CC BY
13СПОСОБ КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ КЛЕТОЧНОГО МАТЕРИАЛА ЭКССУДАТОВ
М.Г. ЛЕОНОВ1, В.И. НОВИК2, С. А. БЕЛЯЕВА1, Я.Х.-Б. ЕРШОВА1, Ж.П. СЕЛИФОНОВА1
1 Онкологический диспансер № 3 (г. Новороссийск),
2 Научно-исследовательский онкологический институт им. Н.Н. Петрова Минздрава России (г. Санкт-Петербург)
Ключевые слова: эксудат, злокачественные опухоли, рак яичников, цитологическая диагностика, метод концентрирования.
Введение
Основным методом диагностики злокачественных новообразований при наличии выпотов в серозных полостях является цитологическое исследование экссудатов. Однако диагностическая точность существующего традиционного цитологического исследования выпотных жидкостей не превышает 40-60%, что недостаточно для установления точного морфологического диагноза [6;3;4;1;7;2].
Одной из причин низкой точности классического цитологического метода исследования выпотных жидкостей является недостаточное содержание в экссудатах опухолевых и мезоте-лиальных клеток [5].
В физколлоидной химии известен способ седиментации, который заключается в осаждении дисперсной фазы из дисперсионной среды под действием силы тяжести для концентрирования дисперсионной фазы. Этот способ применяется, в т.ч., для разделения дисперсионной системы. Несмотря на то, что экссудат является дисперсионной системой, способ седиментации не используется для концентрирования клеточного материала в выпотных жидкостях при проведении цитологических исследований.
В связи с вышеизложенным, целью исследования явилось совершенствование способа концентрирования клеточного материала экссудатов серозных полостей для цитологического исследования.
Материалы и методы исследования
В исследование включено 24 больных раком яичников, с наличием серозного выпота (абдо-
минального экссудата у 16, плеврального экссудата - у 4 и плеврального и абдоминального выпотов - у 4 обследуемых). Всем больным выполнена пункции серозных полостей. При проведении пневмоцентеза собирали весь объем экссудата для цитологического исследования, а при выполнении лапароцентеза собирали три порции экссудата по 500 мл - в начале, середине и в конце пункции. К экссудату добавляли раствор цитрата натрия 5% для предотвращения образования фибринового сгустка в соотношении 1:10.
Три порции абдоминального экссудата, полученного после лапароцентеза, переливали в колбу и перемешивали. Затем экссудат (плевральный или абдоминальный) делили на 5 равных частей и отстаивали в капельной воронке для концентрирования клеточного осадка в придонной части выпотной жидкости. Первую порцию отстаивали в течение 15 минут, вторую - 30 минут, третью - 45 минут, четвертую - 60 минут, пятую - 90 минут для определения оптимального времени накопления клеточных образцов в придонном слое экссудата. Затем придонную часть экссудата, обогащенную клеточными элементами сливали в центрифужные пробирки и центрифугировали на центрифуге Элекон ЦЛМН-Р10-01 в течение 10 минут при скорости 2 000 об/мин. Оценку клеточности проводили в каждом исследуемом образце. Для этого каплю клеточного осадка переносили на предметное стекло, покрывали покровным стеклом и проводили подсчет клеток (клеток опухоли и клеток мезотелия без подсчета клеточных элементов крови) в на-тивном препарате при увеличении 280х (объектив 40х, окуляр 7х) в 3-5 полях зрения.
Проводили сравнение двух способов концентрирования клеточного материала экссудата (с использованием капельной воронки и цилиндра). Было использовано три образца ацитической жидкости, полученной у больных
М.Г. Леонов, В.И. Новик, С.А. Беляева, Я.Х.-Б. Ершова, Селифонова Способ концентрирования ... материала экссудатов
раком яичников, имеющих цитологическую верификацию диагноза. Перед началом накопления клеточного материала определяли клеточность образцов экссудатов. Затем экссудат переносили в 2 цилиндра и в 2 капельных воронки в равном объеме, проводили его отстаивание в течении 30 и 60 мин и определяли количество клеточных образцов и клеточных комплексов.
Результаты исследования и их обсуждение
Через 15 минут отстаивания среднее количество клеток в 28 исследуемых образцах экссудатов составило 48 в поле зрения, через 30 минут - 59.7, через 45 минут - 75.4, через 60 минут - 103.5, через 90 минут - 107.8. На рисунке представлена кривая осаждения клеточных образцов экссудатов.
120
Т К 40
В
II
20
0 •-
15 30 45 БП вО
IЦ)ниц
Рис. 1. Количество клеточных образцов в экссудате в зависимости от экспозиции времени отстаивания
Количество клеточных образцов в экссудате при экспозиции времени его отстаивания 60 минут больше в 1.7 раза (на 73.3%), чем при экспозиции времени 30 минут. Дальнейшее пролонгирование времени экспозиции отстаивания не имеет значимого увеличения клеточных образцов в исследуемых экссудатах.
Так же известен способ концентрирования клеточного материала экссудата, с помощью его отстаивания в целиндре и центрифугирования обогащенного клеточными образцами придонного слоя для получения цитологических микропрепаратов.
Авторы сравнили два способа концентрирования клеточного материала в выпотных жидкостях для цитологического исследования: с использованием капельной воронки и цилиндра.
Среднее количество клеточных образцов подсчитанных в асцитической жидкости, сразу после ее получения, составило 12.3 в поле зрения, а клеточных комплексов - 1.7. После отстаивания выпотной жидкости через 30 минут среднее количество клеточных образцов в цилиндре составило 17.3 в поле зрения, а клеточных комплексов - 2.3. В капельной воронке - 27.3 в поле зрения и 3.7 соответственно. Через 60 минут отстаивания экссудата количество клеточных образцов в цилиндре составило 60 в поле зрения и 4.3 комплекса в поле зрения, а в капельной воронке - 79 и 7 в поле зрения соответственно.
При сравнении 2 способов концентрирования клеточного материала экссудата использование капельной воронки позволяет повысить клеточность исследуемого образца после его отстаивания в течение 30 минут, по сравнению с методом накопления клеточного материала в придонном слое выпотной жидкости с использованием цилиндра в 1.6 раза (на 57.8%), а через 60 минут - в 1.3 раза (на 37.0%). Так же необходимо отметить следующую закономерность: при отстаивании экссудата в капельной воронке происходит не только увеличение количества клеточных образцов и клеточных комплексов, но и увеличение количества клеточных элементов в клеточных комплексах, они становятся более крупными, по сравнению с образцами, полученными из обогащенного придонного слоя выпотной жидкости в цилиндре.
Заключение
Таким образом, использование капельной воронки для концентрирования клеточного материала экссудатов с экспозицией времени отстаивания экссудата 60 минут являются оптимальными для получения качественных микропрепаратов, содержащих достаточное количество клеточного материала для проведения цитологического исследования. Использование капельной воронки для накопления клеточных образцов в экссудате позволяет получить более крупные клеточные комплексы, чем при использовании цилиндра.
М.Г Леонов, В.И. Новик, С.А. Беляева, Я.Х.-Б. Ершова, Селифонова Способ концентрирования ... материала экссудатов
Литература
1. Борисова О.В. Современные возможности цитологического метода в исследовании плевральных и перитонеальных экссудатов: Автореф. дис. канд. мед. наук. М., 2010.
2. Волченко Н.Н., Славнова Е.Н., Тугу-лукова А.А. Жидкостная цитология в онкологии. Онкология. Ж. им. П.А. Герцена. 2013(5):26-31.
3. Глузман Д.Ф., Скляренко Л.М., Над-горная В.А. и соавт. Диагностическая им-муноцитохимия опухолей. Киев: Морион, 2003:28-31.
4. Долгов В.В., Шабалова И.П., Миронова И.И. и соавт. Выпотные жидкости.
Лабораторное исследование. М.-Тверь: Издательство Триада, 2006.
5. Леонов М.Г., Новик В.И., Беляева С.А.
Цитологическая диагностика рака яичников: Пособие для врачей. Краснодар: ООО Три-Мил, 2016.
6. Петрова А.С. Цитологическое исследование в диагностике опухолей. Патологоа-натомическая диагностика опухолей человека/под ред. Н.А. Краевского. М.:Медицина, 1993.
7. Савостикова М.В. Жидкостная цитология и иммуноцитохимическое исследование в цитологической диагностике биологических жидкостей и смывов с брюшины при онкогинекологических заболеваниях. Онко-гинекология. 2013;(4):42-3.
THE NEW METHOD FOR CONCENTRATION OF CELLULAR MATERIAL OF EXUDATES
Leonov M.G., Novik V.I., Belyaeva S.A., Yershova Y.H.-B., Selifonova J.P
The main reason of malignant tumors diagnostics is cytological research. The accuracy of traditional cytological method is 40-60 %. It is not enough for diagnostics because the number of mesotelial and tumor cells in exudates is not enough. Sedimentation method includes deposition of disperse phase from dispersion medium because of gravity.
The improvement of method for concentration of cellular material of exudates of serous cavity for cytological research.
The optimum time of settling exposition was determined on the basis of the analysis sedimen-
tation method with using drop funnel in research of 28 exudates (pleural and abdominal) from 24 patients. We compared two methods for concentration of cellular material of exudates: with using a drop funnel and with using cylinder.
The optimum time of settling exposition is 60 min. with using a drop funnel for concentration of cellular material of exudates.
A drop funnel for concentration of cellular material of exudates is optimum. There are enough cellular material for cytological research in the stuff. Cell's complexes are larger with using a drop funnel.
Авторы:
Леонов М.Г. - Главный врач диспансера №3, доктор мед. наук, доцент; Новик В.И. - ведущий научный сотрудник института, доктор мед. наук, проф.; Беляева С.А. - врач-онколог поликлинического отделения диспансера; Ершова Я. Х.-Б. - врач клин. лаб. диагностики диспансера;
Селифонова Ж.П. - доктор биол. наук, врач клин. лаб. диагностики диспансера.
