CC BY
147
хронического течения заболеваний печени вирусной и токсической этиологии / Е.В.Белобородова и др. // Бюл. СО РАМН, 2010. - Т.30, №2. - С.94-100.
2. Биохимия: учеб. для вузов / под ред. Е.С.Северина. - М., 2003. - 779 с.
3. Воскресенский, С.Л. Суточная цикличность метаболической активности соединительной и мышечной ткани у небеременных и беременных женщин // С.Л.Воскресенский, А.Ч.Федорков, Т.М.Юрага / Здравоохранение. - 2011. - №9. - С.47-51.
4. Галузов, В.В. Определение оксипролина в суточной моче / В.В.Гапузов // Лаборатор. дело.- 1990.-№10.- С.43-45.
5. Маршал, В.Дж. Клиническая биохимия / В.Дж. Маршал. - М., СПб., 1999. - 368 с.
6. Серов, В.Н. Руководство по практическому акушерству / В.Н.Серов, А.Н.Стрижаков, С.А.Маркин. -М., 1997.- 440 с.
7. Сидорова, И.С. Физиология и патология родовой деятельности: учеб. пособие. - М., 2006. - 240 с.
8. Шараев, П.Н. Определение свободного и свя-
занного оксипролина в моче / П.Н.Шараев и др. // Лабораторное дело. - 1990. - №12. - С.23-25.
9. Шараев, П.Н. О состоянии обмена коллагена при иммобилизации и электропунктуре / П.Н.Шараев и др. // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. -1986. - №3. - С.304-306.
10. Щербавская, Э.А. Патофизиологические аспекты остеопении и остеопороза при беременности / Э.А.Щербавская, Б.И.Гельцер // Рос. мед. вести. -
2003.- №2. - С.28-33.
11. Nussbaum, R. Cosmetic aspects of pregnancy / R.Nussbaum, A.V.Benedetto // Clin. Dermatol. -2006. - V24. - P.133-141.
12. Oliveri, B. Mineral and bone mass changes during pregnancy and lactation / B.Oliveri et al. // Nutrition. -
2004. - V20. - P.235-240.
13. Rechberger, T Connective tissue changes in the cervix during normal pregnancy and pregnancy complicated by cervical incompetence / TRechberger, N.Uldbjerg, H.Oxlund // Obstet. Gynecol. - 1988. - V71, N4. - P.563-567.
14. Reece, E.A. Medicine of the fetus and mother / E.A. Reece et al. // Philadelphia: Lippincott Comp., 1992. -Р.845.
15. Ripening of the human uterine cervix related to changes in collagen, glycosaminoglicans and collagenolytic activity / N.Uldbjerg, G.Ekman, A.Malmstrom et al. // Am. J. Obstet. Gynec. - 1983. -V147, N6.- P.662-666.
16. Simsek, B. Urine products of bone breakdown as markers of bone resorption and clinical usefulness of urinary hydroxyproline: an overview / B.Simsek, O.Karacaer, I.Karaca // Chinese Med. J. - 2004.- V117, N2. - P.291-295.
17. Uldbjerg, N. The integrity of cervical collagen during pregnancy and labor / N.Uldbjerg et al. // Gynecol. Obstet. Invest. - 1985. - V.20. - P.68-73.
18. Ulrich, U. Bone remodeling and bone mineral density during pregnancy / U.Ulrich et al. // Arch. Gynecol. Obstet. 2003. - V.268. - P.309-316.
Поступила 26.07.2012 г.
Цитологическое исследование выпотных жидкостей
с использованием метода клеточных блоков
Ерохина О.А., Клюкина Л.Б., Толкач Е.В., Урбанович М.Н., Макейчик Е.Е., Кохановская О.О., Гапанович Е.А.
РНПЦ онкологии и медицинской радиологии им. Н.Н. Александрова, Минск
Erokhina O.A., Kliukina L.B., Tolkach A.V., Urbanovich M.N., Makeichyk A.E., Kokhanovskaya O.O., Hapanovich A.A.
N.N. Alexandrov National Cancer Center of Belarusy, Minsk
Cytology of serous effusions applying the cell block method
Резюме. Проведено исследование по разработке и сравнительной оценке методов приготовления клеточных блоков из материала 70 выпотных жидкостей, обработанных с помощью центрифуги и цитоспина: 70 и 64 соответственно. Показано, что оба метода обеспечивают отличную сохранность (96,3+1,3%) и качество окраски (93,3+2,2%) клеточного материала в микропрепаратах клеточных блоков. Пригодными для выполнения иммуноцитохимического анализа признано 107 клеточных блоков (79,9+3,5%). Установлено, что показатели диагностической и опухолевой клеточности цитологических мазков экссудатов достоверно выше аналогичных показателей микропрепаратов клеточных блоков (88,6+3,8 и 78,4+3,6%; 81,4±4,6 и 67,9+4,0%; р<0,05), что указывает на необходимость совершенствования способа концентрации клеточного осадка выпотных жидкостей с целью повышения информативности микропрепаратов клеточных блоков. Ключевые слова: цитологическое исследование, выпотные жидкости, метод клеточных блоков.
Summary. We have prepared 70 and 64 cell blocks using Centrifuge and Cytospin according from 70 serous effusions in order to develop the cell block method and to compare two mode of it. Both modes of cell block method provided perfectly safe keeping (96.3+1.3%) and stain quality (93.3+2.2%) of cell blocks. 107 cell blocks have been suitable to carry out the immunochemical examination (79.9+3.5%). It was determined that index of diagnostic and tumor cellularity in cytological specimens was significant higher than in cell blocks (88.6+3.8 & 78.4+3.6%; 81.4+4.6 & 67.9+4.0%; р<0,05), that indicates on necessity to improve the method of sediment concentration in serous effusions thus to raise the efficacy of cell block method. Keywords: сytological examination, serous effusions, cell block method.
Современный уровень цитологической диагностики предполагает применение иммуноцитохимиче-ских исследований (ИЦХ), способствующих уточнению гистологической формы и органной принадлежности новообразований [1-4, 8, 10, 11]. По мнению ряда исследователей, при выполнении ИЦХ-анализа наиболее надежной и экономически обоснованной является техника клеточных блоков (КБ). Ее приоритетность обусловлена тем, что в препаратах из КБ сохраняются клеточная и тканевая архитектоника исследуемого материала
с минимальной потерей гистогенетиче-ских антигенов; клеточные маркёры определяются на залитом в парафин материале по рутинной, хорошо апробированной во многих гистологических лабораториях иммуногистохимической методике, и при этом появляется возможность приготовить достаточное количество параллельных срезов, каждый из которых имеет одинаковые характеристики [5, 6, 7, 9].
Цель исследования - разработка методов приготовления клеточных блоков из выпотных жидкостей и оценка их пригодности в цитологической диагностике.
Материалы и методы
Методы приготовления парафиновых КБ разработаны на основе макро- и микроскопического исследования 70 выпотных жидкостей (54 плевральных и 16 асцитических), полученных у 61 онкологического больного. Жидкости обрабатывали с помощью центрифуги Kubota 8100 (Япония) или цитоцентрифуги Cytospin-4 (Thermo Shandon Limited, Великобритания), по 35 экссудатов, случайный отбор. Для получения цитологического материала экссудаты центрифугировали на центрифуге или цитоспине в течение 8
минут со скоростью 1500 об/мин. После обработки экссудата на центрифуге надоса-дочную жидкость сливали, образовавшийся в пробирке осадок перемешивали, аспири-ровали с помощью одноразовой пипетки и равномерно распределяли по всей поверхности предметного стекла тонким слоем.
При использовании цитоспина клеточный материал во время центрифугирования размещается на предметном стекле в фиксированном круге диаметром около 5 мм. В случаях, когда осадка много и он не успевает высохнуть за время цитоцентрифугирования, его равномерно распределяют по поверхности предметного стекла, чтобы мазок был тонкослойным. Первоначально готовили 4-6 микропрепаратов; при отсутствии в них клеточного материала, достаточного для установления цитологического диагноза, дополнительно готовили еще несколько микропрепаратов (в среднем 9 микропрепаратов на 1 случай). Всего с применением центрифуги и цитоспина приготовлено и окрашено по Паппенгейму соответственно 322 и 308 цитологических препаратов.
Микроскопическая оценка мазков экссудатов проводилась с целью опре-
деления характера процесса и адекватности клеточного материала для использования метода КБ. Если клеточные элементы цитограммы были сохранными, клеточность высокая (материал выявлен более чем в 50% полей зрения) или умеренная (материал выявлен в 10-50% полей зрения) и обязательно присутствовали клетки опухоли, то из оставшейся жидкости готовили КБ. В зависимости от объема осадка, образовавшегося после центрифугирования, изготавливалось от 1 до 4 КБ. Всего из материала, обработанного с помощью центрифуги и цитоспина, приготовлено 134 КБ: соответственно 70 и 64 КБ. Микропрепараты КБ окрашивались гематоксилин-эозином. При их микроскопическом изучении оценивалось качество окраски, сохранность клеточного материала, диагностическая клеточность срезов, наличие клеток опухоли, характер расположения клеток в микропрепаратах. Основанием для решения вопроса о пригодности препаратов КБ к проведению ИЦХ-реакции служили сохранность клеточных элементов, высокая и умеренная диагностическая клеточ-ность, наличие клеток опухоли.
Математическая обработка данных выполнена в компьютерной программе «Microsoft Office Excel», все расчеты проведены с достоверностью, превышающей 95% (р<0,05).
Результаты и обсуждение
При разработке метода КБ важное значение придавалось получению из экссудата адекватного клеточного субстрата, обеспечивающего решение задач уточняющей онконозологической диагностики. При исследовании цитологических препаратов выпотных жидкостей определение характера процесса основано, прежде всего, на выявлении клеток злокачественной опухоли и оценке изменений цитоморфо-логических особенностей клеток мезоте-лия. Именно поэтому совокупность клеток злокачественной опухоли и мезотелия в цитологических мазках и микропрепаратах КБ обозначена нами как диагностический материал. Отдельно учитывалось наличие в исследуемом экссудате клеток злокачественной опухоли, проведена количественная оценка указанных параметров.
При сравнении показателей качества окраски микропрепаратов КБ, приготовленных с использованием центрифуги и
Таблица il Сравнительная оценка клеточности микропрепаратов клеточных блоков из выпотных жидкостей
Параметр Всего Клеточность
умеренная (++) высокая (+++) высокая и умеренная (++) и (+++)
абс. % абс. % абс. % t
Диагностическая клеточность (центрифуга) 70 16 22,9±5,0 37 52,9±6,0 53 75,7±5,1 0,78
Диагностическая клеточность (цитоспин) 64 16 25,0±5,4 36 56,3±6,2 52 81,3±4,9
Опухолевая клеточность (центрифуга) 70 14 20,0±4,8 30 42,9±5,9 44 62,9±5,8 1,32
Опухолевая клеточность (цитоспин) 64 15 23,4±5,3 32 50,0±6,3 47 73,4±5,5
Таблица 2 Сравнительна и микропрепа я оценка клеточности цитограмм ратов клеточных блоков из выпотных жидкостей
Параметр Всего Клеточность
умеренная (++) высокая (+++) высокая и умеренная (++) и (+++)
абс. % абс. % абс. % t
Диагностическая клеточность цитограмм 70 12 17,1±4,5 50 71,4±5,4 62 88,6±3,8 1,96
Диагностическая клеточность КБ 134 32 23,9±3,7 73 54,5±4,3 105 78,4±3,6
Опухолевая клеточность цитограмм 70 21 30,0±5,5 36 51,4±6,0 57 81,4±4,6 2,19
Опухолевая клеточность КБ 134 29 21,6±3,6 62 46,3±4,3 91 67,9±4,0
№9^ 2012
МЕДИЦИНСКИЕ НОВОСТИ |27
Таблица 3| Характер расположения клеток в цитограммах и микропрепаратах клеточных блоков
Клеточные блоки Всего Одинаковый t Разный
абс. % абс. %
Все 134 115 92,2±3,4 2,09 19 14,2±3,0
Центрифужные 70 56 80,0±4,7 14 20,0±4,7
Цитоспиновые 64 59 92,2±3,4 5 7,8±3,4
цитоспина, статистически значимых различий не выявлено: отлично окрашены препараты 64 из 70 центрифужных блоков (91,4±3,3%) и препараты 61 из 64 цитоспи-новых блоков (95,3±2,6%), удовлетворительно - 6 (8,6±3,3%) и 3 блока (4,7±2,6%) соответственно (1=0,91, р>0,05).
Аналогичные данные получены при сравнении показателей сохранности клеточного материала в парафиновых КБ. Так, отличная сохранность клеток отмечена в 67 центрифужных блоках (95,7±2,4%) и 62 цитоспиновых (96,9±2,2%), удовлетворительная - в 3 (4,3±2,4%) и 2 КБ (3,1 ±2,2%) соответственно (1=0,36, р>0,05).
Таким образом, разработанные методы приготовления КБ обеспечивают отличную сохранность и качество окраски клеточного материала в подавляющем большинстве микропрепаратов КБ: соответственно в 129 (96,3±1,3%) и 125 (93,3±2,2%) из 134 КБ.
При анализе данных диагностической и опухолевой клеточности микропрепаратов КБ, изготовленных с применением центрифуги и цитоспина, обнаружено, что хотя в препаратах цито-спиновых блоков указанные показатели выше, но выявленные различия недостоверны (р>0,05) (табл. 1).
Результативность микроскопического исследования экссудатов в плане уточняющей и онконозологической диагностики связана с наличием в микро-
препаратах информативного клеточного материала, в частности с присутствием клеток мезотелия и опухоли. В связи с изложенным выполнена сравнительная оценка показателей диагностической и опухолевой клеточности цитограмм и микропрепаратов КБ (табл. 2). Полученные данные позволяют считать, что микропрепараты КБ по клеточности уступают мазкам экссудатов (1=1,96 и 1=2,19; р<0,05).
Предметом исследования явилась оценка характера расположения диагностического и опухолевого клеточного материала в цитологических препаратах и микропрепаратах КБ (табл. 3). Установлено, что характер расположения клеток опухоли и мезотелия в цитологических мазках и цитоспиновых микропрепаратах КБ совпадает достоверно чаще, чем в мазках и центрифужных микропрепаратах КБ (соответственно 92,2±3,4% и 80,0±4,7%, 1=2,09, р<0,05). При этом как в мазках, так и в микропрепаратах КБ, значительная часть клеточных элементов была представлена в виде скоплений, формирующих структуры, что давало возможность цитологу высказать суждение о гистологической структуре опухоли до выполнения ИЦХ-исследования и вынесения окончательного цитоморфоло-гического заключения (соответственно 67,2±4,0 и 61,9+4,1%).
Результаты микроскопического изучения 134 препаратов КБ в соот-
ветствии с избранными параметрами позволили признать пригодными для ИЦХ-анализа 107 КБ (79,9±3,5%), не пригодными - 27 КБ (20,1±3,5%). При этом различий данных показателей при исследовании препаратов центрифужных и цитоспиновых блоков не выявлено (78,6±4,9 и 81,3±4,9%; 21,4±4,9 и 18,7±4,9% соответственно, 1=0,39, р>0,05).
Таким образом, согласно полученным данным, показатели диагностической и опухолевой клеточности цитологических мазков экссудатов достоверно выше аналогичных показателей в микропрепаратах КБ (88,6±3,8 и 78,4±3,6%, 1=1,96, р<0,05; 81,4±4,6 и 67,9±4,0%, 1=2,19, р<0,05), что свидетельствует о необходимости совершенствования способа концентрации клеточного осадка выпотных жидкостей с целью повышения информативности микропрепаратов КБ.
Л И Т Е Р А Т У Р А
1. Волченко Н.Н., Борисова О.В. // Рос. онкол. журн. - 2008. - № 4. - С. 22-26.
2. Глузман Д.Ф. Диагностическая иммуноцитохимия опухолей. - Киев: Морион, 2003. - 155 с.
3. ГригорукО.Г., БазулинаЛ.М., ЛазаревА.Ф. // Клин. лабор. диагн. - 2008. - №1. - С. 20-22, 35-36.
4. Afify A.M., Stern R, Michael CW. // Mod. Pathol. -2006. - Vol.19, №3. - P. 417-428.
5. Grefte J.M.M. [et al.] // Acta Cytol. - 2008. - Vol.52, №1. - Р. 35-44.
6. Kim D.H., Kwon M.S. // Acta Cytol. - 2010. - Vol.54, №1. - Р. 55-59.
7. Kim J.H. [et al.] // Diagn. Cytopathol. - 2009. -Vol.37, № 4. - P. 258-261.
8. Lyons-Boudreaux V. [et al.] // Arch. Pathol. Lab. Med. - 2008. - Vol.32, №1. - Р. 23-28.
9. Queiroz C., Barra--Netto M., Bacchi C.E. // Acta Cytol. - 2001. - Vol.45, №1. - Р. 18-22.
10. Takeshima Y[et al.] // Am. J. Clin. Pathol. - 2008. -Vol.130, №5. - Р. 771-779.
11. Ueda J. [et al.] // Diagn. Cytopathol. - 2006. -Vol.34, №1. - P. 6-10.
Поступила 06.02.2012г.
17 лет мы вместе с вами во имя здоровья людей!
Медицинские новости
Спасибо всем читателям, оформившим подписку на IV
Для тех, кто не успел, -
индексы журнала в каталоге РУП «Белпочта» (подписка осуществляется с любого ближайшего месяца): 74954 - для индивидуальных подписчиков; 749542 - для организаций
Вся полезная информация в разделе «Подписка» - на сайте www.mednovosti.by
ftf
