CC BY
28
УДК 612.2:591.11:577.11 Мудрак Д. I., к.вет.н., Вщур О. I., д.вет.н., старший науковий сшвробггаик, Брода Н. А., к.б.н., старший науковий сшвробггаик, Лешовська Н.М., к.вет.н., Рацький М. I., к.вет.н. (daramvdrak@ukr. пеЮ Тнститут бюлоглг тварин НААН, м. Львгв. Укпата Голубець О.В., к.с-г н., ст.н.сп., Шкаруба С.М., к.с-г н., н.сп. © Науково-методична лабопатоп1я хпоматогпафчних дослгджень ДП "Укрметртестстандарт "
СТАН Т- I В-КЛ1ТИННО1 ЛАНОК 1МУН1ТЕТУ В КРОВ1 Т1ЛЬНИХ КОР1В-ПЕРВ1СТОК ЗА ДIÍ ВГГАМШНО-МШЕРАЛЬНОГО КОМПЛЕКСУ «ОЛДОВП»
У статт1 наведено дат щодо впливу введення коровам-первгсткам в остантй м1сяць тыьност1 комплексного втамшно-мшерального препарату «Ол1говт» на актившсть Т- г В-клгтинног ланок ¡муттету. Показано. що внутршньом 'язове введення коровам препарату «Олковт». що мктить втамти А. D3. РР. Е. В1. В2. В4. В5. В6. В8. В12. мжроелементи — Со. Mg. Си. 2п. Мп та амтокислоту метютн спричиняе активуючий вплив на кглькгсть I функцюнальну актившсть Т- I В-лтфоцитт та гх регуляторних субпопуляцт. Зокрема. у кровг корю за 1-2 доби до отелення та на 8 добу тсля родгв виявлено быьшу кглькгсть Т-лгмфоцитгв (загальних. «активних» г теофшн-резистентних) г В-лтфоцитю. що свгдчить про активацт Т- г В-клтинног ланки специфтного ¡муттету. Цг змти у складг вказаних популяцт клтин вдувалися за рахунок зростання числа Т-лтфоцитю гз низькою та середньою авгднгстю г зменшення кглькостг «нульових» клтин. Такий перерозподы ав1дност1 рецепторного апарату ¡мунокомпетентних клтин у кровг корю. яким вводили препарат «Олковт». вказуе на тдвищення гх функцгональног активност1 г зростання гмунного потенцшлу оргатзму.
Ключовi слова: велика рогата худоба. кров. лтфоцити. втамти. мтроелемент и
УДК 612.2:591.11:577.11
Мудрак Д. И., к.вет.н. Вищур О. И., д.вет.н., старший научный сотрудник Брода Н. А., к.б.н., старший научный сотрудник Лешовская Н.М., к.вет.н., Рацкий М. И., к.вет.н. Институт биологии животных. г. Львов. Украина Голубец А.В., к.с-х н., Шкаруба С.М., к.с-х н. Научно-методическая лаборатория хроматографических исследований ГП
"Укрметртестстандарт "
СОСТОЯНИЕ Т- И В-КЛЕТОЧНОГО ЗВЕНА ИММУНИТЕТА В КРОВИ СТЕЛЬНЫХ КОРОВ-ПЕРВОТЕЛОК ПРИ ДЕЙСТВИИ ВИТАМИННО-МИНЕРАЛЬНОГО КОМПЛЕКСА «ОЛИГОВИТ»
В статье приведены данные о влиянии введения коровам-первотелкам в последний месяц стельности комплексного витаминно-минерального препарата «Олиговит» на активность Т- и В-клеточного звена иммунитета. Показано. что внутримышечное введение коровам препарата «Олиговит». который содержит витамины А. D3. РР. Е. В1. В2. В4. В5. В6. В8. В12.
© Мудрак Д. I., Вщур О. I., Брода Н. А., Лешовська Н.М.,Рацький М. I., Голубець О.В., Шкаруба С.М., 2014
213
микроэлементы - Co, Mg, Cu, Zn, Mn и аминокислоту метионин производит активирующее влияние на количество и функциональную активность Т- и В-лимфоцитов и их регуляторных субпопуляций. В частности, в крови коров за 12 суток до отела и на 8 сутки после родов выявлено большее количество Т-лимфоцитов (общих, «активных» и теофиллин-резистентных) и В-лимфоцитов, что свидетельствует об активации Т- и В-клеточного звена специфического иммунитета. Эти изменения в составе указанных популяций клеток происходили за счет увеличения числа Т-лимфоцитов с низкой и средней авидностью и уменьшение количества «нулевых» клеток. Такое перераспределение авидности рецепторного аппарата иммунокомпетентных клеток в крови коров, которым вводили препарат «Олиговит», указывает на повышение их функциональной активности и рост иммунного потенциала организма.
Ключевые слова: крупный рогатый скот, кровь, лимфоциты, витамины, микроэлементы.
UDC 612.2:591.11:577.11
Mudrak D., Vishchur O., Broda N., Leshovska N., M. I. Ratskiy.
Institute of Animal Biology, Lviv, Ukraine Holubets O., Shkarubo S.
Research laboratory of chromatographic research enterprise "Ukrmetrteststandard"
STATE T-AND B-CELL IMMUNITY IN PARTS IN THE BLOOD OF PREGNANT FIRST-CALVING COWS AND THEIR CALVES UNDER ACTION OF VITAMINS AND MINERALS REMEDY «OLIHOVIT»
The article presents data on the impact of the introduction of cow's of first calving in the last month of pregnancy complex vitamin and mineral preparations "Olihovit" the activity of T-and B-cell immunity. It is shown that the intramuscular introduction to cows of "Olihovit", which contains vitamins A, D3, PP, E, B1, B2, B4, B5, B6, B8, B12, minerals - Co, Mg, Cu, Zn, Mn and amino acid methionine causes an activating effect on the functional activity of T and B lymphocytes and their regulatory subpopulations. In particular, in the blood of cows for 1-2 days before calving and on day 8 after birth revealed a greater number of T lymphocytes (general, "active " and theophylline-resistant) and B-lymphocytes, indicating that the activation of T-and B-cell level of specific immunity. These changes in these cell populations occurred due to the increase in the number of T-lymphocytes with an average avidity and reduce the number of "zero" cells. Such redistribution avidity receptor system of immune cells in the blood of cows injected drug "Olihovit" indicates the elevation offunctional activity of immunity and growth potential.
Key words: cattle, blood, red blood cells, T- and B-lymphocytes, vitamins, minerals.
Вступ. Вщомо, що останнш мюяць тшьносп е одним i3 критичних nep^iB у KopiB, що характеризуеться фiзiологiчною iмуносупресiею оргашзму [1, 2]. До того ж в умовах штенсифжаци тваринництва посилюеться негативний вплив стpeс-фактopiв piзнol природи, яК призводять до порушення фiзioлoгiчних функцш i бioхiмiчних процеЫв в opганiзмi тварин. Пщ час тшьност^ плацента i плщ виробляють oсoбливi бiлкoвi фактори та речовини, що
214
пригшчують iмунну реакцш у вщповщь на наявшсть чужорщного органiзму i не допускають реакци вiдторгнення зародка. Тiльнiсть зазвичай не розглядаеться як iмунологiчно «скомпроментований» процес, однак вона пов'язана зi складними iмунологiчними змiнами, що можуть призвести до тдвищення ризику захворювань [3, 4].
Ключова роль у функцюнуванш специфiчного (адаптивного) iмунiтету належить Т- i В-лiмфоцитам кровi. Пщ час тiльностi вiдбуваеться сенсибiлiзацiя цитотоксичних Т^мфоциив матерi до успадкованих вщ батька антигенiв тканинно! сумiсностi, що завжди супроводжуеться iмунодепресiею. Пригнiчення активност iмунно! системи проявляеться зниженням абсолютно! й вщносно! кiлькостi Т-клiтин при частковому пщвищенш вщносно! кiлькостi «активних» Т-лiмфоцитiв. За виникнення iмунопатологiчного процесу у регуляци iмунологiчно! рiвноваги тд час тiльностi бере участь найбшьш давня система iмунно! вiдповiдi, система цитотоксичних ККК-кл^ин, що iнактивуються тд час тiльностi. Тому актуальним е дослщження особливостей функцiонування клiтинного компаркменту iмунiтету у корiв-первiсток в останнш перюд гестаци та розробка ефективних способiв корекци iмунного потенцiалу оргашзму.
Для тдвищення iмунобiологiчно! реактивностi оргашзму корiв в останнi роки з устхом використовуються вiтамiни, амiнокислоти, мжроелементи, якi мають iмуномодулюючi властивостi. У зв'язку з цим вивчення iмунотропно! ди нових комплексних препаратiв, яю мiстять вiтамiни, амiнокислоти i мжроелементи, особливо у корiв-первiсток в останнш перюд тшьносп е актуальним як у науковому так i практичному значенш
Мета дослiджень полягала у з'ясуванш впливу парентерального введення коровам-первкткам в останнiй мiсяць тiльностi в^амшно-мiнерального комплексу «Олiговiт» на стан Т- i В-клггинно! ланок iмунiтету.
Матер1ал 1 методи. Дослiдження проводилися у зимово-весняний перiод у ДГДП «Оброшине», Пустомитiвського району Львiвсько! областi на двох групах корiв-первiсток укра1нсько1 чорно-рябо! молочно! породи останнього мкяця тiльностi, якi за принципом аналопв були роздiленi на контрольну та дослщну групи по 5-7 тварин у кожнш. Коровам дослщно! групи за 14 дiб до передбачуваних родiв внутрiшньом'язово вводили вiтамiнно-мiнеральний комплекс «Оли'овгг» (KELA, Бельгш) дозою 0,5 мл на 10 кг маси тша тварини, коровам контрольно! групи вщповщно — фiзрозчин дозою 10 мл на тварину. Препарат «Олiговiт» мiстить вггамши А, D3, РР, Е, Вь В2, В4, В5, В6, В8, В12, мiкроелементи — Со, Mg, Си, Zn, Мп, а також незамiниму амiнокислоту метiонiн.
Зразки кровi для дослiджень брали з яремно! вени у корiв до рашшньо! годiвлi за 14 дiб i за 1-2 доби до передбачуваних родiв та на восьму добу тсля отелення. У стабiлiзованiй гепарином кровi визначали: загальну кiлькiсть Т-лiмфоцитiв (ТЕ-РУЛ) - у реакци спонтанного розеткоутворення (Jondal М. et а1., 1972), !х субпопуляцi! - Т-хелпери (Т^РУЛ; Суровас В. М. с соавт., 1980); "активш" Т^мфоцити (ТА-РУЛ; Wansbrough-Jones М. et а1., 1979); кiлькiсть Т-клiтин з переважно супресорною активнiстю (Тs-РУЛ) - вщшманням числа теофiлiн-резистентних Т-клiтин вщ загально! кiлькостi Т-лiмфоцитiв, В-лiмфоцити (ЕАС-РУЛ) - у реакцi! комплементарного розеткоутворення
215
(Чернушенко Е. Ф. с соавт., 1979). При тдрахунку кшькосп Т- i В^мфоциив i ïx регуляторних субпопуляцiй на фжсованих i фарбованих мазках KpoBi визначали лiмфоцити i3 низькою, середньою та високою щiльнiстю рецепторiв.
Одержат цифровi данi опрацьовано статистично з використанням програмного пакету Microsoft Excel для персональних комп'ютерiв.
Результати дослщження. Важливим етапом у розвитку iмунноï вiдповiдi органiзму тварин на дш чужорiдниx чинникiв е мiграцiя Т- i В-лiмфоцитiв iз тимусу i ккткового мозку. Кiлькiсть Т- i В^мфоцитав i ïx регуляторних субпопуляцш у кровi тварин характеризуе функщональну активнiсть iмунноï системи [5]. Результати дослщжень вiдносноï кiлькостi Т- i В^мфоцитав у периферичнiй кровi дослiджуваниx корiв наведенi в таблищ. 1з цих даних бачимо, що загальна кiлькiсть Т-лiмфоцитiв у кровi корiв контрольно1' групи за 1-2 доби до отелення була бшьшою (р<0,05), а на 8-му добу тсля родiв на 8,8 % меншою, нiж за 14 дiб до отелення. При цьому у кровi корiв контрольно1' групи за 1-2 доби до отелення виявлено меншу кшькють «нульових» Т-лiмфоцитiв (р<0,01) i встановлено тенденцiю до тдвищення кiлькостi Т-супресорiв, що призвело до зниження iмунорегуляторного iндексу.
Введення коровам дослщнох' групи препарату «Ол^овт» призводить до вiрогiдного збiльшення у кровi вiдносноï кiлькостi Т-лiмфоцитiв («активних» i теофшн-резистентних) за 1-2 доби до отелення та ТЕ- i ^ РУЛ на 8 добу тсля отелення, що свщчить про активацш Т-кл^инно1' ланки специфiчного iмунiтету. Ц змiни у складi вказаних популяцш Т-клiтин вiдбувалися за рахунок вiрогiдного зростання числа Т-лiмфоцитiв iз низькою та середньою авщшстю i зменшення кiлькостi недиференцiйованиx у функцiональному вщношент клiтин.
В-лiмфоцити значною мiрою забезпечують гуморальний iмунiтет органiзму, оскiльки синтезують специфiчнi антитiла (iмуноглобулiни), а також впливають на актившстъ деяких популяцш Т^мфоципв, беручи участь у реакщях клiтинного iмунiтету [6-8].
При дослщженш кiлькостi В-лiмфоцитiв у кровi корiв нами виявленi подiбнi змiни, що i при дослщженш Т-лiмфоцитiв. Зокрема, у кровi корiв, яким за 14 дiб до передбачуваних родiв внутрiшньом'язово вводили вiтамiнно-мiнеральний комплекс «Ол^овгт», вiдносна кiлькiсть В-лiмфоцитiв за 1-2 доби до родiв i на 8-му добу пiсля отелення була бшьша (р<0,05; р<0,01), шж у контролi. Ц змiни у кровi корiв вiдбувались за рахунок вiрогiдного зростання кiлькостi В-лiмфоцитiв iз низькою щiльнiстю рецепторiв i зменшенням числа «нульових» ЕАС-РУЛ.
Отже, проведет дослщження показали, що введення коровам в останнш перюд тiльностi вгтамшно-мшерального комплексу «Олiговiт» спричиняе пiдвищення у кровi кiлькостi Т- i В^мфоципв та сприяе зростанню ïx функцiональноï активностi за рахунок перерозподiлу рецепторного апарату iмунокомпетентниx клiтин. Вказанi змши ймовiрно можуть бути зумовленi комплексною адитивною дiею компонентiв дослiджуваного препарату на ефекторш ланки адаптивноï iмунноï вiдповiдi.
216
Таблиця
Динамжа bííhocho'í кiлькocтi Т- i B-лiмфoцитiв та ïx cyбпoпyляцiй у R-poBi __кopiв-пepвicтoк (M±m, n=5)_
Показники Групи Перюд дослщжень
14 д1б до отелення 1-2 доби до отелення 8 д1б тсля отелення
ТЕ-РУЛ, 0 К 41,8±1,4б 37,б+0,74°° 4б,4+1,74
Д 3б,2+0,8б 3б,2+1,49 39,8+0,4б**
3-5 К 34,0+1,0 39,б+0,б7 3б,8+0,58
Д 35,4+0,50 37,4+0,50 35,0+0,70
б-10 К 22,б+1,81 20,8+1,24 14,4+1,50
Д 27,8+0,58 25,0+1,84 24,8+0,8б***
M К 1,б+0,4 2,0+0,44 2,4+0,50
Д 1,0+0 1,75+0,47 1,0+0,33*
% К 58,2+1,4б б2,4+0,74° 53,б+1,74
Д б3,8+0,8б б3,8+1,49 б0,2+1,4б*
ТА-РУЛ, 0 К б9,4+0,б8 б8,б+0,б7 бб,4+1,20
Д б7,8+1,01 б3,8+0,бб** б8,2+0,58
3-5 К 21,0+1,58 22,0+0,54 22,0+0,70
Д 21,2+0,58 27,8+0,58*** 22,0+0,31
б-10 К 8,8+1,4б 9,0+0,44 11,0+0,44
Д 10,8+0,37 9,0+0,31 9,б+0,50
M К 1,0+0,33 1,0+0,33 1,0+0,33
Д 1,0+0,33 1,0+0,33 1,0+0,33
% К 30,б+0,74 31,0+0,б3 33,б+1,20
Д 32,2+1,01 37,2+0,бб*** 31,8+0,58
ТЪ, 0 К бб,8+1,01 б7,б+2,11 б9,4+1,20
Д б3,8+0,48 59,0+0,54** б2,0+0,83***
3-5 К 23,4+1,07 22,8+1,б5 21,0+0,70
Д 2б,8+0,8б 29,0+0,70*** 28,2+0,8б***
б-10 К 9,0+0,44 9,2+0,8б 8,8+0,58
Д 8,б+0,50 11,4+0,50 8,б+0,81
M К 1,33+0,33 1,5+0,5 1,0+0,33
Д 1,33+0,33 1,5+0,5 1,5+0,28
% К 33,2+1,01 32,4+0,48 30,б+1,20
Д 3б,2+0,48 41,0+0,54*** 38,0+0,83***
Ts, % К 25,0+1,б7 30,0+2,42 23,0+2,19
Д 27,б+1,07 22,б+1,8б* 22,2+1,42
1Р1 К 1,3+0,1б 1,0+0,11 1,3+0,18
Д 1,3+0,22 1,8+0,34 1,7+0,17
ЕАС-РУЛ, 0 К 73,б+0,92 71,4+0,4 75,2+0,37
Д 70,2+2,51 б9,0+0,77 70,2+1,01**
3-5 К 17,4+0,92 20,4+0,50 17,б+0,50
Д 22,б+2,24 22,8+0,73 21,0+0,70*
б-10 К 8,8+0,58 8,0+0,б3 7,2+0,58
Д 7,2+0,бб 8,0+0,44 8,б+0,50
M К - 0,б7+0,33 -
Д 1,00+0,33 1,00+0,33 1,00+0,33
% К 2б,4+0,92 28,б+0,4 24,8+0,37
Д 29,8+2,51 31,0+0,75* 29,8+1,01**
217
Висновки. Введення коровам за 14 дiб до передбачуваних родiв комплексу в^аммв та мжроелеменив у формi препарату «Ол^овт» призводить до вiрогiдного збiльшення у кровi вiдносноï кiлькостi Т-лiмфоцитiв (загальних, «активних» i теофiлiн-резистентниx) i В^мфоциив. При цьому встановлено пiдвищення ïx функцiональноï активностi за рахунок перерозподшу рецепторного апарату iмунокомпетентниx клiтин - зростання числа Т^мфоциив iз низькою та середньою авщшстю i зменшення кшькосп «нульових» клiтин.
Перспективи подальших дослщжень. З'ясування впливу вггамшно-мiнерального комплексу на бiоxiмiчний профiль кровi у корiв-первiсток.
Лггература
1. Вщур О.1. Розеткоутворюючi клiтини кровi телят при вакцинаци та застосуваннi препарату "Антоксан" / О. I. Вщур, // Ветеринарна бютехнолопя: Бюл. 1ВМ УААН. - Киïв, 2004. - № 5. - С. 9-15.
2. Лешовська Н.М., Брода Н.А., Мудрак Д.М., Рацький M.I. Вплив в^аммв А, D3, Е, селешту натрiю та iнтерферону на вмют вiтамiнiв А та Е у плазмi кровi корiв i телят. Бюлопя тварин. — 2010. — Т. 12 № 2. — C. 156-159.
3. Дементьева Е. С. Показатели иммуноморфологического статуса у коров в разные сроки стельности / Е. С. Дементьева, О. М. Горшкова // Вестник НГАУ. — Новосибирск, 2010. — № 3 — С. 93-97.
4. Vinuesa C.G., C. de Lucas, Cook M.C. Clinical implications of the specialised B cell response to polysaccharide encapsulated pathogens// Postgrad. Med. J. — 2001. — Vol. 77. — P. 562-569.
5. Брода Н. А. Вплив препарату «Ол^овт», введенного коровам-первкткам в останнш мюяць тшьносп, на яюсть молозива / Н. А. Брода // Ветеринарна бютехнолопя. — 2012. — № 21. — С. 199-202.
6. Брода Н. А., Вщур О. I., Рацький М. I., Лешовська Н. М., Крушельницька З. I. Гуморальш фактори захисту оргашзму корiв та ïx телят за ди препарату «Ол^овгг» // Бюлопя тварин. — 2011.
7. Ьмунодефщити у тварин та ï'xra профилактика / !В. Кичун, ОХ Вщур, !В. Скорохщ, В.Г. Квачов // Тваринництво Украши. - 2001. - № 9-10. - С. 1819.
8. Oberdan Leo, Cunningham A., Stern P. L. Vaccine immunology // Understanding Modern Vaccines: Perspectives in Vaccinology. — Ch. 2. — 2011. — Vol. 1, Issue 1. — P. 25-59.
Рецензент - д.вет.н., професор Гуфрш Д.Ф.
218
