Научная статья на тему 'Состояние системы антиоксидантной защиты в головном мозге крыс при разных режимах физических нагрузок'

Состояние системы антиоксидантной защиты в головном мозге крыс при разных режимах физических нагрузок Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
209
56
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
КРОВЬ / ГОЛОВНОЙ МОЗГ / ФЕРМЕНТЫ / ФИЗИЧЕСКИЕ НАГРУЗКИ / BLOOD / BRAIN / ENZYMES / PHYSICAL ACTIVITY

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Корнякова Вера Валерьевна

Интенсивные физические нагрузки приводят к интенсификации в головном мозге свободнорадикальных процессов и торможению активности ферментов антиоксидант-ной системы. Оптимальные физические нагрузки не снижают эффективность анти-оксидантной защиты в головном мозге.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Корнякова Вера Валерьевна

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Antioxidant defense system in the brain of rats at different modes of physical activities

Intensive physical activities lead to intensification in the brain free radical processes and inhibition of enzymes activity of the antioxidant system. Optimal physical activities do not reduce efficiency of antioxidant protection in the brain.

Текст научной работы на тему «Состояние системы антиоксидантной защиты в головном мозге крыс при разных режимах физических нагрузок»

БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ ОМСКИЙ НАУЧНЫЙ ВЕСТНИК № 1 (108) 2012

В. И. Фисинн, В. В. Щеглова, Н. И. Клейменова. — 3-е изд. перераб. и доп. — М., 2003. — 456 с.

4. Шевелев, Н. С. Морфофункциональные особенности слизистой оболочки рубца жвачных животных / Н. С. Шевелев,

А. Г. Грушкин // Сельскохозяйственная биология. — 2003. — № 6. - С. 15-22.

5. Jc)iiany, J .P. Role de lecoysteme du rumen dans la digestion des aliments chez le ruminant. C. R. Acad. Agr. Fr., 1998, Vol. 84. — № 1. — P. 121 — 134.

6. Алиев, А. А. Обмен веществ у жвачных животных /

А А. Алиев. — М. : Инженер, 1997. — 419 с.

7. Пивняк, И. Г. Микробиология пищеварения жвачных /

И. Г. Пивняк, Б. В. Тараканов. — М. : Колос, 1982. — 274 с.

8. Долгов, И. А. Влияние аминокислот на протеолитическую активность микроорганизмов рубца жвачных / И. А. Долгов, Б. В. Тараканов // Физиология и биохимия белкового питания сельскохозяйственных животных : научные труды. — Том XIII. — Боровск, 1974. —С. 241—248.

9. Тараканов, Б. В. Физиологическая роль микробиоты в рубцовом пищеварении (обзор) / Б. В. Тараканов // Сельскохозяйственная биология. —2005. — № 6. — С. 9 — 13.

10. Шевелев, Н. С. О морфофункциональных особенностях микробиоты рубца жвачных животных и роли целлюлозо-литических бактерий в рубцовом пищеварении / Н. С. Шевелев, А. Г. Грушкин // Сельскохозяйственная биология. — 2008. — № 2. — С. 12—19.

11.Dehority В A., GnbbJ. Bacterial population adherent to the epithelium of the roof of the dorsal rumen in sheep. Appl. and Environ. Microbiol., 1981, Vol. 41, № 6. — Р 1424 — 1427.

12. McCowan R.P., Cheng K.-J., Costerton J.W. Adherent bacterial populations on the bovine rumen wall: distribution patterns of adherent bacteria. Appl. and Environ. Microbiol., 1980, Vol 1. — Р. 233—241.

13. Zitnan R., Bomba A., Kolodzieyski L. е.а. Scanning electron microscopical studies into the development of rumen epithelium and adherent bacteria in suckling lambs. Folia Veter. Kosice, 1994, Vol 38, № S. — Р 51—56.

14. Тараканов, Б. В. Нормальная микрофлора преджелудков жвачных / Б. В. Тараканов // Сельскохозяйственные животные, физиологические и биохимические параметры организма. — Боровск, 2002. — С. 259 — 334.

15. Бергер, Х. Научные основы питания с.-х. животных / Х. Бергер, Х-А Кетц ; пер. с нем., к. с.-х. н. А М. Холманова. — М. : Колос, 1973. - С. 24-106.

16. Ёрсков, Э. Р. Протеиновое питание жвачных животных /

Э. Р. Ёрсков ; пер. с англ. Э. В. Овчаренко и Г. Н. Жидкобли-новой ; под ред. и с предисл. В. И. Георгиевского. — М. : Агропромиздат, 1985. — 183 с.

17. Курилов, Н. В. Физиология и биохимия пищеварения жвачных / Н. В. Курилов, А П. Кроткова. — М. : Колос 1971. — 432 с.

18. Протеиновые ресурсы и их рациональное использование при кормлении сельскохозяйственных животных и птицы / П. Ф. Шмаков [и др.]. — Омск : Вариант-Омск, 2008. — 488 с.

19. Алиев, А. А. Экспериментальная хирургия : учеб. пособие / А. А. Алиев. — 2-е изд., доп., перераб. — М. : Инженер, 1998. — 445 с.

20. А. с. 1687257 Способ определения протеолиза в желудке жвачных животных / А. Я Рябиков, А. Н. Симикин. —

№ 4652696 ; заявл. 20.02.89 ; опубл. 01.07.91, Бюл. № 40.

РЯБИКОВ Анатолий Яковлевич, доктор биологических наук, профессор кафедры анатомии, гистологии, физиологии и патологической анатомии. ОКТЯБРЕВ Николай Михайлович, аспирант кафедры анатомии, гистологии, физиологии и патологической анатомии.

Адрес для переписки: [email protected]

Статья поступила в редакцию 22.11.2011 г.

© А. Я. Рябиков, Н. М. Октябрев

УДК 612.015.3:616.831-092.9 В. В. КОРНЯКОВА

Омская государственная медицинская академия

СОСТОЯНИЕ СИСТЕМЫ АНТИОКСИДАНТНОЙ ЗАЩИТЫ В ГОЛОВНОМ МОЗГЕ КРЫС ПРИ РАЗНЫХ РЕЖИМАХ ФИЗИЧЕСКИХ НАГРУЗОК______________________________

Интенсивные физические нагрузки приводят к интенсификации в головном мозге свободнорадикальных процессов и торможению активности ферментов антиоксидант-ной системы. Оптимальные физические нагрузки не снижают эффективность анти-оксидантной защиты в головном мозге.

Ключевые слова: кровь, головной мозг, ферменты, физические нагрузки.

Экстремальные физические нагрузки способны приводить к нарушению процессов адаптации, что сопровождается нарушением гомеостаза и возникновением предпатологических и патологических изменений в отдельных органах и организме в целом [1]. Одним из функциональных состояний, определя-

ющих уровень работоспособности в условиях интенсивной или длительной физической либо умственной работы, является утомление, развивающееся вследствие структурных и функциональных нарушений в различных органах, в частности, в головном мозге, и сопровождающееся изменением

психофизиологического состояния организма [2]. Однако в современной литературе отсутствуют данные о пусковых механизмах утомления в мозге и состоянии в нем антиоксидантной защиты при данном явлении.

Целью исследования явилось изучение изменения активности ферментов АОС в головном мозге крыс при физических нагрузках разной интенсивности.

Материалы и методы. Эксперимент проводили на базе Центральной научно-исследовательской лаборатории Омской государственной медицинской академии на 55 белых крысах-самцах массой 240+20 г. Исследуемые животные были разделены на 4 группы. Первую из них составляли интактные крысы (И, п=10); вторую — контрольные крысы (К, п=15), которые подвергались плаванию без груза по усредненному времени (3 — 7 мин) через день в течение пяти недель эксперимента. В третью группу вошли животные с оптимальным режимом физической нагрузки (ОН, п=15), которые подвергались принудительному плаванию с грузом, равным 10 % от массы тела, в течение пяти недель через день. На крысах четвертой группы (ИН, п=15) моделировали интенсивные физические нагрузки принудительным плаванием с грузом в течение первых трех недель эксперимента через день, последние две недели — ежедневно. Критерием ограничения времени плавания у крыс третьей и четвертой экспериментальных групп служило опускание животного на дно бассейна, после которого оно не могло самостоятельно подняться на поверхность. У всех животных фиксировали время плавания, периоды активного плавания, замирания, выпрыгивания, ныряния.

Плавание крыс проводили в бассейне диаметром 45 см, глубиной 60 см, с температурой воды 28 — 30 оС, а воздуха в виварии — 19 — 21 оС. Исследования проводились в соответствии с требованиями Европейской конвенции по защите экспериментальных животных. По окончании эксперимента в плазме крови крыс забирали кровь и определяли концентрацию лактата, урата и глюкозы унифицированными методами исследования. Из головного мозга готовили 20 % гомогенаты с использованием 0,15 М раствора хлорида калия, в которых определяли содержание белка биуретовым методом, активность супероксиддисмутазы (СОД) по Т. В. Сирота [3], глутатионредуктазы (ГлР) и глутатионперокси-дазы (ГлПО) — по С. Н. Власовой и соавт. [4], глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ) — по Д. В. Черданцеву [5].

Для биохимических исследований использовали реактивы фирм «Ольвекс» (Россия), «Но8риех»

(Швейцария), «ЯапсЗох» (Великобритания). Результаты исследования обработаны статистически с помощью программы ЗРЗБ 13.0. Статистическая обработка осуществлялась с использованием непараметрического критерия Манна —Уитни. Достаточным считался уровень значимости р<0,05.

Результаты и их обсуждение. Полученные нами данные свидетельствуют о том, что экспериментальные животные контрольной группы и подвергнутые ОН незначительно отличаются по биохимическим показателям крови и гомогенатов головного мозга от интактных крыс. Однако следует отметить, что плавание без груза сопровождается увеличением уровня лактата в крови контрольных крыс [на 37,6 % по сравнению с интактными животными (Р = 0,003)], что свидетельствует об активации у них процессов анаэробного гликолиза. У крыс группы К это не сопровождается энергетическим дефицитом и усилением окисления липидов. Наблюдается лишь незначительное снижение в крови данных животных концентрации глюкозы (на 3,0 %, Р = 0,57) и увеличение Р-гидроксибутирата (на 22,2%, Р = 0,11) по сравнению с аналогичными показателями у интакт-ных крыс (табл. 1). Несмотря на усиление процессов анаэробного гликолиза, у контрольных крыс не происходит истощения антиоксидантной системы в ткани головного мозга.

Плавание в режиме ОН сопровождается возрастанием уровня лакцидемии (на 40,0 %, Р = 0,002 по сравнению с аналогичным показателем у животных группы И). У крыс группы ОН увеличивается тенденция к снижению уровня глюкозы в крови (на 6,7%; Р = 0,46), а содержание Р-гидроксибутирата статистически значимо возрастает (на 29,6 %; Р = 0,01) по сравнению с аналогичными показателями у ин-тактных крыс. Вместе с тем плавание в режиме ОН не сопровождается усиленной активацией ксантин-оксидазной реакции, о чем свидетельствует лишь тенденция к нарастанию урата в крови крыс данной группы [на 38,1 % (Р = 0,06) по сравнению с аналогичным показателем у интактных животных]. Однако данные метаболические перестройки сопровождаются напряжением АОС в тканях головного мозга. У крыс группы ОН отмечается снижение активности СОД (на 12,6 %; (Р = 0,08)), ГлПО (на 20,7 %; (Р = 0,11)), ГлР (на 12,5 %; (Р = 0,09)) по отношению к интактным крысам (табл. 2).

Интенсивные физические нагрузки приводят к резкому увеличению в крови уровня молочной кислоты [ на 83,5 % (Р = 0,0001), 33,3 % (Р = 0,0001) и 31,1 % (Р = 0,003) по сравнению с аналогичными параметрами у животных групп И, К и ОН соответственно], что указывает на интенсификацию реакций анаэроб-

Таблица 1

Биохимические показатели крови крыс интактных (И), контрольных (К), подвергнутых оптимальным нагрузкам (ОН) и интенсивным нагрузкам (ИН), М+т, п=10-5

Показатели И К ОН ИН

Глюкоза, ммоль/л 8,04+0,60 7,80+0,45 7,50+0,22 6,44+0,35 и, к, он

Лактат, ммоль/л 5,95+0,32 8,19+0,49 и 8,33+0,60 и 10,92+0,45 и, к, он

[3-гидроксибутират, ммоль/л 81+5 99+9 105+6 и 113+10 и

Урат, мкмоль/л 75,9+6,2 79,2+6,4 104,8+10,5 150,2+16,4 и, к, он

Примечание. Здесь и в табл. 2: и — различия статистически значимы по сравнению с крысами интактными, к — с контрольными, он — с подвергнутыми ОН.

ОМСКИЙ НАУЧНЫЙ ВЕСТНИК № 1 (108) 2012 БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ

БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ ОМСКИЙ НАУЧНЫЙ ВЕСТНИК № 1 (108) 2012

Таблица 2

Биохимические показатели гомогенатов головного мозга крыс интактных (И), контрольных (К), подвергнутых оптимальным нагрузкам (ОН) и интенсивным нагрузкам (ИН), М±т, п=10

Показатели И К ОН ИН

Супероксиддисмутаза, Ед СОД/ мг белка 10,93+0,37 9,87+0,27 9,55+0,61 7,64+0,35 и, к, он

Глутатионпероксидаза, МЕ/мг белка 164+13 175+9 130+15 79+8 и, к, он

Глутатионредуктаза, МЕ/мг белка 96,3+5,8 89,6+7,3 84,3+4,1 79,5+1,9 и

Глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназа, МЕ/г белка 38,0+2,8 38,9+1,8 38,6+2,4 37,4+2,7

ного гликолиза, вызванную недостаточной обеспеченностью тканей кислородом. В этих условиях развивается дефицит углеводов, уровень глюкозы в плазме крови крыс группы ИН статистически значимо снижается [ на 19,9 % (Р = 0,036), 17,4 % (Р = 0,042), 14,1 % (Р = 0,028) по сравнению с аналогичным показателем у животных групп И, К и ОН соответственно]. Вследствие недостаточной эффективности процессов энергообеспечения у крыс группы ИН усиливается окисление в тканях липидов. Тенденция к нарастанию концентрации Р-гидроксибутирата в крови животных группы ИН увеличивается, его содержание на 39,5 % (Р = 0,01) превышает аналогичный параметр у интактных крыс. Развившиеся в организме крыс группы ИН лакто- и кетоацидоз вызывают усиленный катаболизм пуриновых мононуклеотидов до мочевой кислоты. Концентрация урата в крови крыс группы ИН увеличивается на 97,9 % (Р = 0,0001), 89,6 % (Р = 0,0001) и 43,3 % (Р = 0,01) относительно данного показателя у животных групп И, К и ОН соответственно (табл. 1).

Катаболизм пуринов у крыс группы ИН сопряжен с активацией перекисного окисления липидов и истощением АОС в ткани головного мозга. Так, активность СОД в головном мозге животных группы ИН на 30,1 % (Р = 0,009), 22,6 % (Р = 0,009) и 20,0 % (Р = 0,028) ниже по сравнению с соответствующим параметром в группах крыс И, К и ОН соответственно (табл. 2). Известно, что торможение СОД способствует увеличению числа неинактивированных супероксидных радикалов [6].

В условиях ИН снижается активность ферментов метаболизма глутатиона в ткани головного мозга, что указывает на развитие дефицита этого трипеп-тида в условиях интенсивных физических нагрузок. Особенно выражено у крыс вышеупомянутой группы торможение селензависимого фермента ГлПО [на 51,8 % (Р = 0,003), 54,9 % (Р = 0,003) и 39,2 % (Р = 0,015) относительно аналогичного показателя у животных И, К и ОН групп] (табл. 2), что может быть вызвано недостатком селена в условиях интенсивных физических нагрузок [7, 8]. Активность ГлР в головном мозге крыс группы ИН ниже аналогичного параметра у крыс групп И, К и ОН соответственно на 17,4 % (Р = 0,025), 11,3 % (Р = 0,34) и 5,7 % (Р = 0,70).

При интенсивной мышечной работе увеличивается потребление мозгом кислорода и глюкозы, поступающих с током крови. Дефицит глюкозы и нарастающая гипоксия в условиях ИН приводят к торможению реакций пентозного цикла. Последнее подтверждается тенденцией к снижению активности Г-6-ФДГ в головном мозге крыс, подвергнутых ИН [на 1,6 % (Р =1,00), 3,9 % (Р = 0,94) и 3,1 % (Р = 0,86) по сравнению с аналогичным показателем у крыс групп

И, К и ОН соответственно]. Снижение активности этого фермента может способствовать торможению генерации ИЛЭРН, что также приводит к угнетению функции АОС, а в целом — к снижению функциональной активности головного мозга, отличающегося высокой потребностью в энергии.

Необходимо отметить, что у животных группы ИН отмечали снижение времени активного плавания к окончанию эксперимента на 42,5 % и количества выпрыгиваний на 45,5 % по сравнению с крысами группы ОН. Крысы, подвергнутые ИН, на пятой неделе эксперимента отличались более пассивным поведением, снижением двигательной активности в периоды отдыха и вяло реагировали на внешние раздражители. Вышеперечисленные признаки свидетельствуют о развитии у крыс группы ИН утомления, что подтверждает результаты биохимических исследований.

Таким образом, интенсивные физические нагрузки приводят к развитию гипоксии, лакто- и кето-ацидоза, сопряженных с интенсификацией катаболизма пуриновых мононуклеотидов до урата. Это сопровождается усиленным генерированием активных кислородных метаболитов, истощающих функцию антиоксидантной системы в головном мозге.

Библиографический список

1. Лыжина, Е. В. Структурно-функциональная реорганизация клеток Пуркинье мозжечка белых крыс после физической нагрузки разной степени интенсивности / Е. В. Лыжина,

B. В. Корнякова, В. В. Шаповалова // Морфология. — 2008. — Т. 134, № 5. — С. 80 — 81.

2. Роженцов, В. В. Утомление при занятиях физической культурой и спортом: проблемы, методы исследования / В. В. Ро-женцов, М. М. Полевщиков. — М. : Советский спорт, 2006. — 280 с.

3. Сирота, Т. В. Новый подход в исследовании процесса аутоокисления адреналина и использование его для измерения активности супероксиддисмутазы / Т. В. Сирота // Вопр. мед. химии. — 1999. — Т. 45, № 3. — С. 263 — 272.

4. Власова, С. Н. Активность глутатионзависимых ферментов эритроцитов при хронических заболеваниях печени у детей /

C. Н. Власова, Е. И. Шабунина, И. А. Переслегина // Лаб. дело. — 1990. — № 8. — С. 19 — 21.

5. Черданцев, Д. В. Диагностика и лечение окислительного стресса при остром панкреатите / Д. В. Черданцев. — Красноярск : АРТЭ, 2002. — 148 с.

6. Кольтовер, В. К. Свободнорадикальная теория старения: исторический очерк / В. К. Кольтовер // Успехи геронтологии. — 2000. — № 4. — С. 33 — 40.

7. Вировец, О. А. О повышенных потерях макро- и микроэлементов при занятиях спортом и целесообразности их компенсации биологически активными добавками / О. А. Вировец // Вопросы питания. — 2009. — Т. 78, № 2. — С. 67—71.

8. Корнякова, В. В. Применение БАД «Селен-актив» для коррекции антиоксидантного статуса организма у представителей циклических видов спорта / В. В. Корнякова // Теория и практика физической культуры. — 2010. — № 10. — С. 66 — 68.

КОРНЯКОВА Вера Валерьевна, кандидат биологических наук, доцент (Россия), доцент кафедры

безопасности жизнедеятельности, медицины катастроф.

Адрес для переписки: [email protected].

Статья поступила в редакцию 08.09.2011 г.

© В. В. Корнякова

УДК 581.526.325:627.17(571.13) Л. В. ГЕРМАН

Омский государственный аграрный университет им. П. А. Столыпина

ТАКСОНОМИЧЕСКИЙ СОСТАВ ФИТОПЛАНКТОНА ОЗЕРА КАЛАЧ (г. КАЛАЧИНСК, ОМСКАЯ ОБЛАСТЬ)

Описан таксономический состав фитопланктона озера Калач в 2009—2011 гг. Методами биоиндикации установлено, что озеро загрязнено органическими веществами и подвержено «цветению» воды.

Ключевые слова: фитопланктон, таксономический состав, эвтрофирование, «цветение» воды.

Изучение состава живых организмов водоема позволяет быстро установить его санитарное состояние, определить степень и характер загрязнения и пути его распространения в водоеме, а также дать количественную характеристику протекания процессов естественного самоочищения. Биоиндика-ционные свойства фитопланктона как показателя качества водоёма наиболее проработаны по сравнению с другими группами водных организмов, они определяются фактом нахождения или отсутствия определенных видов водорослей и цианопрокариот, а также степенью их количественного развития [1].

Озеро Калач — водоем природно-антропогенного происхождения с замкнутым водообменом, расположенный в центре г. Калачинска. Котловина озера находится на нижней надпойменной террасе реки Оми и имеет подковообразную форму. Озеро является относительно мелководным, максимальная глубина в период половодья составляет около 4 м. Озеро интенсивно используется населением для рекреации.

Количественные пробы фитопланктона объемом 0,5 л отбирали из поверхностного слоя воды на 5 станциях, расположенных равномерно по акватории озера, с мая 2009 по октябрь 2011 гг. Отбор проб проводили 2 раза в месяц в период открытой воды и 1 раз — в период ледостава. Для более тщательного изучения таксономического состава фитопланктона отбирали качественные пробы. Все пробы фиксировали 40 % формалином и концентрировали осадочным способом. Обработку проб проводили общепринятыми в гидробиологии методами [2]. Определение видов диатомовых водорослей проводили на постоянных препаратах с использованием масляной иммерсии при увеличении Х1350 на световом микроскопе Микмед-1 и на сканирующем электронном микроскопе НйасЫ Б3400Н в лаборатории водной экологии Института водных и экологических проблем СО РАН (г. Барнаул). Доминирующий комплекс фитопланктона определяли по численности к доми-

нантам относили виды, численность которых составляла не меньше 10 % [3].

За период исследования в фитопланктоне озера идентифицировано 285 видов, разновидностей и форм, относящихся к 8 отделам: цианопрокариоты (Cyanoprokaryota) — 49, динофитовые (Dinophyta) — 4, криптофитовые (Cryptophyta) — 3, желтозеленые (Xanthophyta) — 4, диатомовые (Bacillariophyta) — 61, золотистые (Chrysophyta) — 9, эвгленовые (Eugleno-phyta) — 39 и зеленые водоросли (Chlorophyta) — 116. Высоким видовым богатством отличались зеленые, диатомовые, эвгленовые водоросли и цианопро-кариоты.

Зеленые водоросли встречаются в фитопланктоне озера Калач во все вегетационные сезоны и часто входят в состав доминирующего комплекса. К их числу относятся Monoraphidium contortum (Thur.) Kom.-Legn., M. minutum (• д**) Kom.-Legn., Scenedesmus acutus Meyen, S. falcatus Chod. и Dictyosphaerium pulchellum Wood. Последний вид в августе 2009 г. достигал максимальной численности в 295,5 млн кл./л. Как отмечает ряд исследователей, присутствие в фитопланктоне Dictyosphaerium pul-chellum служит показателем высокой эвтрофности водоема, особенно при его антропогенном загрязнении, и может вызывать «цветение» воды [4].

Зеленые водоросли представлены классом Chloro-phyceae и порядками Volvocales и Chlorococcales. Основную роль в формировании видового богатства зеленых водорослей играет порядок Chlorococcales (113 видовых и внутривидовых таксонов), значительную роль в котором играют виды семейств Scenedes-maceae (45) и Selenastraceae (22). Высокое видовое богатство характерно для рода Scenedesmus (28 видовых и внутривидовых таксонов).

Вольвоксовые водоросли представлены видами рода Pandorina (P. morum (• д•••) Bory и P. charko-viensis Korsch.) и Chlamydomonas. Летом 2009 г. Pandorina charkoviensis входила в состав доминиру-

ОМСКИЙ НАУЧНЫЙ ВЕСТНИК № 1 (108) 2012 БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.