CC BY
49
рат L-карнитина перорально. После завершения курса спустя 3-5 дней проводилось повторное исследование слюны на содержание лактата и пирувата. При анализе слюны детей с муковисцидозом, принимавших препарат Ь-карнитина, выявлены статистически значимое снижение уровня лактата и повышение уровня пирувата. Соотношение лактат/пируват до приема препарата составляло 13, после приема снизилось до 8, что соответствует норме.
Таким образом, у детей с муковисцидозом изменен энергетический статус с избыточным образованием лактата, что свидетельствует о преобладании процессов анаэробного гликолиза и объясняется наличием хронической гипоксии. Длительное употребление препарата Ь-карнитина может положительно сказаться на адаптационных возможностях и резистентности организма. Благоприятное влияние на состояние энергостатуса у детей с муковис-
УДК 616.931: 616-056.3-053.2: 612.017.1
цидозом позволяет рекомендовать данный препарат в их лечении.
ЛИТЕРАТУРА
1. Брин И.Л. Элькар (20% раствор L-карнитина) в педиатрии. — М., 2005. — 36 с.
2. Капранов Н.И. Муковисцидоз (Современные достижения и проблемы). Метод. пособие. — М.: Мед-практика, 2005. — 76 с.
3. Кнорре Д.Г. Биологическая химия. — М.: Наука, 2002. — 479 с.
4. Колб В.Г., Камышников В.С. Определение пиро-виноградной кислоты в крови модифицированным методом Умбрайта / /Справочник по клин. химии. — Минск, 1982. — С. 198.
5. Николаева Е.А. Эффективность патогенетически обусловленной терапии митохондриальных заболеваний у детей // Вестн. педиатр. фармакол. нутрициол. — 2004. — № 1. — С. 54.
6. СухоруковВ.С. К разработке рациональных основ энерготропной терапии // Рацион. фармакотерап. — 2007. — №2. — С. 40 — 47.
7. Храмов В.А. Простой метод определения лактата в биологических жидкостях // Гиг. сан. — 1995. — №4. — С. 52 — 54.
СОСТОЯНИЕ ПРОТИВОДИФТЕРИЙНОГО МЕСТНОГО ИММУНИТЕТА У ДЕТЕЙ С АЛЛЕРГИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ
Алексей Алексеевич Сависько, Галина Георгиевна Харсеева *, Анна Владимировна Лабушкина Ростовский государственный медицинский университет
Реферат
Цель. Изучение показателей противодифтерийного местного иммунитета у детей с аллергическими заболеваниями, привитых противодифтерийными препаратами.
Методы. Обследовано 50 детей от одного года до 15 лет с аллергическими заболеваниями (бронхиальная астма, астматический бронхит, поллинозы) в анамнезе. Группу контроля составляли дети (131 чел.), не имевшие в анамнезе указаний на аллергические заболевания. Все обследованные были привиты препаратами АКДС и АДС-М. В слюне обследованных определялись уровни sIgA, противодифтерийных антитоксических и антибактериальных sIgA, IgE, ИЛ-4 и ИФН-у.
Результаты. У детей с аллергическими заболеваниями местный иммунитет на фоне вакцинации противодифтерийными препаратами характеризовался формирующимся к 10-15 годам превалированием гуморальных иммунных реакций с более выраженной, чем у здоровых, продукцией IgE. У детей с аллергическими заболеваниями от одного года до 9 лет лет содержание в слюне противодифтерийных антитоксических и антибактериальных sIgA было ниже, чем у здоровых, к 10 — 15 годам эти различия нивелировались.
Выводы. Организм детей с аллергическими заболеваниями характеризуется меньшей устойчивостью к адгезии Corinebacterium diphtheriae по сравнению с таковой здоровых детей.
Ключевые слова: аллергические заболевания, местный противодифтерийный иммунитет, цитокины, IgE, дети.
THE STATE OF THE ANTIDIPHTHERITIC LOCAL IMMUNITY IN CHILDREN WITH ALLERGIC DISEASES
A.A. Savisko, G.G. Kharseeva, A.V. Labushkina, Rostov State Medical University Aim. To study the antidiphtheria indicators of local immunity in children with allergic diseases, vaccinated with antidiphtheritic substances. Methods. Examined were 50 children aged from one to 15 years with allergic diseases (bronchial asthma, asthmatic bronchitis, hay fever) in history. The control group consisted of children (131 people) who had no history of any indications of allergic disease. All patients were vaccinated with DTP vaccine and DT-M vaccine. In the saliva of the examined patients determined were the level of the sIgA, antidiphtheritic antitoxic and antibacterial sIgA, IgE, IL-4 and IFN-y. Results. In children with allergic diseases local immunity secondary to vaccination with antidiphtheritic agents is characterized by the formation by the age of 10-15 years of the predominance of humoral immune responses with a more pronounced production of IgE than in healthypeople. In children with allergic diseases from one year to 9 years of age the content of antidiphtheritic antitoxic and antibacterial sIgA in the saliva was lower than in the healthy, by the age of 10 - 15 years, these differences were leveled. Conclusions. The organism of children with allergic diseases is characterized by a lower resistance to adhesion by Corinebacterium diphtheriae compared to healthy children. Key words: allergic diseases, local antidiphtheritic immunity, cytokines, IgE, children.
* Автор для переписки: galinagh@bk.ru 384
В настоящее время благодаря проводимой вакцинопрофилактике заболеваемость дифтерией в России регистрируется на спорадическом уровне [4]. Тем не менее в популяции продолжают циркулировать генетически гетерогенные штаммы СогтеЬайегшт diphtheгiae [2]. Отсутствие колонизационной резистентности слизистых оболочек к возбудителю с измененной генетической структурой может стать причиной нового эпидемического подъема дифтерии [2]. Группу риска составляют дети с хронической патологией, в частности с аллергическими заболеваниями [3], у которых наблюдается дефект местной защиты, связанный с нарушением синтеза секреторного иммуноглобулина А ^^А) [7]. Известно, что sIgA действует как агглю-тинатор микроорганизмов и нейтрализатор токсинов, ингибируя связывание бактерий с поверхностью слизистых оболочек [8, 9]. В связи с этим при дифтерийной инфекции с воздушно-капельным путем передачи большое значение имеет местный иммунитет, способный дополнять системный и увеличивать вероятность защиты.
Целью настоящего исследования являлось изучение показателей противодифтерийного местного иммунитета у детей с аллергическими заболеваниями, привитых противодифтерийными препаратами.
Было обследовано 50 детей от одного года до 15 лет с аллергическими заболеваниями (бронхиальная астма, астматический бронхит, поллинозы) в анамнезе, наблюдавшихся в муниципальном лечебно-профилактическом учреждении здравоохранения «Консультативно-диагностический центр» г. Ростова-на-Дону в 2008 — 2009 гг. Группу контроля составляли дети (131 чел.), отно-сенные к 1-11 группам здоровья, не имевшие в анамнезе указаний на аллергические заболевания. Все обследованные были привиты препаратами АКДС и АДС-М в установленные сроки согласно календарю профилактических прививок (приказ МЗ РФ № 229 от 27. 06. 2001 г.) На момент обследования дети с аллергическими заболеваниями находились в стадии клинической ремиссии не менее месяца, дети контрольной группы были практически здоровы.
У обследованных брали нестимулиро-ванную слюну утром натощак после ополаскивания ротовой полости водой в стерильную центрифужную пробирку. Образцы слюны центрифугировали при 3000 об/мин в течение 30 минут, собирали надосадочную
© 25. «Казанский мед. ж.», № 3.
жидкость и хранили при температуре -20°С до момента исследования. Содержание противодифтерийных антибактериальных секреторных IgA (sIgA) определяли при помощи иммуноферментного анализа (ИФА). В качестве антигена использовали дифтерийный диализатный антиген (ДДА), полученный путем дезинтеграции токсиген-ных С. diphtheriae через поры целлофана [5]. Анализ проводили на стандартном оборудовании и стандартных реактивах для ИФА. Для сенсибилизации применяли полистироловые планшеты «Dynatech», на которых сорбировали ДДА в количестве 10 — 15 мкг/мл в объеме 100 мкл и выдерживали в течение 18 — 20 часов при +4°С. После инкубации планшеты трижды промывали фосфатно-солевым буферным раствором с 0,05% твин-80 (ФСБ-Т). В лунки сенсибилизированных планшет для блокирования свободных от антигенов участков полистирола добавляли по 220 мкл 0,1% раствора альбумина на ФСБ и инкубировали при +37°С в течение 2 часов. Сенсибизирован-ные планшеты трижды промывали раствором ФСБ-Т. Образцы слюны, предварительно разведенные в 10 раз, добавляли в лунки планшет и выдерживали в течение одного часа при +37°С, затем также трижды промывали раствором ФСБ-Т. В лунки вносили по 100 мкл раствора конъюгата в рабочем разведении, представляющего собой кроличьи антитела против sIgA человека, меченные пероксидазой хрена, и инкубировали один час при +37°С. После инкубации лунки трижды промывали раствором ФСБ-Т, после этого в каждую вносили по 100 мкл раствора хромогена (тетраметил-бензидин в цитратном буферном растворе с рН 5,0). После 15 минут инкубации при +37°С реакцию останавливали 50 мкл 0,1н. раствора серной кислоты. Оптическую плотность конечных продуктов ферментативной реакции учитывали с помощью мульти-скана фирмы «Labsystem» при длине волны 450 нм. Количество антител (в мкг/л) определяли с использованием калибровочной кривой. Содержание sIgA, ИЛ-4, ИНФ-у и IgE устанавливали с помощью иммунофер-ментных тест-систем (фирма «Вектор-Бест», г. Новосибирск). ИФА проводили по общепринятой методике.
Статистическую обработку результатов производили с использованием статистических пакетов Microsoft Exel 2000 и Statistica для Windows XP с помощью параметрических и непараметрических методов
Таблица 1
Содержание sIgA в слюне детей, привитых противодифтерийными препаратами
Возраст, лет Число обследованных sIgA (мг/л) Антитоксические sIgA, мкг/л Антибактериальные sIgA, мкг/л
I II I II I II I II
1-5 14 41 396,1±17,8 393,5±15,1 0,7±0,4* 4,4±0,6 29,1±2,9* 50,1±3,8
6-9 22 41 404,0±15,8 403,2±18,2 2,0±0,5** 5,5±0,9 48,0±4,8*** 62,5±4,2
10-15 14 49 386,3±27,6 410,1±17,3 1,5±0,5 2,7±0,5 114,7±11,6 87,7±8,2
1-15 50 131 396,8±11,3 402,7±15,8 1,5±0,3* 4,1±0,4 61,4±8,4 68,0±3,8
Примечание: I — дети с аллергическими заболеваниями в анамнезе, II — здоровые (контроль). *р<0,001, ** р<0,005, *** р<0,05. То же в табл. 2.
статистики. При анализе полученных результатов определяли средние величины и стандартную ошибку (М±т). Достоверность полученных данных оценивали при р<0,05.
У 50 детей с аллергическими заболеваниями средний уровень sIgA составлял 396,8±11,3 мг/л (табл.1), что соответствовало аналогичному показателю в контроле (402,7±15,8 мг/л). В зависимости от возраста содержание sIgA не изменялось и соответствовало норме. Следовательно, снижения местных барьерных функций слизистых оболочек верхних дыхательных путей у детей с аллергическими заболеваниями на момент обследования обнаружено не было. Уровень противодифтерийного антибактериального sIgA в слюне в обеих группах колебался от 48,0 до 114,7 мкг/л, причем у детей с аллергическими заболеваниями от одного года до 9 лет был достоверно ниже, чем у здоровых, что свидетельствовало о меньшей степени их защиты от дифтерии. С возрастом в обеих группах наблюдалось постепенное нарастание уровня антибактериального sIgA в слюне и к 10 — 15 годам различия в его содержании нивелировались. Выявленное с возрастом увеличение содержания противодифтерийных антибактериальных sIgA у детей указывает на усиление специфической защиты слизистых оболочек, повышении вероятности связывания и элиминации возбудителя. Однако естественный иммунитет против дифтерии является несовершенным и далеко не всегда обеспечивает защиту организма от инфекции. Поэтому для снижения заболеваемости основное значение имеет антитоксический поствакцинальный иммунитет. При изучении местного антитоксического иммунитета обнаружилось, что уровень антитоксического sIgA у всех детей, вакцинированных препаратами АКДС- и АДС-М, был значительно ниже, чем антибактериального sIgA и колебался от 0,7 до 5,5 мкг/л. Среднее содержание анти-386
токсического sIgA у детей с аллергическими заболеваниями (1,5±0,3 мкг/л) было меньше (р<0,001), чем у здоровых (4,1±0,4 мкг/л). При изучении возрастной динамики содержания антитоксического sIgA были обнаружены те же закономерности, что и для антибактериального sIgA. Так, в слюне у пациентов в возрасте до 9 лет этот показатель был ниже, чем у детей группы контроля аналогичного возраста, а к 10 — 15 годам эти различия уже не обнаруживались. Полученные данные согласуются с результатами проведенных ранее исследований [6], согласно которым контингент повышенного риска развития дифтерии по уровню антитоксина в крови составляют дети в возрасте от 3 до 6 лет.
Таким образом, вакцинация детей как здоровых, так и отягощенных аллерголо-гическим анамнезом способствует образованию лишь незначительного количества противодифтерийного антитоксического sIgA. Возможно, этот факт обусловлен физиологической целесообразностью, так как оказавшись на слизистой оболочке верхних дыхательных путей возбудитель выделяет токсин, проникающий в кровяное русло, только после преодоления местных барьеров и адаптации. И, следовательно, антитокси-новая защита эффективна лишь при реализации реакций системного иммунитета.
Известно, что в составе секрета слюнных желез присутствуют цитокины, продуцируемые клетками не только иммунной системы, но и эпителиальными. Для изучения взаимосвязи между ТЫДЪ2- направленностью иммунного ответа, продукцией и уровнем специфических противодифтерийных антител у детей с аллергическими заболеваниями и у здоровых определялось содержание в слюне регуляторных цитоки-нов — ИФН-у и ИЛ-4 (табл. 2). В возрасте до 9 лет в обеих группах установлены близкие значения ИФН-у в слюне, в периоде от 10 до 15 лет уровень данного цитокина в слюне у
Таблица 2
Содержание IgE и цитокинов в слюне детей, привитых противодифтерийными препаратами
Возраст, лет Число обследованных IgE, МЕ/мл ИФН-у, пкг/мл ИЛ-4, пкг/мл
I II I II I II I II
1-5 14 41 0,4±0,2 0,3±0,1 40,5±14,0 54,4±7,9 0,03±0,02 1,0±0,7
6-9 22 41 1,0±0,2*** 0,4±0,1 40,1±19,4 34,9±3,0 0,5±0,2*** 0,1±0,1
10-15 14 49 0,7±0,2** 0,2±0,1 25,5±5,1*** 53,3±7,6 2,9±1,6** 0,3±0,2
1-15 50 131 0,8±0,1* 0,3±0,1 36,1±9,6 47,9±3,9 1,0±0,5 0,5±0,2
больных детей снизился до 25,5±5,7 пкг/мл (р<0,05) в сравнении с таковым у здоровых (53,3±7,6 пкг/мл). В слюне детей 10 — 15 лет с отягощенным аллергологическим анамнезом сниженный уровень ИФН-у начинает менять соотношение регуляторных цитокинов в пользу ИЛ-4, что свидетельствует о превалировании у них ^2-направленности иммунного ответа. У больных детей уровень ИЛ-4 уже с 6 лет превышал аналогичный показатель здоровых. Выраженная «гуморальная направленность» иммунного ответа, зафиксированная на основании динамики содержания ИФН-у и ИЛ-4 в слюне, была выявлена у детей с аллергическими заболеваниями только в возрасте 10 — 15 лет. В то же время у данного контингента уже с 6 лет обнаружились достоверно более высокие значения ^Е в слюне по сравнению с таковыми у здоровых детей. Известно, что у лиц с атопией имеется отрицательная корреляция между уровнем sIgA и ^Е в слизистых оболочках [1].
Таким образом, местный иммунитет у детей с аллергическими заболеваниями на фоне вакцинации противодифтерийными препаратами характеризуется формирующимся к 10 — 15 годам превалированием гуморальных иммунных реакций, сопровождающихся более выраженной, чем у здоровых, продукцией ^Е. Можно предположить, что пониженное содержание в слюне противодифтерийных антибактериальных и антитоксических sIgA приводит к повышению продукции ^Е. Наличие в слюне у детей с аллергическими заболеваниями повышенных концентраций ^Е, конкурирующих с sIgA за антиген, может явиться фактором,
предрасполагающим к формированию дифтерийного бактерионосительства и усугубить выраженность инфекционного процесса. Исходя из важной роли sIgA в колонизационной резистентности, препятствующей проникновению в организм бактериальных антигенов, полученные результаты свидетельствуют о меньшей устойчивости к адгезии С. diphtheriae организма детей с аллергическими заболеваниями по сравнению со здоровыми.
ЛИТЕРАТУРА
1. Долгих В.Т. Основы иммунопатологии. — Ростов-на-Дону: Феникс. — 2007. — 12 с.
2. Комбарова С.Ю., Борисова О.Ю., Мельников В.Г. и др. Полиморфизм генов tox и dtxR у циркулирующих штаммов C.diphtheriae // Ж. микробиол. — 2009. — №1. — С.7 — 11.
3. Магаршак О.О., Костинов М.П. Проблемы вакцинации детей с аллергическими заболеваниями //Леч. врач. — 2008. — №9. — С. 44 — 48.
4. Максимова Н.М.,Маркина С.С.,Яцковский К.А. и др. Иммунизация взрослого населения против дифтерии и России в 2006-2007 гг. //Ж. микробиол. — 2008. — №6. — С.27 -31.
5. Москаленко Е.П., Харсеева Г.Г. Способ получения дифтерийного антигенного диагностикума. — Патент РФ № 2188666 от 10. 09. 2002 г.
6. Харсеева Г.Г., Квасов А.Р., Алутина Э.Л. и др. Состояние иммунитета к дифтерии у населения г. Ростова-на-Дону и Ростовской области в последние годы //Ж. микробиол. — 2009. — №6. — С. 80 — 83.
7. Fukushima C, Matsuse H, Saeki S. et al. Salivry IgA and oral candidiasis in asthmatic patients treated with inhaled corticosteroid //J. Asthma. — 2005. — Vol. 42, №7. — P. 601 — 604.
8. Wines B.D. Hogarth P.M. IgA receptors in health and disease // Tiss. Antigen. — 2006. — Vol.68. — № 2. — P. 103 — 114.
9. Woof. J.M., Kerr M.A. The function on of immunoglobulin A in immunity //J. Pathol. — 2006. — №2. — P. 270 — 282.
