CC BY
25
Пробл. особо опасных инф. 2017; 3:75-79. DOI: 10.21055/0370-1069-2017-3-75-79
УДК 582.28
и.В.новицкая1, Е.В.Прохватилова1, А.В.Топорков1, Д.В.Викторов1, м.ЯЖулаков1, Е.В.савина1, В.Г.Пушкарь1, л.и.Белицкая1, нА.осина2, ЖА.касьян2, и.В.Шульгина2, оА.лобовикова2
диагностические возможности эритроцитарного иММуноглоБулинового диагностикума для выявления и идентификации возбудителей особо опасных (глубоких) микозов
1ФКУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт», Волгоград; 2ФКУЗ «Российский
научно-исследовательский противочумный институт «Микроб», Саратов, Российская Федерация
целью работы является оценка и диагностической чувствительности и специфичности «Набора реагентов. Диагностикум эритроцитарный кокцидиоидомикозный и гистоплазмозный иммуноглобулиновый сухой», предназначенного для идентификации возбудителей кокцидиоидомикоза и гистоплазмоза в выделенных культурах микромицетов, а также клиническом и биологическом материале с помощью РНГА. материалы и методы. С использованием предложенного диагностикума проведено исследование 264 положительных проб (216 проб суспензий микромицетов, 48 проб биологического и клинического материала), содержащих возбудители гисто-плазмоза, кокцидиоидомикоза в концентрации 3,12-106 и 1,56-106 кл/мл и 128 отрицательных проб, содержащих гетерологичные микроорганизмы в концентрации 5-107 кл/мл. В работе использовали пробы биологического материала, искусственно контаминированные данными возбудителями особо опасных микозов, и полученные от биопробных животных с экспериментальной инфекцией. Выводы и результаты. Установлено, что диагностическая чувствительность набора реагентов составила не менее 99,0 %, диагностическая специфичность - не менее 98,0 %. Воспроизводимость результатов во всех случаях 100 %. Полученные результаты указывают на перспективность внедрения разработанного препарата в практику здравоохранения.
Ключевые слова: кокцидиоидомикоз, гистоплазмоз, РНГА, набор реагентов.
Корреспондирующий автор: Новицкая Ирина Вячеславовна, e-mail: [email protected].
I.V.Novitskaya1, E.V.Prokhvatilova1, A.V.Toporkov1, D.V.Viktorov1, M.Ya.Kulakov1, E.V.Savina1, V.G.Pushkar'1, L.I.Belitskaya1, N.A.Osina2, Zh.A.Kas'yan2, I.V.Shul'gina2, O.A.Lobovikova2
Diagnostic Potential of the Erythrocytic Immunoglobulin Diagnosticum for Indication and Identification of the Causative Agents of Particularly Dangerous (Deep) Mycoses
1 Volgograd Research Anti-Plague Institute, Volgograd, Russian Federation; 2Russian Research Anti-Plague Institute "Microbe", Saratov, Russian Federation
Objective of the study was to assess analytical and diagnostic sensitivity and specificity of the "Reagent kit. Erythrocytic coccidioidomycosal and histoplasmosal immunoglobulin dry diagnosticum", designed for identification of causative agents of coccidioidomycosis and histoplasmosis in isolated cultures of micromycetes, as well as in clinical and biological samples using indirect hemagglutination test. Materials and methods. The investigation included 264 positive samples (216 samples of micromycete suspensions, 48 samples of biological and clinical material) containing pathogens of histoplasmosis and coccidioidomycosis concentrated up to 3,12106 and 1,56 106 cells/ml, respectively, and 128 negative samples containing heterologous microorganisms in concentrations equal to 5 106 cells/ml. The study was carried out using biological samples that were artificially contaminated with stated pathogens of particularly dangerous mycoses and samples, obtained from bioassay animals with experimental infection. Results and conclusions. It is established that diagnostic sensitivity of the reagent kit is not less than 99,0 %. The diagnostic specificity is not less than 98,0 %. Reproducibility of the results in all cases was 100 %. The results obtained testify to the prospect of introduction of the developed kit into the health care practice.
Key words: coccidioidomycosis, histoplasmosis, indirect hemagglutination test, reagent kit.
Conflict of interest: The authors declare no conflict of interest.
Corresponding author: Irina V. Novitskaya, e-mail:....................
Citation: Novitskaya I.V., Prokhvatilova E.V., Toporkov A.V., Viktorov D.V., Kulakov M.Ya., Savina E.V., Pushkar' V.G., Belitskaya L.I., Osina N.A., Kas'yan Zh.A., Shul'gina I.V., Lobovikova O.A. Diagnostic Potential of the Erythrocytic Immunoglobulin Diagnosticum for Indication and Identification of the Causative Agents of Particularly Dangerous (Deep) Mycoses. Problemy Osobo Opasnykh Infektsii [Problems of Particularly Dangerous Infections]. 2017; 3:75-79. (In Russ.). DOI: 10.21055/0370-1069-2017-3-75-79
Кокцидиоидомикоз и гистоплазмоз - инфекционные болезни, вызываемые особо опасными диморфными грибами II группы патогенности Сос&-dioides sp. и Histoplasma sp. Восприимчивость человека к возбудителям этих инфекций считается всеобщей. В настоящее время вследствие расширения миграционных потоков, туристических связей и дру-
гих возможностей коммуникации населения случаи заболевания кокцидиоидомикозом и гистоплазмозом регистрируют во многих странах мира. Присутствие возбудителей особо опасных микозов среди потенциальных агентов биотерроризма еще более актуализирует проведение исследований, направленных на их индикацию и идентификацию [3]. В связи с
этим конструирование и последующая регистрация в Российской Федерации диагностических наборов и тест-систем для обнаружения возбудителей кокци-диоидомикоза и гистоплазмоза в пробах окружающей среды и при выявлении клинических случаев болезни является одним из приоритетных направлений отечественного здравоохранения.
В соответствии с приказом Роспотребнадзора № 88 от 17.03.2008 «О мерах по совершенствованию мониторинга за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней» (М1р://ушрсЫ.1^ро^еЬ-nadzor.ru) на базе ФКУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт» сформирован Референс-центр по мониторингу за возбудителями глубоких микозов. В его задачи входит изучение биологических, иммунологических, молекулярно-генетических характеристик данных возбудителей, а также разработка и совершенствование диагностических препаратов, прежде всего экспрессной направленности, для их выявления и идентификации.
Иммуноанализ с помощью РНГА позволяет получить предварительный результат через 3-4 ч от начала исследования [2], что является как своевременным в определении тактики ведения больного, так и экономически выгодным и целесообразным с точки зрения дифференциальной диагностики особо опасных микозов и бактериальных или вирусных инфекций. Специалистами Волгоградского научно-исследовательского противочумного института ранее разработан «Набор реагентов. Диагностикум эритроцитарный кокцидиоидомикозный и гисто-плазмозный иммуноглобулиновый сухой», который позволяет обнаружить антигены микромице-тов Coccidioides sp. и Histoplasma sp. в выделенных культурах микроскопических грибов, а также биологических пробах и пробах клинического материала (преимущественно мокроты, промывной жидкости бронхов, сыворотки крови, секционного материала) с помощью РНГА. Для внедрения данного препарата в практику необходима оценка его диагностической чувствительности и специфичности при исследовании различного вида материала, в том числе полученного от животных с экспериментальным кокци-диоидомикозом и гистоплазмозом.
Материалы и методы
Диагностикум эритроцитарный кокцидиоидо-микозный и гистоплазмозный иммуноглобулиновый сухой был получен на основе иммуноглобулинов гипериммунной кокцидиоидомикозной и гистоплаз-мозной агглютинирующей козьей сыворотки [1]. Лиофилизацию препарата проводили по десятисту-пенчатой программе при плавном подъеме вакуума в камере в течение 18-20 ч [4]. В состав среды высушивания входили реополиглюкин (15 %), сахароза (7,5 %) в воде очищенной.
Постановку РНГА и РТНГА осуществляли в
макро- и микровариантах по стандартной методике в соответствии с инструкцией к препарату [2, 3]. Диагностикум растворяли в 0,15 М растворе натрия хлорида рН (7,2±0,2), содержащем 1 % формалина до конечной концентрации 1 %, и выдерживали 4 ч при температуре (22±2) °С. Проведение РТНГА осуществляли с помощью имеющейся в наборе сыворотки кокцидиоидомикозной агглютинирующей козьей в ее разведении 1:500. Учет результатов РТНГА проводили через (2,0±0,5) ч. Результаты РНГА считали специфичными, если в РТНГА агглютинация отсутствовала или наблюдалась в меньшем (не менее чем на 3-4) числе лунок, чем это имело место в РНГА.
для контроля чувствительности и специфичности диагностикума при проведении клинических испытаний использовали: 26 штаммов возбудителей кокцидиоидомикоза (8 - С. posadasii, 18 - C. immitis); 18 - H. capsulatum; 4 - H. capsulatum var. duboisii; 1 - H. capsulatum var. farciminosum; 5 - H. capsulatum в дрожжевой фазе роста); 29 штаммов гетеро-логичных микроорганизмов микотической и бактериальной природы, включая 5 условно-патогенных дрожжеподобных грибов (Candida guillermondii, Candida parapsilosis, Cryptococcus neoformans 4N, Cryptococcus neoformans 9/22, Rhodotorula mucilagi-nosa); 17 - нитчатых грибов и дерматомицетов III-IV групп патогенности (Absidia (Mycocladus) hyalospora, Aspergillus flavus, Aspergillus fumigatus, Fusarium ave-naceum, Fusarium culmorum, Fusarium sambucinum, Gibberella zeae, Geotrichum candidum, Malbranchea manginii, Paecilomyces variottii, Penicillium citreo-viridae, Penicillium citrinum, Penicillium chrysoge-num, Phialophora verrucosa, Rhizopus microsporus, Scopulariopsis brevicaulis, Trichophyton crateriforme); а также 5 бактериальных штаммов ПБА II группы патогенности - Brucella suis, Yersinia sp. (Y. entero-colitica, Y pseudotuberculosis), Burkholderia pseudo-mallei, Burkholderia mallei. Все штаммы получены из коллекций культур ФКУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт».
Обеззараженные культуры возбудителей кок-цидиоидомикоза и гистоплазмоза, а также гетеро-логичных микроорганизмов использовали в микроварианте РНГА в концентрациях 1108 и 4108 кл/мл соответственно.
методом сравнения являлся микологический анализ, предусматривающий выделение культур после посева штаммов до их инактивации на соответствующие плотные питательные среды из разведения 1105 кл/мл, с последующим доказательством диморфизма микромицетов.
дополнительно для исследования были отобраны образцы сывороток крови и суспензии органов (легкие, печень и селезенка) белых мышей линии BALB/c с экспериментальным кокцидиоидомикозом и гистоплазмозом, а также пробы сыворотки крови человека, мокроты, промывной жидкости бронхов, искусственно контаминированных C. posadasii, C. im-mitis, H. capsulatum, гетерологичными микроорганиз-
мами (P. citreoviridae, C. neoformans, B. pseudomallei и др.) до конечной концентрации 3,12106 кл/мл.
Статистическую достоверность полученных результатов испытаний оценивали в зависимости от числа параллельных опытов при доверительной вероятности 90 %, используя формулу биноминального распределения Бернулли в соответствии с «Методическими рекомендациями по порядку проведения экспертизы качества, эффективности и безопасности медицинских изделий» от 14.11.2013 г., приложение Е.
Результаты и обсуждение
Возбудители кокцидиоидомикоза - грибы вида Coccidioides immitis, считавшегося до недавнего времени единым, но по результатам молекулярно-генетической таксономии, были четко разделены на два: калифорнийский и некалифорнийский варианты - Coccidioides immitis и Coccidioides posadasii соответственно. Фенотипически C. immitis и C. pos-adasii оказались практически идентичны, так как геномы этих видов отличаются преимущественно лишь некодирующими последовательностями [6].
Род Histoplasma включает три варианта штаммов с широкой внутривидовой вариабельностью, отличающихся географическим распространением и особенностями клинического течения вызываемых ими болезней - Histoplasma capsulatum var. capsulatum, Histoplasma capsulatum var. duboisii, Histoplasma capsulatum var. farciminosum. Различия между этими видами подтверждены секвенированием спейсерных областей их хромосомных ДНК [5].
Близкое генетическое родство возбудителей особо опасных микозов объясняет трудности их дифференциации, определяет возможность создания препаратов для их одномоментного выявления, что принципиально для подтверждения микотической природы заболевания. Основываясь на этом, проведена работа по созданию «набора реагентов. Диагностикум эри-троцитарный кокцидиоидомикозный и гистоплаз-мозный иммуноглобулиновый сухой», основу которого составили иммуноглобулины гипериммунной кокцидиоидомикозной и гистоплазмозной агглютинирующей козьей сыворотки.
Для получения высокоактивной агглютинирующей козьей иммунной сыворотки использовали референтные штаммы возбудителей данных особо опасных микозов из уникальной коллекции микромицетов ФКУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт», включающей культуры, полученные как из микологических лабораторий отечественных учреждений здравоохранения, так и из ведущих институтов США.
Выбор коз в качестве продуцентов обусловлен высоким уровнем белка в козьих сыворотках (до 6070 мг%), а также возможностью их длительной (до 2 лет и больше) иммунизации. Отбор сыворотки проводили после каждого двухмесячного цикла, титр
кокцидиоидомикозных и гистоплазмозных антител определяли по результатам РИД, а также РНГА с антигенным эритроцитарным гистоплазмозным диа-гностикумом (экспериментальные серии). Наиболее активные сыворотки (с титром в РИД от 1:32-1:64 и выше, в РНГА от 1:25000) использовали для выделения из них иммуноглобулиновой фракции.
Эритроциты, как биологические носители, требуют щадящих условий обработки их поверхности, в связи с чем все этапы (формалинизация, танизация, сенсибилизация иммуноглобулинами, а также лио-фильное высушивание препарата) осуществляли в течение длительного времени (до 1 сут) и с максимальной осторожностью [1, 4]. В результате после контроля сублимации титр РНГА с лиофилизирован-ным препаратом оставался без изменений.
стандартная чувствительность РНГА составляет 105-106 м.т./мл, что ниже чувствительности таких иммунологических тестов, как ИФА или им-муноблоттинг. однако, по нашему мнению, именно относительно невысокая чувствительность метода гемагглютинации позволяет избежать проблемы перекрестной реактогенности микромицетов, связанной с монотонностью полисахаридных структур (хитина, маннанов, Р-глюканов и т.д.) поверхности их клеток [7].
Для внедрения разработанного препарата в практику необходимо оценить его функциональные свойства, эффективность, качество и безопасность при использовании для идентификации с помощью РНГА возбудителей кокцидиоидомикоза и гисто-плазмоза в выделенных культурах микромицетов, клиническом и биологическом материале.
С этой целью экспертами ГБОУ ДПО РМАПО Минздрава России проведены технические испытания «Набора реагентов. Диагностикум эритроцитар-ный кокцидиоидомикозный и гистоплазмозный сухой» как медицинского изделия, подтвердившие его соответствие национальным и нормативным документам в части требований безопасности и эффективности, а также нормированным техническим характеристикам (спецификации) изготовителя изделия, а затем совместно с сотрудниками ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб» проведены клинические испытания предложенного диагностикума.
Для определения диагностической чувствительности препарата использовали суспензии микро-мицетов и бактериальных клеток представленных выше штаммов в концентрации 3,12 106 кл/мл при выполнении микроварианта РНГА, и в концентрации 1,56 106 кл/мл при использовании макроварианта РНГА. В связи с отсутствием на территории России клинических случаев кокцидиоидомикоза и гистоплазмоза для испытания диагностикума также готовили суспензии органов от экспериментально полученных биопроб, в которых наиболее вероятно присутствие возбудителей особо опасных микозов в реальных условиях, а также искусственно контами-нированного патогенами и гетерологичными микро-
Результаты РНГА с «Набором реагентов. Диагностикум эритро-цитарный кокцидиоидомикозный и гистоплазмозный иммуноглобулиновый сухой» по выявлению возбудителей кокцидиои-домикоза и гистоплазмоза:
В горизонтальных рядах сверху вниз: С. posadasii 36-S, C. posadasii 51, C. immitis 46, C. immitis M-11, H. apsulatum var. capsulatum 6652, H. capsulatum var. capsulatum G-185, H. capsulatum var. duboisii 638, H. capsulatum var. farciminosuml2-89 в концентрации от 1109 до 1108 кл/мл
организмами клинического материала.
Результат учитывали как положительный при формировании сенсибилизированными эритроцитами на дне лунок характерного «зонтика», в отличие от точечных скоплений эритроцитов на дне лунки при отрицательном результате и в контроле. РНГА считали специфичной, если в РТНГА при одномоментном исследовании агглютинация отсутствовала или наблюдалась в меньшем (не менее чем на 3-4), по сравнению с РНГА, числе лунок (рисунок).
В ходе клинических испытаний «Набора реагентов. Диагностикум эрироцитарный кокцидиоидо-микозный и гистоплазмозный иммуноглобулиновый сухой» проведены исследования 246 проб, содержащих инактивированные штаммы C. immitis, C. posadasii, H. capsulatum, в том числе: 184 пробы чистых культур коллекционных штаммов C. immitis, C. posa-dasii и H. capsulatum; 44 - биологического материала, полученного от зараженных экспериментальных животных; 18 - клинического материала, контами-нированного возбудителями кокцидиоидомикоза и гистоплазмоза (табл. 1).
Гетерологичные микроорганизмы были представлены чистыми культурами возбудителей (58 проб); 12 проб содержали биологический материал,
полученный от экспериментальных животных; 12 проб представляли собой исследования клинического материала (табл. 2).
В единичных случаях (по 1 штамму при изучении серий 1-го и 2-го диагностикума) чувствительность микроварианта РНГА составила 6,25-106 кл/мл, что не позволило учесть этот результат реакции как положительный.
при изучении диагностической эффективности «Набора реагентов. Диагностикум эрироцитарный кокцидиоидомикозный и гистоплазмозный иммуно-глобулиновый сухой» оказалось, что его диагностическая чувствительность составила не менее 99,0 % с доверительной вероятностью 90 %; диагностическая специфичность - не менее 98,0 % с доверительной вероятностью 90 %. Внутрипостановочная, межпостановочная и межсерийная воспроизводимость для всех положительных образцов составила 100 %.
Таким образом, «Набор реагентов. Диагно-стикум эритроцитарный кокцидиоидомикозный и гистоплазмозный иммуноглобулиновый сухой» обеспечивает выявление в рНгА клеток возбудителей кокцидиоидомикоза и гистоплазмоза в концентрациях, эквивалентных по отраслевому стандарту мутности ОСО 42-28-85 ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России 1,56106 кл/мл макрометодом и 3,12 106 кл/мл микрометодом и не выявляет гетерологичные микроорганизмы в концентрациях, эквивалентных по отраслевому стандарту мутности ОСО 42-28-85 ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России 5 107 кл/мл.
В ходе клинических испытаний «Набора реагентов. Диагностикум эрироцитарный кокцидиоидомикозный и гистоплазмозный иммуноглобулиновый сухой» установлено его соответствие назначению, а именно - идентификации возбудителей кокцидиои-домикоза и гистоплазмоза в выделенных культурах микромицетов и биологическом материале методом реакции непрямой гемагглютинации, что позволяет рекомендовать данный препарат к использованию в широкой лабораторной сети.
Таблица 1
Результаты исследования в РНГА с «Набором реагентов. Диагностикум эритроцитарный кокцидиоидозный и гистоплазмозный иммуноглобулиновый сухой» проб, содержащих возбудителей кокцидиоидомикоза и гистоплазмоза
Наименование проб Кол-во проб Положительный ответ в РНГА* (абсолютное число)
Набор реагентов. Диагностикум эритроцитарный кокцидиоидозный и гистоплазмозный иммуноглобулиновый сухой Результат микологического исследования
Серия 1 Серия 2
Пробы, содержащие C. immitis, C. posadasii, H. capsulatum в концентрациях 3,12106 и 1,56 106 кл/мл
Пробы клинического материала, искусственно контамини-рованные C. immitis, C. posadasii, H. capsulatum в концентрации 3,12106 и 1,56 1 06 кл/мл
Пробы биологического материала от биопроб с экспериментальным кокцидиоидомикозом и гистоплазмозом
Всего проб/в том числе положительных
184
18
44 246/244
98,91 % (91)
100 % (9)
100 % (22) 99,18 % (122)
98,91 % (91)
100 % (9)
100 % (22) 99,18 % (122)
100 % (184)
100 % (18)
100 % (44) 100 % (246)
* За положительный результат РНГА при постановке макрометодом принимали титр реакции, соответствующий концентрации клеток возбудителей кокцидиоидомикоза и гистоплазмоза 1,56 106 кл/мл, микрометодом - 3,12-106 кл/мл.
Таблица 2
Результаты изучения в РНГА с «Набором реагентов. Диагностикум эритроцитарный кокцидиоидозный и гистоплазмозный иммуноглобулиновый сухой» проб, содержащих гетерологичные микроорганизмы
Наименование проб Число проб Отрицательный ответ в РНГА (абсолютное число)
Набор реагентов. Диагностикум эритроцитарный кокцидиоидозный и гистоплазмозный иммуноглобулиновый сухой Результат культурального исследования
Серия 1 Серия 2
Пробы, содержащие A. (Mycocladus) hyalospora, A. flavus, A. fumigatus, F. avenaceum, F. culmorum, F. sambucinum, G. zeae, G. candidum, M. manginii, P. variottii, P. citreoviri-dae, P. citrinum, P. chrysogenum, P. verrucosa, R. microspo-rus, S. brevicaulis, T. crateriforme, B. suis, Y. enterocolitica, Y. pseudotuberculosis, B. pseudomallei, B. mallei в концентрации 5,0-107 кл/мл
Пробы биологического материала, содержащие P. citreo-viridae в концентрации 5,0107 кл/мл
Пробы клинического материала, содержащие P. citreoviri-dae в концентрации 5,0107 кл/мл
Итого исследованных проб
58
12
12 82
100 % (29)*
100 % (б)
100 % (б) 100 % (41)
100 % (29)
100 % (б)
100 % (б) 100 % (41)
100 % (58)
100 % (12)
100 % (12) 100 % (82)
*В скобках представлено абсолютное число отрицательных в РНГА проб.
Конфликт интересов. Авторы подтверждают отсутствие конфликта финансовых/нефинансовых интересов, связанных с написанием статьи.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Кулаков М.Я., Лесовой В.С., Новицкая И.В., Липницкий А.В., Пушкарь В.Г. Способ получения эритроцитарного антигенного гистоплазмозного и кокцидиоидомикозного диагности-кума. Патент на изобретение № 2422832. Опубл. 25.01.2010 г.
2. Онищенко Г.Г., редактор. Специфическая индикация патогенных биологических агентов. М.: ЗАО «МП Гигиена»; 2006. 288 с.
3. Онищенко Г.Г., Кутырев В.В., редакторы. Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней. М.: Медицина; 2009. 472 с.
4. Пушкарь В.Г., Новицкая И.В., Кулаков М.Я., Павлова К.А., Степурина А.М. Способ лиофильной сушки эритроцитарного диагностикума. Патент на изобретение N° 2476791. Опубл. 27.02.2013 г.
5. Gómez B.L. Molecular diagnosis of endemic and invasive mycoses: Advances and challenges. Rev. Iberoam. Micol. 2014; 31(1):35-41. DOI: 10.1016/j.riam.2013.09.009.
6. Sharpton T.J., Stajich J.E., Rounsley S.D., Gardner M.J., Wortman J.R., Jordar V.S., Maiti R., Kodira C.D., Neafsey D.E., Zeng Q., Hung C.Y., McMahan C., Muszewska A., Grynberg M., Mandel M.A., Kellner E.M., Barker B.M., Galgiani J.N., Orbach M.J., Kirkland T.N., Cole G.T., Henn M.R., Birren B.W., Taylor J.W. Comparative genomic analyses of the human fungal pathogens Coccidioides and their relatives. Genome Res. 2009; I9(10):1722-31. DOI: 10.1101/gr.087551.108.
7. Wüthrich M., Deepe G.S.Jr., Klein B. Adaptive Immunity to Fungi. Annu. Rev. Immunol. 2012; 30:115-48. DOl: 10.1146/an-nurev-immunol-020711-074958.
References
1. Kulakov M.Ya., Lesovoy V.S., Novitskaya I.V., Lipnitsky A.V., Pushkar' V.G. [Method for the production of erythrocytic antigen coccid-ioidomycosal and histoplasmosal diagnosticum]. Patent for the invention
№ 2422832. Published January 25, 2010.
2. Onishchenko G.G., editor. [Specific Indication of Pathogenic Biological Agents]. M.: CJSC "MP Gigiena"; 2006. 288 p.
3. Onishchenko G.G., Kutyrev V.V., editors. [Laboratory Diagnostics of Dangerous Infectious Diseases]. M.: "Meditsina"; 2009. 472 p.
4. Pushkar' V.G., Novitskaya I.V., Kulakov M.Ya., Pavlova K.A. Stepurina A.M. [Method for freeze-drying of erythrocytic diagnosticum] Patent for the invention № 2476791. Published February 27, 2013.
5. Gomez B.L. Molecular diagnosis of endemic and invasive mycoses: Advances and challenges. Rev. Iberoam. Micol. 2014; 31(1):35-41. DOI 10.1016/j.riam.2013.09.009.
6. Sharpton T.J., Stajich J.E., Rounsley S.D., Gardner M.J., Wortman J.R., Jordar V.S., Maiti R., Kodira C.D., Neafsey D.E., Zeng Q., Hung C.Y. McMahan C., Muszewska A., Grynberg M., Mandel M.A., Kellner E.M. Barker B.M., Galgiani J.N., Orbach M.J., Kirkland T.N., Cole G.T., Henn M.R., Birren B.W., Taylor J.W. Comparative genomic analyses of the human fungal pathogens Coccidioides and their relatives. Genome Res. 2009 19(10):1722-31. DOI: 10.1101/gr.087551.108.
7. Wüthrich M., Deepe G.S.Jr., Klein B. Adaptive Immunity to Fungi. Annu. Rev. Immunol. 2012; 30:115-48. DOI: 10.1146/annurev-immunol-020711-074958.
Authors:
Novitskaya I.V., Prokhvatilova E.V., Toporkov A.V., Viktorov D.V., Kulakov M.Ya., Savina E.V., Pushkar' V.G., Belitskaya L.I. Volgograd Research Anti-Plague Institute. 7, Golubinskaya St., Volgograd, 400131, Russian Federation. E-mail: [email protected].
Osina N.A., Kas'yan Zh.A., Shul'gina I.V., Lobovikova O.A. Russian Research Anti-Plague Institute "Microbe". 46, Universitetskaya St., Saratov, 410005, Russian Federation. E-mail: [email protected].
Об авторах:
Новицкая И.В., Прохватилова Е.В., Топорков А.В., Викторов Д.В., Кулаков М.Я., Савина Е.В., Пушкарь В.Г., Белицкая Л.И. Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт. Российская Федерация, 400131, Волгоград, ул. Голубинская, 7. E-mail: vari2@ sprint-v.com.ru.
Осина Н.А., Касьян Ж.А., Шульгина И.В., Лобовикова О.А. российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб».РоссийскаяФедерация,410005, Саратов,ул. Университетская, 46. E-mail: [email protected].
Поступила 11.04.17.
