CC BY
244
teomic alterations leading to melanotumorigenesis. Proteome Sci. 2012; 10: 50.
5. Fol'f K., Dzhonson R.A., SyurmondD. Dermatology at ThomasFitzpatrick: Guidebook. 2nd Russian Edition. [Dermatologiya, po To-masu Fitzpatriku: Atlas-spravochnik (2 russkoe izdanie)]. Moscow: Praktika; 2007: 124—37. (in Russian)
6. Zaal L.H., Mooi W.J., Sillevis Smitt J.H. et al. Classification of congenital melanocytic naevi and malignant transformation: a review of literature. Br. J. Plast. Surg. 2004; 57: 707—19.
7. Mordovtsev V.N., Alchangyan L.V. Gedeon Richter in the CIS. Nauchno-informatsionnyy meditsinskiy zhurnal. 2002; 2: 10; 38— 40. (in Russian)
9. Agaeva L.R., Vozdvizhenskiy I.S. Treatment of pigmented nevi skin. Detskaya khirurgiya. 2004; 4: 31—2. (in Russian)
Поступила 12.12.14
© ЦУМАН В .Г., 2015 УДК 616.71-018.4-013.3-089.843 Цуман В.Г.
СОЗДАНИЕ КОСТНОЙ ТКАНИ IN VIVO ПРИ ПОМОЩИ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК КОСТНОГО МОЗГА
Отделение детской хирургии ГБУЗ МО "Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского" (МОНИКИ), 129110, Москва, ул. Щепкина, 61/2
Для корреспонденции: Цуман Вадим Григорьевич
В статье кратко изложены свойства стволовых клеток костного мозга (СККМ). Приведены данными об эмбриогенезе превращения стволовых клеток (СК) в костную ткань. Охарактеризованы разработанный нами способ прямой пересадки живых аутологичных СК в кость и преимущества этого метода. Дано описание случая лечения ребенка, у которого был полностью разрушен диафиз левой бедренной кости.
Некротизированный гематогенным остеомиелитом диафиз бедренной кости удален, образовался ложный сустав и произошло значительное укорочение бедра. Аутотрансплантация СК по разработанной методике в метаэпифизы бедра привела к росту костной ткани, ликвидации ложного сустава, восстановлению кости бедра и его функции.
Ключевые с лова: острый гематогенный остеомиелит; тотальный некроз бедренной кости; некрэктомия; трансплантация стволовых клеток костного мозга; выращивание кости бедра; восстановление функции бедра.
Для цитирования: Детская хирургия. 2015; 19 (2): 34—38.
Tsuman V.G.
IN VIVO CREATION OF BONE TISSUE FROM BONE MARROW STEM CELLS Department of Pediatric Surgery, Vladimirsky Moscow Regional Research Clinical Institute
A brief review of bone marrow stem cell properties is presented with reference to embryogenesis of their transformation into bone tissue. The new method for direct transplantation of live autologic stem cells into the bone tissue is described. Advantages of the method—?? The femur diaphysis necrotized by hematogenous osteomyelitis was removed, the false joint formed, and the femur markedly shortened. Autotransplantation of stem cells by the proposed method into femoral metaphysis promoted the growth of bone tissue, eliminated the false joint, restored the femoral bone and its function.
Key words: acute hematogenous osteomyelitis, total femoral nerosis, necrectomy, transplantation of bone marrow stem cells, growth of femoral bone, restoration of its function
For citation: Detskaya khirurgiya. 2015; 19 (2): 34—38.
For correspondence: Tsuman Vadim
Received 23.11.14
клеточной терапии, в основе которого лежат возможности стволовых клеток костного мозга (СККМ). Один из видов этих клеток — гемопоэтические — открыты российским гистологом А. Максимовым в 1908 г. [1].
Начало первых экспериментов с СК относится к 50-м годам ХХ века. Наиболее потентными являются СК эмбрионов. До 1996 г. считалось, что только эмбриональные клетки способны к клонированию.
8. Агаева Л.Р., Воздвиженский И.С. Лечение пигментных невусов кожи лица. Детская хирургия. 2004; 4: 31—2.
REFERENCES
1. Ashkraft K.U., Kholder T.M. Pediatric Surgery. [Detskaya khirurgiya]. Moscow: Nauka; 1999; vol. 3: 240—5. (in Russian)
2. Ikonopistsev R.L., Raychev R., Kirov S. Pigmented Tumors. [Pig-mentnye opukholi]. Sofiya; 1997. (in Russian)
3. Cherenkov V.G. Clinical Oncology: A Guide for Students and Physians. [Klinicheskaya onkologiya: Rukovodstvo dlya studentov i vrachey]. Moscow: VUNMTS MZ RF; 1999. (in Russian)
4. Kim H.K., Kim Y.K., Song I., Lee S.-R., Jeong S.H., Kim M.H. et al. Human giant congenital melanocytic nevus exhibits potential pro-
Краткие сведения о стволовых клетках и клеточной терапии
Успехи отечественной медицинской науки в последние десятилетия и хирургии, в частности, ставят новые задачи совершенствования самой хирургической помощи. Это стало возможным благодаря появлению нового биологического метода восстановления утраченных анатомических субстанций, относящихся к соединительной ткани, — метода
СК богата пуповинная кровь. Эти фетальные клетки малоиммунопотентны и при глубокой заморозке в жидком азоте хранятся много лет, оставаясь способными к трансформации. В пуповинной крови СК в 10 раз больше, чем в костном мозге [1].
СК очень мало. У новорожденных 1 гемопоэти-ческая СК приходится на 10 тыс. клеток крови, а у 60-летних людей — 1 СК на 5—6 млн. Однако относительно клеточной терапии имеются в виду СК костного мозга, обладающие большой потенцией к трансформации в различные виды соединительной ткани. Эти клетки называют стромальными или соединительнотканными клетками-предшественниками [2].
Официально пересадка аутогенных СК была разрешена 1 июля 2010 г., а гомогенных — позже.
Использование соединительнотканных клеток-предшественников для создания новых тканей получило название тканеинженерии (тканеинженерные технологии, клеточная трансплантология) и сформировала новую отрасль науки [3, 4].
Выделяя ДНК из одной клетки и помещая ее в яйцеклетку другой особи, Д. Гердон получал поли-потентные клетки, способные создавать практически другой организм.
В 2006 г. К. Такакаси и С. Яманака [5] открыли возможность превращения дифференцированных СК в плюрипотентные клетки.
Возможности перепрограммирования простых зрелых клеток крови в СК добился С. Яманака. Зрелые клетки крови изменяли свой геном и дифференцировались в iPS-клетки. В 2012 г. Д. Гердон и С. Яманака были отмечены Нобелевской премией [6].
Эффект превращения СК в нужную клетку назван homing effect, а плюрипотентные клетки — iPS-клетками. Однако и С. Яманака и другие исследователи опасаются перерождения таких клеток в опухолевые.
Роль стволовых клеток костного мозга в создании костной ткани
В сообщениях, посвященных формированию костной ткани, мы встретили ряд осторожных высказываний о возможностях СК в плане образования зрелой костной ткани. Говоря "зрелая костная ткань", мы имеем в виду целостную кость, способную к росту в организме донора, а не образование колоний или пластов фибробластов либо костных клеток на ма-триксах, что в ряде случаев приводило к образованию костных химер.
Среди осторожных мнений приведем высказывание проф. М. Садового из Новосибирского центра медицинского протезирования, где занимаются выращиванием СК на матриксе. Оно состоит в том, что в мире ведется разработка, нацеленная на искусственное выращивание костной ткани. Индивидуальной разработки под пациента в мире пока нет. Ученые предполагают, что к 2016 г. такие операции будут внедрены в практику.
Существует много способов устранения обширных костных дефектов, в основе которых лежат различные способы костной пластики. Созданием кости путем выращивания фибробластов на аллогенном костном матриксе при несросшихся переломах и
травмах занимаются в Российском НИИ травматологии и ортопедии им. Р.Р. Вредена, Санкт-Петербург, с положительным результатом. Костные клетки выращивали на костном матриксе при ложном суставе у взрослых [7], на керамике [8], при дефектах трубчатых костей [9, 10] и пересадкой ядросодержащих клеток костного мозга [4].
Выращивание СК на матриксах часто неэффективно, по нашему мнению, из-за чужеродности тканей или неэффективной реваскуляризации.
Изучение работ по смежным областям медицины и практическому применению СК фактически не привело к решению проблемы создания естественной костной ткани в организме реципиента, хотя и расширило наши знания. Мы искали другой способ трансплантации СК.
Различают несколько способов трансплантации стволовых клеток: 1) таргетинг — трансплантация соединительнотканных клеток в те места, где нужна новая ткань; 2) хоуминг — трансплантация соединительнотканных клеток-предшественниц в те места, где их нет в настоящее время; 3) трансплантация аутогенных соединительнотканных клеток-предшественниц с целью усиления локальной популяции; 4) трансплантация модифицированных соединительнотканных клеток-предшественниц; 5) трансплантация соединительной ткани.
Таким образом, при разработанной методике пересадки СК нами одновременно использованы условия, отвечающие пунктам 2 и 3.
Хоуминг возможен и при системно циркулирующих клетках, способных участвовать в остеогенезе. Эта биологическая особенность СК лежит в основе сращения костей при переломах [11, 12]. Существует еще один важный факт, обусловливающий успех трансплантации. При пересадке пунктата СК в месте пересадки возникает "селективная ретенция" клеток самого пунктата [13].
Эмбриогенез развития костной ткани
В середине 50-х годов прошлого века отечественному ученому А.Я. Фриденштейну удалось впервые выделить культуру стромальных клеток и проследить их превращение в костную клетку.
СККМ дифференцируются на мезенхимальные, производные эмбриональных клеток мезенхимы в разных стадиях развития плода, и гемопоэтические, превращающиеся в клетки крови.
Поиски способов пересадки СККМ и изучение результатов опытов заняло много времени. В экспериментальных работах [14] приведены результаты введения крови в селезенку и фибробластов под капсулу почки. При этом в них развивалось подобие губчатого вещества кости.
Известно, что первичная клетка крови гемоцисто-бласт в своем микроскопическом масштабе тоже имеет полости, в которых образуются элементы крови. Он является и СК — миелобластом, который дифференцируется на мезенхимальные и гемопоэтические клетки.
Этот факт остался в памяти и натолкнул на мысль, что при пересадке СК в кость также может образовываться некое подобие кости.
В работах А.Я. Фриденштейна и приверженцев его школы представлена схема преобразования костной и хрящевой ткани из мезодермы в остеобласты и остеоциты — ряд предшественников клеток костной ткани [15].
Строение кости подробно описал W. Bidermann в 1914 г. [16]. Не повторяя его описание, мы придали значение "межклеточному веществу и ветвистым отросткам костных клеток, между которыми расположены канальцы, через которые проникают питательные вещества". Мы допустили мысль, что именно благодаря этому пересаженные нами в кость СК не погибают.
Зная эмбриогенез и механизм образования костной ткани, мы решились на попытку создания кости из СККМ путем прямой пересадки живых аутологич-ных клеток в кость, считая, что такая пересадка СК приведет к природным закономерностям развития костной ткани и ее росту.
Нужные клетки во взрослом организме образуются из остеогенных стволовых клеток-предшественников, которые локализуются на границе между костью и хрящевой или костно-мозговой тканью. Дифференцируясь, они превращаются в остеобласты, а затем в остеоциты. Остеобласты расположены ближе к соединительной ткани, а остеокласты — к кровяным клеткам. Рост длинных трубчатых костей осуществляется путем энхондрального окостенения, причем увеличение диафизов в ширину происходит только со стороны периоста, а метафизов — только со стороны эндооста. Процесс костной резорбции имеет соответственно обратное направление [17, 18]. Именно этот факт заставил нас вводить взвесь костного мозга при трансплантации через канальцы, сделанные на всю толщу кости. Первая трансплантация СК непосредственно в кость была выполнена нами в деткой хирургической клинике МОНИКИ в 1992 г. (приоритет на изобретение от 12.07.1994) и патент на изобретение № 2097001 от 27.11.1997 [19].
СККМ получены при пункции пяточной кости. Растворы для разбавления не применяли, что повышало концентрацию СК в 1 мл. В 1 мл крови костного мозга содержится около 2000 клеток-предшественников соединительной ткани, и только половина из них размножается постоянно. Эти клетки более потентны к созданию костной ткани, чем полученные из мышечной или жировой ткани.
Разработанный нами метод выращивания костной ткани непосредственно в организме больного без промежуточных этапов и выращивания фибробластов на матриксе значительно упрощает создание зрелой костной ткани, при которой применяют генетически однородные СККМ этого же человека.
Непосредственной причиной, заставившей нас заняться практическим применением накопленных знаний о возможностях СК, стал трагический исход острого гематогенного остеомиелита у 4-летнего ребенка, у которого был полностью разрушен диафиз левой бедренной кости. Приводим описание этого случая.
Больная А., 4 года, с 1990 г. болеет гематогенным остеомиелитом левой бедренной кости (свищевая форма). Неоднократно оперировалась по месту
жительства. При поступлении в клинику состояние крайне тяжелое: сепсис, гнойная интоксикация, флегмона левого бедра с гнойными свищами (рис. 1, см. на вклейке).
После стабилизации состояния ребенка некроти-зированная кость удалена. Бедро укорочено на 10 см. Остались непораженными оба сустава и части мета-эпифизов. Продолжалось длительное комбинированное лечение с использованием аппарата Илизарова, химиотерапевтических, физиотерапевтических, обще-стимулирующих и других методов, переливания крови, иммунных плазм и биопрепаратов. Однако сформировался ложный сустав (рис. 2, см. на вклейке).
Комплексное лечение в течение 6 мес без успеха. Бедро оставалось укороченным. За это время дефицит кости бедра составил 7 см. Кость подросла на 3 см за счет концов метаэпифизов. Срастание костей не наступило (рис. 3, см. на вклейке). Все известные методы оказались безуспешными, что заставляло нас искать новые нестандартные пути лечении за пределами классической медицины.
Метод был разработан детально до мелочей, включая последовательность выполнения всех этапов хирургического вмешательства. После стихания воспалительного процесса, находясь в безвыходной ситуации, решили применить СККМ (эти же клетки, этому же ребенку) и пересадить их в концы ложного сустава.
Разработанная нами техника пересадки аутологичного костного мозга
Обнажают концы костей ложного сустава. Предварительно в кости делают тонкие канальцы глубиной на толщу компактного слоя. Именно в них имплантируют СК.
Костный мозг аспирируют из пяточной кости и сразу вводят в приготовленные костные канальцы обеих концов кости при ложном суставе. Канальцы должны удерживать вводимую суспензию костного мозга. Число канальцев зависит от диаметра кости — приблизительно 4 канальца на 1 см2. Их глубина на всю толщу кости. Важно, чтобы суспензия костного мозга попала на периост и эндост. Чем больше канальцев, тем больше шансов на успех. Оставшуюся часть суспензии вводят в рану, в область ложного сустава.
Операция (29.01.1992). Конечность освобождена от спиц аппарата Илизарова. Обнажены концы ложного сустава, которые слегка резецированы. В обоих концах была ослизненная хрящеподобная масса, более близкая к губчатому веществу кости, которую удерживал аппарат Илизарова.
Из пяточной кости взято 20 мл костного мозга. В обоих концах кости сделаны тонкие канальцы спицей приблизительно 4 х 1 см (тонкие сверла даже не понадобились). В образованные канальцы маленьким шприцем ввели 15 мл взвеси костного мозга. 5 мл взвеси костного мозга было введено к месту трансплантации. Вновь подсоединен аппарат Илизаро-ва. (пересадка СК была поручена канд. мед. наук А.Е. Машкову — лечащему врачу этого ребенка.)
Расчет был на создание множественных очагов ко-стеобразования. Так и случилось. Именно эти канальцы, заполненные костным мозгом, обеспечили положительный результат. Концы вновь образованной
кости начали расти навстречу друг другу и срослись в костную мозоль (рис. 4, см. на вклейке).
Наш успех обеспечил сам метод прямой пересадки живых СК к месту ожидаемого роста костной ткани. Один из постулатов, которые следует соблюдать при пересадке СК, — расстояние между пересаживаемыми СК и донорским местом, которое в идеале должно быть равно 0 (при нашей методике — непосредственно в кость). Увеличение расстояния снижает эффект пересадки.
Кости срослись, более того, кость стала расти. Нам впервые удалось добиться направленного роста кости из СККМ для создания целостной кости. Это была необыкновенная удача с первого раза.
В нашем случае одна из причин несрастания костей до пересадки СК заключалась и в том, что оба конца костей состояли не из компактного вещества кости, а из той массы, которая была частью ослизненных мета-эпифизов. Компактная костная ткань была уничтожена остеомиелитом. Это осложняло исход нашей пересадки СК. Тем не менее кость срослась. Ложный сустав, существовавший около года, ликвидирован пересадкой СК. Стала подрастать и материнская бедренная кость. Больная выросла, стала студенткой, дефицит костной ткани составил 3,5 см. Походка не нарушена.
Предложенный нами метод трансплантации ауто-логичного костного мозга технически прост, в практике не требует дополнительного инструментария или оборудования, легко повторим в последующих случаях, имеет ряд преимуществ.
Аналогичная пересадка СК по разработанной методике была успешно применена в детской хирургической клинике с хорошим результатом еще у 8 детей с не столь тяжелой патологией при осложнениях острого гематогенного остеомиелита.
Метод открывает широкие возможности для экспериментальных исследований, которые стали проводиться в клинике детской хирургии МОНИКИ с другими тканями.
Преимущества метода
1. Используется живой костный мозг, взятый во время данной операции у этого же больного, будучи теплым и не подвергшимся культивированию или консервации.
2. Аутологичный костный мозг вводится непосредственно в костную ткань через каналы, сформированные во время операции, к местам ожидаемого приживления, дальнейшего роста и превращения в кость.
3. Способ не требует использования каких-либо растворов или консервантов.
4. Оперативное лечение проводится в один этап.
5. В ряде случаев введение СК можно выполнять закрытым способом без рассечения мягких тканей путем чрескожной пункции в месте несрастающегося патологического перелома.
6. Наилучшим образом сохраняется основной постулат при пересадке СК — окружение. Эти клетки должны попадать в окружение генетически однородных тканей.
7. Отпадают вопросы, касающиеся ИЬЛ или другого типа несовместимости.
8. Не требуется ждать после пересадки трансформации клеток и миграции к нужному месту.
9. Метод оказался технически удивительно простым и доступным для повторения в любых хирургических отделениях.
10. Известно, что при трансплантации мезенхималь-ных клеток, способных образовывать костную ткань, сосуды проникают в нее отдельно уже из гемопоэтиче-ских клеток. Пересаживая живой костный мозг, мы пересаживаем и гемопоэтические клетки, поэтому образование кости и сосудов происходит одновременно. Это главное отличие нашего метода, оказавшегося успешным, от выращивания фибробластов на матрицах. Кроме того, пересаженные клетки попадают в однородную среду, что обеспечивает и их питание.
12. Благодаря применению СК по разработанной методике при тяжелых разрушениях кости можно предотвратить переход тяжелой травмы в инвалидность.
13. Культивирование СК, наблюдение за их трансплантацией, трансформацией, миграцией и ассимиляцией, соблюдение условий, связанных с ИЬЛ, и выполнение всех других требований на уровне обычного лечебного учреждения практически невозможно. Для этого нужна отдельная лаборатория.
Здесь уместно сказать о судьбе пересаженного костного мозга. Прежде всего после пересадки он живет и доказательство этого — образование костной мозоли и замещение части разрушенной кости. Пересаживая СККМ, мы одновременно пересаживаем и гемопоэтические, и мезенхимальные — стромальные клетки. Их функция дифференцируется.
Судьба пересаженных СК во многом зависит от их приспособляемости к новым условиям. Важнейшее значение придается насыщению тканей кислородом и обеспечению их питанием. Этому вопросу уделено много внимания в литературе [20—24]. С одной стороны, это можно обеспечить вдыханием кислородной смеси, а с другой — избегать давящих повязок, жесткой постели, возвышенного положения конечностей и всего, что препятствует кровообращению в соответствующей области тела. Питание трансплантированных клеток идет за счет тканей донора, которые попадают в прямой контакт с однородной межклеточной костной средой, что отсутствует при пересадке на матриксе. Одновременно продолжается инфузия белковых препаратов.
Заключение
Таким образом, был открыт и использован новый простой способ целенаправленного применения природных свойств СККМ при значительных разрушениях костной ткани путем прямой внутрикостной пересадки живых аутологичных мезенхимальных и гемопоэтических СК в материнскую кость, в которой образуются канальцы для создания множественных очагов костеобразования при остеомиелитических, травматических дефектах, ложных суставах и не-срастающихся переломах костей, что обеспечивают условия аутотрансплантации для получения зрелой костной ткани.
ЛИТЕРАТУРА 1. Максимов А. Сайт Стволовые клетки.
2. http://www.iHve.com.иа/Сайт Мезенхимальные стволовые клетки
3. Середа А. Тканеинженерные технологии в траматологии и ортопедии. Http://www Sait Forum. Rusmedserv.com
4. Takakasi K., Yamanaka S. http://www. Wikipedia Сайт Стволовые клетки
5. Yamanaka S. http://www Сайт ru.Wikipedia org Сайт.Терапия стволовыми клетками.
6. Щепкина Е.А., Кругляков П.В, Соломин Л.Н. и др. Трансплантация аутогенных мультипотентных мезенхимальных стромаль-ных клеток на деминерализованном костном матриксе при лечении ложных суставов длинных трубчатых костей. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2007; 2 (3): 67—74.
7. Clarke S.A., Brooks R.A., Lee P.T., Rushton N. The effect of osteogenic growth factors on bone growth into a ceramic filled defect around an implant. J. Orthop. Res. 2004; 22 (5): 1016.
8. Гололобов В.Г., Дулаев А.К., Деев Р.В. и др. Новый подход к лечению дефектов длинных костей конечностей. От культур in vivo к культурам in vitro. В кн.: Анатомия и военная медицина: Сборник научных работ конференции, посвященной 80-летию со дня рождения профессора Е.А. Дыскина. СПб.: ВМедА; 2003.
9. Деев Р.В., Цупкина Н.В., Иванов Д.Е. и др. Результаты трансплантации культуры аутогенных стромальных клеток костного мозга в область краевого дефекта длинных трубчатых костей. Травматология и ортопедия России. 2007; 2 (44): 57—63.
10. Деев Р.В., Исаев А.А., Кочиш А.Ю., Тихилов Р.М. Клеточные технологии в травматологии и ортопедии: пути развития. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2007; 2 (4): 18—31.
11. Khosla S., Eghbali-Fatourechi G.Z. Circulating cells with osteogeni potential. Ann. N. Y. Acad. Sci. 2006; 1068: 489.
12. Lieberman J.R., Daluiski A., Einhorn T.A. The role of growth factors in the repair of bone. Biology and clinical applications. J. Boш Jt Surg. Am. 2002; 84: 1032.
13. Muschler G.F., Nitto H., Matsukura Y., Boehm C., Valdevit A., Kambic H. et al. Spin fusion using composites enriched in bone marrow derivedl cells. Clin. Orthop. Res. 2003; 407. 18 sley. 2009.
14. Лурия Е.А., Кузнецов С.А., Генкина Е.Н., Фриденштейн А.Я. Образование костной ткани в органных культурах костного мозга человека. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1989; 107 (5): 593—5.
15. Фриденштейн А.Я., Петракова К.В., Куролесова А.И., Фролова Г.П. Клетки предшественники для остеогенной и кроветворной тканей. Анализ гетеротопных трансплантантов костного мозга. Цитология. 1968; 5: 57—67.
16. Bidernann W. Phvsiolo. Der Sturz und Skeletensubstanzen Handverl. Jena; 1914; Bd 3 1.
17. Фриденштейн А.Я., Лалыкина К.С. Индукция костной ткани и стеогенные клетки предшественники. М.: Медицина; 1973.
18. Фриденштейн А.Я., Чайлахян Р.К., Лалыкина К.С. О фибрабла-стоподобных клетках в культурах кроветворной ткани морских свинок. Цитология. 1970; 12 (9): 1147—55.
19. ЦуманВ.Г., Машков А.Е. Способ лечения хронического остеомиелита с дефектом кости и способ пересадки стволовых клеток. Патент РФ № 2097001, 1997.
20. Abdel-Aleem S., St. Louis J.D., Hughes G.C., Lowe J.E. Metabolic changes in the normal and hypoxic neonatal myocardium. Ann. N. Y. Acad. Sci. 1999; 874: 254—61.
21. Аvgoustiniatos E.S., Colton C.K. Effect of external oxygen mass transfer istances on viability of immunoisolated tissue. Ann. N. Y. Acad. Sci. 1997; 831: 145—67.
22. Burwill K. Thаt function of bone marrow in the in corporaition of a bone graft. Clin. Orthop. 1985; 200: 25—41.
23. Chow D., Wenning L., Miller W. Papoutsacis E.Modeliins distributions in the bone marrow hematopoietic corr. Мodified Kroghing models. Biophys. J. 2001; 81: 685—96.
24. Ivanovic Z., Bartolozzi B., Bernabei P.A., Cipolleschi M.G., Rovi-da E., Milenkovic P. et al. Incubation of murine bone marrow cells
in hypoxia ensures the maintenance of marrow-repopulating ability together with the expansion of committed progenitors. Br. J. Haematol. 2000; 108: 424.
REFERENCES
1. Maksimov A. Http://www.Wikipedia Sayt Stvolovye kletki
2. http://www ilive.com.ua/ Sayt Mezenhimal'nye stvolovye kletki
3. Sereda A. Tkaneinzhenernye tekhnologii v travmatologii i ortopedii. Http://www Sayt Forum. Rusmedserv.com
4. Takakasi K., Yamanaka S. http://www. Wikipedia Sayt Stvolovye kletki
5. Yamanaka S. http://www. Sayt ru.Wikipedia org Sayt.Terapiya stvo-lovymi kletkami.
6. Shchepkina E.A., Kruglyakov P.V., Solomin L.N. et al. Kletochnaya transplantologiya i tkanevaya inzheneriya. 2007; 2 (3): 67—74. (in Russian)
7. Clarke S.A., Brooks R.A., Lee P.T., Rushton N. The effect of osteogenic growth factors on bone growth into a ceramic filled defect around an implant. J. Orthop. Res. 2004; 22 (5): 1016.
8. Gololobov V.G., Dulaev A.K., Deev R.V. et al. In: Anatomiya i voen-naya meditsina: Sbornik nauchnykh rabot konferentsii, posvyash-chennoy 80-letiyu so dnya rozhdeniya professora E.A. Dyskina. St. Petersburg: VMedA; 2003: 104—6. (in Russian)
9. Deev R.V., Tsupkina N.V., Ivanov D.E. et al. Travmatologiya i orto-pediya Rossii. 2007; 2 (44): 57— 63. (in Russian)
10. Deev R.V., Tsupkina N.V., Sergeev V.S. et al. Kletochnaya transplantologiya i tkanevaya inzheneriya. 2006; 3 (5): 54—8. (in Russian)
11. Khosla S., Eghbali-Fatourechi G.Z. Circulating cells with osteogeni potential. Ann. N. Y. Acad. Sci. 2006; 1068: 489.
12. Lieberman J.R., Daluiski A., Einhorn T.A. The role of growth factors in the repair of bone. Biology and clinical applications. J. Bone Jt Surg. Am. 2002; 84: 1032.
13. Muschler G.F., Nitto H., Matsukura Y., Boehm C., Valdevit A., Kambic H. et al. Spin fusion using composites enriched in bone marrow derivedl cells. Clin. Orthop. Res. 2003; 407. 18 sley. 2009.
14. Luriya E.A., Kuznetsov S.A., Genkina E.N., Fridenshteyn A.Ya. Byulleten' eksperimental'noy biologii i meditsiny. 1989; 107 (5): 593—5. (in Russian)
15. Fridenshteyn A.Ya., Petrakova K.V., Kurolesova A.I., Frolova G.P. Tsitologiya. 1968; 5: 57—67. (in Russian)
16. Bidernann W. Phvsiolo. Der Sturz undSkeletensubstanzenHandverl. Jena; 1914; Bd 3 1.
17. Fridenshteyn A.Ya., Lalykina K.S. Induktsiya kostnoy tkani i steogen-nye kletki predshestvenniki. Moscow: Meditsina; 1973. (in Russian)
18. Fridenshteyn A.Ya., Chaylakhyan R.K., Lalykina K.S. Tsitologiya. 1970; 12 (9): 1147—55. (in Russian)
19. Tsuman V.G., MashkovA.E. Sposob lecheniya khronicheskogo osteo-mielita s defektom kosti i sposob peresadki stvolovykh kletok. Patent RF№ 2027001, 1997. (in Russian)
20. Abdel-Aleem S., St. Louis J.D., Hughes G.C., Lowe J.E. Metabolic changes in the normal and hypoxic neonatal myocardium. Ann. N. Y. Acad. Sci. 1999; 874: 254—61.
21. Аvgoustiniatos E.S., Colton C.K. Effect of external oxygen mass transfer istances on viability of immunoisolated tissue. Ann. N. Y. Acad. Sci. 1997; 831: 145—67.
22. Burwill K. Thаt function of bone marrow in the in corporaition of a bone graft. Clin. Orthop. 1985; 200: 25—41.
23. Chow D., Wenning L., Miller W. Papoutsacis E.Modeliins distributions in the bone marrow hematopoietic corr. Мodified Kroghing models. Biophys. J. 2001; 81: 685—96.
24. Ivanovic Z., Bartolozzi B., Bernabei P.A., Cipolleschi M.G., Rovi-da E., Milenkovic P. et al. Incubation of murine bone marrow cells in hypoxia ensures the maintenance of marrow-repopulating ability together with the expansion of committed progenitors. Br. J. Haematol. 2000; 108: 424.
Поступила 23.11.14
