CC BY
10ежемесячный научно-практическии медицинским журнал
на-йенсена составляет 2-3 месяца, на жидкой модифицированной среде в автоматическом анализаторе BactecMGIT 960 - 2-3 недели. Результаты наших исследований свидетельствуют о том, что тест-система GenoType® MTBDRplus имея такое преимущество как скорость получения результата - определения чувствительности к основным ПТП: изониазиду и рифампицину (от 6 часов до 2-х рабочих дней) - должен шире использоваться в диагностике резистентных форм ТБ, назначении раннего и адекватного лечения, а также прерывания эпидемиологической цепочки в трансмиссии возбудителя.
Литература
1. World Health Organization. Global tuberculosis control: WHO report 2011.WHO/HTM/TB/2011.16. WorldHealthOrganization, Geneva, Switzerland 2011.
2. Аналитическая справка НЦФ по реализации противотуберкулезных мероприятий и Закона КР «О защите населения от туберкулеза» за 2011 г.
3. WHO (World Health Organisation). Global tuberculosis
control - epidemiology, strategy, financing. Geneva, WHO, 2009 (WHO/HTM/TB/2009.411)
4. Review of the laboratory network ofthe Kyrgyz Republic. 9-29 April 2012. Dr. HaraldHoffmann & Dr. UladzimirAntonenka, TB Laboratory Experts, IML red GmbH, Germany
5. Crudu V, Stratan E, Romanenco E, Allerheiligen V, Hillemann A, Moraru N. First evaluation of an improved assay for molecular genetic detection of tuberculosis as well as RMP and INH resistances. // JClinMicrobiol 2012; Epub ahead of print, doi: 10. 1128/JCM.05903-11.
6. TelentiA, Imbonden P, Marshesi F, Lowrie D, Cole S, Colston MJ, MatterL, Schopter K, Bodmer T. Detection of rifampicin-resistance mutations in Mycobacterium tuberculosis. Lancet.-1993.- 341.-P. 647-650.
7. Исакова Ж.Т., Гончарова З.К., Юсупова Э.У. и др. Эффективность применения биочип-анализа для быстрого молекулярно-генетического определения мульти-резис-тентных штаммовM.Tuberculosis//Молекулярная медицина. - 2008. -№1. -С.51-55.
8. Zhang Y, Yew WW. Mechanisms of drug resistance in M.tuberculosis. //Int JTubercLungDis.-2009.-13.-Р. 13201330.
УДК 616.24-002.5-076:57.083.1
СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА
А.Д. Адамбекова, Д.А. Адамбеков, А.Ш.Алишеров
КРСУ, Национальный Центр фтизиатрии
Кургак учуктун микробиологиялык ыкмаларынын есуп-енугуусу
Адамбекова А.Д., Адамбеков Д.А., Алишеров А.Ш. Кыргыз-Орус Славян Университети, Бишкек ш, Кыргызстан Национальный Центр фтизиатрии, Бишкек ш, Кыргызстан Корутунду: Автоматташтырылган BACTECMGIT 960 системасынын жана классикалык бактериология-лык Левенштейн-йенсен чeйрeнYн тажырыйбаларын салыштыруу анализи аткарылды.
Негизги сездер: кургак учукту дартын аныктоо, автоматташтырылгын BACTECMGIT 960 системасы,Левенштейн-йенсен чeйрeсY.
An improvement of microbiological methods in diagnosis of tuberculosis
A. D.Adambekova, D.A. Adambekov,A.Sh. Alisherov Kyrgyz-RussianSlavonicUniversity, NationalCenter of Phthisiology, Abstract: Comparative analysis of the automated BACTEC MGIT 960 and classical bacteriological method, culturing on Lowenstein-Jensen medium.
Keywords: diagnosis of tuberculosis, automated BACTEC MGIT 960, Lowenstein-Jensen medium.
Туберкулёз остается ведущей причиной смертности. Так, по данным Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ), около трети населения планеты - два миллиарда человек - инфицированы Mycobacterium tuberculosis (МБТ) и подвержены риску заболевания. Ежегодно более чем у восьми миллионов человек развивается активный туберкулез (ТБ) и примерно два миллиона умирают от этой болезни. Так в 2010 году, зарегистрировано 8,8 миллиона случаев заболевания ТБ [1].
В Кыргызской Республике в 2011 году было
зарегистрировано 5 535 впервые выявленных больных туберкулезом (в системе Государственной Службы Исполнения Наказания (ГСИН) - 292 случая), заболеваемость составила 101,1 на 100 тыс. населения. Показатель смертности от ТБ составил 9,2 на 100 тыс. населения (с ГСИН) [2]. Ситуация по туберкулезу Кыргызской Республике, как и во всем мире, в последние годы характеризуется увеличением распространенности множественно лекарственно-устойчивого туберкулеза (МЛУ ТБ) как среди впервые выявленных, так и среди ранее
14
№ 3, апрель-май 2013
СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА
леченных больных, а также нарастанием устойчивости к противотуберкулезным лекарственным средствам резервного ряда и формирования широкой лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза (ШЛУ ТБ) [3, 4].
Достоверный диагноз МЛУ/ШЛУ-ТБ устанавливается только на основании лабораторных данных, что диктует необходимость обеспечения высокого качества, точности, надежности и воспроизводимости тестирования лекарственной чувствительности МБТ. Наряду с этим, традиционные бактериологические методы определения лекарственной чувствительности отличаются длительностью получения результатов, что не позволяет проводить коррекцию химиотерапии в самые короткие сроки. Все это обусловливает необходимость внедрения в практику современных диагностических технологий: (автоматизированные диагностические системы, молекулярно-генетичес-кие исследования) [5, 6, 7].
В настоящее время в Республиканской рефе-ренс лаборатории для культуральной диагностики туберкулеза используется автоматизированная система Вайес1^1Т 960.
Целью данного исследования явилось проведение сравнительного анализа эффективности ускоренного метода выявления и классических бактериологических методов исследования.
Материал и методы исследования. В Республиканской референс лаборатории НЦФ исследовано 2547 образцов на среде Левенштейна-йенсена и автоматизированной системе Вайес1^1Т 960.
Система 1^1Т (mycobacteriagrowthindicatingtu Ье) относится к разработкам высоких технологий и предназначена для ускоренной бактериологической диагностики туберкулеза и определения чувствительности микобактерий туберкулеза к препаратам первого ряда и некоторым препаратам второго ряда. Описанные процедуры ориентированы на использование 1^1Т в приборе ВАСТЕС 960. Культивирование микроорганизмов производится в специальных пробирках с жидкой питательной средой на основе модифицированной среды Middlebrook 7Н9. Для стимуляции роста микобактерий и подавления роста посторонней микрофлоры используются добавки роста MGIT GrowthSupplement и смесь антибиотиков PANTA [8, 9].
Регистрация роста микроорганизмов осуществляется оптически. В ее основе лежит флюоресценция, возникающая при потреблении кислорода в процессе роста микобактерий. Кислород-зависимый флюорохромный краситель содержится на дне специальной пробирки и покрыт слоем силикона. Изначально, концентрация кислорода в среде достаточно велика, что вызывает гашение флюоресценции. Размножение микобактерий приводит к потреблению кислорода в пробирке и снижению его концентрации, что вызывает усиление флюоресценции. Флюоресценция становится видимой
при облучении пробирки ультрафиолетовым (УФ) светом и автоматически регистрируется фотодатчиками, встроенными в прибор BACTEC 960. Интенсивность свечения регистрируется в единицах роста (GU — growthunits).
Результаты исследования. В Республиканской референс лаборатории Национального центра фтизиатрии проведено исследование 2547 образцов на автоматизированной системе BactecMGIT 960, из которых 1113 образцов являлись мазок положительными, при проведении диагностических тестов было выделено 920 культур, 116 образцов не дали роста, в 32 случаях отмечался рост культуры в присутствии посторонней микрофлоры, а в 45 образцах рост посторонней микрофлоры не позволил провести идентификацию роста М .tuberculosis. В данном исследовании проводился тест 1434 микроскопически отрицательных образцов, где был зафиксирован рост M.tuberculosis в 397 образцах, 742 образца не дали роста, в 19 случаях был зафиксирован рост культуры M.tuberculosis в присутствии посторонней микрофлоры и в 276 образцах рост посторонней микрофлоры не позволил провести идентификацию роста M.tuberculosis.
Полученные результаты представлены в таблице 1.
Для проведения сравнительного анализа эффективности выделения M. tuberculosis все тестированные образцы были засеяны на твердой питательной среде Левенштейна-йенсена, после обработки патологического материала NALC-NaOH методом. Данные исследования представлены в табл.2.
Всего было культивировано 2488 образцов из которых 1051 (42,3%) дали положительный рост культур микобактерий туберкулеза, а 1223 (57,7%) образца не дали роста. 1051 культура микобактерий туберкулеза была получена при культивировании 777 (73,9%) бактериоскопически положительных и 274 (26,1%) микроскопически отрицательных образцов. Из 1223 отрицательных образцов 216 образцов были бактериоскопически положительными, а 1007 образцов были микроскопически отрицательными. Из 2488 проведенных исследований были контаминированы 214 образца, 90 из которых были бактериоскопически положительными и 124 образца были бактериоскопически отрицательными.
В результате использования этой системы среднее время детекции роста микобактерий составляет 18,7 дня против 33,2 на стандартной плотной среде Левенштейна-йенсена.
Таким образом, результаты проведенных исследований позволяют констатировать следующее: ростовые качества M.tuberculosis при проведении исследований на BDBACTECMGIT 960значительно выше, чем при культивировании на среде Левен-штейна-йенсена., что потверждено данными ряда исследователей. Также, метод исследования на диагностической тест системе BDBACTECMGIT 960 по сравнению с классическим бактериологи-
№ 3, апрель-май 2013
15
ежемесячный научно-практический медицинский журнал
таблица 1
результаты посевов на bactecMGIT 960
Положительные образцы Отрицательные образцы Общее количество культивированных образцов
Положительный результат культивирования (M.Tuberculosis) 920 391 1311
Отрицательный результат культивирования (М. tuberculosis) 116 742 858
Положительный результат культивирования (M.Tuberculosis) в присутствии посторонней микрофлоры 32 19 51
Рост посторонней микрофлоры не позволил провести идентификацию роста M. tuberculosis 45 276 321
итого 1113 1434 2547
таблица 2
результаты посевов на среде левенштейна-йенсена
положительные образцы отрицательные образцы общее количество образцов
Положительный результат культивирования (M.Tuberculosis) 111 274 1051
Отрицательный результат культивирования (М. tuberculosis) 216 1007 1223
Рост посторонней микрофлоры не позволил провести идентификацию роста М. tuberculosis 90 124 214
итого 1083 1405 2448
ческим исследованием (посев на среду Левенш-тейна-йенсена) проявил себя как более чувствительный. Уровень контаминации при проведении исследований на современном оборудовании значительно выше, чем при проведении классических бактериологических исследований.
литература
1. World Health Organization. Global tuberculosis control: WHO report 2011. WH0/HTMTB/2011.16. WorldHealthOrganizatio n.- Geneva, Switzerland, 2011.
2. Аналитическая справка НЦФ по реализации противотуберкулезных мероприятий и Закона КР «О защите населения от туберкулеза» за 2011г.
3. Эпидемиологический надзор за резистентными формами туберкулеза в Кыргызской Республике. CDC, Атланта. Проект ХОУП в Кыргызской Республике. 2012.
4. Руководство по борьбе с туберкулезом в Кыргызской Республике. Под редакцией профессора, д.м.н. А.Ш. Али-шерова.- Бишкек, 2008.
5. Исаева Е.Л., Литвинов В.И., Мороз А.М., и др. Mycobacte riumtuberculosis, ее выявление и определение лекарственной резистентности // Туберкулез сегодня - проблемы и перспективы. - М., 2000.- с.56.
6. Мороз А.М. Лабораторная диагностика туберкулеза: реальность и перспектива // Туберкулез сегодня - проблемы и перспективы. -М., 2000.- с.98.
7. Иртуганова О.А., Смирнова Н.С., Мороз A.M., Литвинов В.И. Ускоренная культуральная диагностика туберкулеза с использованием систем ВАСТЕС MGIT и MB/Bact: Метод.рекомендации МНПЦБТ. - М., 2001. - 16 с.
8. Sabine Rьsch-Gerdes, Ph.D. Director, National Reference Center for Mycobacteria, Borstel, Germany. MGIT TM. Procedure Manual for BACTEC™ MGIT 960™ TB System (Also applicable for Manual MGIT). Mycobacteria Growth Indicator Tube (MGIT). Culture and Drug Susceptibility Demonstration Projects. July 2006.
9. WHO (World Health Organisation). Global tuberculosis control - epidemiology, strategy, financing. Geneva, WHO, 2009 (WH0/HTM/TB/2009.411)
1б
№ 3, апрель-май 2013
