CC BY
41
лин хлорида) лизосомные мембраны клеток, в том числе лейкоцитов, через избирательную активацию внутриклеточных мессенджеров — ц-АМФ и ц-ГМФ [1-3, 7], свидетельствует о возможности иммунорегуляции путем целенаправленной коррекции состояния стабильности лизосомных мемран антигенпрезентирующих клеток, какими являются фагоцитирующие клетки, на начальном этапе иммуногенеза.
Литература
1. Кобылянский Л.Н. Влияние ацетилхолина на функциональное состояние лизосом печени и почек крыс при тяжелой механической травме // Бюл. экспер. биол. и мед.
- 1983. - ХСУ (1). - С. 27-79.
2. Коровкин Б.Ф. Циклазная система и активность лизосомальных ферментов в норме и патологии // Вестн. АМН СССР. - 1982. - № 9.- С. 69-74.
3. Панин Л.Е., Маянская Н.Н. Лизосомы: роль в адаптации и восстановлении. - Новосибирск: Наука СО, 1987.
- 198 с.
4. Талаев В.Ю., Бабайкина О.Н., Ломунова М.А. и др. Функциональные свойства моноцитарных дендритных
клеток новорожденных в краткосрочных культурах // Иммунология. - 2008. - Т.29, №3. - С. 141-147.
5. Шаронов А. С. Исследование стабильности лизосомных мембран фагоцитирующих клеток при фагоцитозе различных объектов // RJI. - 2004. - Vol. 9, Suppl. 1. - P. 358.
6. Lambrecht B.N. Dendritic cells and the regulation of the allergic immune response // Allergy. - 2005. - Vol. 60, №3. - P.271-282.
7. Ramsay C.E., Hayden C.M., Filler K.J. et al. Polimorphism in the B-adrenoreceptor gene are associated with decreased airway responsiveness // Clin.Exp.Allergy. -1999. - Vol. 29. - P. 1195-1203.
Координаты для связи с авторами: Шаронов Анатолий Степанович — доктор мед. наук, профессор, заведующий иммунологической лабораторией главного госпиталя Военно-морского ТОФ, тел.: 8(4232)-26-96-67; Храмова Ирина Афанасьевна — канд. мед. наук, доцент кафедры акушерства и гинекологии, тел.: 8(4232)-27-26-87; Кольцов Игорь Петрович — канд. мед. наук, доцент, заведующий кафедрой микробиологии, вирусологии и иммунологии.
□□□
УДК 616.381 - 003.235 : 616 - 092.9
А.А. Кашафеева, С.Г. Гаймоленко, Б.С. Хышиктуев, А.Г. Гончаров
СОСТОЯНИЕ ПЕРЕКИСНОГО СТАТУСА БРЮШИНЫ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ПЕРИТОНИТЕ У КРЫС
Государственная медицинская академия,
672090, ул. Горького, 39 а, e-mail: macadem@mail.chita.ru, г. Чита
Несмотря на совершенствование техники хирургических вмешательств, внедрение новых методов лечения, перитонит остается одной из основных причин неблагоприятных исходов у больных с абдоминальной хирургической патологией. По данным литературы [5, 6], летальность при перитоните варьирует от 13 до 40%. Известна важная патогенетическая роль перекисного дисбаланса при гнойно-воспалительных процессах, в том числе и перитоните, и в формировании полиорганной недостаточности как основной причины летальных исходов. Однако большая часть исследований при перитоните основана на изучении показателей крови, что снижает их информативность и степень объективности оценки перекисного гомеостаза в брюшной полости [2, 8]. В связи с этим определенный интерес представляет исследование локального перекисного статуса, что позволит установить патогенетические закономерности его изменений и создать предпосылки для поиска новых направлений в лечении перитонита.
Цель исследования — изучить динамику показателей липопероксидации и антиокислительной защиты брюшины при экспериментальном перитоните.
Материалы и методы
Исследование проведено на 30 беспородных половозрелых крысах обоего пола с массой тела около 200 г. Все эксперименты выполнялись в соответствии с Приказом № 742 от 13.11.84 г. «Об утверждении проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденным в ГУ НИИ нормальной физиологии им. П. К. Анохина РАМН и ГУ НИИ общей патологии и патофизиологии РАМН, который соответствует требованиям Всемирного общества защиты животных (Ш8РА) и Европейской конвенции по защите животных, используемых для экспериментальных и других научных целей. Всем крысам под эфирным наркозом выполнялась срединная лапаротомия. Для исследования смыва петли кишечника и париетальная брюшина орошались 4,5 мл 0,9% раствора №С1, который затем аспирировался в пробирку
с 0,25 мл 3,8% раствора цитрата натрия. Кроме этого в бессосудистой зоне брыжейки тонкого кишечника иссекался фрагмент брюшины площадью 1,5-2,0 см2, который промывался в охлажденном физиологическом растворе. Каждый образец гомогенизировали в 0,05% трис-HCl-буфере (рН=7,8), затем центрифугировали по методу Н. Д. Ещенко, а супернатант использовали для изучения параметров липидного обмена [7]. Полученные результаты при исследовании смыва и гомогената служили контролем для последующих экспериментов. Для моделирования перитонита перед ушиванием раны брюшная полость орошалась 20% каловой взвесью в объеме 1 мл. Течение воспалительного процесса отслеживалось гистологически с окраской препаратов кишечника гематоксилин-эозином. Повторный забор материала для исследования осуществляли на 1, 3 и 7 дн. В смывах с поверхности брюшины исследовали концентрацию начальных интермедиатов ПОЛ - ДК, КД и СТ [4], ТБК-активных продуктов [1], активность каталазы (Кат) [9], общую антиокисли-тельную активность (АОА) [11]. В гомогенате помимо вышеназванных показателей исследовали уровень оснований Шиффа, активность глутатионпероксидазы (ГПО) [10], глутатионредуктазы (ГР) [3], супероксиддисмутазы (СОД) [3]. Активность ГПО и ГР выражалась в мкмоль/с мг белка, каталазы — в нмоль/с мг белка, СОД и АОА — в %, содержание веществ с двойными связями, ДК, КД и СТ рассчитывалось на 1 мг липидов в брюшине и на 1 мл в смывах с ее поверхности, ТБК-активных продуктов — в мкмоль/мг липидов, оснований Шиффа — в УЕ на мг липидов. Полученные результаты обработаны методами вариационной статистики с использованием программного пакета Microsoft Excel Professional for Windows-98.
Примечания. * — уровень значимости достоверных отличий по сравнению с контролем (р<0,001); р1 — уровень значимости достоверных отличий между 1 и 3; 1 и 7 сут.
Резюме
При экспериментальном каловом перитоните у крыс исследованы параметры системы «перекисное окисление липидов — антиокислительная защита» в брюшине и смывах с нее. Показано, что в условиях воспалительного процесса наиболее выраженные изменения локального перекисного статуса наблюдались в 1 и 3 сут течения перитонита.
Ключевые слова: перитонит, эксперимент, моделирование, перекисный стресс.
A.A. Kashafeeva, S.G. Gaimolenko,
B.S. Khyshiktuev, A.G. Goncharov
PERITONEUM PEROXIDATE STATUS IN EXPERIMENTAL PERITONITIS IN RATS
Chita State Medical Academy, Chita Summary
The system parameters lipid «peroxidation - antioxidate defence» in peritoneum and its washouts were studied in experimental fecal peritonitis in rats. In inflammatory process the most expressed changes of local peroxidate status were observed during 1st and 3rd day of peritonitis.
Key words: peritonitis, experiment, design, peroxidate stress.
Результаты исследования
У животных в первые трое суток отмечалось снижение двигательной активности, пищевого инстинкта при повышенной потребности в воде. Летальность к 7 дн. составила 50%. При макроскопическом исследовании брюшной полости во время релапаротомий у всех животных в 1-3 сут эксперимента отмечены гиперемия, полнокровие сосудов париетальной брюшины, брыжейки. Кроме этого в брюшной полости присутствовал в умеренном количестве мутный, серого цвета выпот, имел место налет фибрина на петлях кишечника, паренхиматозных органах, брыжейке, отмечались признаки пареза кишечника: увеличение диаметра кишки в 2,0 раза, наличие в просвете жидкости, газа. На 3-7 сут в 66% случаев определяли увеличение размеров печени, селезенки и их полнокровие. В течение первых дней эксперимента у 20% животных обнаружены отдельные пиемические очаги в брыжейке, переднебоковой поверхности брюшной стенки, поджелудочной железе, селезенке, большом сальнике, а также между петлями кишечника. У оставшихся в живых животных к 7 сут сохранялись макроскопические признаки воспаления брюшины, налет фибрина, увеличение печени. При гистологическом исследовании проявления гнойного перитонита обнаружены на 1 сут эксперимента, в последующем сменившиеся картиной продуктивного воспаления.
При исследовании параметров ПОЛ в смывах с поверхности брюшины (табл. 1) на протяжении всего эксперимента обнаружено снижение содержания веществ с двойными связями как в гептановой, так и в изопро-панольной фазах в среднем в 1,6 раза по отношению к контролю. В то же время имело место существенное снижение уровня начальных интермедиатов ПОЛ в гептано-
Таблица 1
Динамика показателей перекисного статуса и антиокислительной защиты в перитонеальных смывах при экспериментальном перитоните
Показатель Контроль (n=43) Перитонит
1 сут (n=32) 3 сут (n=12) 7 сут (n=10)
Гептановая фаза
АЕ220/мЛ 0,437 ±0,039 0,335 ±0,014* 0,307 ±0,035* 0,248 ±0,003* р1<0,001
ДК ДЕ232/мл 0,345 ±0,014 0,321 ±0,017 0,286 ±0,028 0,254 ±0,002* р1<0,001
КД и СТ АЕ278/мЛ 0,047 ±0,005 0,047 ±0,004 0,013 ±0,001* р1<0,001 0,014 ±0,0003* р1<0,001
Изопропанольная фаза
АЕ220/мЛ 0,656 ±0,065 0,441 ±0,032* 0,380 ±0,008* 0,388 ±0,008*
ДК ДЕ232/мл 0,462 ±0,039 0,422 ±0,027 0,397 ±0,012 -
КД и СТ АЕ278/мЛ 0,107 ±0,009 0,016 ±0,002* 0,011 ±0,001* р1<0,05 -
АОА, % 4,8 ±0,04 4,75 ±0,05 4,53 ±0,15 4,44 ±0,14* р1<0,05
Динамика показателей перекисного статуса в брюшине при экспериментальном перитоните (М±m)
Показатель Контроль (п=54) Перитонит
1 сут (п=32) 3 сут (п=14) 7 сут (п=8)
Гептановая фаза
АЕ220/мг липидов 0,081 ±0,005 0,096 ±0,008 0,082 ±0,007 0,060 ±0,006* р1<0,001 р12<0,05
ДК АЕт/мг липидов 0,053 ±0,003 0,063 ±0,006 0,051 ±0,003 0,036 ±0,003* р1<0,001 р2<0,001
КД и СТ АЕ278/мг липидов 0,040 ±0,002 0,047 ±0,004 0,040 ±0,003 0,024 ±0,003* р1<0,001 р2<0,001
Изопропанольная фаза
АЕ220/мг липидов 0,771 ±0,035 0,939 ±0,062* 0,801 ±0,023 р1<0,05 0,615 ±0,063* р1<0,001 р2<0,001
ДК АЕ232/мг липидов 0,694 ±0,034 0,870 ±0,057* 7 5 л О 0±0 р2 0,544 ±0,055* р1<0,001 р3<0,001
КДиСТ АЕ278/мг липидов 0,507 ±0,023 0,606 ±0,042* 0,528 ±0,018 0,391 ±0,040* р1<0,001 р2<0,001
ТБК (мкмоль/мг липидов) 1,22 ±0,09 1,52 ±0,11* 1,07 ±0,13 р1<0,05 0,93 ±0,17 р1<0,001
О. Шиффа (УЕ/мг липидов) 1,36 ±0,06 1,79 ±0,07* 1,43 ±0,15 р1<0,05 1,20 ±0,1 р1<0,001
Примечания. * — уровень значимости достоверных отличий по отношению к контролю (р<0,001); р1 — уровень значимости достоверных отличий между 1 и 3; 1 и 7 сут; р2 — уровень значимости достоверных отличий между 3 и 7 сут.
вой фазе на 3 сут, а изопропанолрастворимых КД и СТ
— с 1 дн. эксперимента. При оценке общей АОА в смывах выявлено незначительное (на 7,5%; р<0,05) снижение антирадикальной активности лишь на 7 сут.
Изучение параметров ПОЛ в гомогенате брюшины показало (табл. 2), что достоверные отличия в содержании исследуемых параметров в гептановой фазе зарегистрированы только на 7 сут эксперимента в среднем в 1,6 (1,21,95) раза как относительно контроля, так и других дней исследования. В изопропанольной фазе незначительное увеличение всех параметров на 1 сут сопровождалось аналогичными изменениями в содержании промежуточных и конечных интермедиатов ПОЛ, при этом более существенный рост был характерен для оснований Шиффа. К 7 дн. эксперимента содержание полярных продуктов ПОЛ, а также ТБК-активных веществ и оснований Шиф-фа снижалось до уровня контрольных значений и ниже (табл. 2). В 1 сут выявлен дефицит антиокислительных ресурсов, который нивелировался к концу эксперимента (табл. 3). При этом на протяжении всего срока исследования наблюдалось падение активности ГПО, ГР и СОД, а скорость каталазной реакции значимо сниженной была в 1 дн. (на 70%, р<0,001), с 3 сут постепенно повышалась,
Динамика общей и ферментативной активности в брюшине при экспериментальном перитоните (М±m)
Показатель Контроль (п=54) Перитонит
1 сут (п=32) 3 сут (п=14) 7 сут (п=8)
АОА, % 12,4 ±0,33 9,16 ±0,42* 9,97 ±0,845* 11,9 ±1,16 р1<0,05
ГПО, мкмоль/с мг белка 60,3 ±3,46 44,1 ±3,5* 42,2 ±3,72* 35,0 ±4,82*
ГР, мкмоль/с мг белка 39,3 ±2,58 23,9 ±2,37* 35,8 ±3,25 р1<0,001 22,8 ±2,82* р2<0,001
СОД, % активности 32,4 ±1,21 25,2 ±0,81* 26,0 ±1,31* 26,1 ±2,87*
Каталаза, нмоль/с мг белка 10,4 ±1,09 3,12 ±0,316* 12,0 ±1,24 р1<0,001 16,9 ±0,459* р1<0,001 р21<0,001
Примечания. * — уровень значимости достоверных отличий по отношению к контролю (р<0,001); р1 — уровень значимости достоверных отличий между 1 и 3; 1 и 7 сут; р2 — уровень значимости достоверных отличий между 3 и 7 сут.
достигая максимальных значений на 7 дн. (в 1,6 раза по отношению к контролю).
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о наличии выраженных локальных изменений в системе «ПОЛ — антиокислительная защита» в сторону активации радикальных реакций в первые сутки течения экспериментального перитонита у крыс. Развитие продуктивного воспаления в последующие дни эксперимента сопровождается существенным снижением темпов перекисных реакций в брюшине на фоне ингибирования ферментативного звена антирадикальной защиты. Активация перекисных реакций способствует повышению проницаемости мембран, увеличению содержания белка в экссудате, в том числе фибриногена, что в дальнейшем является основой развития спаечного процесса. При этом изменения параметров системы «ПОЛ — антиоксиданты» в смывах с поверхности брюшины не позволяют в полной мере определить направленность сдвигов в перекисном статусе брюшины.
Литература
1. Андреева Л.И., Кожемякин Л. А., Кишкун А. А. Модификация метода определения перекисей липидов в тесте с тиобарбитуровой кислотой // Лаб. дело. - 1988. - №11.
- С. 41-43.
2. Васильков В.Г., Шикунова Л.Г., Келина Н.Ю. и др. Роль нарушений антиоксидантного статуса организма в формировании синдрома эндогенной интоксикации у больных токсической и терминальной стадией перитонита // Анестезиология и реаниматология. - 2001. - №6. - С. 31-34.
3. Верболович В. П., Подгорная Л. М. Определение активности глутатионредуктазы и супероксиддисмутазы на биохимическом анализаторе // Лаб. дело. - 1987. - №2. - С. 17-20.
4. Волчегорский И.А., Налимов А.Г., Яровинский Б.Г. и др. Сопоставление различных подходов к определению продуктов перекисного окисления липидов в гептан-изо-пропанольных экстрактах крови // Вопросы мед. химии.
- 1989. - №1. - С. 127-131.
5. Гельфанд Е.Б., Гологорский В. А., Гельфанд Б.Р. Абдоминальный сепсис: интегральная оценка тяжести состояния больных и полиорганной дисфункции // Анестезиология и реаниматология. - 2000. - №3. - С. 29-33.
6. Гринберг А. А. Неотложная абдоминальная хирургия. - М.: Триада-Х, 2000. - 496 с.
7. Ещенко Е. Д. Выделение и очистка субклеточных и клеточных структур // Методы биохимических исследований [под ред. М.И. Прохоровой]. - Л.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1982. - С. 29-53.
8. Келина Н.Ю., Васильков В.Г., Безручко Н.В. и др. Динамика показателей антиоксидантного и оксидантного статуса при перитоните в ранний послеоперационный период // Вестник интенсивной терапии. - 2004. - №3. - С. 45-50.
9. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г. и др. Метод определения каталазы // Лаб. дело. - 1988. - №1.
- С. 16-19.
10. Моин В.М. Простой и специфический метод определения активности глутатионпероксидазы в эритроцитах // Лаб. дело. - 1986. - №12. - С. 724-727.
11. Промыслов М.Ш., Демчук М. Л. Модификация метода определения суммарной антиоксидантной активности сыворотки крови // Вопросы мед. химии. - 1990. - №4.
- С. 90-92.
Координаты для связи с авторами: Кашафеева Алла Анатольевна — ассистент кафедры оперативной хирургии и топографической анатомии, тел.: 8-(3022)-35-37-96, e-mail: Taskina16@mail.ru; Гаймоленко Сергей Григорьевич — канд. мед. наук' доцент' заведующий кафедрой хирургии детского возраста; Хышиктуев Баир Сергеевич — доктор мед. наук' профессор' заведующий кафедрой биоорганической химии; Гончаров Андрей Геннадьевич — канд. мед. наук, доцент кафедры оперативной хирургии и топографической анатомии.
□□□
УДК 611 - 018.4 + 613.166.9 + 615.45 + 577.17 + 577.17.049 Е.Е. Бирюкова, В.А. Доровских, Н.В. Коршунова
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ НОВОЙ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ ДОБАВКИ К ПИЩЕ «КЛИМАТОЛ» В УСЛОВИЯХ ХОЛОДОВОЙ И ТЕПЛОВОЙ НАГРУЗКИ НА ОРГАНИЗМ
Амурская государственная медицинская академия, ул. Горького, 95, тел.: 8-(4162)-52-68-28, г. Благовещенск
Изучение резистентности организма к высоким и низким температурам окружающей среды актуально и является одной из важнейших проблем современной профилактической медицины. Актуальность проблемы в настоящее время обусловлена еще и тем, что в условиях жаркого и холодного климата проживает большая часть населения планеты, где происходит бурное развитие промышленности и современной техники, увеличение миграционных процессов в обществе, что вызывает необходимость поиска новых способов коррекции патогенного воздействия низких и высоких температур на организм человека. Нельзя не признать того факта, что оптимальным средством для регуляции метаболических процессов в условиях высоких и низких широт могли бы стать не лекарственные препараты, а целенаправленное применение биологически активных добавок (БАД) к пище из адаптогенных продуктов животного и растительного происхождения.
Среди перспективных компонентов для получения новой БАД «Климатол» использовали смесь продуктов производства пантов (ПФП) и дигидрокверцитин (ДКЦ). Новая БАД «Климатол» представляет смесь измельченных отходов переработки пантов и дигидрокверцитина
до порошкообразной массы с последующей стерилизацией в автоклаве в течение 30 мин. По аминокислотному минеральному составу «Климатол» мало отличается от пантов, а наличие в нем ДКЦ обусловливает источник соединений флавоноидного ряда [4, 7].
Цель исследования заключалась в научном обосновании пищевого использовании БАД «Климатол» в питании населения для повышения резистентности организма в условиях тепловой и холодовой нагрузки на организм.
Материалы и методы
Токсиколого-гигиенические исследования по изучению БАД «Климатол» выполнены на белых крысах (50 особей) и кроликах (15 особей) по общепринятым методическим подходам [5, 6]. Антиокислительные эффекты изучаемых соединений исследовались в организме лабораторных животных при активизации процессов ПОЛ путем введения четыреххлористого углерода [1]. Опыты выполнены на 30 белых крысах-самцах. Эксперименты по изучению холодовых и тепловых адаптационных реакций животных с использованием модели длительного холодового [3] и теплового воздействия выполнены на 60 беспородных белых крысах. Тепловые адаптацион-
