CC BY
314
стве современного маркера СРП при изучении патогенетических механизмов развития хронической патологии кожи и тяжести течения заболевания.
ЛИТЕРАТУРА
1. Биткина О. А. Копытова Т. В., Контоpщикова К. Н., Бавpина А. П. // Клин. лаб. диагн. - 2010. - № 4. - С. 13-17.
2. Дуpнев А. Д., Жанатаев А. К., Сеpеденчин С. Б. // Рос. мед. журн. -2002. - № 2. - С. 2-8.
3. Копытова Т. В., Абалихина Е. П., Щелчкова Н. А. // Клин. лаб. диагн. - 2007. - № 11. - С. 20-24.
4. Копытова Т. В., Химкина Л. Н., Пантелеева Г. А. // Успехи соврем. естествознания. - 2009. - № 6. - С. 25-30.
5. Кузнецова А. А., Кноppе Д. Г., Федоpова О. С. // Успехи химии. -2009. - Т. 78. - С. 714 - 718.
6. Кулева Н. В., Залесова З. С. // Цитология. - 2000. - Т. 42, № 1. - С. 66-71.
7. Ломоносов К. М., Есипов Д. С., Бабешко О. А., Татаpенко А. Ю. // Рос. журн. кож. и вен. бол. - 2011. - № 1. - С. 68-70.
8. Малахова М. Я. // Эфферент. тер. - 2000. - Т. 6, № 4. - С. 3-14.
9. Окислительный стресс и антиоксиданты: Организм, кожа, косметика: Сборник статей / Под ред. А. Петрухиной. - М.: "Фирма Кла-вель", 2006.
10. Соломаха А. А. // Вестн. нов. мед. технол. - 2006 - Т. 13, № 4. - С. 21-23.
11. Суздальцева И. В., Копытова Т. В., Пантелеева Г. А. // Рос. журн. кож. и вен. бол. - 2008. - № 5. - С. 31-33.
12. Суздальцева И. В. Патогенетическая роль эндогенной интоксикации при истинной пузырчатке, оптимизация ее терапии: Автореф. дис.... канд. мед. наук - М., 2009.
13. Хэбиф Т. П. Кожные болезни. Диагностика и лечение. - М.: Медпресс-информ., 2008.
14. Dimon-Gadal S., Gerbaud P., Therond P. et al. // J. Invest. Dermatol. -2000. - Vol. 114. - Р. 984-989.
15. TroubaK. J., HamadehH. K., AminR. P. et al. // Antioxid. Redox. Signal. - 2002. - Vol. 4. - Р. 665-673.
16. Wiseman H, Halliwell B. // Biochem. J. - 1996. - Vol. 313. - Р. 17-29.
Поступила 19.01.12
гематология
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013 УДК 616-076.5
Д.А. Шмаров, В.м. Погорелов, Г.И. Козинец
современные аспекты оценки пролиферации и апоптоза в клинико-лабораторной диагностике (обзор литературы)
Гематологический научный центp минздравсоцразвития РФ, Mocквa
Рассматриваются вопросы исследования клеточной пролиферации и апоптоза, взаимоотношения и обусловленность этих двух важнейших физиологических процессов. Подробно анализируются основные цитологические маркеры пролиферации и апоптоза, а также методы прижизненной неинвазивной визуализации апоптоза. Рассматривается значение этих маркеров для клинико-лабораторной диагностики, изучения механизма действия противоопухолевых препаратов и выбора оптимальной схемы терапии.
Ключевые слова: пролиферация, апоптоз, цитологические маркеры
D.A. Shmarov, V.M. Pogorelov, G.I. Kozinetz THE ACTUAL ASPECTS OF EVALUATION OF PROLIFERATION AND APOPTOSIS IN CLINICAL LABORATORY DIAGNOSTIC: A REVIEW The article deals with the issues of studying cell proliferation and apoptosis, relationship and conditionality of these two important physiologic processes. The main cytological markers of proliferation and apoptosis are analyzed, including the techniques of intravital non-invasive visualization of apoptosis. The value of these markers in clinical laboratory diagnostic and investigation is considered. The mechanisms of action of antineoplastic pharmaceuticals and issues of choosing the optimal scheme of treatment are analyzed.
Key words: proliferation, apoptosis, cytological markers
В настоящее время пристальное внимание уделяют вопросам исследования клеточной пролиферации и апоптоза, взаимоотношениям и обусловленности этих двух важнейших физиологических процессов, которые имеют большое значение при многих видах патологии [2-7, 15-17], особенно при злокачественном опухолевом росте, для системы крови и иммунной системы. Рассматривая необходимость их изучения в клинико-
Для корреспонденции:
Шмаров Дмитрий Александрович, д-р мед. наук, вед. науч. сотр. Адрес: 125167, Москва, Новый Зыковский пр., 4 Телефон: 8-917-583-81-88 E-mail: [email protected]
лабораторной диагностике, необходимо выделить три аспекта:
1) пролиферация и апоптоз являются сопряженными процессами, и необходимо стремиться к тому, чтобы рассматривать их совместно;
2) надо хорошо себе представлять, что это динамические характеристики, которые меняются в процессе лечения, в частности в ходе химиотерапии;
3) каждый врач должен стремиться к тому, чтобы составить себе представление о состоянии пролиферативной активности и апоптоза лимфоцитов (в иммунной системе), нормальных гемопоэтических клеток и опухолевого клона; настоящий обзор является попыткой расширить представления о возможностях современных лабораторных и функциональных методов исследований в оценке показателей пролиферации и апоптоза.
Цитологические маркеры клеточной пролиферации. В число известных цитологических маркеров клеточной пролиферации входят:
1) наличие в препаратах фигур митозов;
2) способность делящихся клеток включать меченный тритием тимидин (3Н-тимидин), другие радиоактивно меченные предшественники или аналог пиримидина - бромдезок-сиуридин [7];
3) окраска препаратов красителем Фельгена [8, 9] с последующим цитофотометрическим анализом распределения клеток по стадиям митотического цикла;
4) ДНК-цитофлюориметрия с анализом клеточных популяций, при помощи проточной цитометрии [20-22], конфокальной микроскопии и других методов;
5) экспрессия ядерного антигена пролиферирующих клеток (PCNA) [41], антигена Ki-67 [29] и других антигенов;
6) сродство ядрышковых антигенов, транскрипционных факторов, нуклеолина (С23) [12], нуклеофозмина (В23) [25] или фибриллярина [37] к ионам серебра;
7) возможны "гибридные варианты", которые основаны на одновременном определении на одном цитологическом препарате двух или даже нескольких маркеров пролиферации (митозы и 3Н-тимидин, определение включения бромде-зоксиуридина и ДНК-цитометрия и др.).
Митотический индекс (МИ). Среди перечисленных маркеров определение частоты митозов на 1000 клеток, т.е. мито-тического индекса МИ (в %о), в окрашенных мазках является одним из наиболее распространенных способов оценки про-лиферативной активности клеток [9], так как не требует специального оборудования и реактивов. Результаты оценки МИ у онкологических больных подвержены высокой вариабельности и лучше всего воспроизводятся на гистологических препаратах ткани опухоли [28]. Более достоверную информацию получают при изучении статмокинетического индекса (СТИ), который не зависит от времени митоза, а определяется только величиной интервала между делениями клеток.
Способность делящихся клеток включать тимидин и бромдезоксиуридин. Другие возможности изучения пролиферации клеток открывают авторадиография метки тимидином, бромдезоксиуридином, спектрофотометрия окрашенных по Фельгену клеток и проточная цитофлюориметрия.
Экзогенный тимидин включается во вновь синтезированную молекулу ДНК во время фазы синтеза ДНК митотиче-ского цикла благодаря фосфорилированию клеточной тими-динкиназой и превращению в тимидиловую кислоту. Наиболее простым показателем, который определяется меткой Н-тимидина, является тимидиновый индекс мечения (ИМ), т. е. доля клеток, за короткий промежуток времени включающих изотоп. Величину ИМ можно подсчитать на радиоавтографах 500-1000 клеток и выразить в процентах.
В 1970-х годах в литературе появились работы по анализу митотического цикла на хромосомном и клеточном уровне с использованием бромдезоксиуридина, причем анализ выполнялся как in vitro, так и, что особенно ценно, in vivo. Однако оказалось, что методом флюорохромной микроскопии можно выявлять клетки, включившие и не включившие бромдезоксиуридин (окраска флюорохромом Хехст 33258), но определить ИМ без длительной экспозиции с реагентом нельзя: метод импульсной метки здесь не работает [6].
Окраска клеток красителем Фельгена с анализом распределения клеток по содержанию ДНК. Наибольшее количество цитофотометрических работ по оценке пролиферации посвящено реакции Фельгена - специфической реакции для выявления ДНК [8]. Цитофотометрия ДНК позволяет проследить прохождение клетками всего митотического цикла и получить представление об их распределении по его фазам. Однако применение реакции Фельгена в этом контексте ограничивается зависимостью связи реактива Шиффа (трифе-нилметановый основной краситель) от состояния хроматина,
связи ДНК с белками и ряда других факторов.
ДНК-цитофлюориметрия с анализом клеточных популяций при помощи проточной цитометрии. Наиболее широкое применение в исследовании митотического цикла нашли способы с использованием люминесцентных (флюоресцентных) красителей, для окраски ДНК (бромистый этидий, йодистый пропидий, акридиновый оранжевый, Н33258, Н33342, ДАФИ и др.). Стехиометричность окраски этими агентами (степень соответствия окраски количественным характеристикам выявляемого объекта) чрезвычайно высокая, что позволяет различать клетки с невероятно низкими отличиями в содержании ядерной ДНК.
Анализ клеточных популяций включает на первом этапе построение при помощи соответствующей аппаратуры так называемых гистограмм распределения (по оси абсцисс - содержание ДНК, по оси ординат - количество с данным содержанием ДНК). Гистограммы распределения клеток по содержанию ДНК имеют пики, соответствующие клеточным фракциям в стадиях G (2 С) и G2 + М (4 С), а также клетки в стадии S, находящиеся между этими двумя пиками (содержание ДНК от 2 до 4 С). Компьютерный анализ этих гистограмм позволяет находить процентное количество клеток в разных фазах цикла [11, 21]. Анализ ДНК-гистограмм, полученных при помощи цитофотометрии (реакция Фельгена) и конфокальной цитоме-трии, дает значительно более низкую точность и позволяет в большей степени проводить качественную оценку.
Экспрессия PCNA и Ki-67 ядерных антигенов. Белок Ki-67 (тестируется при оценке "ростовой фракции" данной клеточной популяции [38]) относится к контролирующим мито-тический цикл белкам, по мнению большинства патологов, использующих индекс метки этим белком как маркер проли-ферирующих клеток, успешно конкурирует с PCNA: покоящиеся клетки (G0) негативны по содержанию Ki-67; антиген экспрессируется в клетках поздней G1 (G1/b), а также в клетках S, G2 и М (в метафазе). По сравнению с частотой митозов индекс метки этим белком более информативен. В реформирующихся ядрышках дочерних клеток Ki-67 появляется позже таких ядрышковых белков, как фибриллярин и нуклеолин [1], а также белок ядрышка SURF-6 [10].
Ядрышковые антигены. Известно, что именно эти ядрыш-ковые белки и нуклеофозмин (В23), специфически связывая ионы серебра, обеспечивают субстрат цитохимической реакции транскрипционно активных ядрышкообразующих районов (ЯОР) с 50% раствором его нитрата (Ag-ЯОР-реакция) как в метафазе митоза, так и в ядрах интерфазных клеток [30].
Содержание аргентофильных белков в ядрышке, их размер (полимеры или мономеры), пространственная локализация и функции в динамике интерфазы претерпевают изменения [26]. Собранные на примере индукции пролиферации in vitro данные подтверждают гипотезу о том, что, оценивая аргентофильность ядрышек, можно получить ориентировочное представление о долевом распределении клеток по фазам митотического цикла; наиболее высокое содержание С23 и В23 отмечено в клетках фаз S-G2, низкое - в клетках фазы G1; в состоянии покоя (фаза G0) содержание аргентофильных белков равно половине их содержания в фазе G1 [12-14, 40].
Таким образом, в настоящее время исследователи обладают достаточно внушительным арсеналом методов для характеристики пролиферативной активности опухолевых клеток. Однако в клинико-лабораторной диагностике предпочтение отдают только отдельным маркерам, в частности антигену Ki-67, который отражает долю клеток пролиферирующего пула и информативен для качественной оценки, что важно для дифференциальной диагностики. Другие маркеры, в частности белок ядрышка SURF-6, пока не нашли должного применения в клинике, хотя показано, что они являются ранними индикаторами активации клеток к пролиферации [10], что может иметь дополнительное диагностическое и прогностическое значение. В частности, на основе этого белка могут быть использованы методы ранней диагностики активации лимфоцитов и оценки
опухолевого роста. По недостаточно ясным причинам почти не находит применения проточная ДНК-цитометрия, которая в дополнение к оценке распределения клеток по фазам клеточного цикла позволяет оценивать анеуплоидию и апоптоз на одной гистограмме [18]. Кроме того, этот метод дает возможность применять одновременно метки с антителами.
Апоптоз и методы его определения. В 1972 г. J. Kerr и соавт. [34] впервые использовали термин "апоптоз" для обозначения морфологии альтернативной некрозу физиологической гибели клеток; сам термин (в переводе с греческого "листопад") уже использовался древними медиками - основоположниками медицины. Первенство приписывают Гиппократу [34], хотя в современной литературе очень часто ссылаются на его ученика и последователя Галена. Феномен был детально описан этими авторами, которые и дали простое объяснение его биологической сути: безболезненное освобождение от ненужных организму клеток. Можно только удивляться мудрости древних ученых, которые, ничего не зная и даже не предполагая существования клетки, понимали суть физиологических процессов, происходящих в организме. Наши современники, несомненно, знают гораздо больше, но понимают, к великому сожалению, меньше. Это в полной мере относится и к другим областям научного познания.
Апоптоз является одним из основных механизмов поддержания тканевого гомеостаза. Особенно важен этот механизм для иммунной и кроветворной систем, так как с его помощью осуществляются контроль клеточной пролиферации и элиминация агрессивных клеточных клонов. Изучение факторов, модулирующих развитие апоптоза, может стать основой для разработки подходов к фармакологическому контролю апоптоза, который играет важную роль в развитии многих заболеваний.
В настоящее время стало ясно, что пролиферация может быть прервана генетически запрограммированными действиями по физиологическому предупреждению перепроизводства соматических клеток или их удалению из популяции. Предполагается, что осмысление сопряжения пролиферации и апоптоза, как и идентификация его морфологических маркеров в целом, может способствовать изучению некоторых аспектов патогенеза, улучшению дифференциальной диагностики и созданию основы принципиально новой терапии злокачественных заболеваний.
Контролируемая извне или изнутри пролиферация является неотъемлемым свойством любой живой клетки, а апоптоз - активный процесс удаления клеток - уникальная особенность многоклеточного организма, где деление и жизнеспособность индивидуальной клетки становятся заботой всего клеточного сообщества.
Значимость физиологической гибели клетки постепенно раскрывается. Апоптоз играет серьёзную роль в эмбриогенезе и онтогенезе млекопитающих. Апоптоз - механизм, ограничивающий избыточность соматических мутаций врождённо или путем истощения наиболее активных клонов, гарантия сдерживания амплификации дефектной (нежелательной) ДНК. Такая гибель клеток часто отождествляется с запрограммированной. Кажется, что те же самые сигнальные пути, которые приводят клетку к митозу (протеинкиназы С, клеточные протоокогены и регуляторы транскрипции c-fos, c-jun, с-тус, белки из ras-семейства тирозиновых киназ), обеспечивают чувствительность ее хроматина к эндонуклеа-зам, т. е. запускают программу гибели.
Основные цитологические маркеры апоптоза:
1) учет апоптических клеток по характернойморфологии ядра (конденсированный и фрагментированный хроматин) с использованием флюоресцентных красителей акридинового оранжевого, бромистого этидия и флюоресцентной микроскопии;
2) выявление изменений в плазматической мембране с помощью белка аннексина V; в апоптотических клетках фосфолипид фосфатидилсерина (ФС) переориентируется и
локализуется на поверхности клеточной мембраны; его локализация на мембране наблюдается начиная с ранней стадии апоптоза до полной деградации клетки; связываясь с ФС на поверхности клетки, аннексии V, конъюгированный с флюо-рохромом, служит маркером апоптоза; обычно аннексии V используют в комбинации с йодистым пропидием;
3) определение межнуклеосомной деградации (фрагментации) ДНК - регистрация образования "лесенки" ДНК с помощью гельэлектрофореза;
4) оценка фрагментации ДНК in situ b гистологических срезах TUNEL - метод, основанный на флюоресцесцентной метке окончаний отрезков ДНК (3'-ОН-окончания, образовавшиеся в результате фрагментации ДНК) с использованием биотинконъюгированного дезоксиуридинтрифосфата (dUTP) в реакции, катализируемой экзогенной терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазой (TdT);
5) определение экспрессии Fas-антигена на поверхности клетки с помощью моноклональных антител к CD95; это позволяет с использованием проточной цитометрии или флюоресцентной микроскопии выявить популяцию клеток, несущих Fas-антиген, т. е. потенциально способных вступить в апоптоз;
6) определение экспрессии внутриклеточного bcl2 с помощью моноклональных антител и проточной цитометрии или флюоресцентной микроскопии;
7) проточная ДНК-цитометрия позволяет количественно оценивать апоптоз по измерению доли клеток с содержанием ДНК < 2 С [41-43].
Наиболее характерными биохимическими признаками апоптоза является расщепление эндонуклеазами двуспи-ральной ядерной ДНК. В настоящее время известны не менее трех типов фрагментации ДНК во время апоптоза: 1) одно-нитевые разрывы ДНК; 2) фрагментация ДНК на большие участки (50-300 тыс. пар оснований); 3) межнуклеосомное расщепление ДНК на фрагменты, длина которых кратна 180-200 парам оснований. Гель-электрофорез единичных клеток (метод ДНК-комет) является высокочувствительным методом выявления однонитевых разрывов ДНК. Метод основан на анализе электрофоретической подвижности ДНК единичных клеток, помещенных в агарозный гель. Поскольку с помощью обычного электрофореза ДНК в агарозном геле не удается разделить фрагменты ДНК большого размера, то для этого был разработан специальный метод цульс-электрофореза ДНК.
Методы прижизненной неинвазивной визуализации апоп-тоза в экспериментальных и клинических условиях остаются сложными для решения вопросов вывления процессов дестабилизации (торможение или стимуляция) апоптоза, которые имеют место при тех или иных патологических состояниях [4, 5, 19]. Роль апоптоза в патогенезе заболеваний человека [39] подтверждена преимущественно патогистологическими методами с использованием биопсии и аутопсии. Однако такие исследования не позволяют получить ясное представление о динамике патологического процесса. Первые попытки успешной регистрации апоптоза как динамического процесса сделаны с помощью получившей развитие в последнее время техники прижизненной неинвазивной визуализации тканей и органов. Имеется 5 универсальных клинических методов визуального контроля апоптоза: однофотонная эмиссионная компьютерная томография (ОФЭКТ), позитронная эмиссионная томография (ПЭТ), магнитно-резонансная томография (МРТ), магнитно-резонансная спектроскопия (МРС) и ультразвуковая допплероспектроскопия (УДС).
ОФЭКТ позволяет получать трехмерное изображение распределения g-излучающих стабильных изотопов (131Хе, 1311, 99тТс). Этот метод в основном применяют для исследования регионального мозгового и коронарного кровотока. Однако в последние годы его используют и для прижизненной визуализации апоптоза. Выявление апоптоза методом ОФЭКТ основано на том, что на ранних этапах его развития молекулы
анионного лиганда фосфатидилсерина перемещаются из внутренней на внешнюю сторону клеточной мембраны, что связывают с инактивацией ферментов (транслоказа, флоппаза) и сооответствующей активацией фермента скрамблаза (цит. по [31, 33]. Молекулы фосфатидилсерина, экспрессирующиеся на поверхности апоптических (но не интактных) клеток, можно визуализировать in vivo с помощью зонда, содержащего белок аннексии V. У человека аннексии V имеет молекулярную массу 36 кД и с высокой аффинностью связывается с фос-фатдилсерином плазматической мембраны [24, 36]. В 1998 г. впервые была разработана методика получения аннексиновых зондов, меченных 99тТс [23]. В экспериментах in vivo было показано, что локализация меченного аннексина V после его внутривенного введения соответствует переходу фосфатидил-серина на внешнюю сторону клеточной поверхности [31]. Эффективность использования 99тТс-аннексина V для визуализации апоптоза подтверждена результатами предклинических исследований на моделях Fas-опосредованного апоптоза гепа-тоцитов, реакции отторжения трансплантатов сердца, а также физиологической гибели лейкоцитов [44].
УЗС-метод основан на анализе радиочастотных характеристик отраженных сигналов ультразвука, поступающих от ограниченной популяции клеток, которые находят на начальных стадиях гибели с помощью компьютерного калибрования спектров рассеивания и усреднения отраженных ультразвуковых сигналов [35]. При этом два широкополосных ультразвуковых датчика, излучающих на частотах 30 и 34 МГц, совмещенных с системой регистрации и автоматического анализа отраженных сигналов, позволяют получать графическое изображение ультразвуковых сигналов. Оказалось, что для апоптических клеток характерно двукратное увеличение интенсивности рассеивания отраженных ультразвуковых сигналов по сравнению с таковым для интактных клеток. Полученная высокая степень усреднения ультразвуковых сигналов во времени позволила выявить отчетливый пик (соответствующий 14 дБ), появление которого вызвано повреждением ДНК в ядрах апоптических клеток [27]. В дальнейшем было показано, что появление отраженных микросигналов ("microechoes") ультразвука обусловлено конденсацией хроматина ядра и апоптической гибелью клеток [32]. К преимуществам метода следует отнести быстроту проведения анализа, безболезненность и отсутствие лучевой нагрузки.
Таким образом, в последнее время разработан ряд технологий визуализации апоптоза in vivo и in vitro. С помощью томографических, спектроскопических и ультразвуковых методов показана возможность неинвазивно и безвредно получать в масштабе реального времени объективную информацию о степени выраженности апоптоза в отдельных тканях и органах. Это увеличивает арсенал методов оценки эффектов цитостатических препаратов, что позволит оптимизировать программу доклинических исследований лекарственных соединений.
ЛИТЕРАТУРА
1. Артеменко Е.Г. Иммуноцитохимический анализ ядерных антигенов лимфоцитов человека, выявляемых с помощью монокло-нальных антител: Автореф. дис. ... канд. 6иол. наук. - М., 2004.
2. Владимирская Е.Б. Биологические основы противоопухолевой терапии. - М., 2001.
3. Гринева Н. И., Ахлынина Т.В., Герасимова Л.П. и др. // Acta Naturae. - 2009. - № 3. - С. 120-133.
4. Залесский В.Н., Гавриленко Т.И. //Врач. дело. - 2002. - № 1. - С. 8-15.
5. Залесский В.Н., Фильченков А.А. // Соврем. пробл. токсикол. -2002. - № 4. - С. 64-70.
6. Кинетические аспекты гемопоэза / Под ред. Г.И. Козинца, Е.Д. Гольдберга. - Томск: Издательство Томск. ин-та, 1982.
7. Клетки крови: современные технологии исследования / Козинец Г.И., Погорелов В.М., Шмаров Д.А. и др. - М.: Триада-Фарм, 2002.
8. Козинец Г.И., Котельников В.М., ГольдбергВ.Е. Цитофотометрия
гемопоэтических клеток. - Томск: Издательство Томск. ун-та. -1986.
9. Котельников В.М. Параметры пролиферации гемопоэтических клеток в клинике гемобластозов: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук.
- 1991.
10. МалышеваМ.В., Моралева А.А., Дейнеко Л.Н. и др. //Иммунология. - 2010. - Т. 32, № 1. - С. 13-17.
11. Никулин Б.А., Шмаров Д.А., Першин В.Н., Крехнов Б.А. // Лаб. дело. - 1989. - № 4. - С. 34-38.
12. Погорелов В.М., Даровский Б.М., Котельников В.М., Шинкарен-коB.C. и др. // Эксперим. - 1987. - Т. 1, № 3. - С. 43-418.
13. Погорелов В.М. Морфологические особенности нуклеологенеза лимфоидных клеток в норме, при лимфосаркомах и остром лим-фобластном лейкозе: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. - М., 1992.
14. Погорелов В.М., Козинец Г.И. // Пробл. гематол. - 1998. - № 2. -С. 5-10.
15. Погорелов В.М., Козинец Г.И. Хромосомы. Методы исследований. - М.: Триада-Фарм, 2004.
16. Руководство по гематологии Под ред. А.И. Воробьева. - 3-е изд.
- М.: Ньюдиамед, 2002.
17. Савченко В.Г., Паровичникова Е.Н. Лечение острых лейкозов (клинические исследования). - М.: Триада-Фарм, 2004.
18. Тимофеев А.М., Боровкова Т.В., Найденова H.M. и др. // Молекул. биол. - 2005. - Т. 39, № 2. - С. 235-244.
19. Фильченков А.А., Залесский В.Н. // Нейрофизиология. - 2002. - Т. 34, № 6. - С. 468-484.
20. Шмаров Д.А. // Клин. лаб. диагн. - 1993. - № 5. - С. 40-44.
21. Шмаров Д.А., Козинец Г.И. - 1999. - № 8. - С. 16-18.
22. Шмаров Д.А., Сарычева Т.Г., КучмаЮ.М., Козинец Г.И. // Клин. лаб. диагн. - 2011. - № 9. - С. 33.
23. BlankenbergF.G., KatsikisP., Tain J.F. et al. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. - 1998. - Vol. 95, N 7. - P. 6349-6354.
24. Blankenberg F.G., Katsikis P., Tain J.F. et al. // J. Nucl. Med. - 1999. -Vol. 40, N 11. - P. 184-191.
25. Chen H, Wunn Т., Britton P. et al. // J. Virol. - 2002. - Vol. 76, N 10. - P. 5233-5250.
26. Chou Y.H., Yung B.Y. // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1995. -Vol. 217, N 1. - P. 313-325.
27. Czarnota G.J., Kolios M.C., Abraham J. et al. // Br. J. Cancer. -1999. - Vol. 8l, N 3. - Р. 520-527.
28. DonhuijsenK. // Hum. Pathol. - 1986. - Vol. 17, N 11. - P. 1122-1125.
29. Gerdes J., Schwab U., LemkeH., SteinH. // Int. J. Cancer. - 1983. -Vol. 31. - P. 13-20.
30. Goodpasture C., Bloom S.E. // Chromosoma. - 1975. - Vol. 53. N. 1. - P. 37-50.
31. Green A.M., Steipmetz N.D. // Cancer J. - 2002. - P. 82-92.
32. Hunt J.M., Woringhton A.E., Xian A. et al. // Ultrasound Med. Biol. -2002. - Vol. 28, N 4. - P. 217-226.
33. Illera V.A., Perandones C.E., Stunz L.L. et al. // J. Immunol. - 1993.
- Vol. 151. - P. 2965-2973.
34. Kerr J.F.R., Willie A.H., Currie A.R. // Br. J. Cancer. - 1972. - Vol. 6. - P. 239-257.
35. KoliosM.C., Czarnota G.J., LeeM. et al. // Ultrasound Med. Biol. -2002. - Vol. 28, N 12. - P. 589-597.
36. Мепу D.E., Korsmeyer S. J. // Annu. Rev. Neurosci. - 1997. - Vol. 20. - P. 245-267.
37. OchsR.L., LischweM.A., Spohn W.H., BuschH. // Biol. Cell. - 1985.
- Vol. 54. - P. 123-134.
38. Scholzen T, Gerdes J. // J. Cell Physiol. - 2000. - Vol. 182. - P. 311-322.
39. Shulte H.R., Bursch W., GraslK.B. // Progress in liver diseases/ Eds J.L. Boyer, R.K. Ockuer. - 1995. - Vol. 13. - P. 1-35.
40. Sirri V., Roussel P., Gendron M.C., Hernandez-Verdun D. // Cytometry. - 1997. - Vol. 28, N 2. - P. 147-156.
41. SmetanaK., Likovsky Z. // Cell Tiss. Res. - 1984. - Vol. 237, N 2. -P. 367-370.
42. SrivastavaM., PollardH.B. // FASEB J. - 1999. - Vol. 13. - P. 19111922.
43. WhyteM.K., MeagherL.C., MacDermotM., Haslett C.// J. Immunol.
- 1993. - Vol. 150, N 11. - P. 5124-5134.
44. Zhao M., Beauregard D.A., Loizon L. et al. // Nat. Med. - 2001. -Vol. 7, N 12. - P. 1241-1244.
Поступила 13.02.12
