное извлечение исследуемых веществ из сбора Арфазетин обеспечивается при получении экстракта сухого водорастворимого. При получении экстракта сухого экстрагирование проводили трехкратно методом мацерации водой очищенной при температуре 800С [5]. Как показали результаты экспериментального исследования, такой режим экстракции обеспечивал наиболее полное извлечение полисахаридов из ЛРС. Выводы:
1. Содержание суммы полисахаридов в растворе экстракта сбора Арфазетин сухого составило 1,452±1,38%, что было в среднем в 10,6 раза (р<0,05) выше, чем в настое сбора (1:10).
2. Содержание суммы полисахаридов в настое сбора Арфазетин (1:40) было в среднем в 2,9 раза (р<0,05) ниже, чем в настое сбора (1:10).
3. Полисахариды содержатся в водных извлечениях всех компонентов сбора Арфазетин, однако, наибольшее содержание полисахаридов отмечается в водных извлечениях травы хвоща полевого и створок плодов фасоли обыкновенной.
Литература
1. Ажунова Т.А. Полисахаридный комплекс Aloe arborescens mill как средство дополнительной терапии сахарного диабета / Т.А. Ажунова, С М. Николаев, А.Д. Бакуридзе // Раст. ресурсы. - 2004. - Вып. 1. - С.76-81.
2. Балицкий К.П. Лекарственные растения и рак. / К.П. Балицкий, Л.А. Воронцова. - Киев: Наукова думка, 1982. - 376 с.
3. Булгаков Т.В., Кудашкина Н.В. Количественное определение полисахаридов в траве болиголова пятнистого. // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / под ред. Гаврилина М.В. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2010. -Вып. 65. - с. 18-19.
4. Государственная фармакопея СССР. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье [Текст] / МЗ СССР. - . 11- е изд., доп. - М.: Медицина, 1989. - Вып.2. -с. 147-148, .350-352.
5. Давыдова В.Н. Современные технологии получения сухих экстрактов и их ассортимент / В.Н. Давыдова // Новая аптека. - 2002. - № 4. -С. 64-71.
6. Получение сухого экстракта Сбора Арфазетин [Текст]: Т.М. Квасова, М.А. Демидова. // Синтез и перспективы использования новых биологически активных соединений: материалы II региональной научно-практической конференции. / КГМУ. - Казань: [б.и.], 2009. - с. 145-147.
7. Яцюк В.Я., Сошникова О.В., Изучение полисахаридного комплекса мелколепестника однолетнего. // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / под ред. Гаврилина М.В. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2010. -Вып. 65. - с. 165-167.
