CC BY
157
3. Decyk O.R., Danilova M.A., Odincova O.V., Maslov Ju.N. Assessment of the oral microflora in patients undergoing treatment with fixed orthodontic equipment. Orthodontiya. 2009; 4: 28-31. (in Russian)
4. Gavrilova O.A., Chervinec Ju.V., Matlaeva A.S. Influence of duration of orthodontic treatment on the structure of the microbiota of oral fluid and plaque. Institut Stomatologii. 2014; 2: 33-4. (in Russian)
5. Leonard T.J., McNamara C.M., O'Mullane D.M. Use of global plaque index to compare plaque scores in children. J. Dental Res. 2001; 80(4): 1173.
6. Arsenina O.I., Kirjushina V.V., Popova N.V. Features of preventive measures during orthodontic treatment with braces. Orthodontiya. 2006; 3: 45-8. (in Russian)
7. Alves P. V., Alviano W.S., Bolognese A.M. Treatment protocol to control streptococcus mutans level in an orthodontic patient with high caries risk. Am. J. Orthod. Dentofacial. Orthop. 2008; 133(1): 910-4.
8. Zakharov A.V., Suetenkov D.E., Magomedov T.B. A new method of preventing and treating complications in orthodontics. stomatologiya Detskogo Vozrasta. 2006; 1: 49-53. (in Russian)
9. Speer C., Pelz K., Hopfenmuller W., Holtgrave E.A. Investigation on the influencing of the subgingival microflora in chronic periodontitis. A study in adult patients during fixed appliance therapy. J. Orofac. Orthop. 2004; 65(1): 34-47.
10. Perinetti G., PaolantonioM., SerraE. et al. Longitudinal monitoring of subgingival colonization by Actinobacillus actinomycetemcomitans, and crev-icular alkaline phosphatase and aspartate aminotransferase activities around orthodontically treated teeth. J. Clin. Periodontol. 2004; 31(1): 60-7.
Received 01.12.14
ОРГАНИЗАЦИЯ ЛАБОРАТОРНОЙ СЛУЖБЫ
© коллектив авторов, 2015 УДК 616.9-022-078
шепелин А.П.1, Домотенко Л.в.1, Дятлов И.А.1, Миронов А.Ю.2, Алешкин в.А.2
СОВРЕМЕННЫЕ ПОДХОДЫ К ПРОБЛЕМЕ ИМПОРТОЗАМЕЩЕНИЯ В ОБЛАСТИ ПРОИЗВОДСТВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
1ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора, г. Оболенск; 2ФБУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г. Н. Габричевского» Роспотребнадзора, г. Москва
В связи с введением экономических санкций в отношении России со стороны США, стран ЕС, Японии, ряда других государств импортозамещение становится одной из стратегических задач российской экономики. Разработка состава и технологии производства отечественных импортозамещающих питательных сред позволит удовлетворить потребности лабораторной службы России в расходных материалах, обеспечить адекватный ответ на возникающие вызовы и новые биологические угрозы и поддержание биобезопасности государства на должном уровне. Представленные данные по обоснованию номенклатуры питательных сред и транспортных систем позволят в полном объеме удовлетворить потребности клинической и санитарной микробиологии в питательных средах отечественного производства и отказаться от импортных поставок, не снижая при этом качества микробиологических исследований.
К л ю ч е в ы е с л о в а: питательные среды; импортозамещение.
Для цитирования: Клиническая лабораторная диагностика. 2015; 60(6): 63-65. ShepelinA.P.', DomotenkoL.V.', DiatlovI.A.', MironovA.Yu.2, Aleshkin V.A.2
THE ACTUAL APPROACHES TO PROBLEM OF IMPORT SUBSTITUTION IN TH FIELD OF PRODUCTION GROWTH MEDIUM
1The state research center of applied microbiology and biotechnology of Rospotrebnadzor, Obolensk, Russia; 2The G.N. Gabritchevskii Moscow research institute of epidemiology and microbiology of Rospotrebnadzor, 125212 Moscow, Russia
The import substitution becomes one of strategic tasks of Russian economy as a result of imposition of economic sanctions on part of the USA, EU countries, Japan and number of other states. The development of structure and technology ofproduction of national import substituted growth mediums permits satisfying needs of laboratory service of Russia inactive storage and to secure appropriate response to occurring challenges and new biological menaces and support bio-security of state at proper level. The presented data concerning substantiation of nomenclature of growth mediums and transport systems permit satisfying in fullness the needs of clinical and sanitary microbiology in growth mediums of national production and to give up of import deliveries without decreasing of quality of microbiological studies.
Keywords: growth medium; import substitution
Citation: Klinicheskaia Laboratornaia Diagnostika. 2015; 60 (6): 63-65.
Важной составляющей санитарно-эпидемиологического надзора за инфекционными болезнями является система методов и средств их лабораторной диагностики. Быстрая и
Для корреспонденции: Шепелин Анатолий Прокопьевич, shepelin.rabota@rambler.ru
For correspondence: ShepelinA.P., shepelin.rabota@rambler.ru
точная индикация и идентификация инфекционного патогена - определяющий фактор для своевременного проведения профилактических и противоэпидемических мероприятий с целью предупреждения распространения инфекции и назначения адекватного лечения, предупреждения экономического ущерба от временной потери трудоспособности заболевшими гражданами.
Среди методов микробиологической диагностики куль-
КЛИНИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА, № 6, 2015
туральный метод занимает особое место, являясь «золотым стандартом» лабораторной диагностики, поскольку именно обнаружение возбудителя заболевания при культивировании на питательных средах является убедительным доказательством инфекционной природы болезни.
Перечень питательных сред, необходимых в работе микробиологической лаборатории, определяется в первую очередь ее спецификой, оснащением, финансовыми возможностями.
Основные отечественные производители питательных сред (ФБУН ГНЦ ПМБ Роспотребнадзора, НПО «Питательные среды» Махачкала, НИЦФ и др.) обеспечивают до 50% рынка в РФ. Остальное - импортные питательные среды, среди которых большую часть составляют питательные среды для микроорганизмов со сложными питательными потребностями, готовые к применению в чашках Петри, транспортные среды, хромогенные, дифференциально-диагностические среды в картриджах для бактериологических анализаторов и др.
В связи с введением экономических санкций в отношении РФ со стороны США, стран Евросоюза, Канады, Японии и ряда других государств закупка продукции для бактериологических анализаторов и высокотехнологичных питательных сред будет ограничена.
Актуальной становится разработка состава и технологии производства отечественных импортозамещающих питательных сред.
ФБУН ГНЦ ПМБ Роспотребнадзора является одним из основных производителей питательных сред в России. Проведение научных исследований в области разработки питательных сред для широкого круга микроорганизмов, включая возбудителей особо опасных инфекций, туберкулеза, кишечных инфекций, гнойных бактериальных менингитов и др., началось в 80-е годы ХХ столетия. В настоящее время номенклатура выпускаемых препаратов в ФБУН ГНЦ ПМБ Роспотребнадзора составляет около 100 наименований. Большинство питательных сред прошли все этапы государственных испытаний, зарегистрированы в качестве медицинских изделий Росздравнадзором и разрешены для применения в практическом здравоохранении. Питательные среды производства ФБУН ГНЦ ПМБ Роспотребнадзора широко используются бактериологическими лабораториями страны для выделения и дифференциации энтеробактерий, для диагностики особо опасных инфекций, дисбиотических состояний, дифтерии, гнойных бактериальных менингитов, при контроле микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств и др.
Сотрудники ФБУН ГНЦ ПМБ Роспотребнадзора имеют большой опыт работы по конструированию и разработке технологии производства бактериологических питательных сред, организации производства и сертификации продукции. В ФБУН ГНЦ ПМБ Роспотребнадзора функционируют отдел биологического и технологического контроля, отдел обеспечения качества.
На завершающем этапе разработки находятся следующие отечественные питательные среды:
- агар Мюллера-Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам;
- агар Байард-Паркера - селективный агар для выделения и количественного учета Staphylococcus aureus в пищевых продуктах и фармацевтическом материале;
- агар Фогеля-Джонсона для выявления коагулазо- и маннитположительных S. aureus;
- триптон-соевый агар для культивирования широкого круга микроорганизмов;
- цетримидный агар для выделения и дифференциации Pseudomonas аeruginosa из различного материала;
- триптон-желчный агар для обнаружения и подсчета бактерий E. coli и других колиформных бактерий в воде с помощью метода мембранной фильтрации;
- агар Мосселя для выделения Bacillus сereus^;
- бульон Мосселя для накопления энтеробактерий;
- бруцелла бульон для культивирования возбудителя бруцеллеза.
Внедрение перечисленных питательных среда в микробиологическую практику позволит гармонизировать требования стандартов РФ, ЕС, США и других стран при определении чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам, при бактериологическом контроле лекарственных средств, воды, пищевых продуктов и др., что особенно важно при членстве РФ в ВТО.
В настоящее время остро стоит вопрос об организации в России производства питательных сред для культивирования высоко требовательных микроорганизмов, таких как:
- агар с сердечно-мозговой вытяжкой;
- бульон с сердечно-мозговой вытяжкой;
- основа колумбийского агара;
- двухфазная питательная среда для гемокультур;
- основа кровяного агара;
- желчно-эскулиновый агар для энтерококков;
- среды для стрептококков;
- бульон MRS;
- Шадлера агар для анаэробов.
Организация производства отечественных бактериологических сред для микроорганизмов с высокими питательными потребностями значительно снизит зависимость отечественной микробиологии от импорта.
В конце прошлого века в бактериологическую практику вошли дифференциальные среды нового поколения - хромогенные, принцип действия которых основан на выявлении высокоспецифичных ферментов у искомых микроорганизмов. К таким ферментам относятся, например, бета-Б-глюкуронидаза Escherichia coli или бета-D-глюкозидаза энтерококков. Для обнаружения этих ферментов и соответственно идентификации микроорганизма в состав питательной среды вводят хромогенный субстрат. Хромогенный субстрат представляет собой вещество, при расщеплении которого специфическим ферментом образуются окрашенные и/или флуоресцирующие продукты. В результате колонии микроорганизмов окрашиваются в определенный цвет или приобретают способность к флуоресценции при ультрафиолетовом облучении. Хромогенный субстрат или смесь субстратов вводятся в состав питательных сред для первичного посева, поэтому выделение чистой культуры и ее идентификация могут быть осуществлены уже в течение первых суток исследования.
Хромогенные среды предназначены для быстрой индикации в исследуемом материале целого ряда микроорганизмов, имеющих большое значение для клинической и санитарной микробиологии: E. coli и другие колиформные бактерии, сальмонеллы и энтерогеморрагические эшерихии (E. coli О157:Н7), энтерококки, Staphylococcus aureus, клостридии, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, другие грибы и бактерии.
Наиболее востребованы следующие хромогенные питательные среды:
- хромогенный агар для E. coli 0157;
- основа хромогенного агара МакКонки с сорбитом;
- хромогенный агар для энтерококков;
- основа хромогенного агара для листерий;
- хромогенный бульон для колиформных бактерий и Е. coli;
- хромогенный агар для выделения метициллинустойчи-вых S. aureus (MRSA агар);
- хромогенный агар для грибов рода Candida;
- хромогенный агар для определения энтеробактерий, продуцирующих ß-лактамазы расширенного спектра действия (БЛРС);
- хромогенный агар для выделения, подсчета микроорганизмов в моче и прямой идентификации E. coli, Enterococcus, группы KESC (Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Citrobacter) и Proteus в один этап.
Вместе с тем крупнотоннажное производство данных питательных сред будет возможно при организации производства отечественных хромогенных субстратов.
Эффективность микробиологической диагностики инфекционных заболеваний зависит не только от выбранного метода исследования и его характеристик, но и от качества проведения преаналитического этапа исследования, включающего взятие и транспортировку клинического материала в микробиологическую лабораторию для анализа. Даже незначительные ошибки на этом этапе исследований неизбежно ведут к искажению окончательных результатов, не позволяя получить достоверные данные. По сведениям многих авторов, на преаналитический этап приходится от 57 до 68% всех диагностических ошибок, которые ведут к необходимости проведения повторных исследований, но, что еще более серьезно, - к неправильной постановке диагноза. Для повышения качества лабораторных исследований в первую очередь необходимо повысить качество отбора проб биологического материала и транспортирования его в лабораторию.
Одним из возможных путей предотвращения ошибок преаналитического этапа является использование надлежащих транспортных систем, содержащих транспортные среды в пробирках и тампоны-аппликаторы. Использование для транспортировки аналита (гной, кишечное содержимое и т. п.) обычных питательных сред является зачастую серьзной ошибкой, поскольку в них идет быстрое размножение менее требовательных сапрофитных микроорганизмов с непритязательными питательными потребностями.
Промышленный выпуск транспортных систем осуществлен в Европе еще в 1975 г В России промышленное производство транспортных сред в пробирках, готовых к применению, до сих пор отсутствует, хотя уже более полувека существует производство сухих питательных сред в Махачкале и более 20 лет - в Оболенске.
К числу основных транспортных сред относятся среда Кэри-Блэра, среда Эймса (с углем и без угля), среда Стюарта. Транспортные среды не являются питательными. Они, с одной стороны, должны обеспечивать сохранение жизнеспособности микроорганизмов и, с другой - ограничивать их размножение. Транспортные среды содержат буферный раствор, набор солей, тиогликолят натрия, предназначены для сбора и транспортировки только бактериологических проб. Среда Стюарта предназначена для сохранения и транспортировки широкого спектра патогенных микроорганизмов. Наиболее требовательные микроорганизмы сохраняются в данной среде около суток, прочие - до нескольких дней. Транспортная среда Кэри-Блэра представляет собой модификацию транспортной среды Стюарта, предназначенную специально для фекальных и ректальных образцов. Данная среда является стандартной для транспортировки анаэробов.
Транспортная среда Эймса представляет собой очередную модификацию транспортной среды Стюарта, в которой глицерофосфат заменен неорганическим фосфатом, поскольку глицерофосфат является метаболитом некоторых энтеробак-терий (Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, ets.) и может поддерживать рост некоторых грамотрицательных микроорганизмов. Метиленовый синий заменен на активированный уголь. В транспортную среду добавлены соли кальция, магния для поддержания проницаемости бактериальных клеток. Эта транспортная среда способна более трех дней поддерживать жизнеспособными такие микроорганизмы, как Neisseria spp., Haemophilus spp., Corynebacterium spp., Streptococcus spp., Enterobacteriaceae и др., однако наилучшие результаты дает культивирование в течение первых 24 ч.
Необходимы специальные транспортные среды для отдельных видов микроорганизмов, таких как вибрионы, кам-пилобактерии и др., для сохранения и транспортировки которых не подходит ни одна из перечисленных сред.
Транспортные среды обычно укомплектованы тампонами-аппликаторами для сбора проб культур бактерий, которые после взятия пробы помещаются в пробирку с транспортной средой.
Заключение. В связи с введением экономических санкций в отношении России со стороны США, стран ЕС, Японии, ряда других государств импортозамещение становится одной из стратегических задач российской экономики. Разработка состава и технологии производства отечественных импортозамещающих питательных сред призвана удовлетворить потребности лабораторной службы России в расходных материалах, обеспечить адекватный ответ на возникающие вызовы и новые биологические угрозы и поддержание биобезопасности государства на должном уровне.
Представленные данные по обоснованию номенклатуры планируемых к выпуску питательных сред и транспортных систем дают вектор направления в области разработки технологии и организации производства отечественных препаратов, что позволит в полном объеме удовлетворить потребности клинической и санитарной микробиологии и отказаться от импортных поставок, не снижая при этом качества исследований.
ЛИТЕРАТУРА
1. Домотенко Л. В., Шепелин А. П. Бифидум-среда для выделения и культивирования бифидобактерий. Инфекция и иммунитет. 2014; 4 (3): 279-83.
2. Домотенко Л. В., Шепелин А. П., Детушев К. В. Сравнительные испытания лактобакагара и MRS агара. Курский научно-практический вестник « Человек и его здоровье». 2014; 4: 5-10.
3. Миронов А. Ю., Харсеева Г. Г., Клюкина Т. В. Основы клинической микробиологии и иммунологии: учебное пособие. Ростов-на-Дону: ГОУ ВПО РостГМУ; 2011.
4. Харсеева Г. Г., Алутина Э. Л., Гасретова Т. Д., Дятлов И. А., Лабушки-на А. В., Миронов А. Ю. Дифтерия: микробиологические и иммунологические аспекты. М.: Практическая медицина; 2014.
5. Шепелин А. П., Марчихина И. И., Полосенко О. В., Складан Г. Е. Сравнительная оценка дифференциально-диагностических свойств питательной среды Эндо различных производителей. Клиническая лабораторная диагностика. 2013; 5: 47-59.
6. Шепелин А. П. Тенденции в закупках медицинских изделий для диагностики инфекционных заболеваний. Справочник заведующего КДЛ. 2014; 9: 15-20.
7. Шепелин И. А., Миронов А. Ю., Шепелин К. А. Питательные среды. 2-е изд. М.: А-Принт; 2015.
8. Шепелин, А. П., Дятлов И. А., Шолохова Л. П., Марчихина И. И. Сравнительный анализ качества питательных сред различных производителей для выделения энтеробактерий. Клиническая лабораторная диагностика. 2011; 9: 42.
Поступила 05.02.15
REFERENCES
1. Domotenko L.V., Shepelin A.P. Bifidum-medium for isolation and cultivation of bifidobacteria. Infektsiya i immunitet. 2014; 4 (3): 279-83. (in Russian)
2. Domotenko L.V., Shepelin A.P., Detushev K.V. Comparative trials of lac-tobacagar and MRS agar. Kurskiy nauchno-prakticheskiy vestnik «Che-lovek i ego zdorov'e». 2014; 4: 5-10. (in Russian)
3. Mironov A.Yu., Harseeva G.G., Klyukina T.V. Fundamentals ofClinicalMicrobiology and Immunology: a tutorial. Rostov-on-Don; 2011. (in Russian)
4. Harseeva G.G., Alutina E.L., Gasretova T.D., Dyatlov I.A., Labushkina A.V., Mironov A.Yu. Diphtheria: microbiological and immunological aspects [Difteriya: mikrobiologicheskie i immunologicheskie aspekty]. Moscow: Prakticheskaya meditsina; 2014. (in Russian)
5. Shepelin A. P., Martchikhina I. I., Polosenko O. V., Skladan G. Ye. The comparative evaluation of differential diagnostic characteristics of Endo growth medium of different mаnufacturers. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. 2013; 5: 47-59. (in Russian)
6. Shepelin A.P. Trends in the procurement of medical devices for the diagnosis of infectious diseases. SpravochnikzaveduyushhegoKDL. 2014; 9: 15-20. (in Russian)
7. Shepelin I.A., Mironov A.Yu., Shepelin K.A. Nutrient media. 2nd ed. Moscow: A-Print; 2015. (in Russian)
8. Shepelin A. P., Dyatlov I. A., Sholohova L. P., Marchihina I. I. The comparative analysis of quality of growth medium of various producers to isolate enterobacterium. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. 2011; 9: 42. (in Russian)
Received 05.02.15
