CC BY
21
Е.Н. Кособокова, В. С. Косоруков
СРАВНЕНИЕ УРОВНЯ ЭКСПРЕССИИ И ЭФФЕКТИВНОСТИ ОЧИСТКИ РЕКОМБИНАНТНОГО ИФН- -2b ЧЕЛОВЕКА С ПОЛИГИСТИДИНОВОЙ СИСТЕМОЙ И БЕЗ НЕЕ
Лаборатория трансгенных препаратов РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва
Задача исследования. Сравнить уровень экспрессии и эффективность очистки рекомбинантного Интерферо-на-а-2Ь человека (чИФН-а-2Ь) с полигистидиновой системой и без нее, выбрать наиболее удачную по этим показателям конструкцию.
Материалы и методы. Для экспрессии использовали культуры Escherichia coli. Индукцию проводили при помощи IPTG. Очищение включало в себя три этапа. На первом этапе изолировали нерастворимые белки путем центрифугирования лизата бактериальных клеток. На втором - провели промежуточную отмывку телец включения чИФН-а-2Ь. Окончательное очищение осуществили при помощи аффинной хроматографии.
Результаты. Мы синтезировали три генетические конструкции чИФН-а-2Ь: без гистидинового конца, с одним и с двумя полигистидиновыми повторами (6His и 12His). В ходе работы выяснили, что наличие полигистидиновой системы увеличивает уровень экспрессии рекомбинантного чИФН-а-2Ь. При этом второй 6His несколько снижает ее.
чИФН-а-2Ь-6^ полностью агрегируется в виде телец включения. Результаты работы показали, что промежуточная стадия очищения необходима для чИФН-а-2Ь-6^, т.к. увеличивает эффективность посадки белка на сорбент и качество отмывки белков бактериальной клетки. Эффективность отмывки телец включения составила 80%. В случае чИФН-а-2Ь и чИФН-а-2Ь-12^ необходимо изменение состава промывочных буферов, т.к. часть целевого белка уходит в смывы. При проведении аффинной хроматографии выяснили, что чИФН-a-2b-6His полностью связывается с сорбентом. Конечный продукт очищен более чем на 90% (см. рисунок).
1. Лизат клеток BL21(DE3), экспрессирующих чИФН-а-2Ь-6^.
2. Супернатант после центрифугирования лизата.
3. Отмывка телец включения PBS.
4. Отмывка телец включения буфером 1.
5. Отмывка телец включения буфером 2.
6. Отмывка телец включения буфером 3.
7. Отмытые тельца включения.
8. чИФН-а-2b-6His после очистки на колонке.
Выводы. Полученные результаты позволяют утверждать, что в отношении уровня экспрессии и эффективности очистки наиболее удачна конструкция с одним 6Шв на Оконце.
А.Ф. Лазарев, В.Д. Петрова, Н.А. Михеева, Е.Л. Секержинская, Т.В. Синкина ОЦЕНКА ПЕРЕНОСИМОСТИ ПРЕПАРАТА АНАСТЕРЫ У ПАЦИЕНТОК С ПРОГРЕССИРУЮЩИМ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
Алтайский филиал РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН,
ГУЗ «Алтайский краевой онкологический диспансер», Барнаул
Актуальность. Лечение метастатического рака молочной железы может включать в себя хирургическое вмешательство и лучевую терапию. Но на сегодняшний день, установлено, что главным в программе специального лечения таких пациенток является системное воздействие - проведение химио- и эндокринотерапии. Для больных с гормональным рецептор-положительным раком молочной железы эндокринное лечение представляет терапевтический выбор, который обладает лучшими профилями безопасности, нежели цитотоксическая химиотерапия. Как правило, при генерализации процесса имеет место резистентность к тамоксифену, и женщинам назначают препараты третьего поколения - ингибиторы ароматазы: анастрозол, летрозол и экземестан. В 2006 года в России зарегистрирован препарат Анастера, который также является ингибитором ароматазы. Однако широкого опыта применения данного препарата нет.
Задачей данного пилотного исследования явилась оценка переносимости и побочных действий препарата Анастеры.
Материал и методы. В данном исследовании были оценены переносимость и побочные действия у 28 пациенток (ср. возраст 58,7 лет; менопауза > 5 лет) с генерализованным раком молочной железы, имевших положительный гормонорецепторный статус. В анамнезе у всех - комбинированное и комплексное лечение по поводу рака молочной железы и адьювантная антиэстрогенная эндокринотерапия тамоксифеном. Функциональный статус 0-2 балла по шкале БСОО. Препарат Анастера назначали одни раз в день по 1 таблетке (1 мг) в течение 3 мес. Сведения о побочных действиях и переносимости анализировали с помощью анкетирования один раз месяц. Оценивали следующие побочные эффекты: наличие тошноты и рвоты, слабости, анорексии или повышенного аппетита, головных болей, приливов, бессонницы, запоров или диареи, сыпи, периферических отеков, повышенного давления, набора веса, вагинальных кровотечений, потливости, артралгий.
В качестве группы сравнения были выбраны 29 пациенток, сопоставимых по всем характеристикам с исследуемой группой, получавших в течение 3 мес. препарат Аримидекс.
Результаты. Наиболее часто женщины, получавшие препарат Анастера, предъявляли жалобы на приливы и потливость - 9, причем, у 5 из них, данные симптомы были слабо выражены, у 3 - умеренно и у 1 - сильно. Головную боль отмечали 8 пациенток, у 3 из них головная боль была выражена слабо, у 5 умеренно. Жалобы на слабость, связанную с приемом препарата, отмечали 7 больных (у 3 - выражена слабо, у 4 - умеренно). Остальные побочные действия регистрировались в единичных случаях. Ни у одной из женщин препарат Анастера не был отменен в связи с плохой переносимостью. При сравнении с группой женщин, получавших препарат Аримидекс, достоверных отличий регистрации побочных действий выявлено не было.
Заключение. Препарат Анастера отличается хорошей переносимостью. Побочные действия находятся в диапазоне от слабых до умеренных и не требуют корректировки дозы.
№ 4/том 8/2009
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
