CC BY
22
able at: http://193.232.7.120/feml/clinical_ref/pharmacopoeia_2/ HTML/#928(accessed 15 September 2017). (in Russian)
6. Test for anti-D antibodies in human immunoglobulins preparations: 0©C.1.8.2.0004.15 State Pharmacopoeia of the Russian Federation. 13 ed V. 2. [Gosudarstvennaya farmakopeya Rossiyskoy Fed-eratsii. XIIIizdanie. TomII]. Available at: http://l93.232.7.120/feml/ clinical_ref/pharmacopoeia_2/HTML/#924 (accessed 15 September 2017). (in Russian)
7. Glants S. Biomedical statistics. [Mediko-biologicheskaya statistika]. Moscow: Praktika; 1998. (in Russian)
8. Perez E.E., Orange J.S., Bonilla F., Chinen J., Chinn I.K., Dorsey M. et al. Update on the use of immunoglobulin in human disease: A review of evidence. J. Allergy Clin. Immunol. 2017; 139 (3S): 30.
9. Stiehm E.R. Adverse effects of human immunoglobulin therapy. Transfus. Med. Rev. 2013; 27: 171—8.
10. Zhiburt E.B. Plasma transfusion rules. [Pravila perelivaniya plazmy]. Moscow; 2008: 18—9. (in Russian)
11. International Quality Plasma Program (IQPP) Available at: http:// www.pptaglobal.org/safety-quality/standards/iqpp.
12. Quality Standards of Excellence, Assurance and Leadership (QSEAL). Available at: http://www.pptaglobal.org/safety-quality/ standards/qseal.
13. Lebing W., Remington K.M., Schreiner C., Paul H.I. Properties of a new intravenous immunoglobulin (IGIV-C, 10%) produced by virus inactivation with caprylate and column chromatography. Vox. Sang. 2003; 84: 193—201.
14. Bertolini J., Goss N., Curling J. Production of plasma proteins for therapeutic use. John Wiley&Sons; 2013: 188—9.
15. Method of immunodiffusion in gel: 00c.1.8.2.0001.15. State Pharmacopoeia of the Russian Federation. 13 ed. V. 2. [Gosudarstvenna-ya farmakopeya Rossiyskoy Federatsii. XIII izdanie. Tom II]. Available at: http://193.232.7.120/feml/clinical_ref/pharmacopoeia_2/ HTML/#924.
16. Method of immunoelectrophoresis in agar gel: 00c.1.8.2.0002.15.
ORIGINAL ARTICLE
State Pharmacopoeia of the Russian Federation. 13 ed. V. 2. [Gosudarstvennaya farmakopeya Rossiyskoy Federatsii. XIII izdanie. Tom II]. Available at: http://193.232.7.120/feml/clinical_ref/ pharmacopoeia_2/HTML/#924.
17. Moussa E.M., Panchal J.P., Moorthy B.S., Blum J.S., Joubert M.K., Narhi L.O., Topp E.M. Immunogenicity of therapeutic protein aggregates. J. Pharm. Sci. 2016; 105: 422—3.
18. Ballow M. Safety of IVIG therapy and infusion-related adverse events. Immunol. Res. 2007; 38: 122—32.
19. Ahrer K., Buchacher A., Iberer G., Josic D., Jungbauer A. Defection of aggregate formation during production of human immunoglobu-lin G by means of light scattering. J. Chromatogr. A. 2004; 1043: 41—6.
20. Sewell W.A., Kerr J., Behr-Gross M.-E., Peter H.-H., Ig Working Group. European consensus proposal for immunoglobulin therapies. Eur. J. Immunol. 2014; 44: 2207—14.
21. Supotnitskiy M.V. Bacterial toxins. Their nature, modes of action, opportunities of creating hybrid and modified toxins. BIOprepara-tions. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2011; 1: 6—15. (in Russian)
22. Vassallo R.R. IgA anaphylactic transfusion reactions. Part I: Laboratory diagnosis, incidence and supply of IgA deficient products: review. Immunohematology. 2004; 20: 226—33.
23. Bonilla F.A. Intravenous immunoglobulin: adverse reactions and management. J. Allergy Clin. Immunol. 2008; 122: 1238—9.
24. Orange J.S., Elham M.H., Hossny M.H., Catherine R.W., Ballow M., Berger M. et al. Use of the intravenous immunoglobulin in human disease: A review of evidence by members of the Primary Immunodeficiency Committee of the American Academy of Allergy, Asthma and Immunology. J. Allergy Clin. Immunol. 2006; 117: 525—53.
25. Ballow M. Safety of IVIG therapy and infusion-related adverse events. Immunol. Res. 2007; 38: 122—32.
Поступила 07.10.17 Принята в печать 10.10.17
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2017 УДК 616.344-002-031.84-053.6-078.33
Талаев В.Ю.1, Талаева М.В.1, Воронина Е.В.1, Талаева Е.Б.2, Заиченко И.Е.1, Бабайкина О.Н.1
СОДЕРЖАНИЕ И ФЕНОТИП CCR6+ И CCR9+ Т-ХЕЛПЕРОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У ПОДРОСТКОВ С БОЛЕЗНЬЮ КРОНА
1 ФБУН «Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной» Роспотребнадзора, 603950, г Нижний Новгород, РФ;
2 ФГБУ «Приволжский федеральный медицинский исследовательский центр» Минздрава России, 603155, г. Нижний Новгород, РФ
Болезнь Крона — это хроническое рецидивирующее воспалительное заболевание кишечника человека, которое может быть вызвано действием провоцирующих факторов на фоне различных вариантов генетической предрасположенности. Развитие заболевания ассоциировано с патологическим ответом Т-клеток эффекторов на антигены микрофлоры кишечника. В этой работе оценивали содержание в крови и фенотип CD4+ лимфоцитов с хемокиновыми рецепторами, участвующими в миграции в кишечник (CCR9 и CCR6) или в лимфоидную ткань (CCR7 и CXCR5), у подростков с болезнью Крона. Группа пациентов с болезнью Крона и группа сравнения были рандомизированы по возрасту и сопутствующим патологиям. Показано, что при болезни Крона содержание CD4+CD45RO+ Т-хелперов в крови увеличивается в 2 раза, а содержание эффекторов/клеток памяти с фенотипом cd4+cd45ro+ccr7-ccr6+ возрастает в 4,4 раза. CD4+CD45RO+CCR6+ клетки, увеличивающие свою численность при болезни Крона, не экспрессировали молекулу ICOS и хемокиновый рецептор CXCR5. Мы не обнаружили увеличения содержания CD4+CCR9+ клеток в крови пациентов с болезнью Крона, но при анализе структуры незрелых CD4+CD45RO- Т-лимфоцитов выявили увеличение доли CCR9+CCR7+, CCR9+CXCR5+ и CCR9-CXCR5+ клеток. CD4+CD45RO-CCR9+ клетки по сравнению с CD4+CD45RO-CCR9- клетками обладали повышенным уровнем экспрессии молекул ICOS, PD1 и CXCR5.
Ключевые слова: Т-лимфоциты хелперы, миграция, рецепторы хемокинов, болезнь Крона. Для цитирования: Талаев В.Ю., Талаева М.В., Воронина Е.В., Талаева Е.Б., Заиченко И.Е., Бабайкина О.Н. Содержание и фенотип CCR6+ И CCR9+ Т-хелперов периферической крови у подростков с болезнью Крона. Иммунология. 2017; 38(6): 313-320. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2017-38-6-313-320.
Для корреспонденции: Талаев Владимир Юрьевич. E-mail: talaev@inbox.ru
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Talayev V.Yu.1, Talaeva M.V.1, Voronina E.V.1, Talayeva E.B.2, Zaichenko I.Ye.1, Babaykina O.N.1
CONTENT AND PHENOTYPE OF BLOOD CCR6+ AND CCR9+ T-HELPER CELLS IN ADOLESCENTS WITH
CROHN'S DISEASE
1 Federal Budget Institution of Science «Nizhny Novgorod Scientific and Research Institute of Epidemiology and Microbiology named after Academician I.N. Blokhina» Of Federal Service on Surveillance for Consumer Rights Protection and Human Welfare (Rospotrebnadzor), 603950, Nizhny Novgorod, Russian Federation;
2 Nizhny Novgorod Research Institute of Traumatology and Orthopedics of Public Health Ministry of Russian Federation, 603155, Nizhny Novgorod, Russian Federation
Crohn's disease is a chronic recurrent inflammatory disease of the human intestine, which can be caused by the action of provoking factors against the background of different variants of genetic predisposition. The development of the disease is associated with a pathological response of effector T-cells to the antigens of the intestinal microflora. In this study, we examined the blood levels and phenotype of CD4+ lymphocytes with chemokine receptors involved in migration into intestine (CCR9 and CCR6) or lymphoid tissue (CCR7 and CXCR5) in adolescents with Crohn's disease. A group of patients with Crohn's disease and a comparison group were randomized by age and concomitant pathologies. It was shown that in Crohn's disease the content of CD4+CD45RO+ T-helper cells in the blood increases 2 times, and the content of effector/memory T-cells with phenotype CD4+CD45RO+CCR7-CCR6+ increases 4.4-fold. CD4+CD45RO+CCR6+ cells, increasing their numbers in Crohn's disease, did not express the molecule ICOS and the chemokine receptor CXCR5. We did not find an increase in the concentration of CD4+CCR9+ cells in the blood of patients with Crohn's disease. Nonetheless, CCR9+CCR7+, CCR9+CXCR5+ and CCR9-CXCR5+ cells augmented their percentages in the structure of immature CD4+CD45RO- T-lymphocytes. CD4+CD45RO-CCR9+ cells showed an increased level of expression of the molecules ICOS, PD1 and CXCR5 in comparison with CD4+CD45RO-CCR9- cells.
Keywords: T-helper cells, migration, chemokine receptors, Crohn's disease.
For citation: Talayev V.Yu., Talaeva M.V, Voronina E.V, Talayeva E.B., Zaichenko I.Ye., Babaykina O.N. Content and phenotype of blood CCR6+ and CCR9+ T-helper cells in adolescents with crohn's disease. Immunologiya. 2017; 38(6): 313-320. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2017-38-6-313-320.
For correspondence: Talayev Vladimir Yurevich, prof., E-mail: talaev@inbox.ru
conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Acknowledgments. The study had no sponsorship.
Received 15.06.17 Accepted 16.08.17
введение
Болезнь Крона (БК) — иммунологически опосредованное воспалительное заболевание кишечника с хроническим рецидивирующим течением, способное поражать любые участки желудочно-кишечного тракта, но чаще всего затрагивающее слизистую тонкого кишечника или одновременно тонкого и толстого кишечника. По современным представлениям, это заболевание развивается в результате патологической иммунной реакции на антигены (АГ) микрофлоры кишечника на фоне генетической предрасположенности [1, 2]. Следует отметить, что список генов, варианты которых ассоциированы с этой болезнью, велик, что наводит на мысль о разнообразии патогенетических механизмов, реализуемых на начальных этапах заболевания при воздействии провоцирующих факторов. Большинство генов, ассоциированных с БК, имеют непосредственное отношение к барьерной функции эпителия и системе врожденного иммунитета. В частности, с БК ассоциированы определённые варианты полиморфизма гена внутриклеточного рецептора пептидогликана NOD2, рецептора липополисахарида TLR4, интелектина-1 (лектина со свойствами опсонина), а также генов, контролирующих аутофагию и ответ клеток на стресс эндоплазматического ре-тикулума [3—7]. Кроме того, обнаружена связь БК с генами И23К, IL12B, М^, STAT3, CCR6 и TNFSF15, ассоциированными с созреванием и функцией Т-хелперов-17 (Тх17) [8, 9].
Интересно, что варианты рецептора NOD2, демонстрирующие наибольшую связь с БК у жителей северного полушария, обладают гипоморфной функцией и при распознавании микробных лигандов слабее стимулируют сигнальный путь активации ядерного фактора МР-кВ — внутриклеточного индуктора провоспалительной активности [10, 11]. Соответственно, мононуклеарные клетки крови человека, гомозиготного по этим вариантам генов, также как и макрофаги Nod2-/- мышей слабее продуцируют провоспалительные цитокины в ответ на стимуляцию мурамилдипептидом [12, 13]. Каким же образом
наследственное ослабление провоспалительной сигнализации от микробных паттернов может способствовать развитию хронического воспаления? Решить эту загадку можно с учётом необходимости эффективной работы NOD2 в клетках Панета и эпителии кишечника для продукции антибактериального а-дефензина, а также активации белка аутофагии ATG16L1, необходимого для уничтожения бактерий, проникающих через плазматическую мембрану. Главные БК-ассоциированные варианты NOD2 лишены этих функций, поэтому нарушен контроль состава флоры кишечника и уничтожение внедряющихся в эпителий бактерий [13—17]. О самостоятельном значении дефектов аутофагии для развития БК свидетельствует идентификация вариантов полиморфизма, вовлечённых в аутофагию генов ATG16L1 и IКОМ в качестве специфичных для БК факторов риска [7, 18]. Также нарушение барьерной функции слизистой кишечника может быть обусловлено дефектами работы фагоцитов, связанными с гипоморфными БК-ассоциированными вариантами генов рецептора TLR4 и ней-трофильного цитозольного фактора-4 — одного из ключевых компонентов ферментативной системы генерации активных форм кислорода [2]. Эти разнообразные генетические особенности ведут к нарушению барьерной функции слизистой кишечника, которые проявляются в усилении адгезии бактерий на эпителии, росте проницаемости эпителия для микроорганизмов или ослаблении их уничтожения в слизистой, что, в конечном итоге, приводит к увеличению антигенной нагрузки во внутренней среде организма, срыву толерантности к АГ нормофлоры и развитию адаптивного провоспалительного иммунного ответа.
Также с БК ассоциированы варианты полиморфизма генов, напрямую связанные с усилением воспалительных реакций. Так, семейные формы рано проявляющихся БК обусловлены мутациями генов IL10RA или IL10RB, кодирующих субъединицы рецептора противовоспалительного интерлейкина-10 (ИЛ-10) [1]. Вызванное этими дефектами
Рис. 1. Схема цитометрического анализа Т-хелперов пациента с болезнью Крона. Последовательно гейтировали лимфоциты (а, гейт Ю) и СБ4+ Т-хелперы (б, гейт 112), которые затем разделяли на С045110 (в, гейт Я4) и СБ45ЯО+ клетки (113). На рис. г и д показаны результаты анализа фенотипа С 045 КО и С 045110+ клеток соответственно. В качестве примера приведена экспрессия ССЯ9 для СО45Я0- клеток и ССЯб для СБ45ЯО+ клеток как наиболее информативных хемокиновых рецепторов для данных субпопуляций.
% от всех лимфоцитов 40 -,
CD4+
% от CD4+CD45RO+ 40 п
CD4+ CD4+ CD45RO+ CD45RO-
CCR7+ CCR6+ CCR9+ CCXR5+
Рис. 2. Содержание CD4+ Т-хелперов и клеток с фенотипом CD4+CD45RO+ и CD4+СD45RO- среди лимфоцитов крови пациентов с БК и лиц группы сравнения (а). Доля зрелых CD4+CD45RO+, экспрессирующих хемокиновые рецепторы CCR7, СС^6, CCR9 и CXCR5 (б). Группы обследованных обозначены в легенде, экспрессируемые маркеры — под гистограммами. * — достоверные отличия пациентов с БК от группы сравнения прир < 0, 05; ** — прир < 0,01; *** — прир < 0,0005. Столбцы со штриховкой - болезнь Крона, чёрные - группа сравнения.
ORIGINAL ARTICLE
хроническое воспаление может изменять состав микрофлоры [19] и усиливать презентацию АГ, что также способствует срыву толерантности и развитию ответа Т-лимфоцитов на АГ кишечной флоры.
Таким образом, реализация различных форм генетической предрасположенности ведёт к общему элементу патогенеза — иммунному ответу на АГ микрофлоры кишечника. Несмотря на наличие выраженного гуморального иммунного ответа на АГ флоры при БК, основную роль в индукции мощного воспаления и повреждения кишечника играют Тх1 и Тх17, а также клетки со смешанными признаками этих субпопуляций [20]. Они инфильтрируют слизистую, продуцируют фактор некроза опухоли-а, интерферон-у (ИНФ-у), ИЛ-17 и ИЛ-22 [21— 25] и, по-видимому, вовлекают в процесс продукции провоспалительных цитокинов другие клетки кишечника, используя при этом механизмы регуляции, не затронутые описанными выше генетическими дефектами. Патогенетическая роль ответа Тх на АГ кишечных комменсалов подтверждается классической мышиной моделью БК, в которой воспаление развивается при введении CD4+ Т-клеток, специфичных к АГ кишечной флоры [26, 27]. Однако относительный вклад Тх1 и Тх17 в развитие заболевания до сих пор остается неясным. Исходно БК была атрибутирована как Тх1-зависимая патология, и действительно, роль Тх1, по крайней мере на начальных стадиях заболевания, не вызывает сомнений [20]. В мышиных моделях с переносом зрелых CD45RBhi Т-эффекторов или в моделях с дефицитом ИЛ-10 развитие воспаления кишечника предотвращается или ослабляется блокадой ИНФ-у непосредственно после переноса клеток [28, 29], а также использованием для переноса Т-клеток, дефицитных по ИНФ-у [30] или ядерным факторам Tbet [31] и STAT4 [32], участвующим в созревании Тх1. У людей в поражённой слизистой при БК увеличено содержание клеток с маркерами Тх1 [31, 32, 34], а в крови повышена концентрация ИНФ-у [35]. Однако после открытия Тх17 исследователи обнаружили повышенное содержание этой субпопуляции в воспалённой ткани кишечника при БК у человека и в различных моделях этого заболевания у мышей [20]. Перенос Тх17, специфичных к АГ микрофлоры, в иммунодефицитных мышей-реципиентов индуцирует более тяжелый колит, чем перенос Тх1 [36], а использование для переноса Т-клеток с заблокированным созреванием Тх17 (RORyt-/-) или одновременная блокада двух основных ци-токинов Тх17 — ИЛ-17А и ИЛ-17Б — ведёт к ослаблению колита [37]. Также показано, что ИЛ-17Б критически необходим для развития воспаления кишечника, индуцированного натриевой солью сульфата декстрана (DSS) у мышей [38]. Но следует отметить, что другой продукт Тх17 — ИЛ-17А — в различных моделях демонстрирует как провоспалительное [39], так и неожиданное защитное действие. Так, нейтрализация [40] или генетическая делеция ИЛ-17А [55] сопровождается усилением DSS-индуцированных колитов. Также повышал тяжесть колитов перенос Il17a-/- CD45RBhigh T-клеток в Rag1-/- хозяев. Рост тяжести был
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
+ +
(О
a. tu о о о о
Группа сравнения
Болезнь Крона
Группа сравнения
21,3
53,1
ffi CCR7+CCR6-Щ CCR7-CCR6-
CCR7-CCR6+ CCR7+CCR6+
12 п «
Группа сравнения
Болезнь Крона Группа сравнения 6,1 16,0 7,0
26,2
21,0
52,3
CXCR5-CCR6-CXCR5-CCR6+
55,7
CXCR5+CCR6-CXCR5+CCR6+
Группа сравнения
Болезнь Крона
23,4.
Группа сравнения
13,6
26,9
45,8
Ц ICOS-CCR6-■ ICOS-CCR6+
Рис. 3. Доля (%) зрелых CD4+CD45RO+ Т-клеток с различной экспрессией молекул CCR6, CCR7, CXCR5 и ICOS среди всех лимфоцитов (столбик гистограмм а) и в структуре зрелой CD4+CD45RO+ субпопуляции Т-хелперов (столбик б). Набор анализируемых молекул на CD4+CD45RO+ Т-клетках приведён под гистограммами. * — достоверные отличия пациентов с БК от группы сравнения приp < 0, 05; ** — приp < 0,01; *** — приp < 0,0005.
ассоциирован с увеличением количества ИНФ-у в толстом кишечнике [41]. По нашему мнению, эти данные свидетельствуют о большой опасности замены Тх17 на Тх1 при БК, но не исключают участия Тх17 в патогенезе. В любом случае, противоречивость данных, получаемых в мышиных моделях, требует их верификации в условиях реального заболевания, что вызывает существенные трудности. По нашему мнению, определенную помощь в исследовании патогенеза БК у человека может оказать идентификация в крови субпопуляций Т-хелперов, имеющих признаки вовлечения в иммунный ответ при заболевании. В этой работе с помощью оценки экспрессии хемокиновых рецепторов выявлены группы Т-хелперов, способных к миграции в кишечник и увеличивающих своё содержание при БК, а также оценена степень их зрелости.
Материалы и методы
Обследовали подростков с БК (n = 10, возраст от 12 до 17 лет, средний возраст 15,0 ± 0,7 лет) и детей группы сравнения без БК (n = 10, возраст от 11 до 17 лет, средний возраст 13,8 ± 1,2 лет). Группы были рандо-мизированы по частоте сопутствующей патологии желудочно-кишечного тракта, которые были диагностированы у 80% детей как в группе БК, так и в группе сравнения. Основными сопутствующими патологиями были хронический гастродуоденит (7 пациентов в группе БК и 6 в группе сравнения) и синдром Жильбера (2 пациента в группе БК и 3 в группе сравнения). Кроме того, у 7 пациентов группы БК было обнаружено дисфункциональное расстройство билиар-ного тракта с холестазом. Пациенты с БК имели подтвержденный диагноз ранее и обследовались при поступлении в стационар в связи с обострением заболевания. До поступления в стационар все пациенты с БК находились на поддерживающей терапии противовоспалительными препаратами месалазина (пентаса, салофальк), 5 детей принимали иммунодепрессант аза-тиоприн, 3 — глюкокортикоиды будено-фальк или преднизолон. Воспалительно-деструктивный процесс у всех пациентов с БК локализовывался в тонком и толстом кишечнике за исключением одного пациента с локализацией поврежденного участка в перианальной зоне. Помимо этого, у 1 пациента повреждения были локализованы не только в тонком и толстом кишечнике, но и в желудке. Степень тяжести пациентов с БК оценивалась как тяжёлая (40%) или средняя (60%).
Исследования проводили с помощью многоцветной лазерной проточной цитоф-луориметрии. Клетки крови пациентов с БК и лиц группы сравнения окрашивались мечеными моноклональными антителами: к молекулам CD4 (Сорбент, Москва), меченными флюоресцеинизотиоционатом, к CD45RO, меченными PerCPeFluor710 (eBiosciences, США), к CD45RA (Beckman Coulter, США), CCR6 или CCR9 (eBiosci-ences, США), меченными фикоэритрином, к CCR7, CXCR5, ICOS или PD1, меченными аллофикоцианином (eBiosciences, США). Всего из образца крови получали 12 проб, окрашенных четырьмя антителами (включая соответствующие контроли). Затем пробы клеток обрабатывали лизирующим эритроциты раствором BD FACS Lysing Solution (BD Biosciences, США), отмывали и фиксировали 1%-ным параформальдегидом. Анализ проводили на лазерном проточном цитофлуориметре FacsCalibur (BD Biosciences, США), последовательно гейтируя лимфоциты, CD4+ лимфоциты (используя гетерологичное гейтирование в осях FL-1/SSC), CD45RO- и CD45RO+ Т-хелперы). Затем оценивали количество клеток, несущих комбинации исследуемых маркеров, как долю (%) от общего количества лимфоцитов или как долю от CD4+CD45RO- и CD4+CD45RO+ Т-лимфоцитов. Результаты проточной цитометрии обрабатывали с помощью программного обеспечения CellQuest (BD Biosciences, США). Статистический анализ проводили с использованием /-теста Стьюдента. Данные представлены в виде M ± m.
51,4
ICOS+CCR6-ICOS+CCR6+
ORIGINAL ARTICLE
% от CD4+CD45RO-90-,
% от CD4+CD45RO-90
CCR7+ CCR6+ CCR9+ CXCR5+ Болезнь Крона ^ Группа сравнения
а
CCR9+
Болезнь Крона в тонком кишечнике Группа сравнения
+ + О) h-
К О.
о о о о
Группа сравнения
Болезнь Крона Группа сравнения .13,5 24,0 _ 23,0
36,2
48,0
CCR7-CCR9- Ш CCR7+CCR9-CCR7-CCR9+ ■ CCR7+CCR9+
Группа сравнения
Болезнь Крона . 9,3
27,2 J
13,1.
50,4
CXCR5-CCR9-CXCR5-CCR9+
Рис. 4. Доля незрелых CD4+CD45RO-, экспрессирующих хемокиновые рецепторы CCR7, CCR6, CCR9 и CXCR5 у пациентов с БК и лиц группы сравнения (а, б). Доля (%) незрелых CD4+CD45RO- Т-клеток, различающихся по экспрессии молекул CCR9 и CCR7 (в и г), а также CCR9 и CXCR5 (д и е) среди всех лимфоцитов (в и д) и в структуре CD4+CD45RO- субпопуляции (г и е). На рис. а и в—е приведены данные по всей группе БК (п = 10), на рис. б — по пациентам группы БК с наличием поражения тонкого кишечника (п = 9). Набор анализируемых хемокиновых рецепторов приведён под гистограммами. * — достоверные отличия пациентов с БК от группы сравнения при р < 0, 05; ** — при р < 0,01; *** — прир < 0,0005.
результаты и обсуждение
С помощью лазерной проточной цитометрии у пациентов с БК и лиц группы сравнения оценивали степень зрелости циркулирующих в крови СБ4+ Т-клеток и экспрессию на
них хемокиновых рецепторов, способных направить миграцию клеток в ткани кишечника или в лимфоидные органы. При анализе результатов цитометрии последовательно гейтировали лимфоциты и CD4+ лимфоциты, которые затем разделяли на 2 группы по экспрессии молекулы CD45RO (рис. 1, а—в). Подавляющее большинство С04+С045Я0--клеток экспрессировало молекулу CD45RA и хемокиновый рецептор CCR7, что соответствует фенотипу наивных Т-хелперов. Клетки этой группы обладали низким уровнем экспрессии молекулы ICOS, характерной для активированных Т-хелперов. Слабая экспрессия молекулы PD1, характерной для зрелых Т-хелперов, обнаруживалась на крайне малой части CD4+CD45RO- клеток (рис.
1, г).
CD4+CD45RO+ клетки представляли зрелые группы Т-хелперов — CCR7+ центральные Т-клетки памяти и CCR7- эффекторы и эффекторные Т-клетки памяти. Подавляющее большинство CD4+CD45RO+ клеток было лишено молекулы CD45RA. Существенная часть клеток экспрессиро-вала молекулы ICOS и PD1 (рис. 1, д).
Фенотипический анализ лимфоцитов выявил небольшое, но достоверное увеличение концентрации CD4+ Т-лимфоцитов и значительный рост количества CD45RO+ Т-хелперов в крови у пациентов с БК (рис.
2, а). Доля CD4+CD45RO+ клеток среди всех лимфоцитов крови при БК увеличивалась по сравнению с контрольной группой более чем в 2 раза (до 20,2% при 9,8% в группе сравнения, р = 0,0001).
Анализ экспрессии хемокиновых рецепторов CCR6, CCR7, CCR9 и CXCR5 на CD4+CD45RO+ Т-клетках выявил небольшой, но достоверный рост количества клеток, несущих CCR6 (рис. 2, б). Этот рецептор обеспечивает миграцию Т-лимфоцитов как в кожу, так и в желудочно-кишечный тракт, а варианты полиморфизма его гена ассоциированы с риском развития БК [9]. Для выявления субпопуляции клеток, значительно увеличивающих свою долю в структуре CD4+CD45RO+ Т-лимфоцитов, потребовался более подробный анализ. Такой субпопуляцией оказалась группа зрелых эффекторов/эффекторных клеток памяти с фенотипом CD4+CD45RO+CCR7-CCR6+. Доля этих клеток среди CD4+CD45RO+ лимфоцитов у пациентов с БК по сравнению с контрольной группой увеличивалась в 2 раза — до 21,3% (р = 0,0004), а их общее содержание среди всех лимфоцитов возрастало с 1,0 до 4,4% (р = 0,0002) (рис. 3). Сходным образом увеличивалось количество CD4+CD45RO+CXCR5-CCR6+ Т-клеток и CD4+CD45RO+ICOS-CCR6+ клеток (см. рис. 3), что наводит на мысль о том, что среди зрелых Т-клеток росту, в основном, подвергается одна субпопуляция клеток с фенотипом CD4+CD45RO+CCR7-CCR6+CXCR5-ICOS-.
Незрелые CD4+CD45RO- Т-клетки не экспрессировали хемокиновый рецептор CCR6 ни при БК, ни в группе сравнения (рис. 4, а).
Группа сравнения 4,1
65,7
CXCR5+CCR9-CXCR5+CCR9+
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
60 п
ICOS+ CXCR5+ PD1 +
СЗ Болезнь Крона 0 Группа сравнения
Рис. 5. Экспрессия молекул, ассоциированных с активацией и зрелостью Т-клеток, в CCR9+ и CCR9--подгруппах CD4+CD45RO-Т-хелперов (% клеток, несущих ICOS, CXCR5 и PD1). * — достоверные отличия пациентов с БК от группы сравнения обозначены при p < 0,05 в непарном /-тесте; f — отличия CCR9+ и CCR9- подгрупп приp < 0,05 в парном /-тесте.
При обсуждении этих результатов следует отметить связь экспрессии CCR6 с субпопуляцией Тх17. Известно, что практически все Тх17 несут на своей мембране CCR6, однако этот рецептор нельзя считать специфическим маркером Тх17, поскольку лишь около 30% CD4+CCR6+ Т-лимфоцитов крови являются зрелыми Тх17, способными продуцировать ИЛ-17А и/или ИЛ-22 после стимуляции [42]. С другой стороны, экспрессия гена CCR6 находится под контролем мастер-регулятора созревания Тх17 ядерного фактора транскрипции RORyt и ядерного фактора PLZF, также участвующего в созревании Тх17 [42]. В соответствии с этим представляется вероятным, что CD4+CCR6+лимфоциты являются гетерогенной группой, состоящей из созревших Тх17 и клеток, вступивших на путь созревания Тх17, но не достигших функциональной зрелости или изменивших направление дифференцировки в силу выраженной пластичности Тх17. Чрезвычайно важно, что пластичность Тх17 при БК может иметь особое патогенетическое значение, поскольку при этом заболевании у человека и в моделях БК у мышей в слизистой кишечника обнаруживается группа клеток, совмещающих признаки Тх17 и Тх1, а сам факт формирования этой субпопуляции из Тх17 продемонстрирован в модели переноса Тх17 в иммуно-дефицитных мышей, который ведёт к развитию колита, при котором в воспалённой слизистой появляются клетки со смешанными свойствами Тх17 и Тх1 [20]. Также теоретически возможен дрейф между субпопуляциями Тх17 и регулятор-ными Т-клетками [1], причём клетки со смешанными признаками этих субпопуляций и супрессорной функцией можно получить из Тх17 в условиях in vitro [43]. В связи с этим представляется целесообразным оценить принадлежность CD4+CD45RO+CCR7-CCR6+ Т-клеток, увеличивающих свою численность при БК, к основным патогенетически значимым
функциональным субпопуляциям CD4+ лимфоцитов (Тх17, Тх1, регуляторным Т-клеткам или переходным формам этих субпопуляций), а также исследовать возможность «репро-граммирования» Т-клеток-эффекторов данной группы для придания им супрессорных свойств регуляторных Т-клеток.
Другим хемокиновым рецептором, обеспечивающим миграцию Т-лимфоцитов крови в тонкий кишечник, является CCR9. Несмотря на имеющиеся в литературе данные об увеличении количества CD4+CCR9+ клеток в крови при БК с поражением тонкого кишечника [44], нам не удалось обнаружить соответствующие изменения, что, возможно, связано с различной степенью тяжести, возрастом пациентов или различиями в базовой терапии у больных, обследованных в этой работе и в исследовании наших оппонентов. Также мы не обнаружили роста количества CCR9+клеток в субпопуляции зрелых CD45RO+ Т-хелперов (см. рис. 2, б), и лишь среди CD45RO- Т-хелперов при БК наблюдалась недостоверная тенденция к увеличению доли CCR9+ клеток (см. рис. 4, а). После исключения из группы больных с БК единственного пациента, у которого тонкий кишечник не был затронут воспалительным процессом, различия доли CCR9+ клеток среди CD45RO- Т-хелперов несколько увеличились и стали достоверными (р = 0,044) (рис. 4, б). Наиболее ярко различие в содержании CCR9+ клеток проявлялось при одновременной оценке экспрессии CCR9 и CCR7. Так, количество CD4+CD45RO-CCR7+CCR9+ клеток в структуре группы CD45RO- Т-хелперов увеличивалось с 24,0 ± 4,9% в группе сравнения до 36,2 ± 6,3% в общей группе БК (р = 0,042) (рис. 4, г) или до 40,4 ± 4,9% в группе БК с поражением тонкого кишечника (р = 0,006). Однако следует уточнить, что речь идёт лишь об увеличении доли CD4+CD45RO-CCR7+CCR9+ в структуре наивных CD4+CD45RO- Т-хелперов, тогда как содержание этих клеток среди всех лимфоцитов крови при БК и в группе сравнения не различалось (рис. 4, в), что связано с уменьшением концентрации CD45RO- Т-хелперов при заболевании (см. рис. 2. а). Кроме того, в структуре CD4+CD45RO-Т-хелперов при БК было обнаружено увеличение доли CX-CR5+ клеток, (см. рис. 4, а), а также немногочисленных групп клеток с фенотипом CXCR5+CCR9+ и CXCR5+CCR9- (рис. 4, е). CXCR5+CCR9- клетки увеличивали не только свое содержание в структуре наивных Т-хелперов, но и общее содержание в крови среди всех лимфоцитов (рис. 4, д).
Интересно, что относительный прирост экспрессии CCR9 при БК наблюдался в группе наивных Т-хелперов, но не в группе более зрелых CD45RO+ Т-хелперов. Известно, что рецептор CCR9 отвечает за миграцию Т-хелперов в слизистую тонкого кишечника, где преимущественно секретируется его лиганд — хемокин CCL25. Соответственно, большинство Т-хелперов, инфильтрирующих слизистую тонкого кишечника в норме и при БК, являются CCR9+ клетками [44, 45]. Однако практически все эти клетки в кишечнике имеют фенотип зрелых эффекторов/клеток памяти [45], тогда как обнаруженный нами прирост CCR9+ Т-хелперов при БК ограничен группой клеток с фенотипом наивных Т-клеток. Кроме того, считается, что параметры хоминга в периферические ткани формируются в ходе взаимодействия с антигенпрезентирующими клетками. В соответствии с этим мы предположили, что часть CD4+CD45RO-CCR9+ клеток была активирована АГ и находится на ранних этапах созревания эффекторов, не утратив при этом феноти-пические признаки наивных Т-лимфоцитов, а окончательное «дозревание» этих клеток происходит непосредственно в слизистой тонкого кишечника, куда они мигрируют из кровотока благодаря экспрессии CCR9. В связи с этим мы попытались уточнить активационный статус CD4+CD45RO-CCR9+ клеток при БК и в группе сравнения. Для этого сравнивали экспрессию молекул ICOS и PD1 на CD4+CD45RO-CCR9+ и CD4+CD45RO-CCR9- лимфоцитах. Как у пациентов с БК, так и у лиц группы сравнения CCR9+ клетки экспрессировали молекулу ICOS сильнее, чем CCR9- клетки (рис. 5).
Экспрессия PD1 на CD4+CD45RO- была крайне слабой,
однако и эта молекула сильнее экспрессировалась в ^R9+ подгруппе клеток. Хемокиновый рецептор CXCR5 также сильнее экспрессировался в ^R9+ подгруппе CD4+CD45RO-Т-клеток. Кроме того, CXCR5 при БК экспрессировался сильнее, чем в группе сравнения как на CD4+CD45RO-^R9+, так и на CD4+CD45RO-CСR9- лимфоцитах (см. рис. 5). Известно, что рецептор CXCR5 обеспечивает миграцию Т- и В-лимфоцитов в В-клеточные зоны лимфоидных органов, и его экспрессия на зрелых, CD45RO+^R7- Т-лимфоцитах периферических лимфоидных органов маркирует субпопуляцию Т-фолликулярных хелперов (Тфх) — профессиональных стимуляторов гуморального ответа [46]. В периферической крови основной группой Т-хелперов, экспрессирующих CXCR5, являются клетки с фенотипом CD4+CD45RO+^R7+, гетерогенные по цитокиновому профилю и включающие подгруппы со смешанными признаками Тфх и Тх17, Тфх и Тх2, а также Тх1-подобные клетки [47]. Функциональный статус CD4+CD45RO-CХСR5+ не определён, однако известно, что CXCR5 и регулирующий его экспрессию фактор Bcl-6 очень быстро экспрессируются после антигенной стимуляции [46]. Интересно, что даже в условиях, поляризующих созревание наивных Т-хелперов в Тх1 часть клеток транзиторно экспрессирует Bcl-6 [48]. По-видимому, такая лёгкость экспрессии связана с активной конформацией локуса гена Bcl-6 и наличием в нём разрешающих эпигенетических маркеров (H3K4me3) как в наивных CD4+ Т-клетках, так и в зрелых Т-хелперах различных субпопуляций [48]. Следует предположить, что экспрессия CXCR5 на клетках с фенотипом наивных Т-хелперов является следствием их недавней активации и придаёт клеткам большую свободу выбора пути миграции в различное микроокружение, что может отразиться на их дальнейшей дифференцировке.
Таким образом, повышенную экспрессию ICOS, CXCR5 и PD1 в ^R9+ подгруппе CD4+CD45RO- Т-клеток можно рассматривать как проявление недавней активации этих клеток, а повышенную экспрессию CXCR5 на CD4+CD45RO- клетках при БК — как следствие усиленного вовлечения наивных Т-клеток в иммунный ответ при заболевании.
Заключение
Выявлены группы CD4+ лимфоцитов с маркерами хоминга в кишечник, которые увеличивают своё содержание в крови при БК у детей и подростков. При БК в крови значительно увеличивается концентрация зрелых CD45RO+ Т-хелперов и особенно зрелых Т-хелперов с фенотипом CD4+CD45RO+CСR7-CСR6+, CD4+CD45RO+CХСR5-CСR6+ и CD4+CD45RO+ICOS-CСR6+. В структуре CD4+CD45RO- Т-лимфоцитов увеличивается доля ^R9+^R7+, CCR9+CXCR5+ и CCR9-CXCR5+ клеток, при этом CD4+CD45RO-^R9+ клетки демонстрируют признаки активации.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
литература (references)
1. Kaser A., Zeissig S.,Blumberg R.S. Inflammatory Bowel Disease. Annu. Rev. Immunol. 2010; 28: 573—621.
2. Butto L.F., Schaubeck M., Haller D. Mechanisms of microbe-host interaction in Crohn's disease: Dysbiosis vs. Pathobiont Selection. Front. Immunol. 2015; 6: 555. doi: 10.3389/fimmu.2015.00555. eCollection 2015.
3. Gregersen P.K., Olsson L.M. Recent advances in the genetics of autoimmune disease. Annu. Rev. Immunol. 2009; 27: 363—91.
4. Peterson D.A., Frank D.N., Pace N.R., Gordon J.I. Metagenomic approaches for defining the pathogenesis of inflammatory bowel diseases. Cell Host Microbe. 2008; 3: 417—27.
5. Van Limbergen J., Wilson D.C., Satsangi J. The genetics of Crohn's disease. Annu. Rev. Genomics Hum. Genet. 2009; 10: 89—116.
6. Cho J.H. The genetics and immunopathogenesis of inflammatory bowel disease. Nat. Rev. Immunol. 2008; 8: 458—66.
ORIGINAL ARTICLE
7. Hampe J., Franke A., Rosenstiel P., Till A., Teuber M., Huse K. et al. A genome-wide association scan of nonsynonymous SNPs identifies a susceptibility variant for Crohn disease in ATG16L1. Nat. Genet. 2007; 39: 207—11.
8. Duerr R.H., Taylor K.D., Brant S.R., Rioux J.D., Silverberg M.S., Daly M.J. et al. A genome-wide association study identifies IL23R as an inflammatory bowel disease gene. Science. 2006; 314: 1461—3.
9. Wang K., Zhang H., Kugathasan S., Annese V., Bradfield J.P., Russell R.K. et al. Diverse genome-wide association studies associate the IL12/IL23 pathway with Crohn Disease. Am. J. Hum. Genet. 2009; 84: 399—405.
10. Abbott D.W., Wilkins A., Asara J.M., Cantley L.C. The Crohn's disease protein, NOD2, requires RIP2 in order to induce ubiquitinylation of a novel site on NEMO. Curr. Biol. 2004; 14: 2217—27.
11. Inohara N., Ogura Y., Fontalba A., Gutierrez O., Pons F., Crespo J. et al. Host recognition of bacterial muramyl dipeptide mediated through NOD2. Implications for Crohn's disease. J. Biol. Chem. 2003; 278: 5509—12.
12. van Heel D.A., Ghosh S., Butler M., Hunt K.A., Lundberg A.M., Ahmad T. et al. Muramyl dipeptide and Toll-like receptor sensitivity in NOD2-associated Crohn's disease. Lancet. 2005; 365: 1794—96.
13. Kobayashi K.S., Chamaillard M., Ogura Y., Henegariu O., Inohara N., Nunez G., Flavell R.A. Nod2-dependent regulation of innate and adaptive immunity in the intestinal tract. Science. 2005; 307: 731—34.
14. Wehkamp J., Salzman N.H., Porter E., Nuding S., Weichenthal M., Petras R.E. et al. Reduced Paneth cell alpha-defensins in ileal Crohn's disease. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2005; 102: 18129—34.
15. Petnicki-Ocwieja T., Hrncir T., Liu Y-J., Biswas A., Hudcovic T., Tlaska-lova-Hogenova H., Kobayashi K.S. Nod2 is required for the regulation of commensal microbiota in the intestine. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2009; 106: 15813—18.
16. Travassos L.H., Carneiro L.A., Ramjeet M., Hussey S., Kim Y.G., Magal-häes J.G. et al. Nod1 and Nod2 direct autophagy by recruiting ATG16L1 to the plasma membrane at the site of bacterial entry. Nat. Immunol. 2009; 11(1): 55—62.
17. Cooney R., Baker J., Brain O., Danis B., Pichulik T., Allan P. et al. NOD2 stimulation induces autophagy in dendritic cells influencing bacterial handling and antigen presentation. Nat. Med. 2009; 16(1): 90—7.
18. Parkes M., Barrett J.C., Prescott N.J., Tremelling M., Anderson C.A., Fisher S.A. et al. Sequence variants in the autophagy gene IRGM and multiple other replicating loci contribute to Crohn's disease susceptibility. Nat. Genet. 2007; 39: 830—2.
19. Lupp C., Robertson M.L., Wickham M.E., Sekirov I., Champion O.L. et al. Host-mediated inflammation disrupts the intestinal microbiota and promotes the overgrowth of Enterobacteriaceae. Cell. Host. Microbe. 2007; 2: 119—29.
20. Maynard C.L., Weaver C.T. Intestinal effector T cells in health and disease. Immunity. 2009; 31(3): 389—400.
21. Fujino S., Andoh A., Bamba S., Ogawa A., Hata K., Araki Y. et al. Increased expression of interleukin 17 in inflammatory bowel disease. Gut. 2003; 52: 65—70.
22. Fuss I.J., Becker C., Yang Z., Groden C., Hornung R.L., Heller F. et al. Both IL-12p70 and IL-23 are synthesized during active Crohn's disease and are down-regulated by treatment with anti-IL-12 p40 mono-clonal antibody. Inflamm. Bowel Dis. 2006; 12: 9—15.
23. Wolk K., Witte E., Hoffmann U., Doecke W.D., Endesfelder S., Asadul-lah K. et al. IL-22 induces lipopolysaccharide-binding protein in hepato-cytes: a potential systemic role of IL-22 in Crohn's disease. J. Immunol. 2007; 178: 5973—81.
24. Dige A., Stoy S., Rasmussen T.K., Kelsen J., Hvas C.L., Sandahl T.D. et al. Increased levels of circulating Th17 cells in quiescent versus active Crohn's disease. J. Crohns Colitis. 2013; 7: 248—55.
25. Chao K., Zhang S., Yao J., He Y., Chen B., Zeng Z. et al. Imbalances of CD4(+) T-cell subgroups in Crohn's disease and their relationship with disease activity and prognosis. J. Gastroenterol. Hepatol. 2014; 29: 1808—14.
26. Cong Y., Brandwein S.L., McCabe R.P., Lazenby A., Birkenmeier E.H. et al. CD4+ T cells reactive to enteric bacterial antigens in spontaneously colitic C3H/HeJBir mice: increased T helper cell type 1 response and ability to transfer disease. J. Exp. Med. 1998; 187: 855—64.
27. Iqbal N., Oliver J.R., Wagner F.H., Lazenby A.S., Elson C.O., Weaver C.T. T helper 1 and T helper 2 cells are pathogenic in an antigen-specific model of colitis. J. Exp. Med. 2002; 195: 71—84.
28. Berg D.J., Davidson N., Kuhn R., Muller W., Menon S., Holland G. et al. Enterocolitis and colon cancer in interleukin-10-deficient mice are associated with aberrant cytokine production and CD4(+) TH1-like responses. J. Clin. Invest. 1996; 98: 1010—20.
29. Powrie F., Leach M.W., Mauze S., Menon S., Caddle L.B., Coffman R.L. Inhibition of Th1 responses prevents inflammatory bowel disease in scid mice reconstituted with CD45RBhi CD4+ T cells. Immunity. 1994; 1: 553—62.
ОБЗОРЫ
30. Ito H., Fathman C.G. CD45RBhigh CD4+ T cells from IFN-gamma knockout mice do not induce wasting disease. J. Autoimmun. 1997; 10: 455—9.
31. Neurath M.F., Weigmann B., Finotto S., Glickman J., Nieuwenhuis E., Iijima H. et al. The transcription factor T-bet regulates mucosal T cell activation in experimental colitis and Crohn's disease. J. Exp. Med. 2002; 195: 1129—43.
32. Simpson S.J., Shah S., Comiskey M., de Jong Y.P., Wang B., Mizoguchi E. et al. T cellmediated pathology in two models of experimental colitis depends predominantly on the interleukin 12/Signal transducer and activator of transcription (Stat)-4 pathway, but is not conditional on interferon gamma expression by T cells. J. Exp. Med. 1998; 187: 1225—34.
33. Fuss I.J., Neurath M., Boirivant M., Klein J.S., de la Motte C., Strong S.A. et al. Disparate CD4+ lamina propria (LP) lymphokine secretion profiles in inflammatory bowel disease. Crohn's disease LP cells manifest increased secretion of IFN-gamma, whereas ulcerative colitis LP cells manifest increased secretion of IL-5. J. Immunol. 1996; 157: 1261—70.
34. Matsuoka K., Inoue N., Sato T., Okamoto S., Hisamatsu T., Kishi Y. et al. T-bet upregulation and subsequent interleukin 12 stimulation are essential for induction of Th1 mediated immunopathology in Crohn's disease. Gut. 2004; 53: 1303—8.
35. Beltran C.J., Candia E., Erranz B., Figueroa C., Gonzalez M.J., Quera R., Hermoso M.A. Peripheral cytokine profile in Chilean patients with Crohn's disease and ulcerative colitis. Eur. Cytokine Netw. 2009; 20: 33—8.
36. Elson C.O., Cong Y., Weaver C.T., Schoeb T.R., McClanahan T.K., Fick R.B., Kastelein R.A. Monoclonal anti-interleukin 23 reverses active colitis in a T cell-mediated model in mice. Gastroenterology. 2007; 132: 2359—70.
37. Leppkes M., Becker C., Ivanov I.I., Hirth S., Wirtz S., Neufert C. et al. RORgamma-expressing Th17 cells induce murine chronic intestinal inflammation via redundant effects of IL-17A and IL-17F. Gastroenterology. 2009; 136: 257—67.
38. Yang X.O., Chang S.H., Park H., Nurieva R., Shah B. et al. Regulation of inflammatory responses by IL-17F. J. Exp. Med. 2008; 205: 1063—75.
39. Zhang Z., Zheng M., Bindas J., Schwarzenberger P., Kolls J.K. Critical role of IL-17 receptor signaling in acute TNBS-induced colitis. Inflamm. BowelDis. 2006; 12: 382—88.
40. Ogawa A., Andoh A., Araki Y., Bamba T., Fujiyama Y. Neutralization of interleukin-17 aggravates dextran sulfate sodium-induced colitis in mice. Clin. Immunol. 2004; 110: 55—62.
41. O'Connor W. Jr., Kamanaka M., Booth C.J., Town T., Nakae S. et al. A protective function for interleukin 17A in T cell-mediated intestinal inflammation. Nat. Immunol. 2009; 10: 603—9.
42. Singh S.P., Zhang H.H., Tsang H., Gardina P.J., Myers T.G., Nagarajan V., et al. PLZF Regulates CCR6 and is Critical for the Acquisition and Maintenance of the Th17 Phenotype in Human Cells. J. Immunol. 2015; 194 (9): 4350—61.
43. Longhi M.S., Moss A., Bai A., Wu Y., Huang H., Cheifetz A. et al. Characterization of Human CD39+ Th17 Cells with Suppressor Activity and Modulation in Inflammatory Bowel Disease. PLoS ONE. 2014; 9 (2): e87956. doi:10.1371/journal.pone.0087956
44. Papadakis K.A., Prehn J., Moreno S.T., Cheng L., Kouroumalis E.A., Deem R. et al. CCR9-Positive lymphocytes and thymus-expressed chemokine distinguish small bowel from colonic Crohn's disease. Gas-troenterology. 2001; 121(2): 246—54.
45. Saruta M., Yu Q.T., Avanesyan A., Fleshner P.R., Targan S.R., Papadakis K.A. Phenotype and Effector Function of CC Chemokine Receptor 9-Ex-pressing Lymphocytes in Small Intestinal Crohn's Disease. J. Immunol. 2007; 178(5): 3293—300.
46. Ma C.S., Deenick E.K., Batten M, Tangye S.G. The origins, function, and regulation of T follicular helper cells. J. Exp. Med. 2012; 209(7): 1241—53.
47. Morita, R., Schmitt N., Bentebibel S.E., Ranganathan R., Bourdery L., Zurawski G. et al. Human blood CXCR5(+)CD4(+) T cells are counterparts of T follicular cells and contain specific subsets that differentially support antibody secretion. Immunity. 2011; 34(1): 108—21.
48. Lu K.T., Kanno Y., Cannons J.L., Handon R., Bible P., Elkahloun A.G., et al. Functional and epigenetic studies reveal multistep differentiation and plasticity of in vitro-generated and in vivoderived follicular T helper cells. Immunity. 2011; 35(4): 622—32.
Поступила 15.06.17 Принята в печать 16.08.17
ОБЗОРЫ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2017 УДК 615.373:547.962.4].03:616.9-022-08
Борисевич И.В., Кудашева Э.Ю., Иванов В.Б., Лебединская Е.В.
ПРЕПАРАТЫ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ЧЕЛОВЕКА СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 127051, Москва
Состояние инфекционной заболеваемости в нашей стране характеризуется возвратом некоторых вакцино-контролируемых инфекционных заболеваний, в частности, из-за неполного охвата прививками детского контингента и других групп населения. В перечне 35 социально-значимых инфекционных болезней наиболее актуальны такие нозологии, как ветряная оспа, корь, гепатит А, краснуха, столбняк, коклюш и т. д. В связи с этим применение эффективных специфических сывороточных лекарственных препаратов для купирования указанных инфекционных заболеваний является важной задачей здравоохранения. Специфические иммуноглобулины как средства пассивной иммунопрофилактики и/или лечения содержат в качестве основного действующего вещества концентрированную очищенную фракцию иммуноглобулинов класса G плазмы крови здоровых доноров, иммунизированных соответствующими вакцинами, или доноров-реконвалесцентов с доказанной протективной эффективностью в отношении инфекционных агентов вирусной и бактериальной природы.
В статье приведены современные представления о номенклатуре препаратов иммуноглобулинов человека специфических, выпускаемых в разных странах, об особенностях их производства, механизмах реализации фармакологического действия для достижения терапевтического эффекта, значимости результатов оценки показателей качества, эффективности и безопасности, применении для пассивной иммунопрофилактики и/или иммунотерапии инфекционных заболеваний человека. Установлено, что в различных странах препараты гомологичных специфических иммуноглобулинов зарегистрированы и используются для пассивной иммунопрофилактики и/или терапии 13 инфекционных
Для корреспонденции: Кудашева Эльвира Юрьевна, канд. мед. наук, начальник лаборатории иммуноглобулинов и препаратов крови Научного центра экспертизы средств медицинского применения, E-mail: Kudasheva@expmed.ru
