CC BY
42
способ оценки эффективности комплексной терапии
с использованием иммуномодуляторов
при хронических дерматологических заболеваниях
DOI: 10.17691/stm2017.9.1.12 УДК 576.3:616.5-002.3:615.37 Поступила 27.09.2015 г.
о.А. Лукова, к.б.н., ассистент кафедры микробиологии и иммунологии1; Е.И. Пышкина, научный сотрудник2; И.А. Клеменова, д.м.н., главный научный сотрудник3; Н.В. Шебашова, к.м.н., научный сотрудник3; Т.В. Махрова, к.м.н., доцент кафедры микробиологии и иммунологии1; Л.И. Заславская, д.б.н., профессор кафедры микробиологии и иммунологии1
Нижегородская государственная медицинская академия, 603005, Н. Новгород, пл. Минина и Пожарского, 10/1; 2Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии (Нижегородский филиал), 603155, Н. Новгород, ул. Ковалихинская, 49 г;
3Приволжский федеральный медицинский исследовательский центр Минздрава России, Н. Новгород, 603155, ул. Верхне-Волжская набережная, 18/1
Цель исследования — определить значимость показателя естественной колонизации эпителиоцитов в оценке эффективности лечебно-профилактических мероприятий с использованием иммуномодуляторов у больных с микробной экземой и онихомико-зом дрожжевого генеза.
Материалы и методы. Был определен уровень естественной бактериальной колонизации буккальных эпителиоцитов у больных с микробной экземой и онихомикозом дрожжевого генеза до и после комплексной терапии с использованием иммуномодуля-
Результаты. Исследования показали, что при выраженном патологическом процессе уровень естественной колонизации эпителиоцитов повышается. После комплексной терапии с использованием отечественных иммуномодулирующих препаратов Полиок-сидоний (при микробной экземе) или Деринат (при онихомикозе) уровень естественной колонизации быстро снижается, приближаясь к значениям у здоровых людей. Изучение изменения естественной бактериальной колонизации на буккальных эпителиоцитах позволяет оценить эффективность комплексного лечения с использованием иммуномодуляторов.
Ключевые слова: буккальные эпителиоциты; микробная экзема; Деринат; растворимые молекулы адгезии.
онихомикоз; естественная колонизация; Полиоксидоний;
Как цитировать: Lukova O.A., Pyshkina E.I., Klemenova I.A., Shebashova N.V., Makhrova T.V., Zaslavskaya M.I. Method for evaluating the effectiveness of combined treatment with immunomodulators in chronic dermatologic diseases. Sovremennye tehnologii v medicine 2017; 9(1): 98-102, https://doi.org/10.17691/stm2017.9.1.12
English
Method for Evaluating the Effectiveness of Combined Treatment with Immunomodulators in Chronic Dermatologic Diseases
0.A. Lukova, PhD, Tutor, Department of Microbiology and Immunology1; E.I. Pyshkina, Researcher2;
1.A. Klemenova, MD, DSc, Chief Researcher3; N.V. Shebashova, MD, PhD, Researcher3;
T.V. Makhrova, MD, PhD, Associate Professor, Department of Microbiology and Immunology1; M.I. Zaslavskaya, DSc, Professor, Department of Microbiology and Immunology1
1Nizhny Novgorod State Medical Academy, 10/1 Minin and Pozharsky Square, Nizhny Novgorod, 603005, Russian Federation;
Для контактов: Лукова Ольга Алексеевна, e-mail: olga_domracheva@bk.ru
/////////////////////^^^^
98 СТМ J 2017 — ТОМ 9, №1 О.А. Лукова, Е.И. Пышкина, И.А. Клеменова, Н.В. Шебашова, Т.В. Махрова, М.И. Заславская
2State Scientific Center of Dermatovenerology and Cosmetology (Nizhny Novgorod branch), 49g Kovalikhinsakaya St., Nizhny Novgorod, 603155, Russian Federation;
3Privolgzhsky Federal Medical Research Center, Ministry of Health of the Russian Federation, 18/1 Verkhne-Volzhskaya naberezhnaya St., Nizhny Novgorod, 603155, Russian Federation
The aim of the investigation was to determine the significance of the index of natural colonization of epithelial cells for evaluating the effectiveness of treatment and prevention using immunomodulators in patients with microbial eczema and yeast onychomycosis.
Materials and Methods. The level of natural bacterial colonization of buccal epithelial cells was determined in patients with microbial eczema and yeast onychomycosis before and after combined treatment with immunomodulators.
Results. The study showed that the level of natural colonization of epithelial cells increased in pathologic processes. The natural colonization level significantly decreased after combined therapy with Polyoxidonium (in microbial eczema) and Derinat (in onychomycosis), approximating the level in healthy people. Evaluation of changes in natural bacterial colonization on buccal epithelial cells makes it possible to estimate the efficiency of combined treatment with immunomodulators.
Key words: buccal epithelial cells; microbial eczema; onychomycosis; natural colonization; Polyoxidonium; Derinat; soluble adhesion molecules.
Значительное количество патологий человека протекает на фоне иммунной недостаточности, что определяет тяжесть клинических проявлений хронических заболеваний, а также развитие осложнений и ухудшение прогноза [1]. Чтобы добиться достаточного клинического эффекта при заболеваниях, торпидных к проводимой стандартной терапии, в схему комплексного лечения часто вводятся иммуномодулирующие препараты [2-4]. Дерматологические заболевания развиваются на фоне изменений реактивности организма, сопровождаются нарушениями в работе иммунных факторов и склонны к хроническому рецидивирующему течению. Поэтому использование в их лечении иммуномодуляторов является важной частью комплексной терапии. Однако до сих пор не существует алгоритма, позволяющего определиться с точным выбором и оценкой эффективности действия иммуномо-дулятора, используемого в ходе комплексной терапии различных патологических состояний [5-7].
Одним из простых и неинвазивных методов для выявления патологических изменений в организме человека служит оценка уровня естественной колонизации буккальных эпителиоцитов [8, 9]. Способность к адгезивным взаимодействиям является важнейшей функциональной характеристикой эпителиоцитов и может быть источником важной диагностической и прогностической информации [10].
В работе нами была сделана попытка оценить информативность показателя естественной колонизации буккальных эпителиоцитов при определении эффективности комплексной терапии хронических патологий: микробной экземы и онихомикоза дрожжевого генеза с использованием иммуномодулирующих препаратов Полиоксидоний и Деринат. Выбор данных препаратов был обусловлен их широким применением в различных областях медицины (педиатрия, гинекология, кардиология, онкология и др.) [2].
Цель исследования — определить значимость показателя естественной колонизации эпителиоцитов в оценке эффективности лечебно-профилактических
мероприятий с использованием иммуномодуляторов у больных с микробной экземой и онихомикозом дрожжевого генеза.
Материалы и методы. Естественная колонизация буккальных эпителиоцитов исследована у 52 больных микробной экземой. Часть пациентов с микробной экземой (п=28) получали терапию согласно стандарту лечения данного заболевания. В группе с комбинированной терапией (п=24) пациентам дополнительно назначали иммуномодулятор Полиоксидоний (азоксиме-ра бромид) (НПО «Петровакс Фарм», Россия) 24 мг 2 раза в день 10 дней.
Также в работе исследованы буккальные эпители-оциты, полученные от больных с онихомикозом до и после курса лечения: после классического лечения антимикотиками (п=26) и комплексного лечения с препаратом Деринат (дезоксирибонуклеат натрия, ФП «Техномедсервис, Россия) (п=27) — внутримышечно по 5 мл 1,5% раствора с интервалом 24-72 ч, курс 5-10 инъекций.
Контрольную группу (п=28) составили здоровые мужчины и женщины 21-38 лет.
Исследование проведено в соответствии с Хельсинкской декларацией, принятой в июне 1964 г. (Хельсинки, Финляндия) и пересмотренной в октябре 2000 г. (Эдинбург, Шотландия), и одобрено Этическим комитетом НижГМА. От каждого пациента получено информированное согласие.
Буккальные эпителиоциты получали утром, натощак, с внутренней поверхности щеки, дважды отмывали (40 д, 5 мин) забуференным физиологическим раствором, готовили взвесь с концентрацией 106 кл./мл. Оценку естественной колонизации у пациентов проводили путем подсчета общего количества бактериальных клеток, адгезированных на эпителиоцитах. Из суспензии буккальных эпителиоцитов готовили мазки, фиксировали метанолом (10 мин), окрашивали 0,25% водным раствором азура А ^дта-АШс1"1, США). Индекс естественной колонизации оценивали по числу бактериальных клеток в пересчете на один эпите-
Оценка терапии с использованием иммуномодуляторов при хронических дерматологических заболеваниях СТМ | 2017 — том 9, №1 99
Бактерии — представители микрофлоры полости рта
Рис. 1. Естественная колонизация буккального эпителио-цита; х900; окраска азуром А
лиоцит (бакт./эп.). Учитывали средний результат после подсчета 100 эпителиоцитов (рис. 1).
Для оценки значимости индекса естественной колонизации буккального эпителия в определении эффективности комплексной терапии мы сравнили его изменения с изменениями растворимых молекул межклеточной адгезии sICAM-1 и иммуноглобулинов IgG, IgE. Исследование их уровня проводили методом иммуноферментного анализа на спектрофотометре Bio-Rad 480 (Bio-Rad Laboratories, США). Кровь
из локтевой вены отбирали утром натощак в объеме 5 мл, получали сыворотку путем центрифугирования (1000 g, 20 мин, 4°С). Для определения уровня иммуноглобулинов и sICAM-1 использовали коммерческие тест-системы («Вектор Бест», Россия и Bender MedSystems, Австрия).
Статистическую обработку данных проводили по общепринятой методике. Рассчитывали среднюю арифметическую и ее стандартную ошибку (М±т). Достоверность различий оценивали при помощи критериев Вилкоксона и Манна-Уитни. Различия расценивали как статистически значимые при р<0,05.
Результаты и обсуждение. Исследования показали, что у больных микробной экземой до лечения наблюдалось повышение средних значений всех выбранных показателей (см. таблицу). Стандартная схема лечения приводила к несущественному снижению индекса естественной колонизации — с 36,79±15,52 до 35,12±15,21 бакт./эп. После комплексной терапии с использованием препарата Полиоксидоний индекс естественной колонизации снижался в большей степени (p>0,05) и составлял 26,47±12,03 бакт./эп., приближаясь к показателям в контрольной группе — 14,31±6,91 бакт./эп. (рис. 2).
Концентрация сывороточных факторов sICAM-1, IgG и IgE также повышалась при патологии, однако в отличие от индекса естественной колонизации не от-
Естественная колонизация буккального эпителия и сывороточные показатели у больных с микробной экземой при различных схемах лечения (М±m)
Группы Показатель Факторы сыворотки
адгезии, бакт./эп. sIOÄM-1, нг/мл IgG, мг/мл IgE, мг/мл
Здоровые добровольцы (п=28) 14,31±6,91 377,60±92,78 10,45±0,68 25,53±5,51
Пациенты с экземой до лечения (п=52) 36,79±15,52f 514,73±110,57f 12,92±0,93 42,38±15,74Т
Пациенты с экземой после стандартного лечения (п=28) 35,12±15,21 510,54±110,26 12,92±0,89 42,85±15,25
Пациенты с экземой после комплексного лечения* (п=24) 26,47±12,03| 505,61±114,29 12,87±0,56 43,81±16,87
Примечание. * — комплексное лечение с применением препарата Полиоксидоний; | — увеличение показателя относительно группы здоровых; | — снижение показателя в процессе лечения.
оо
е
70
60
50
40
л а
^ ю
ее
mi_
20
10
Здоровые
Группа с экземой
После стандартного лечения
После включения
в лечение Полиоксидония
Рис. 2. Уровень естественной колонизации буккальных эпителиоцитов у больных микробной экземой при лечении с использованием иммуномоду-лятора Полиоксидоний
///////////////////^^^^
100 СТМ j 2017 — том 9, №1 О.А. Лукова, Е.И. Пышкина, И.А. Клеменова, Н.В. Шебашова, Т.В. Махрова, М.И. Заславская
Рис. 3. Уровень естественной колонизации буккальных эпителиоцитов у пациентов с онихо-микозом при лечении с использованием иммуномодулятора Деринат
ражала динамику положительных изменений в ходе лечения заболевания (см. таблицу).
На следующем этапе исследования проводили оценку изменения уровня естественной колонизации буккального эпителия на фоне комплексного лечения онихомикозов, вызываемых грибами рода Candida, с использованием препарата Деринат.
Установлено, что индекс естественной колонизации эпителиоцитов у больных онихомикозом был также существенно выше, чем у здоровых: 45,32±22,14 бакт./эп. против 14,30±7,89 бакт./эп. (рис. 3).
После проведенного курса стандартного лечения онихомикоза дрожжевого генеза индекс естественной колонизации был ниже и составлял 34,19±17,21 бакт./эп. (p>0,05). При комплексной терапии с использованием препарата Деринат индекс естественной колонизации снижался в большей степени — до 23,71±11,0 бакт./эп. (p>0,05), приближаясь к показателям в контрольной группе.
Таким образом, повышение уровня естественной колонизации буккальных эпителиоцитов наблюдалось при обеих патологиях (см. рис. 2, 3). При этом на фоне комплексной терапии уровень микробной колонизации буккальных эпителиоцитов снижался достаточно быстро (в течение 10-14 дней), приближаясь к значениям, характерным для здоровых людей. Кроме того, при проведении комплексной терапии микробной экземы изменение уровня естественной колонизации было выражено намного сильнее, чем у сывороточных показателей (sICAM, IgE).
Известно, что уровень естественной колонизации эпителиоцитов во многом зависит от индивидуальных особенностей человека, его мукозаль-ного иммунитета, а также наличия сопутствующих патологий, в частности заболеваний полости рта (кариес и др.) [11]. Этим можно объяснить тот факт, что изменение индекса естественной колонизации
у группы пациентов как на фоне заболевания, так и после лечения имело характер тенденции, поскольку у ряда больных данная динамика отсутствовала. Тем не менее возвращение к нормальным значениям уровня естественной колонизации эпителиоцитов наблюдалось у большинства людей после лечения с использованием иммуномодуляторов. Так, статистически значимое (р<0,05) уменьшение и нормализация индекса естественной колонизации отмечались у 62,6% больных с онихомикозом после комплексной терапии с использованием препарата Деринат. Эффективность комплексной терапии с иммуномо-дулятором Полиоксидоний при микробной экземе была еще выше: выраженная позитивная динамика наблюдалась у 72,3% пациентов (р<0,05). У меньшей группы больных уровень естественной колонизации эпителиоцитов существенно не изменялся после проведенного курса лечения, что могло свидетельствовать либо об отсутствии терапевтического эффекта в данной группе пациентов, либо о наличии у них дополнительной (невыявленной) патологии. В целом можно считать, что введение иммунодуляторов в схему комплексной терапии микробной экземы и онихомикоза дрожжевого генеза имеет положительный результат, хотя и не является панацеей.
Заключение. Сравнение уровня естественной колонизации буккальных эпителиоцитов у пациентов с хроническими дерматологическими заболеваниями до и после проведенного курса лечения является доступным методом, позволяющим в короткие сроки оценить эффективность терапевтических мероприятий, в том числе с использованием иммуномодулирующих препаратов.
Финансирование исследования и конфликт интересов. Исследование не финансировалось какими-либо источниками, и конфликты интересов, связанные с данным исследованием, отсутствуют.
Оценка терапии с использованием иммуномодуляторов при хронических дерматологических заболеваниях СТМ 1 2017 — том 9, №1 101
Литература/References
1. Сепиашвили РИ. От иммунотерапии к персонализированной таргетной иммуномодулирующей терапии и иммунореабилитации. Аллергология и иммунология 2015; 16(4): 323-328. Sepiashvili R.I. From immunotherapy to personalized targeted immunomodulating therapy and immunorehabilitation. Allergologiya i immunologiya 2015; 16(4): 323-328.
2. Хаитов Р.М., Пинегин Б.В. Механизм действия и клиническое применение иммуномодуляторов. Аллергия, астма и клиническая иммунология 2003; 8: 43-49. Khaitov R.M., Pinegin B.V. The mechanism of action and clinical application of immunomodulators. Allergiya, astma i klinicheskaya immunologiya 2003; 8: 43-49.
3. Аллахвердиева Л.И., Эюбова А.А., Ахмедова Г.П. Влияние иммуномодулирующей терапии на показатели иммунитета и апоптоз у детей с атопической бронхиальной астмой. Иммунология 2011; 32(3): 160-163. Allakhverdieva L.I., Eyubova A.A., Akhmedova G.P. The influence of immunomodifying therapy on the immune characteristics and apoptosis in children suffering atopic bronchial asthma. Immunologiya 2011; 32(3): 160-163.
4. Караулов А.В. Полиоксидоний в клинической практике. М: ГЭОТАР-Медиа; 2008; 136 с. Karaulov A.V. Polioksidoniy v klinicheskoy praktike [Polyoxidonium in clinical practice]. Moscow: GEOTAR-Media; 2008; 136 p.
5. Булгакова В.А. Практика клинического применения азоксимера бромида (Полиоксидоний®) для терапии и профилактики респираторных инфекций. Российский аллергологический журнал 2014; 3: 73-81. Bulgakova V.A. The practice of clinical use of azoximer bromide for therapy and prevention of respiratory infections. Rossiyskiy allergologicheskiy zhurnal 2014; 3: 73-81.
6. Márquez-González H., López-Gallegos D., González-Espinosa A.M., Zamudio-López J.O., Yáñez-Gutiérrez L. Effect of immune therapy in the prognosis of viral myocarditis in pediatric patients. Rev Med Inst Mex Seguro Soc 2016; 54(Suppl 3): S296-S301.
7. Абдрахимова Н.А., Хисматуллина З.Р., Муста-фина Г.Р., Надырченко Р.М., Гареев Е.М. Роль иммуно-
модулирующей терапии в лечении микробной экземы. В кн.: Проблемы медицины в современных условиях. Казань; 2015; с. 31-33. Abdrakhimova N.A., Khismatullina Z.R., Mustafina G.R., Nadyrchenko R.M., Gareev E.M. Rol' immunomoduliruyushchey terapii v lechenii mikrobnoy ekzemy. V kn.: Problemy meditsiny v sovremennykh usloviyakh [The role of immunomodulating therapy in management of microbial eczema. In: Problems of medicine in the modern context]. Kazan; 2015; p. 31-33.
8. Маянский А.Н., Абаджиди М.А., Маянская И.В., Заславская М.И., Махрова Т.В. Реактивность буккальных эпителиоцитов: индикация местных и общих нарушений гомеостаза (обзор литературы). Клиническая лабораторная диагностика 2004; 8: 31-34. Mayansky A.N., Abadjidi M.A., Mayanskaya I.V., Zaslavskaya M.I., Makhrova T.V. Reactivity of buccal epitheliocytes: indication of local and general impairment in hemostasis (literature survey). Klinicheskaya laboratornaya diagnostika 2004; 8: 31-34.
9. Махрова Т.В. Влияние метаболитов стафилококка на адгезивные реакции в системе «Candida albicans — буккальные эпителиоциты». Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии 2004; 5: 4-7. Makhrova T.V. The influence of staphylococcal metabolites on adhesive reactions in the system "Candida albicans — buccal epithelial cells". Zhurnal mikrobiologii, epidemiologii i immunobiologii 2004; 5: 4-7.
10. Полякова В.О., Пальцева Е.М., Крулевский В.А. Буккальный эпителий. Новые подходы к молекулярной диагностике социально-значимой патологии. СПб: Н-Л; 2015; 128 с. Polyakova V.O., Pal'tseva E.M., Krulevskiy V.A. Bukkal'nyy epiteliy. Novye podkhody k molekulyarnoy diagnostike sotsial'no-znachimoy patologii [Buccal epithelium. New approaches to molecular diagnosis of socially significant pathology]. Saint Petersburg: N-L; 2015; 128 p.
11. Рацюк М.М., Лукиных Л.М., Зеленова Е.Г. Индекс естественной колонизации буккального эпителия в клинике терапевтической стоматологии. Нижегородский медицинский журнал. Стоматология 2003; прил.: 65-66. Ratsyuk M.M., Lukinykh L.M., Zelenova E.G. An index of the buccal epithelium natural colonization in a therapeutic stomatology clinic. Nizhegorodskiy meditsinskiy zhurnal. Stomatologiya 2003; Suppl: 65-66.
/////////////////////^^^^
102 СТМ J 2017 — TOM 9, №1 О.А. Лукова, Е.И. Пышкина, И.А. Клеменова, Н.В. Шебашова, Т.В. Махрова, М.И. Заславская
