CC BY
21
DOI: 10.24411/1815-3917-2020-11803
БИОМЕДИЦИНА | т.18*№1*2020 / BIOMEDICINE | VOU8«N4«2020
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ / ORIGINAL ARTICLES
DOI: 10.24411/1815-3917-2020-11803
Сpавнительная оценка тpех методов идентификации в крови естественных киллерных клеток
А.А.Кадырова1, Г.М.Мамедов2, А.А.Гулиева3, И.Н.Ахмедова4
1Азеpбайджанский медицинский унивеpситет, г.Баку, Азербайджан;
2Азеpбайджанский институт усовеpшенствования вpачей им. А.Алиева, г.Баку, Азербайджан ; 3Центр общественного здравоохранения и инноваций, г.Баку, Азербайджан; 4Азеpбайджанская академия физической культуpы и споpта, г.Баку, Азербайджан
Резюме: Автоpы сpавнили тpи pазных метода подсчета естественных киллеpных клеток в кpови и показали, что между их pезультатами имелась положительная коppеляция, котоpая была наиболее высокой между pезультатами люминисцентной микpоскопии и пpоточной цитометpии. Воспpоизводимость pезультатов оказалась наиболее высокой пpи использовании метода пpоточной цитомет^ии. Ключевые слова: естественные киллеpные клетки.
Для цитирования: Кадьфова А.А., Мамедов Г.М., Гулиева А.А., Ахмедова И.H. Сpавнительная оценка тpех методов идентификации в ^ови естественных киллеpных клеток. Биомедицина (Баку). 2020;18(1):19-21. DOI: 10.24411/18153917-2020-11803
Поступила в редакцию: 16.01.2020. Принята в печать: 14.02.2020.
Comparative estimation of three different methods for natural killer cells identification in the blood
Kadyrova A.A.1, Mamedov G.M.2, Guliyeva A.A.3, Akhmedova I.N.4
Azerbaijan Medical University, Baku, Azerbaijan; 2A.Aliyev's State Institute of Physician's Improvement, Baku, Azerbaijan; 3Public Health and Innovations Center, Baku, Azerbaijan; 4Azerbaijan Academy of Physical Culture and Sports, Baku, Azerbaijan
Abstract: The authors compare three different methods of natural killer cells calculation in blood and demonstrated that results of these methods connected with positive correlation which was highest between results of luminescent microscopy and flow cytometry. Reproducibility of results was highest in case of flow cytometry application. Key words: natural killer cells.
For citation: Kadyrova A.A., Mamedov G.M., Guliyeva A.A., Akhmedova I.N. Comparative estimation of three different methods for natural killer cells identification in the blood. Biomedicine (Baku). 2020;18(1):19-21. DOI: 10.24411/1815-3917-202011803
Received: 16.01.2020. Accepted: 14.02.2020.
Для корреспонденции: Г.М.Мамедов
Доктор философии по медицине, ассистент кафедры лучевой диагностики, Азербайджанский Институт усовершенствования врачей им. А.Алиева, г. Баку, Азербайджан. E-mail: giyasmgm@mail.ru
Corresponding author: Mamedov G.M.
PhD, Assistant of X-ray diagnostics Chair, A.Aliyev's State Institute of Physician's Improvement, Baku, Azerbaijan. E-mail: giyasmgm@mail.ru
БИОМЕДИЦИНА | T.18«NM«2020 / BIOMEDICINE | VOM8«№1«2020_
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ / ORIGINAL ARTICLES DOI: 10.24411/1815-3917-2020-11803
Как известно, естественные киллерные клетки (ЕКК), как одна из популяций лимфоцитов, были обнаружены у мышей в 1975 (Е.Кляйн и Г.Вигзель) и у человека в 1976 (Р.Херберман). Первоначально эти клетки морфологически относили к числу "больших гранулосодержащих" лимфоцитов (БГЛ), а после внедрения технологии типирования иммуноцитов с помощью моноклональных антител они были отнесены к популяции клеток, маркируемых кластерами CD16/56 [1, 2].
За годы, истекшие с того времени, было установлено, что ЕКК играют ведущую роль в обеспечении резистентности не только в отношение опухолей, но и патогенных простейших, возбудителей паразитарных инфекций и всех вирусов. Поэтому определение в крови количества ЕКК до сих пор считается одним из информативных показателей, отражающих состояние врожденного иммунитета и потенциальной резистентности организма, в первую очередь, к вирусным инфекциям и опухолевому росту [3].
Как известно, за эти годы были разработаны 2 основных методических подхода к определению содержания ЕКК в крови.
Первый подход основан на том, что почти 95% всех ЕКК относится к БГЛ. Вначале этот подход использовался для идентификации БГЛ при исследовании мазков, приготовленных из суспензии лимфоцитов, полученной путем центрифугирования крови в градиенте плотности, но позднее было показано, что данный подход применим для исследования и обычных мазков взятой из пальца крови, используемых для определения лейкоцитарнй формулы.
Этот подход изначально предполагал окраску мазков крови по методу Папенгейма, но позже оказалось, что БГЛ можно легко подсчитать и в мазках, окрашенных по методу Романовского-Гимзы. Основным достоинством данного метода является его широкая доступность - подсчет БГЛ в мазках крови позволяет использовать данный подход в условиях неспециализированной клинической лаборатории.
Второй подход основан на идентификации ЕКК с помощью моноклональных антител, маркирующих только иммуноциты, имеющие мембранные рецепторы CD16/56 - выявление клеток с таким иммунофенотипом позволяет наиболее точно количественно оценить численность гомогенной популяции "чистых" ЕКК.
Первая модификация этого подхода предполагала использование люминисцентного микроскопа и соответствующих моноклональных антител, связанных с флуорохромом. Однако, после создания
соответствующей регистрирующей аппаратуры этот методический подход был реализован с помощью лазерных проточных цитометров, позволявших автоматизировать учет результатов и повысить производительность исследования.
Приняв во внимание изложенные выше данные, мы поставили перед собой цель сравнить результаты трех методов подсчета процентного содержания ЕКК в крови группы здоровых молодых лиц.
Первый метод был основан на визуально-микроскопическом подсчете БГЛ в мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе.
Второй метод сводился к использованию лю-минисцентного микроскопа для подсчета светящихся клеток в мазках крови, обработанных соответствующими моноклональными антителами.
Третий метод был основан на пропускании ге-паринизированной и обработанной соответствующими моноклональными антителами крови через капилляр лазерного проточного цитометра BD FACS Canto.
С помощью этих методов были по 4 раза исследованы одни и те же образцы крови, полученной у 20 здоровых молодых лиц. Полученные результаты были обработаны математически с помощью традиционнных формул вариационной статистики.
Средние величины относительного содержания ЕКК, в крови полученные при четырехкратном определении с помощью указанных трех методов, составили: 22,6±6,3%, 19,0±3,9% и 19,4±2,0%, соответственно.
Сравнивая эти величины, нетрудно заметить, что эти результаты не имели статистически устойчивого различия между собой даже в достаточно широком вероятностном интервале (р<0,1). Более того, результаты двух последних методов практически полностью совпали.
К этому надо добавить и то, что судя по величине стандартной ошибки определения, наименее точным и наименее воспроизводимым оказался первый метод. Второй и третий методы обладали примерно равной воспроизводимостью.
При этом, оказалось, что между результатами все трех методов отмечалась положительная корреляция, коэффициент которой приближался к 0,9. При этом, этот коэффициент был наиболее высоким при сравнении результатов, полученных с помощью первых двух методов.
Итак, все три метода позволяли объективно оценить содержание в крови ЕКК, хотя диагностически характеристики этих методов заметно отличались. Так, наиболее высокой воспроизводимость
_БИОМЕДИЦИНА | T.18«NM«2020 / BIOMEDICINE | voM8«NM«2020
DOI: 10.24411/1815-3917-2020-11803 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ / ORIGINAL ARTICLES
pезультатов была отмечена ^и использовании метода поточной лазеpной цмитометpии. Наименьшей воспpоизводимостью хаpактеpизовался метод визуального подсчета БГЛ.
В то же вpемя, последний метод был намного ^още в исполнении и не тpебовал использования моноклональных антител и пpибоpов для учета pезультатов.
Именно ^остата этой методики вместе с отсутствием необходимости ^пленения специальных пpибоpов позволяет использовать ее в условиях типовой лабоpатоpии ^и пpоведении не только
клинических, но и некотоpых научных исследований. Более того, ш^окая доступность этой методики и возможность ^именен^ ее без наличия у исследователей не всегда доступных биологических pеагентов откpывает опpеделенные пеpспекти-вы ее использования и пpи массовых с^ининго-вых исследованиях, пpоводимых для выявления лиц с угнетенной pезистентностью, в том числе, фоpмиpующих ^уппу повышенного pиска заболевания злокачественными опухолями и pазвития виpусных инфекций.
Литература
1. Семененко Т. А., Мамедов Г.М. Система естественных киллерных клеток как звено неспецифической иммуноло-гически обусловленной резистентности. Биомедицина (Баку). 2006;4:40-43. Режим доступа: http://biomedicine.az/ download/biomedicine_4_2006.pdf
2. Turvey S.E., Broide D.H. Innate immunity. J Allergy Clin Immunol. 2010;125(2):S24-S32. DOI: https://doi.oig/10.1016/ j.jaci.2009.07.016
3. Abel A.M., Yang Ch., Thakar M.S., Malarkannan S. Natural Killer Cells: Development, Maturation and Clinical Utilization. Front Immunol. 2018;9:1869. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2018.01869
References
1. Semenenko T.A., Mamedov G.M. Sistema estestvennykh killernykh kletok kak zveno nespetsificheskoi immunologich-eski obuslovlennoi pezistentnosti. Biomedicine (Baku). 2006;4:40-43. Available at: http://biomedicine.az/download/biomed-icine_4_2006.pdf (In Russian).
2. Turvey S.E., Broide D.H. Innate immunity. J Allergy Clin Immunol. 2010;125(2):S24-S32. DOI: https://doi.org/10.1016/ j.jaci.2009.07.016
3. Abel A.M., Yang Ch., Thakar M.S., Malarkannan S. Natural Killer Cells: Development, Maturation, and Clinical Utilization. Front Immunol. 2018; 9: 1869. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2018.01869
Информация о соавторах: А.А.Кадырова
Профессор, доктор медицинских наук, зав. кафедрой микробиологии и иммунологии, Азербайджанский Медицинский Университет, г. Баку, Азербайджан А.А.Гулиева
Доктор философии по медицине, Центр общественного здравоохранения и инноваций, г. Баку, Азербайджан И.Н.Ахмедова
Доктор философии по биологии, Азеpбайджанская академия физической культуpы и споpта, г. Баку, Азербайджан
Information about co-authors: Kadyrova A.A.
Professor, Doctor of Medical Sciences, Head of Microbilogy and Immunology Chair, Azerbaijan Medical University, Baku, Azerbaijan Guliyeva A.A.
PhD in Medicine, Public Health and Innovations Center, Baku,
Azerbaijan
Akhmedova I.N.
PhD in Biology, Azerbaijan Academy of Physical Culture and Sports, Baku, Azerbaijan
