CC BY
58
УДК 616-002.8 .......' ... ■ Г ■ . ■ . ■
Т.Д.Тарасова, В.СЛесовой, В.Н.Андрус, А.В.Липницкий , -
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ДЕЗИНФИЦИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТОВ ИЗ КЛАССА ЧЕТВЕРТИЧНО-АММОНИЙНЫХ СОЕДИНЕНИЙ В ОТНОШЕНИИ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ МИКОЗОВ, ВЫЗЫВАЕМЫХ МИЦЕЛИАЛЬНЫМИ ГРИБАМИ
Волгоградский научно-исследовательский'противочумный институт
Исследована активность препаратов из класса, четвертично-аммонийных соединений на мицелиальные грибы Aspergillus fumigatus, Coccidioides immitis, Histopiasma 'capsulatum: Показано, что септодор-форте является самым эффективным для обезвреживания поверхностей, контаминированных, или подозрительных на контаминацию этими грибами. ' ..
Одной из наиболее сложных проблем современной дезинфектологии является разработка средств и методов обеззараживания объектов, контаминированных возбудителями грибковых заболеваний. Это объясняется, с одной стороны, их биологическими особенностями, а с другой - требованиями практики. Среди поверхностно-активных веществ (ПАВ) наиболее перспективными для целей дезинфекции следует считать катионоактивные четвертично-аммонийные соединения (ЧАС). Этот класс соединений сочетает в себе дезинфицирующие, смачивающие и антикоррозионные свойства, обладая в то же время низкой токсичностью.
Механизмы действия современных дезинфицирующих средств изучены недостаточно. Фунгицидный эффект достигается, когда препарат разрушает имеющиеся структуры или останавливает процессы, поддерживающие основные жизненные функции грибковой клетки. Чаще всего это! происходит за счет разрушения мембраны.
Об успешном применении препаратов ЧАС против возбудителей грибковых инфекций сообщали как отечественные [2], так и зарубежные исследователи [6]. Однако B.Terleckyi и D.A.Axler отмечали отсутствие фунгицидной активности ЧАС при воздействии на мицелиальные грибы (Aspergillus fumigatus, Trichophyton mentagrophytes и Epidermo-phyton floccosum), выделенные в клинической практике [8]. В то же время известно, что мицелиально-дрожжевой морфологический диморфизм типичен для многих патогенных грибов (в том числе Coccidioides immitis и Histoplasma capsulatum), и это свойство признано одним из основных факторов вирулентности [5]. С. immitis и Я. capsulatum, являющиеся первичными патогенами, существуют во внешней среде в мицелиальной (сапрофитической) фазе и могут контаминировать больничное окружение, медицинскую аппаратуру, инструменты а также помещения диагностических лабораторий.
Целью настоящего исследования явилось сравнительное изучение эффективности действия препаратов ЧАС против клинически значимого оппортунистического мицелиального гриба A. fumigatus и
патогенных (С; ттМ5, Н: сарзиШит) в мицелиальной фазе.
Изучение Дезинфицирующей активности препаратов ЧАС (септабика, бромосепта-50, велтолена, септодора, септодора-форте, новодеза и лизофор-мина-3000) проводили согласно Единым инструктивно-методическим указаниям по изучению и отбору новых средств дезинфекции и стерилизации, безопасных для применения в практике [1].
В качестве тест-штаммов использовали музейные культуры Я. сарзиШит 6650, С. 1ттШ5 34, A.fumigatus 30/50, полученные из коллекционного центра ВолгНИПЧИ. Мицелиальную фазу С. иптгйа и Я. сар5и1ашт выращивали на среде Сабуро при 28 °С в течение 45 сут. Вырастали плоские, мучнистые, серовато-белые колонии С. ттШз, с концентрически исчерченной поверхностью, и бархатистые, серовато-коричневые, вросшие в толщу питательного субстрата колонии Я. са^иШит. При микроскопии - ветвистый септированный мицелий с гладкими конидиями и концевыми округлыми хла-мидоспбрами у Я. сар.чикиит и многочисленными прямоугольными артроспорами у С. иптШз. А. /и-выращивали при 28 °С в течение 48 ч до появления бархатисто-мучнистых, серо-зеленых колоний. При микроскопии - мицелий и. стоячие, кони-диеносцы, оканчивающиеся грушевидным расширением, вокруг которого радиарно лежат цепочки из конидий..
Заражение батистовых тестов проводили путем погружения их в суспензию микроорганизмов из расчета 0,5 мл/2 млрд взвеси на 1 тест-объект. На тест-поверхности наносили 0,5 мл суспензии 2-мил-лиардной агаровой культуры^ микроорганизмов на площади 100 см2. - • ‘ <
. Тест-поверхности орошали растворами дезинфектанта из расчета 500 мл/м2. Контроль эффективности обработки поверхностей проводили путем смыва с подвергнутых обработке инфицированных поверхностей при 30, 60, 90 и 120 мин экспозиции (с использованием смоченных 0,9 % раствором КаС1 стерильных марлевых тампонов). Тампоны затем отмывали в растворе нейтрализатора (0,3 %
раствор анионного ПАВ сульфонола) и стерильной водопроводной воде с последующим высевом в объеме 0,2 мл на пластины агара Сабуро. Окончательный учет результатов роста микроорганизмов проводили через 7-14 сут: В контроле дезинфицирующее вещество заменяли стерильной водопроводной водой.
При определении минимальной фунгицидной концентрации (МФК) препаратов ЧАС для испытуемых тест-микроорганизмов использовали метод серийных разведений в жидкой питательной среде (бульон Сабуро). Изучение фунгицидной активности проводили при 0,1—0,5—1,0—3,0 % концентрациях и 5,10, 15, 30, 60 и 120 мин экспозициях. Эффективными считали данные, полученные после обобщения не менее 3 опытов с обеспечением 100 % гибели микроорганизмов.
На первом этапе была изучена активность 0,1 % растворов препаратов ЧАС в отношении тестируемых культур при разных экспозициях. Показано, что время, необходимое для инактивации микроорганизмов, существенно варьировало. Самым устойчивым оказался гриб А. ^т1§аш$, сохранявший жизнеспособность даже после 60 мин обработки любым из изучаемых препаратов. Возбудители гис-топлазмоза и кокцидиоидоза,- находящиеся в мице-лиальной фазе, были более чувствительны. Септа-бик, бромосепт-50, велтолен, новодез и катамин АВ вызывали инактивацию этих грибов после 15 мин обработки. Максимальный эффект достигался при действии лизоформина-3000, септодора. и септодо-ра-форте: гибель Н. сарзиШит и С. imm.itI,? наступала уже <герез 5-10 мин.
Таким образом, нами было подтверждено наблюдение В.Тег1еску1 и Б.А.Ах1ег [8], что препараты ЧАС не проявляют фунгицидной активности в отношении A.fumigatus при 60 мин экспозиции. В то же время патогенные грибы ,С. ЬттШ и Я. cap.su-1ашт в мицелиальной фазе инактивировались этими же дезинфицирующими средствами в течение 5-15 мин. Очевидно, химический состав отдельных клеточных структур у разных грибов может отличаться настолько, что некоторые из них вообще не имеют специфических мишеней для действия некоторых противогрибковых средств.
О высокой устойчивости аспергиллов к антисептикам и дезинфектантам сообщают и зарубежные авторы [7], объясняя ее за счет инсерционной резистентности этих микроорганизмов, которая контролируется хромосомой.
Аспергиллез в настоящее время называют «принцем» оппортунистических инфекций, который идет на смену кандидозу: Внутрибольничные плесневые микозы возрастают на 5-10 % в год и характеризуются трудностью диагностики, лечения и высокой летальностью. Учитывая полученные нами предварительные результаты по чувствительности возбудителей клинически значимых микозов к препаратам ЧАС, мы определили минимальные фунгицидные концентрации (МФК) изучаемых дезинфи-
цирующих средств для исследуемых грибов.
При этом показано, что самым чувствительным к препаратам на основе ЧАС является Я. сарзиШит (МФК колеблется от 0,001 до 0,007), затем следует С. ттШя (МФК= 0,01-0,04). Наиболее устойчивым, как и в предыдущем эксперименте, показал себя A.fumigatus( МФК = 0,1-0,5).
Проблема обеззараживания различных поверхностей и медицинского оборудования в диагностических лабораториях, операционных и больничных палатах является очень актуальной в связи с совершенствованием техники пересадки органов, хирургическим удалением и иссечением каверн и опухолей неизвестного происхождения, снятием гипсовых повязок при лечении остеомиелитов неустановленной этиологии, удалением катетеров после длительной катетеризации брюшной полости [3, 4, 9].
Нами было проведено изучение активности препаратов ЧАС при дезинфекции гладких (стекло, кафель) и шероховатых (керамика, дерево) поверхностей и показано, что наиболее устойчивыми к действию исследуемых ЧАС являются аспергиллы. При концентрациях дезинфицирующих средств от
0,1 до 3,0 % они выживали на шероховатых поверхностях при 120 мин экспозиции, а на гладких погибали лишь через 60-120 мин в зависимости от препарата. Самым эффективным показал себя септо-дор-форте, 0,5 % раствор которого вызывал гибель аспергиллов как на гладкой, так и на шероховатой поверхностях через 60 мин.
Близким по устойчивости к A.fumigatus был возбудитель кокцидиоидоза. При тех же концентрациях препаратов он требовал для инактивации гладких поверхностей 60-120 мин, а шероховатых -120 мин и более. Септодор-форте вызывал его гибель через 30 и 60 мйн соответственно. Более чувствительным был Я. сар.чиШит, погибавший на шероховатых поверхностях через 60-120 мин, а на гладких - через 30-60 мин.
Таким образом, было показано, что мицелиаль-ные грибы не однородны по чувствительности к действию дезинфицирующих средств. на основе ЧАС, что, возможно, связано с функциональноморфологическим строением стенки, грибной клетки. Но, очевидно, есть и другие факторы, обусловливающие максимальную устойчивость аспергиллов (например, транспозоны). Это должно быть учтено при разработке режимов обеззараживания поверхностей, контаминированных мицелиальными грибами. Препараты. класса ЧАС могут быть использованы для' дезинфекции объектов внешней среды, контаминированных или подозрительных на контаминацию патогенными грибами Я. сарзиШит и С. иптп1.ч. Самым эффективным из препаратов ЧАС для обезвреживания поверхностей, контаминированных мицелиальными грибами, является септодор-форте, содержащий в своем составе глютаро-вый альдегид. Из испытанных грибов A.fumigatus обладает максимальной устойчивостью к препаратам ЧАС.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Единые инструктивногметодические указания по изучению и отбору новых средств дезинфекции и стерилизации безопасных для применения в практике. - М., 1985. -
2. Суворов B.C., Комков И.П., Агафонов А.В. //Матер. Всесоюз. совещ. по вопр. глубоких микозов. - Волгоград, 1970.- С. 179-184. - 3.Botterel F., Romand S., Saliba F. // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. - 1999. - V. 18(9). -P. 662-664. - 4. Buck B.E., Malinin T.I., Davis J.H.//N. Engl. J. Med. - 2001. - Vol. 344, N4. - P. 310-314. -5.Kobayashi G.S., Medoff G., Maresca B. //Fungal Dimorphism with Emphasis Fungi Pathog. Hum. - New York, Lon- •> don, 1985. - P. 69-91. - 6. Najafpoor A. A., Dehgani M.H., Hagi F.M. //Успехи медицинской микологии: Матер. Первого Всероссийск. конгресса по мед. микологии. - 2002. - Т. 1. -С. 119. - 7. Russell A.D., Furr J.R. // Sci. prog. (Engl.). -1996. - Vol. 79.-P. 27-48.-8.Terleckyi B., Axler D.A.//J. Am. Pediatr. Med. Assoc. -1993. - Vol. 83, N 7. - P. 386-393. -
9. Vandecasteele S.J., Boelaert J.R., Verrelst P.//Clin. Infec. Dis. - 2002. - Vol. 35. - P. 887-890.
T.D.Tarasova, V.S.Lesovoy, V.N.Andrus, A.V.Lipnitsky
Comparative Assessment of Disinfection Activity of Preparations Representing the Class of Quaternary Ammonia Compounds Against the Etiologic Agents of Mycoses Caused by Micellar Fungi
Volgograd Antiplague Research Institute
Activity of preparations - members of the group of quaternary ammonia compounds against micellar fungi Aspergillus fumigatus, Coccidi-oides immitis, Histoplasma capsulatum was studied in the work. Septodor-forte was shown to be the most efficient agent for disinfection of surfaces contaminated with these fungi or suspected so.
nocTyrmia 08.01.04
ИНФОРМАЦИЯ
РЕЗОЛЮЦИЯ V МЕЖГОСУДАРСТВЕННОЙ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКОЙ КОНФЕРЕНЦИИ «ПРОБЛЕМЫ САНИТАРНОЙ ОХРАНЫ ТЕРРИТОРИЙ И ГОССАНЭПИДНАДЗОРА НА ТРАНСПОРТЕ В СОВРЕМЕННЫХ УСЛОВИЯХ»
9 сентября 2004 г.
Участники V Межгосударственной научно-практической конференции «Проблемы санитарной охраны территорий и госсанэпиднадзора на транспорте в современных условиях» государств-участников СНГ от Азербайджанской Республики, Республики Беларусь, Республики Молдова, Российской Федерации, Республики Узбекистан, Украины, а также Латвии, Литвы, Эстонии при участии Исполнительного Комитета СНГ, Европейского регионального Бюро ВОЗ, Международной Организации Труда по результатам состоявшегося обсуждения проблем, связанных с сотрудничеством и взаимодействием стран Содружества по предупреждению заноса и распространения инфекционных болезней, завоза и реализации санитарно-опасных товаров и грузов, чрезвычайных санитарно-эпидемиологических ситуаций, имеющих международное значение, в том числе и связанных с актами биотерроризма, констатировали динамичный характер и прогрессирующую актуальность проблем правового, нормативно-методического, информационного, технологического регулирования обеспечения санитарно-эпидемиологической безопасности стран в части санитарной охраны территорий, государственного санитарно-эпидемиологического надзора, охраны и гигиены труда на транспорте.
Решение всех перечисленных научно-практических проблем осуществлялось в порядке выполнения таких основополагающих документов как:
Соглашение о сотрудничестве в области обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия населения государств-участников СНГ, при-
Российская Федерация, г. Санкт-Петербург
нятого Советом по сотрудничеству в области здравоохранения 02.06.95 г. (г. Душанбе);
Резолюция 1-й Межгосударственной научно-практической конференции по проблемам санитарной охраны территорий государств-участников СНГ (Саратов, 1998 г.);
Соглашение о сотрудничестве в области санитарной охраны территорий государств-участников СНГ, принятого Советом глав правительств государств-участников СНГ 31.05.01 г. (г. Минск);
Межгосударственная программа сотрудничества в области санитарной охраны территорий госу-дарств-участников СНГ от завоза и распространения особо опасных инфекционных болезней на период до 2005 г., принятой Советом -по сотрудничеству в области здравоохранения 19.06.01 г. (г. Баку).
Участники конференции отмечают положительную динамику в разработке принципов и содержания теории и практики осуществления санитарной охраны территорий на межведомственном, междисциплинарном и межотраслевом уровне, выраженную в разработке следующих документов:
1. Положение о порядке осуществления информационного обмена между государствами-участниками Содружества Независимых Государств, об эпидемиологическом надзоре за карантинными и другими опасными инфекционными болезнями и о контроле за потенциально опасными для здоровья населения товарами и грузами (утверждены на XV заседании Совета по сотрудничеству в области здравоохранения СНГ 03.06.03 г., г. Астана, Республика Казахстан);
