CC BY
108
эрлихиозы человека - новая проблема инфекционной патологии в России: Пособие для врачей. - Омск, 2006. - С.45.
6. Травина Н.С., Скрынник С.М., Карань Л.С. Возбудители трансмиссивных инфекций, передаваемых клещами I. регеика^ в Зауралье // Национальные приоритеты России. Современные аспекты природной очаговости болезней. -2011- № 2 (5). - С.76-77.
7. Фоменко Н.В., Епихина Т.И., Черноусова Н.Я. Выявление ЕоттгНа тгуатоШ в крови людей, заболевших в весеннелетний эпидемиологический период // Молекулярная медицина. - 2010. - №3. - С.28-31.
8. Фоменко Н.В. Генетическая гетерогенность ЕоттгНа 5рр. Западной Сибири: Дисс. ... канд. биол. наук. - Новосибирск, 2008. - 147 с.
9. Чаусов Е.В., Терновой В.А., Протопопова Е.В. и др. Генетическое разнообразие инфекционных агентов, переносимых клещами в г. Томске и его пригородах // Паразитология.
- 2009. - №5 (43). - С.374-388.
10. Шихин А.В., Баженова И.В., Романенко В.Н. и др.
Современная эпидемиологическая ситуация по природноочаговым инфекциям в Томской области // Национальные приоритеты России. Современные аспекты природной очаговости болезней. - 2011.- №2 (5). - С.69-70.
11. Шпынов С.Н., Рудаков Н.В., Ястребов В.К. и др. Новые данные о выявлении эрлихий и анаплазм в иксодовых клещах в России и Казахстане // Мед. паразитол. - 2004. - №2.
- С.10-14.
12. CDC (Center for Disease Control and Prevention) http:// www.cdc.gov/ ticks/diseases/index.html.
13. Platonov A.E., Karan L.S., Kolyasnikova N.M. Humans infected with relapsing fever spirochete Borrelia miyamotoi, Russia // Emerg. Infect. Dis. - 2011. - Vol. 17. №10. - P.1816-1823.
14. Rar V.A., Livanova N.N., Panov V.V., et al. Genetic diversity of Anaplasma and Ehrlichia in Asian part of Russia // Vector Borne Zoonotic Dis. - 2011. - Vol. 11. №8. - Р.1013-1021.
15. Tamura K., Dudley J., Nei M., et al. MEGA4: Molecular Evolutionary Genetics Analysis (MEGA)Software Version 4.0 // Mol. Biol. Evol. - 2007. - Vol. 24. №8. - P.1596-1599.
Информация об авторах: Бондаренко Евгений Иванович - к.м.н., научный сотрудник, 630117, г. Новосибирск-117, а/я 492, e-mail: ebondarenko@ngs.ru; Тимофеев Денис Игоревич - к.б.н., старший научный сотрудник, тел. (383) 227-68-24, e-mail: timofeev@vector-best.ru; Фоменко Наталия Владимировна - к.б.н., научный сотрудник, e-mail: nataliyaf@ngs.ru; Якименко Валерий Викторович - д.б.н., заведующий лабораторией, 644080, г. Омск, проспект Мира, 7, тел. (3812) 65-03-04, e-mail: vyakimenko78@yandex.ru; Танцев Алексей Константинович - к.б.н., научный сотрудник, тел. (3812) 65-14-77;
Рар Вера Александровна - к.б.н., научный сотрудник, 630090, г. Новосибирск, пр. Лаврентьева, 8, тел. (383) 363-51- 37,
e-mail: rarv@niboch.nsc.ru.
© БАБКИН И.В., ТИКУНОВА Н.В., ВАСЬКОВА А.А., БАБКИНА И.Н., ФОМЕНКО Н.В. - 2012 УДК 573.6; 57.089:616-7
СОЗДАНИЕ ШТАММОВ ЕБСИЕЙ1СИ1Л СОИ, ПРОДУЦИРУЮЩИХ РЕКОМБИНАНТНЫЙ БЕЛОК Р83/100 БОЙЙЕНЛ вЛШЫИ И БОЙЙЕНЛ ЛПЕИI
Игорь Викторович Бабкин1, Нина Викторовна Тикунова1, Анна Андреевна Васькова1,
Ирина Николаевна Бабкина1, Наталья Владимировна Фоменко1'2 ('Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск, директор -акад. РАН В.В. Власов; 2ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск, генеральный директор - М.Д. Хусаинов)
Резюме. Сконструированы штаммы Escherichia coli / pUR-p83/100-43T и Escherichia coli / pUR-p83/100-52T, продуцирующие рекомбинантные белки бета-галактозидаза-Р83/100 Borrelia garinii, Tom 9105 и B. afzelii, Tom 4106, соответственно. Уровень продукции гибридных белков составил около 20% от суммарного клеточного белка, и большая их часть находится в растворимой форме. Методом вестерн блот анализа было подтверждено, что полученные рекомбинантные белки, в отличие от бета-галактозидазы, выявлялись сыворотками больных иксодовыми клещевыми боррелиозами и не выявлялись сыворотками здоровых доноров.
Ключевые слова: иксодовый клещевой боррелиоз, рекомбинантный белок, штамм-продуцент.
GENERATION OF ESCHERICHIA COLI STRAINS PRODUCING RECOMBINANT PROTEIN Р83/100 BORRELIA GARINII AND BORRELIA AFZELII
I.V. Babkin1, N.V. Tikunova1, A.A. Vas’kova1,1.N. Babkina1, N.V. Fomenko1'2 ('Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine, Siberian Branch of RAS, Novosibirsk;
2LTD “Vector-Best”, Novosibirsk, Russia)
Summary. Escherichia coli / pUR-p83/100-43T and Escherichia coli / pUR-p83/100-52T strains, producing recombinant proteins beta-galactosidase-F83/100 Borrelia garinii, Tom 9105 and Borrelia afzelii, Tom 4106, respectively, have been generated. Production level of the recombinant proteins was about 20% from the total level and the most part of them was in a soluble form. It was confirmed by western blot analysis that these recombinant proteins, unlike beta-galactosidase, were developed by serum of ixodes tick-born borreliosis patients and were not developed by serum of healthy donors.
Key words: ixodes tick-born borreliosis, recombinant protein, producing strain.
Значительное место по уровню заболеваемости и широте распространения в Российской Федерации занимают иксодовые клещевые боррелиозы (ИКБ). Эпидемиологическая обстановка по заболеваемости ИКБ продолжает оставаться неблагополучной. Проблемой является достоверная диагностика ИКБ, что связано с высоким генетическим разнообразием выявляемых на территории РФ боррелий и антигенной изменчивостью этого патогена в ходе заболевания. Для разработки надежных диагностических средств ключевым этапом является выбор и создание антигенов на основе иммунодоминантных белков боррелий, вызыва-
ющих образование антител у больных, на всех стадиях заболевания ИКБ.
Одним из иммунодоминантных белков боррелий является белок Р83/100. Показано, что антитела к этому белку обнаруживаются у пациентов как на ранних стадиях ИКБ, так и на поздних стадиях заболевания [8]. Ген p83/100 (BB0744) локализован на хромосоме, степень гомологии гена p83/100 для разных видов боррелий комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato (s.l.) составляет 88,2-99,1%, причем 5'-конец гена является довольно консервативным, тогда как 3'-конец более вариабелен [9]. У разных видов комплекса B. burgdorferi s.l. обнару-
живаются варианты белка Р83/100, различающиеся по молекулярной массе - p83, p93, p94, p97, p100, хотя молекулярные массы аминокислотных последовательностей мало различаются и составляют в среднем 79,8 кДа [9,10]. Основные антигенные детерминанты Р83/100 локализованы в центральном гидрофильном районе (250-550 а.о.), который является высоко вариабельным [5]. Обнаружены иммунологические отличия между разными гомологами Р83/100, следствием чего является вариабельность антител, специфичных к этому белку [5]. В связи с этим при создании антигенов для средств диагностики необходимо использовать белки P83/100 разных видов комплекса B. burgdorferi s.l.
Исследования генетического разнообразия борре-лий показало, что в большинстве регионов Российской Федерации этиологию, эпидемиологию и клинические проявления ИКБ определяют B. afzelii и B. garinii [3,4,7].
Целью данной работы являлось создание штаммов Escherichia coli, продуцирующих рекомбинантные белки Р83/100 видов B. garinii и B. afzelii.
Материалы и методы
В работе использовали штаммы E. coli XL2-blu (endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F' [Tn10 proAB+ laclq A(lacZ)M15 Amy CmR] hsdR17(rK- mK+)) и BMH7118 (A(lac/pro) F' laclq lacZ AM15 pro+ supE).
Олигонуклеотидные праймеры синтезированы на автоматическом синтезаторе ABI-394 (Applied Biosystems, США) в Институте химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН (Новосибирск).
ПЦР проводили с использованием набора XL PCR Kit (Applied Biosystems, США) в 50 мкл смеси, содержащей XL PCR буфер, dNTP (200 мкМ каждого), 1,2 мМ Mg(OAc)2, 4 е.а. полимеразы «rTth DNA Polymerase XL», 30 пкм каждого праймера и 0,4 мкг матрицы. Реакции вели с использованием технологии горячего старта в амплификаторе GeneAmp PCR System 9700 (Applied Biosistems, США).
Анализ фрагментов ДНК проводили электрофорезом в 0.8% агарозном геле в буфере TAE с бромистым этидием в концентрации 0,2 мкг/мл. Выделение ДНК из агарозного геля проводили с помощью набора QIAquick Gel Extraction (Qiagen, США) в соответствии с рекомендациями производителя.
Реакцию секвенирования проводили с использованием BigDye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction kit (Applied Biosystems, США) с последующей очисткой продуктов реакции секвенирования с помощью набора DyeEx Spin Kit (Qiagen, США). Разгонку очищенных продуктов реакции секвенирования осуществляли на автоматическом секвенаторе ABI 310 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, США). Каждый нуклеотид прочитывался по двум цепям. Анализ нуклеотидных последовательностей проводили с помощью компьютерной программы Sequencher.
Получение рекомбинантных ДНК и трансформацию клеток E. coli проводили с использованием стандартных процедур [2]. Плазмидную ДНК выделяли из индивидуальных клонов E. coli методом щелочного лизиса [6] с нашими модификациями. Для экспрессии целевых генов соответствующие клоны E. coli культивировали в 5 мл среды LB c ампициллином при 37°C в течение ночи. Далее аликвоты ночных культур пересевали в свежую среду LB с ампициллином и инкубировали при 32°C 2 часа при интенсивном перемешивании. Для индукции lac-промотора добавляли изопропил бета-D-тиогалактозид (ИПТГ) до конечной концентрации 1 mM и продолжали культивирование при 32^ в течение 5-7 часов при интенсивном перемешивании. Экспрессию гибридного белка оценивали электрофоретически в полиакриламидном геле с SDS.
Для исследования распределения гибридных белков между растворимой и нерастворимой фракциями (тельцами включения) по 1 мл индуцированных куль-
тур центрифугировали и клетки ресуспендировали в 500 мкл буфера TE. Затем клетки разрушали с помощью ультразвукового дезинтегратора, центрифугировали и отбирали супернатант, содержащий растворимую фракцию белков. Осадок, содержащий нерастворимую фракцию белков, ресуспендировали в 50 мкл 8 M мочевины в TE буфере. Фракции анализировали в полиакриламидном геле с SDS, нанося одинаковые по объему аликвоты. Уровень продукции белков определяли с помощью программы Image Lab (БиоРад, США).
Для вестерн блот анализа белки клеточных лизатов, разделенные электрофоретически в полиакриламидном геле с SDS, переносили на нитроцеллюлозную мембрану по методу [11]. Затем места неспецифического связывания мембраны насыщали 3% раствором бычьего сывороточного альбумина в фосфатно-солевом буфере (ФСБР), pH 7,2 при 37^ в течение 2 часов. Все последующие этапы проводили в растворе 0,1% Tween-20-ФСБР, проводя после каждого этапа трехкратную промывку мембраны этим же раствором. Стрипы инкубировали с пулами донорских сывороток, объединенными по 6 штук, в разведении 1:20 в течение 60 минут при 37оС Образовавшиеся иммунные комплексы выявляли антивидовым конъюгатом щелочной фосфатазы (Sigma, США) в разведении 1:6000. В качестве хромогена использовали смесь 5-бромо-4-хлоро-3-индолил фосфата и нитро-тетразолиевого голубого.
Результаты и обсуждение
На территории Российской Федерации основными патогенными видами комплекса B. burgdorferi s.l. являются B. garinii и B. afzelii [3,4,7]. На первом этапе работы осуществили конструирование плазмид, обеспечивающих в клетках E.coli экспрессию генов p83/100 двух изолятов боррелий, принадлежащих к видам B. garinii и B. afzelii. На основании анализа последовательности межгенного спейсера 5S-23S рРНК определена групповая принадлежность этих изолятов - Tom 9105 B. garinii подгруппы 20047 и Tom 4106 B. afzelii подгруппы NT28. Полноразмерные последовательности генов p83/100 получали в ПЦР с использованием следующих праймеров, рассчитанных на основе проведенного выравнивания последовательностей гена p83/100, имеющихся в базе данных GenBank и полученных нами ранее [3]:
p83U67 5'-GGGTAGGATCCATGAAAAAAATGTTAC TAATCTTTAGTTTTTTTCTTATTTCTTTGAATGGATT TCC,
p83L39 5'- СССАТ GTCGACGATCGTGA GTTCGAATCCCACC ATCCCG.
В состав праймеров были введены сайты для эндонуклеаз рестрикции BamHI и SalI (выделены серым цветом) для последующего клонирования.
Полученные продукты амплификации длиной около 2000 п.н. (рис. 1) обрабатывали эндонуклеазами рестрикции BamHI и SalI, очищали в агарозном геле и объединяли в реакции лигирования с ДНК векторной плазмиды pUR291, линеаризованной с помощью тех же эндонуклеаз рестрикции. Выбор в качестве экспресси-
Рис. 1. Электрофореграмма ПЦР-фрагментов гена р83/100 B. garinii (1), B. afzelii (2). М-ДНК-маркер, длина фрагментов в п.н. приведена слева.
р83/100 ВалЯ1 (3286)
Рис. 2. Карта рекомбинантной плазмиды, содержащей последовательность гена р83/100 боррелий.
рующего вектора плазмиды риЯ291, содержащей ген бета-галактозидазы под контролем 1ас-промотора, обусловлен тем, что при встраивании чужеродных последовательностей в З'-конец этого гена 5'-концевая область мРНК сохраняется нативной, и поэтому оптимальна для инициации трансляции. Кроме того, гибридные белки на основе бета-галактозидазы как правило сохраняют ферментативную активность и антигенные свойства, характерные для продуктов генов, входящих в состав гибридного белка, что существенно упрощает процедуру их очистки и использования.
Продуктами реакции лигирования трансформировали компетентные клетки Е. соН XL2-b1u. Полученные индивидуальные клоны анализировали на наличие в них плазмид, содержащих целевую встройку. В отобранных клонах, содержащих плазмиду со встройкой около 2190 п.н. по сайтам ВатНI и БаИ, правильность встройки подтверждали секве-нированием. Для этого на основе ранее построенного нуклеотидного выравнивания различных последовательностей гена р83/100 были рассчитаны следую-
щие олигонуклеотидные праймеры:
Bor_SEQ528U25 5' T CAAT GGGCT GGAAAGACACA AATA 3',
Bor_SEQ1021U26 5' CCAAAACCTGGTGATGTAAGT TCTCC 3',
Bor_SEQ1647U26 5' TTTAGGAACGCTTCAACTTAT TGATT 3',
Bor_SEQ1729L29 5' ACAACTAAATCTTTTTCACGTT CATAAAT 3',
Bor_SEQ1141L26 5' CTTTTTTTGATTTCAATTTGCT TTTC 3',
Bor_SEQ613L26 5' GCCACAACCTTATCTGTAACCA AACT 3',
а также последовательности праймеров, комплементарных ДНК векторной плазмиды pURSEQU20 5' GCCCGTCAGTATCGGCGGAA 3' и
pURSEQL22 5' TCACGAGGCCCTTTCGTCTTCA 3'.
По результатам секвенирования выбрали плазмид-ные ДНК pUR-p83/100-43T и pUR-p83/100-52T, содержащие правильную последовательность гена Р83/100 двух видов боррелий - B. garinii, Tom 9105 и B. afzelii, Tom 4106, соответственно. Карта результирующих рекомбинантных плазмид представлена на рис. 2.
Плазмидными ДНК pUR-p83/100-43T и pUR-p83/100-52T трансформировали клетки E. coli BMH7118.
Рис. 3. Электрофореграмма в 10% полиакриламидном геле с SDS лизатов клеток E. coli, периплазматических и цитоплазматических фракций. Дорожки: растворимая фракция индуцированных клеток, содержащих плазмиду pUR-p83/100-43T (1); нерастворимая фракция индуцированных клеток, содержащих плазмиду pUR-p83/100-43T (2); лизат клеток, содержащих плазмиду pUR-p83/100-43T без индукции (3); лизат клеток, содержащих плазмиду pUR-p83/100-52T без индукции (4); pUR291 (5), лизат индуцированных клеток, содержащих плазмиду pUR-p83/100-43T (6); лизат индуцированных клеток, содержащих плазмиду pUR291_p83/100_52T (7); растворимая фракция индуцированных клеток, содержащих плазмиду pUR291_p83/100_52T (8), нерастворимая фракция индуцированных клеток, содержащих плазмиду pUR291_p83/100_52T (9). М - маркер молекулярных масс «PageRuler™ Plus Prestained Protein Ladder» (Ферментас, Литва).
Рис. 4. Вестерн блот анализ лизатов индуцированных клеток E. coli, содержащих плазмиду pUR-p83/100-43T, проявленных сыворотками здоровых доноров (1), клеток E. coli, содержащих плазмиду pUR-p83/100-43T, проявленных сыворотками больных ИКБ (2), клеток E. coli, содержащих плазмиду pUR291, проявленных сыворотками больных ИКБ (3).
Продукцию гибридных белков достигали индукцией lac-промотора с помощью ИПТГ. Индивидуальные клоны анализировали на присутствие гибридного белка электрофоретически (рис. 3). Согласно расчетам молекулярная масса гибридного белка в случае B. garinii должна составлять 196 кДа (1719 а.к.о.), в случае B. afzelii - 192 кДа (1689 а.к.о.). По результатам анализа было сделано заключение, что в обеих культурах клеток E. coli происходит эффективная продукция гибридного белка бета-галактозидаза-Р83/100 (рис. 3) с уровнем продукции около 20% от суммарного клеточного белка.
Исследование распределения гибридных белков между растворимой и нерастворимой фракцией показало, что большая часть белка (более 90%) находится в растворимой фракции (рис. 3), принимая во внимание то, что фракция нерастворимых белков была сконцентрирована в 10 раз больше, чем фракция растворимых белков. Методом вестерн блот анализа было подтверждено, что полученные гибридные белки, в отличие от бета-галактозидазы, выявляются сыворотками больных ИКБ и не выявляются сыворотками здоровых доноров (рис. 4).
Таким образом, нами были сконструированы штаммы Escherichia coli / pUR-p83/100-43T и Escherichia coli / pUR-p83/100-52T, продуцирующие гибридные белки бета-галактозидаза-Р83/100 Borrelia garinii, Tom 9105 и B. afzelii, Tom 4106, соответственно.
Работа выполнена при частичной поддержке гранта РФФИ 11-04-01066-а и проекта №5.25 Программы фундаментальных исследований РАН «Фундаментальные науки - медицине» Российской академии наук.
ЛИТЕРАТУРА
1. Боргояков В.Ю., Фоменко Н.В., Панов В., Чикова Е.Д. Исследование зараженности боррелиями таежных клещей в Новосибирском научном центре СО РАН // Паразитология.
- 2010. - №44(6). - С.54З-556.
2. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. - М., 1984. -4УУ с.
3. Фоменко Н.В., Сабитова Ю.В., Хаснатинов М.А. и др. Гетерогенность генa p83/100 боррелий комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato // Молекулярная генетика микробиология и вирусология. - 200У. - №4. - С.З1-ЗУ.
4. Фоменко Н.В., Стронин О.В., Сабитова Ю.B., Романова Е.В. Использование боррелий трех видов для выявления специфических антител в крови больных иксодовыми клещевыми боррелиозами // Журнал инфекционной патологии.
- 2010. - Т. 1У. №З. - С.14З-146.
5. Anda P., Backenson P.B., Coleman J.L., et al. Epitopes shared by unrelated antigens of Borrelia burgdorferi // Infect. Immun. -1994. - Vol. 62. - P.1070-1078.
6. Birnboim H., Doly J. A rapid alkaline extraction procedure
for screening recombinant plasmid DNA // Nucl. Acids Res. -1979 - Vol.7 - P.1513.
7. Fomenko N. V., Livanova N.N., Chernousova N. Y. Diversity of Borrelia burgdorferi sensu lato in natural foci of Novosibirsk region // Int. J. Med. Microbiol. - 2008. - Vol. 298. S1. - P.139-148.
8. Rauer S., Kayser M., Neubert U., et al. Establishment of enzyme-linked immunosorbent assay using purified recombinant 83-kilodalton antigen of Borrelia burgdorferi sensu stricto and Borrelia afzelii for serodiagnosis of Lyme disease // J. Clin. Microbiol. - 1995. - Vol. 33. - P.2596-2600.
9. Rossler D., Eiffert H., Jauris-Heipke S., et al. Molecular and immunological characterization of the p83/100 protein of various Borrelia burgdorferi sensu lato strains // Med. Microbiol. Immunol. - 1995. - Vol. 184. - P.23-32.
10. SigalL. Immunologic mechanisms in Lyme neuroborreliosis: the potential role of autoimmunity and molecular mimicry // S. Neurol. - 1997. - Vol. 17. - P.63-68.
11. Towbin H., Staehlin T., Gorden J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1979. - Vol. 76. - P.4350.
Информация об авторах: 630090, г. Новосибирск, Академика Лаврентьева проспект, 8, раб. тел. (383)-363-51-57, e-mail: i_babkin@mail.ru Бабкин Игорь Викторович — к.б.н., старший научный сотрудник; Тикунова Нина Викторовна — д.б.н., зав. лабораторией; Васькова Анна Андреевна — соискатель; Бабкина Ирина Николаевна — к.б.н., с.н.с.; Фоменко Наталья Владимировна — к.б.н., научный сотрудник.
© ШКОДА О.С., ЧИКОВА Е.Д., ФОМЕНКО Н.В., ВЛАСОВ В.В., ЛАКТИОНОВ П.П., РЫКОВА Е.Ю. - 2012 УДК 616.98:579.834.144-97
ВЗАИМОСВЯЗЬ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ДНК КРОВИ С ОСОБЕННОСТЯМИ И ХАРАКТЕРОМ ИММУННОГО ОТВЕТА У БОЛЬНЫХ ИКСОДОВЫМ КЛЕЩЕВЫМ БОРРЕЛ ИОЗОМ НА РАННИХ СТАДИЯХ
Ольга Сергеевна Шкода, Елена Дмитриевна Чикова, Наталья Владимировна Фоменко, Валентин Викторович Власов, Павел Петрович Лактионов, Елена Юрьевна Рыкова (Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск, директор - акад. РАН, проф., д.х.н. В.В. Власов)
Резюме. Для оценки возможности использования внеклеточных ДНК, циркулирующих в крови (цирДНК), в диагностике инфекционного процесса проведено определение их концентрации в крови 61 больного с диагнозом «иксодовый клещевой боррелиоз» (ИКБ) и 60 здоровых доноров. В крови больных выявлено повышение концентрации провоспалительных цитокинов и цирДНК крови на ранней стадии ИКБ до появления специфических антител к антигенам боррелий комплекса Borrelia burgdorferi s.l. Показано, что дальнейшее возрастание концентрации цирДНК крови при развитии гуморального иммунного ответа ассоциировано с появлением высоких титров анти-боррелиозных антител и повышением уровня противовоспалительных цитокинов. Полученные данные говорят о перспективности дальнейшего изучения цирДНК крови в качестве дополнительного диагностического критерия при ИКБ.
Ключевые слова: иксодовый клещевой боррелиоз, циркулирующие ДНК крови, иммунный ответ, цитокины, специфические антитела.
CIRCULATING DNA AND IMMUNE RESPONSE CHARACTERISTICS IN PATIENTS WITH EARLY STAGES OF TICK-BORNE BORRELIOSIS
O.S. Shkoda, E.D. Chikova, N.V. Fomenko, V.V. Vlassov, P.P. Laktionov, E.Y. Rykova (Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine SB RAS)
Summary. To assess the possibility of using circulating DNA diagnostic potential in tick-borne borreliosis, 61 patients and 60 healthy donors have been surveyed. With the purpose of establishment of immune response characteristics cytokine profile and antibodies level, specific to Borrelia burgdorferi s.l antigens were analyzed. At an early stage of tick-borne borreliosis induction of pro-inflammatory cytokines secretion and increase in csb-cirDNA concentration were revealed before the development of specific antibodies. Further increase in csb-cirDNA concentration was significantly associated with the appearance of high titers of antibodies specific to Borrelia burgdorferi s.l. and with anti-inflammatory cytokines secretion increase. The data obtained indicate that further study of the cirDNA concentration is promising to evaluate its applicability as the additional diagnostic criterion of tick-borne borreliosis.
Key words: Tick-borne borreliosis, circulating DNA of blood, immune response, cytokines, specific antibodies.
Иксодовые клещевые боррелиозы (ИКБ) - природноочаговые трансмиссивные заболевания, занимающие по широте распространения одно из первых мест среди природно-очаговых инфекций в России. Возбудители ИКБ - спирохеты комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato (s.l.), - передаются человеку клещами рода Ixodes.
Боррелии обладают способностью к длительной пер-систенции в организме человека, что может вызывать осложнения, в том числе аутоиммунного характера. Поэтому актуальным является выявление факторов, пригодных для ранней диагностики и разработки подходов эффективного лечения. Одним из критериев по-
