CC BY
9stomatologiy. 2009; 3:6-10.
11. Levitskiy A. P., Denga O. V., Makarenko O. A., Demyanenko S. A., Rossachanova L. N., Knava O. E. Biokhimiches-kie markery vospaleniya tkaney rotovoy polosti: metodicheskie reko-mendatsii [Biochemical markers of inflammation of oral cavity tissue: method guidelines]. Odessa, KP OGT, 2010:16.
12. Levitskiy A. P., Makarenko O. A., Selivanskaya I. A., Rossachanova L. N., Denga O. V., Pochtar V. N., Skidan K. V., Goncha-ruk S. V. Fermentativnyy metod opredeleniya disbioza polosti rta dlya skrininga pro- i prebiotikov: metodicheskie rekomendatsii [Enzymatic methods for determination of oral dysbiosis for screening pro- and pre-biotics: method guidelines]. Kiev, GFC, 2007: 26.
13. Levitskiy A. P., Denga O. V., Selivanskaya I. A., Makarenko O. A., Demyanenko S. A., Tsiselskiy Yu. V. The method of estimation of the degree of dysbiosis (dysbacteriosis) of organs and tissues. Patent of Ukraine 43140. IPC (2009) G01N 33/48. Application number u 200815092. Date of filling: 26.12.2008. Publ.: 10.08.2009. Bul. № 15.
14. Sokolova I. I., Khlystun N. L., Levitskiy A. P. The role of hyaluronidase at the pathogenesis of inflammatory and destructive diseases of periodontium. Visnyk stomatologiy. 2012; 6 (The extra issue):125.
Поступила 15.02.13
УДК 616.731:612.045
О. А. Макаренко, д. биол. н., И .А. Селиванская, к. тех. н., А. В. Скиба, к. мед. н., Л. Н. Хромагина, к. биол. н., О. Э. Кнава, В. Я. Скиба, д. мед. н.
ГУ «Институт стоматологии НАМН»
СОСТОЯНИЕ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ РТА КРЫС С САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ 2 ТИПА ПОСЛЕ АППЛИКАЦИЙ ОРАЛЬНЫХ ФИТОГЕЛЕЙ
У крыс воспроизводили сахарный диабет 2 типа с помощью протамина и определяли в слизистой щеки и языка уровень биохимических маркеров воспаления (содержание МДА и активность эластазы), а также состояние антиокси-дантной системы по уровню активности каталазы и индексу АПИ. Установлено повышение уровня маркеров воспаления и снижение активности каталазы и индекса АПИ. У крыс с диабетом, которым делали аппликации на слизистую фитогелей, содержащих лизоцим, кверцетин или экстракты из листьев винограда и ягод черники, нормализовались все биохимические показатели, причем в большей степени, после аппликаций фитогелей с растительными экстрактами.
Ключевые слова: диабет, слизистая полости рта, воспаление, антиоксиданты, лизоцим, кверцетин, виноград, черника.
О. А. Макаренко, I. О. Селiванська, О. В. Скиба, Л. М. Хромагта, О. Е. Кнава, В. Я. Скиба
ДУ «1нститут стоматологи НАМН»
СТАН СЛИЗОВО1 ОБОЛОНКИ ПОРОЖНИНИ РОТА ЩУР1В З ЦУКРОВИМ Д1АБЕТОМ 2 ТИПУ П1СЛЯ АПЛ1КАЦ1Й ОРАЛЬНИХ Ф1ТОГЕЛ1В
У щурiв вiдтворювали цукровий дiабет 2 типу за допомо-гою протамта та визначали в слизовт щоки i язика рiвень бiохiмiчних маркерiв запалення (вмкт МДА i активтсть
еластази), а також стан антиоксидантноЧ системи за pie-нем aKmueHocmi каталази та тдекса АП1. У щуpiв з дiабе-том, яким робили аплтацп на слизову фiтогелiв, що мiс-тять лiзоцим, кверцетин або екстракти з листя винограду i ягiд чорнищ, ноpмалiзувались yd бiохiмiчнi показники, причому в быьшш мipi тсля аплтацш фiтогелiв з рослин-ними екстрактами.
Ключовi слова: дiабет, слизова порожнини рота, запалення, антиоксиданти, лiзоцим, кверцетин, виноград, чорниця.
O. A. Makarenko, I. A. Selivanskaja, A. V. Skyba,
L. N. Khromagina, O. E. Knava, V. Ya. Skyba
State Establishment "The Institute of Stomatology of the NAMS"
THE STATE OF ORAL MUCOUS MEMBRANE OF RATS WITH II TYPE DIABETES MELLITUS AFTER THE APPLICATIONS OF ORAL PHYTO-GELS
The formulations of the oral phytogels, containing bioactive substances of anti-inflammatory anti-dysbiotic effect, have been recently elaborated in the Institute of Stomatology of the NAMS. The aim of this investigation is to study the state of OMM of rats with diabetes mellitus with the help of bio-chemical markers and the influence of the applications of oral phytogels, containing some bioactive substances (lysozyme from ovalbumin, quercethin, powder from wine leaves, aqueous extract from bilberry) on it.
II type diabetes mellitus was simulated with protamine in rats and the level of biochemical markers of inflammation (the contents of malonic dialdehyde and activity of elastase), as well as the state of antioxidant system by the level of catalase activity and index API, were determined in the mucous membrane of cheek and tongue. The growth of the level of markers of inflammation and the decrease in catalase activity and index API were revealed. All biochemical indices, at that in greater degree after the applications with phytogels with vegetative extracts, have normalized in rats with diabetes, which undergone the applications of phytogels, containing lysozyme, quercethin or extracts from wine leaves and bilberry, on mucous membrane. In the mechanism of therapeutic and preventive effect of phytogels their possibility to increase the level of antioxidant prevention may lie.
Key words: diabetes, oral mucous membrane, inflammation, an-tioxidants, lysozyme, quercethin, wine, bilberry.
Ранее нами было показано развитие воспалительно-дистрофических и дисбиотических процессов в тканях полости рта (СОПР) при экспериментальном сахарном диабете 1 типа [1] и в клинике у больных сахарным диабетом 2 типа [2].
В последнее время в Институте стоматологии НАМН разработаны рецептуры оральных фитогелей, содержащих биологически активные вещества и обладающих противовоспалительным и антидисбиоти-ческим действием [3].
Цель настоящего исследования. Изучение с помощью биохимических маркеров состояния СОПР крыс с сахарным диабетом и влияние на него аппликаций оральных фитогелей, содержащих ряд биологически активных веществ (БАВ).
Материалы и методы исследования. В работе были использованы следующие БАВ: лизоцим из яичного белка (производство Дания), кверцетин (производство Германия), мука из виноградных листьев
(производство НПА «Одесская биотехнология», Украина) и водный экстракт из ягод черники (с концентрацией экстрактивных веществ 4,9 %). Все эти БАВ вводились в состав фитогелей на основе 3 %-ной кар-боксиметилцеллюлозы, натриевой соли.
Опыты были проведены на 42 белых крысах линии Вистар (самцы, 5 месяцев, живая масса 260±10 г). Из этого числа крыс у 35 воспроизводили сахарный
диабет 2 типа (СД2) по методу Ульянова и Тарасова [4] путем внутримышечного введения протамин сульфата в дозе 18 мг/кг дважды в день в течение двух недель. Распределение крыс по группам представлено в табл. 1. Аппликации фитогелей на СОПР начинали с первого дня опыта и продолжали в течение 2-х недель.
Таблица 1
Группы крыс с экспериментальным СД2, получавшие разные оральные фитогели (в каждой группе 7 крыс)
№ Группа Препарат Доза на 1 крысу в день
1 Контроль (норма) - -
2 СД2 + плацебо Гель КМЦ 0,5 мл
3 СД2 + лизоцим Гель с яичным лизоцимом 2 мг/мл 0,5 мл 1 мг лизоцима
4 СД2 + кверцетин Гель с кверцетином 2 мг/мл 0,5 мл 1 мг кверцетина
5 СД2 + виноград Гель с мукой из виноградных листьев 20 мг/мл 0,5 мл 10 мг муки
6 СД2 + черника Водный экстракт из ягод черники 2 мл с питьевой водой
Эвтаназию животных осуществляли на 15-й день под тиопенталовым наркозом (20 мг/кг) путем тотального кровопускания из сердца. Иссекали слизистую щеки и десны и хранили до исследования при минус 30 °С.
В гомогенате СОПР (50 мг/мл 0,05 М трис НС1 буфера рН 7,5) определяли уровень маркеров воспаления [5]: содержание малонового диальдегида (МДА) и активность эластазы. В качестве показателя
состояния антиоксидантной системы использовали определение активности каталазы [5] и по соотношению активности каталазы и концентрации МДА рассчитывали антиоксидантно-прооксидантный индекс АПИ [5].
Результаты исследований и их обсуждение.
В табл. 2 и 3 представлены результаты определения в СОПР маркеров воспаления - МДА и эластазы.
Таблица 2
Влияние оральных фитогелей на уровень маркеров воспаления в слизистой щеки крыс с сахарным диабетом 2 типа (в каждой группе 7 крыс)
№ Группа МДА, моль/кг Эластаза, мк-кат/кг
1 Контроль (норма) 27,8 ± 0,6 38 ± 3
2 СД2 + плацебо 37,3 ± 1,2 р<0,001 55 ± 4 р<0,01
3 СД2 + лизоцим 35,7 ± 1,4 р<0,01; р!>0,3 48 ± 2 р<0,05; р!>0,05
4 СД2 + кверцетин 29,3 ± 0,7 р>0,05; р2<0,01 46 ± 4 р>0,05; р!>0,05
5 СД2 + виноград 30,3 ± 0,6 р<0,05; р2<0,01 46 ± 2 р<0,05; р!<0,05
6 СД2 + черника 31,9 ± 0,6 р<0,01; р2 <0,01 43 ± 3 р>0,1; р!<0,05
Примечание : р - <0,05 в сравнении с группой № 1; р1 - <0,05 в сравнении с группой № 2.
Таблица 3
Влияние оральных фитогелей на уровень маркеров воспаления в слизистой языка крыс с сахарным диабетом 2 типа (в каждой группе 7 крыс)
№№ Группа МДА, моль/кг Эластаза, мк-кат/кг
1 2 3 4
1 Контроль (норма) 5,28 ± 0,24 53 ± 2
2 СД2 + плацебо 9,85 ± 0,33 р<0,001 62 ± 4 р<0,05
Продолжение таблицы 3
3 СД2 + лизоцим 9,29 ± 0,19 р<0,001; р1>0,05 54 ± 4 р<0,8; р1>0,1
4 СД2 + кверцетин 6,50 ± 0,48 р>0,05; р1<0,05 55 ± 4 р>0,05; р1>0,1
5 СД2 + виноград 8,10 ± 0,29 р<0,001; р1<0,05 56 ± 5 р>0,05; р1>0,3
6 СД2 + черника 6,41 ± 0,28 р<0,05; р1<0,05 55 ± 2 р>0,3; р1<0,05
Примечание : р - <0,05 в сравнении с группой № 1; р1 - <0,05 в сравнении с группой № 2.
Таблица 4
Влияние оральных фитогелей на активность каталазы и индекс АПИ в слизистой щеки крыс с сахарным диабетом 2 типа (в каждой группе 7 крыс)
№ Группа Каталаза, мкат/кг АПИ, ед.
1 Контроль (норма) 5,06 ± 0,16 1,82 ± 0,10
2 СД2 + плацебо 4,82 ± 0,26 р>0,05 1,29 ± 0,11 р<0,01
3 СД2 + лизоцим 5,01 ± 0,21 р>0,6; р1>0,3 1,40 ± 0,05 р<0,05; р1>0,3
4 СД2 + кверцетин 5,73 ± 0,25 р<0,05; р1<0,05 1,98 ± 0,12 р>0,3; р1<0,01
5 СД2 + виноград 5,02 ± 0,21 р>0,6; р1>0,3 1,66 ± 0,18 р>0,3; р1>0,05
6 СД2 + черника 5,41 ± 0,28 р>0,3; р1>0,2 1,69 ± 0,13 р>0,3; р1<0,05
Примечание : р - <0,05 в сравнении с группой № 1; р1 - <0,05 в сравнении с группой № 2.
Таблица 5
Влияние оральных фитогелей на активность каталазы и индекс АПИ в слизистой языка крыс с сахарным диабетом 2 типа (в каждой группе 7 крыс)_
№ Группа Каталаза, мкат/кг АПИ, ед.
1 Контроль (норма) 4,06 ± 0,11 7,69 ± 0,24
2 СД2 + плацебо 3,80 ± 0,10 р>0,05 3,86 ± 0,29 р<0,001
3 СД2 + лизоцим 4,08 ± 0,12 р>0,8; р1>0,05 6,34 ± 0,27 р<0,01; р1<0,001
4 СД2 + кверцетин 4,12 ± 0,10 р>0,3; р1<0,05 4,39 ± 0,21 р<0,001; р1>0,1
5 СД2 + виноград 3,89 ± 0,16 р>0,3; р1>0,3 4,80 ± 0,22 р<0,01; р1<0,05
6 СД2 + черника 4,08 ± 0,07 р>0,8; р1>0,05 6,36 ± 0,25 р<0,05; р1<0,01
Примечание : р - <0,05 в сравнении с группой № 1; р1 - <0,05 в сравнении с группой № 2.
Как видно из этих данных, у крыс с СД2 достоверно возрастает в слизистых щеки и языка уровень обоих маркеров, свидетельствующий о развитии воспалительно-дистрофических процессов в СОПР («диабетогенный стоматит»).
У крыс с СД2, получавших аппликации фитогеля с лизоцимом, отмечается лишь тенденция к снижению содержания МДА и активности эластазы. У крыс, получавших фитогель с кверцетином, достоверно снижается содержание МДА и проявляется четкая тенденция к снижению активности эластазы. У крыс с СД2, получавших аппликации фитогелей с растительными экстрактами (из листьев винограда или ягод
черники) достоверно снижается уровень обоих маркеров воспаления в слизистой щеки и содержание МДА в слизистой языка.
Полученные нами данные свидетельствуют о лечебно-профилактическом действии при сахарном диабете 2 типа оральных аппликаций мукозальных фито-гелей, причем более выраженное - при использовании фитогелей с растительными экстрактами, содержащими значительное количество полифенолов, в том числе и биофлавоноидов.
В табл. 4 и 5 представлены результаты определения активности каталазы и индекса АПИ. Из этих данных видно, что при СД2 достоверно снижается в
СОПР индекс АПИ (в 1,5-2 раза) и наблюдается тенденция к снижению активности каталазы. Аппликации фитогеля с лизоцимом достоверно увеличивают лишь индекс АПИ в слизистой языка, в остальных случаях наблюдается тенденция к изменению биохимических показателей антиоксидантной защиты.
Аппликации фитогеля с кверцетином достоверно повышают в обеих тканях активность каталазы, а в слизистой щеки и индекс АПИ.
Аппликации гелей с растительными экстрактами достоверно повышают в СОПР индекс АПИ и проявляют тенденцию к повышению активности каталазы.
Эти данные свидетельствуют о способности фи-тогелей, содержащих растительные полифенолы или лизоцим, повышать уровень антиоксидантной защиты, что может способствовать проявлению лечебно-профилактического эффекта при диабетогенном стоматите.
Выводы. 1. При экспериментальном сахарном диабете 2 типа в СОПР развиваются воспалительно-дистрофические процессы («диабетогенный стоматит»).
2. Аппликации оральных фитогелей, содержащих лизоцим, кверцетин или экстракты из листьев винограда и ягод черники, оказывают лечебно-профилактический эффект при «диабетогенном стоматите».
3. В механизме лечебно-профилактического действия фитогелей может лежать их способность повышать уровень антиоксидантной защиты.
Список литературы
1. Лечебно-профилактическое действие оральных гелей с полифенолами при экспериментальном сахарном диабете / А. П. Левицкий, Ю. В. Цисельский, О. Ю. Билык [и др.] // Вюник морсь-ко! медицини. - 2012. - № 2 (56). - С. 88-92.
2. Використання пребютигав для профшактики стоматолоп-чних ускладнень у хворих на цукровий дiабет: метод. рекомендацп / А. П. Левицький, Ю. В. Цюельський, С. О. Дем'яненко [та ш.] -Одеса, 2010. - 18 с.
3. Применение мукозальных гелей в стоматологии : метод. рекомендации / А. П. Левицкий, О. А. Макаренко, И. А. Селиван-ская [и др.] - Одесса, 2012. - 20 с.
4. Ульянов А. М. Инсулярная система животных при хроническом дефиците гепарина / А. М. Ульянов, Ю. А. Тарасов // Вопр. мед. химии. - 2000. - т. 46, № 2. - С. 149-154.
5. Биохимические маркеры воспаления тканей ротовой полости: метод. рекомендации / А. П. Левицкий, О. В. Деньга, О. А. Макаренко [и др.] - Одесса, 2010. - 16 с.
REFERENCES
1. Levitskiy A. P., Tsiselskiy Yu. V., Bilyk O. Yu. i dr. The
therapeutic and prophylactic action of oral gels with polyphenols on experimental diabetes mellitus. Visnyk morskoy meditsiny. 2012; 2(56): 88-92.
2. Levitskiy A. P., Tsiselskiy Yu. V., Demyanenko S. A. ta in.
Vukorustanya prebiotikov dlya profilaktiki stomatologichnykh usklad-nen u khvorykh na cukrovyy diabet: metodicheskie rekomendatsii [The use of prebiotics for the prophylaxis of stomatological complications in patients with diabetes mellitus: methodical recommendations].Оdеssа, KP OGT, 2010:18.
3. Levitskiy A. P., Makarenko O. A., Selivanskaya I. A., i dr. Primeneniye mukozalnykh geley v stomatologiy: metodicheskie rekomendatsii [The use of mucosal gels in dentistry].Оdеssа, KP OGT, 2012:20.
4. Ulyanov A. M., Tarasov Yu. A. The insular system of animals at chronic deficiency of heparin. Vopr. med. khimiy. 2000; 46(2):149-154.
5. Levitskiy A. P., Denga O. V., Makarenko O. A. i dr. Bi-
okhimicheskie markery vospaleniya tkaney rotovoy polosti: metodicheskie rekomendatsii [Biochemical markers of inflammation of oral cavity tissue: method guidelines]. Odessa, KP OGT, 2010:16.
Поступила 15.02.13
УДК 517.112:612.8+615.462.03
О. А. Макаренко, д. биол. н.1, И. И. Соколова, д. мед. н.2, Н. Л. Хлыстун2, К. В. Скидан, к. мед. н.2
1 ГУ «Институт стоматологии НАМН» 2ГУ «Харьковский национальный медицинский университет»
ВЛИЯНИЕ ОРАЛЬНОГО ФИТОГЕЛЯ С ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТОЙ НА РАЗВИТИЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО СТОМАТИТА
Аппликации на слизистую щеки или языка крыс пчелиного яда или протамина вызывают развитие воспаления, о чём свидетельствует увеличенная активность эластазы и, в меньшей степени, увеличение содержания МДА. Аппликации на слизистые оболочки полости рта фитогеля с гиалу-роновой кислотой в дозе 0,02 мг/кг в течение 2 дней оказывают противовоспалительное действие. Ключевые слова: стоматит, гиалуровноая кислота, эла-стаза, МДА, фитогель.
О. А. Макаренко1,1.1. Соколова2, Н. Л. Хлистун2, К. В. Скидан2
1 ДУ «Институт стоматологи НАМН» 2ДУ «Харювський нацюнальний медичний ушверситет»
ВПЛИВ ОРАЛЬНОГО Ф1ТОГЕЛЮ З Г1АЛУРОНОВОЮ КИСЛОТОЮ НА РОЗВИТОК ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО СТОМАТИТУ
Апл^ацп на слизову оболонку щоки або язика щурiв бджо-линоï отрути або протамту викликають розвиток запа-лення, про свiдчать збыьшення активностi еластази i, в меншш мiрi, збыьшення вмкту МДА. Аплжацп на слизовi оболонки фто гелю з гiалуроновою кислотою в дозi 0,02 мг/кг на протязi 7 дшв здтснюе протизапальну дю. Ключовi слова: стоматит, гiалуронова кислота, еластаза, МДА, фто гель.
O. A Makarenko1,1.1. Sokolova2, N. L. Khlystun2, K. V. Skidan2
1 State Establishment "The Institute of Stomatology of the NAMS"
2 State Establishment "Kharkov National Medical University"
THE INFLUENCE OF ORAL PHYTOGEL WITH HYALURONIC ACID UPON THE DEVELOPMENT OF EXPERIMENTAL STOMATITIS
Hyaluronic acid is glycosamineglycane and composes the basis of intracellular substance of conjunctive tissue along with collagen. Its optimal contents in tissues provides with the required level of penetrability and resistance of tissue to the development of inflammation. As at stomatites the intensification of the proc-
