CC BY
512
3. Клиническая психиатрия: пер.с англ.//гл.ред. Т.Б. Дмитриева - М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1998 (Pocket Handbook of Clinical Psychiatry // H.Kaplan, B.Sadok // Baltimore, Willia ms&Wilkins).
4. Насилие в семье. Как бороться с ним государству // Под ред. М.Шулер. - М., Глас. - 1999.
5. Пиголкин Ю.И., Федченко Т.М., Дмитриева ОА.. Изнасилование: судебно-медицинский аспект. Владивосток: Интертех - 2001.
6. Aizenberg D, Zemishlany Z, Dorfman-Etrog P., Weizman A. Sexual dysfunction in male schizophrenic patients // J Clin Psych
- 1995. - Vol.56. - P. 137-141.
7. Allen M., Emmers T, Gebhardt L, Liery M.A. Exposure to pornography and acceptance of rape myths // J of Communication. -1995. - 45(1). - P.5-26.
8. Bader M.J. Adaptive sadomasochism and psychological growth // Psychoanalytic Dialogues. - 1993. - 3(2). P. 279-300.
9. Brosius H.B., Weaver S.B., Staab J.F. Exploring the social and sexual reality of contemporary pornography // J of Sex Research. -1993. - vol. 30(21). - P.161-170.
10.Bux D.A. The epidemiology of problem drinking in gay men and lesbians: A critical review // Clinical Rsychology Review. - 1996.
- 16(4). - P.277-298.
11.Byne W.B., Parsons B. Human sexual orientation - the biologic theories reappraised // Arsh.Gen.Psychiatry. - 1993. - 50. - P.228-229.
12.Comhaire F.H., Dhooge W., Mahmoud A., Depuydt C. Een strategie voor de prevetie van mannelijke interliteit // Kon.acad.geneesk.Belg. - 1999 - T.61. - №3. - C. 441-452.
13.Cooper AJ, Cernovsky Z, Magnus RV. The long-term use of cyproterone acetate in pedophilia: a case study // J Sex Marital Ther.
- 1992. - vol. 18(4). P.292-302.
14.De Graff R., Vanwesenbeeck I., van Zessen G., Straver C.J. // Alcohol and drug use in heterosexual and homosexual prostitution, and its relation to protection behaviour. // A IDS Care. - 1995. - 7(1). - P.35-47.
15.Domonick J. Wegesin, Ph.D.1,A Neuropsychologic Profile of Homosexual and Heterosexual Men and Women // Archives of Sexual Behavior, Vol. 27, N. 1, 1998. P. - 91.
16.Eriksson C.J., Fukunada T., Lindman R. Sex hormone response to alcohol // Nature. - 1994. - 369. - P.711.
17.Finkelhor D. The victimization ofchildren: A developmental perspective //American J of Orthopsychiatry. -1995. - Vol.65. - P.177-193.
18. Gabay N Sexual victimizaton prevalence among New Zealand university students // J Consult. Clin. Psychol.. -1991 - Vol.. 59. - P. 464-466.
19.Gad Y.Z., Nasr H., Mazen I., Salah N. at all. 5?-Reductase deficiency in patients with micropenis // J Jnherit.Metab.Disease. -1997. - 20, № 1. - Р.95 -101.
20.Hammer D.H., Hu S., Magnuson V.L. A linkade between DNA markers on the chromosome and male sexual orientation // Science. - 1993. - T.261. - P.321-322.
21.Hazelwood R.R., Warren J. The criminal behavior of the serial rapist // FBI Law Enforcement Bull. - 1990. - Vol. 59. - P. 11-16.
22.Kreuter M, Sullivan M, Siosteen A. Sexual adjustment and quality of relationships in spinal paraplegia //Arch Phys Med Rehabil.
- 1996. - №77. - 541-547.
23.Margolin L. A treatment model for the adolescent sex offenders // J of Offender Counseling, Services & Rehabilitation. - Fall/ Winter, - 1983. - Vol. 8, № 1 - 2.
24.Schuhler P.H. Fertile masculine: L'environnement mis en cause // Cjncours med. - 1997. - 119. - №32. - P.2425.
© А.Б. Мелентьев, 2002 УДК 340.67: 615.214.2: 543.544
А.Б. Мелентьев
СКРИНИНГ ЛЕКАРСТВЕННЫХ, НАРКОТИЧЕСКИХ BE ЩЕСТВ И ИХ МЕТАБОЛИТОВ МЕТОДОМ ГАЗОВОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С МАСС - СЕЛЕКТИВНЫМ ДЕТЕКТОРОМ
Бюро судебно-медицинской экспертизы (нач. бюро- проф. П.И.Новиков) Челябинской области
Приведены данные о степени извлечения из биожидкости в органический растворитель наркотических, лекарственных веществ, их метаболитов и продуктов гидролиза для дальнейшего скрининга методом газовой хроматографии с масс-селективным детектором. Обоснован выбор дериватизации с помощью уксусного ангидрида, как наиболее простого и надежного метода, предназначенного для серийных анализов.
Ключевые слова: скрининг, наркотические, лекарственные вещества, токсикологический анализ.
A.B.Melentev
SCREENING OF DRUGS AND THEIR METABOLITES BY GAS CHROMATOGRAPHY FROM MASS - SELECTIVE DETECTOR
Chelabinsk
The extractions, given about a degree, from biological fluid in organic solvent of drugs, their metabolites and product of hydrolysis for further screening by gas chromatography from mass - selective detector are given. The choice derivatization with acetic anhydride, as most simple and reliable method intended for serial analysis is proved.
Key words: screening, drugs, toxicological analysis.
В связи с широким внедрением в химико-токсикологи- ется разработке методов скрининга наркотических, психический анализ выкокоспецифичных и чувствительных инст- тропных и сильнодействующих лекарственный: веществ из
рументальных методов анализа, таких как газовая и высоко- биожидкостей организма, основанных на инструментальных
эффективная хроматографии с масс-селективными детекто- анализах взамен низко чувствительного и мало специфично-
рами, в зарубежной литературе все большее внимание уделя- го метода хроматографии в тонких слоях [6, 8-10,12].
Таблица 1
Экспериментальные степени извлечения из мочи некоторых наркотических, лекарственных веществ
№ п.п. Название соединения рКа Производные Степень извлечения, %
1 Адифенин (Спазмолитин) - 81,5
2 Алимемазин (Терален) 9 - 78
3 Амидопирин 5 - 51,7
4 Аминазин (Хлорпромазин) 9,3 - 74,5
5 Амитриптилин 9,4 - 77,1
6 Амобарбитал (Барбамил) 7,9 Ме 96,2
7 Амфетамин 9,9 Ас 66,3
8 Анабазин Ас 67,5
9 Атропин 10 ТМС 75,1
10 Ацепромазин 9,3 - 61,3
11 Барбитал 8 Ме 90,5
12 Бромгексин 8,5 - 86
13 Бупренорфин 8,5;10 Ас 74,9
14 Бутадион 4,5 - 96,9
15 Верапамил 8,9 - 54,6
16 Гексабарбитал 8,2 Ме 95,2
17 Диазепам 3,3 - 76,3
18 Диклофенак 4,2 - 89,9
19 Дифенгидрамин (Димедрол) 9 - 90,2
20 Динезин - 76,7
21 Дипразин 9,1 - 63,9
22 Имизин 9,5 - 76,4
23 Индометацин 4,5 Ме 73,5
24 Карбамазепин - 78,1
25 Кардиамин - 87,9
26 Кетамин 7,5 - 99,3
27 Клозапин Ас 85,8
28 Клонидин 8,2 Ас 73,2
29 Кодеин 8,2 Ас 86,4
30 Кокаин 8,7 - 88,8
31 Лидокаин 7,9 - 96
32 Маркаин (Бупивакаин) 8,1 - 84,2
33 МДА Ас 67
34 МДМА Ас 64,6
35 Мебикар - 94,5
36 Медазепам (Мезапам) 6,2 - 88,2
37 Мепробамат - 80,2
38 Метамфетамин 9,9 Ас 68,1
39 Миансерин 7,1 - 83,1
40 Морфин 8;9,9 Ас 64,8
41 Нитразепам 3,4,10,8 - 70,6
42 Новокаин (Прокаин) 8,1 Ас 64,9
43 Окспренолол 9,5 Ас 98,2
44 Папаверин 6,4 - 77,1
45 Пентобарбитал (Этаминал) 8 Ме 98,5
46 Промедол (Тримеперидин) - 88,1
47 Пропранолол (Анаприлин) 9,5 Ас 94,6
48 Стрихнин 2,3;8 - 76
49 Супрастин (Галопирамин) - 77,8
50 Тиаприд - 57,5
51 Тизерцин (Левомепрамазин) 9,2 - 78,4
52 Тиопентал 7,5 Ме 95,2
53 Тиоридазин 9,5 - 61,6
54 Трамадол 8,3 ТМС 92,5
55 Триоксазин - 92,5
56 Феназепам - 77,8
57 Фенобарбитал 7,4 Ме 89,1
58 Фентанил 8,4 - 79,8
59 Хинин 4;8,5 Ас 87,5
60 Хлордиазепоксид 4,6 - 69,8
61 Хлорпротиксен 8,8 - 73,3
62 Циклобарбитал 7,6 Ме 94,5
63 Тригексифенидил (Циклодол) - 87,1
64 Циннаризин - 82,6
65 Эфедрин 9,6 Ас 89,2
Методики скрининга, основанные на газовой хроматографии с масс-селективным детектором (ГХ/МСД) обычно используют в качестве биологического объекта мочу. В моче, как правило, концентрация анализируемых веществ больше чем в других биообъектах, кроме того, в моче одновременно с нативными соединениями идентифицируется еще несколько метаболитов, что увеличивает надежность идентификации и время, в течение которого можно обнаружить факт приема сильнодействующих и нелегальных средств.
В настоящее время многие региональные бюро судебно-медицинской экспертизы уже оснащены ГХ/МСД и нуждаются в современных методиках анализа наэтой аппаратуре. Внедрение методики скрининга на ГХ/МСД позволяет существенно улучшить качество и сократить трудоемкость проведения судебно-химических экспертиз на наркотические, психотропные и сильнодействующие вещества.
Для того чтобы результаты скрининга по анализу мочи были достоверными и наде жными, необходимы
данные о метаболизме и фармакокинетике всех контролируемых субстанций, газохроматографических и масс-спектральных характеристиках нативных веществ, их метаболитов и дериватов, в виде которых эти вещества анализируются методом ГХ/МСД. Большинство метаболитов наркотических и лекарственных веществ -это соединения более полярные, чем нативные вещества. Кроме того, многие из них амфолиты, то есть их ионизация происходит, как в кислой, так и в щелочной среде. Из-за наличия в структурах метаболитов полярных МИ- и ОН- групп эти вещества трудно летучи в условиях ГХ анализа. Все эти проблемы существенно затрудняют разработку и внедрение эффективного ГХ скрининга в химико-токсикологическом анализе.
В Челябинском областном бюро судебно-медицинской экспертизы разработана и используется в течение последних пяти лет методика скрининга мочи на наркотические и сильнодействующие лекарственные вещества методом ГХ/МСД. В настоящей статье и ряде последующих будут приведены данные, необходимые для обосно-
Таблица2
Экспериментальные степени извлечения из мочи некоторых метаболитов и продуктов гидролиза наркотических и лекарственных веществ
№ п.п. Название соединения Производные Степень извлечения, %
1 2-амино-5-хлорбензофенон (АХБ) Ас 76,2
2 2-метиламино-5-хлоробензофенон (МХБ) Ас 84,0
3 2-амино-5-бром-2'-хлорбензофенон (АБХБ) Ас 83,0
4 2-амино-5-нитробензофенон (АНБ) Ас 91,6
5 Дифенилметанол (продукт гидролиза дифенгидрамина) Ас 89,5
6 1,2,5-триметил-4-фенил-пиперидил-4-ол (продукт гидролиза промедола) Ас 74,1
7 Нортриптилин Ас 90,9
8 Амитриптилин -М (10-гидрокси-) ТМС 88,0
9 Амитриптилин -М (нор, 10-гидрокси-) ТМС 85,6
10 Имипрамин-М (дезметил-) Ас 58,2
11 Имипрамин-М (гидрокси-) Ас 93,4
12 Имипрамин-М(дезметил, гидрокси-) Ас 52,5
13 Клозапин -М (дезметил-) Ас 60,1
14 Клозапин -М (гидрокси-) изомер 1 Ас 89,6
15 Клозапин -М (гидрокси-) изомер2 Ас 82,3
16 Котинин - 85,7
17 Левомепромазин -М (гидрокси-) Ас 56,8
18 МДМА -М (4-гидрокси-3-метоксиметамфетамин Ас 62,8
19 Медазепам -М (дезметил-) Ас 103,2
20 Метилэкгонин (пр-т гидролиза кокаина) Ас 81,4
21 Миансерин-М Ас 92,0
22 Морфин -М(дезметил-) Ас 86,7
23 Пентоксифиллин -М(дегидро-) - 84,8
24 Пентоксифиллин -М2 Ас 87,9
25 Прометазин -М(дезметил-) Ас 61,8
26 Прометазин -М(гидрокси-) Ас 83,4
27 Прометазин -М(дезметил, гидрокси-) Ас 89,9
28 Тиаприд -М(О-дезметил-) Ас 64,7
29 Трамадол -М(О-дезметил-) ТМС 77,6
30 Трамадол -М^-дидезметил-) Ас 80,5
31 Трамадол-М (О^-дидезметил-) Ас 57,1
32 Фенобарбитал-М(гидрокси-) Ас 80,9
33 Хлорпромазин-М (гидрокси-) Ас 90,4
Примечание: буква -М после названия вещества означает его метаболит.
вания применяемого нами подхода.
Как правило, методика ГХ скрининга включает стадии разрушения коньюгатов, экстракции анализируемых соединений из биожидкости, их дериватизацию, хроматографический анализ и последующую обработку хроматограмм для идентификации потенциальных токсикантов [5, 8].
Т ак как большинство полярных метаболитов наркотических и лекарственных веществ выводятся с мочой в коньюгированном виде [5, 7], перед газохроматографическим анализом необходима стадия разрушения коньюгатов. Нами используется прямой кислотный гидролиз в 2н. растворе соляной кислоты. При этом не-
добиться одновременного извлечения в органический растворитель веществ кислого, основного и амфотерного характера с целью проведения ГХ скрининга. Цель данного этапа работы проверка работоспособности методики извлечения на широком круге наркотических, сильнодействующих лекарственных веществ их метаболитов и выбор способа дериватизации.
Материалы и методы исследования
Стандартные растворы наркотических и лекарственных веществ: В качестве стандартных растворов наркотических и лекарственных веществ использовали мета-ноловые или этаноловые растворы этих веществ в виде солей или оснований, которые готовили разведением
Рис. 1. Схемы ацетилирования аминов, фенольных и спиртовых гидроксильных групп
обходимо учитывать возможность гидролиза соединений, имеющих сложно - эфирные и амидные связи, а также иногда и простые эфирные связи. При более мягком энзимном гидролизе [6, 8] не происходит разрушения анализируемых соединений, по использование дорогого импортного реактива (Ь-глюкоронидазы) пока не позволяет нам использовать этот метод для рутинных анализов.
Большинство авторов методик скрининга предпочитают жидкость - жидкостную экстракцию, как наиболее дешевый и универсальный метод изолирования [8]. Как было показано ранее [3, 4], выбором экстрагента, рН водной фазы в сочетании с высаливанием можно
Рис. 2. Схема возможных реакций, происходящих при ацетилировании 1-(3-метоксифенил-)-2-(диметиламинометил)-гидроксициклогексан- 1-ола
ампулированных препаратов или растворением порошков фармацевтического качества. При отсутствии порошков или ампулированных препаратов, для наркотических веществ, находящихся в нелегальном обороте, использовали методику приготовления стандартов, описанную в работе [2]. С контролем приготовленных стандартов методом ГХ /МСД. Из стандартных растворов (обычно с концентрацией 1 г/л) перед экспериментом готовили смеси растворов различных веществ с концентрацией 0,04 г/л каждого компонента, смеси добавляли в "холостую" биожидкость перед пробоподготовкой до получения их концентрации в биожидкости 1,0 мкг/мл.
Приготовление растворов метаболитов. Растворы метаболитов наркотических и лекарственных веществ и продуктов гидролиза готовили из экстрактов образцов мочи после кислотного гидролиза, в которой ранее были
обнаружены нативные вещества и их метаболиты. К 10 мл мочи добавляли 2 мл концентрированной соляной кислоты и смесь кипятили 30 минут на водяной бане. После этого корректировали pH водной фазы раствором аммиака или NaOH и экстрагировали трижды при рН=4,0; 8, 5 и 11 порциями по 40 мл смеси хлороформа с изобутанолом (6:1). Экстракты объединяли и упаривали досуха при температуре 40оС в токе воздуха. Сухие остатки растворяли в 500 мкл этанола. В "холостую" мочу перед экстракцией добавляли по 50 мкл полученного экстракта.
Реагенты и растворители: В работе использовали BSA (^О-бис(триметилсилил) ацетамид и иодметан фирмы "Aldrich", тетраметиламмония гидроксид фирмы "ICN", пиридин квалификации "ч" был перед использованием обезвожен и перегнан, уксусный ангидрид квалификации "ч", также был перегнан перед использованием. Хлороформ, изобутанол и диметилсуль-фоксид были квалификации "хч".
Методика эксперимента: К 1мл "холостой" мочи добавляли по 25 мкл спиртовых растворов смеси лекарственных и наркотических для получения их концентраций в моче на уровне 1 мкг/мл или по 50 мкл экстрактов, содержащих метаболиты наркотических и лекарственных веществ. К образцам добавляли по 100 мг бикарбоната натрия. Проверяли рН среды по бумаге "Ри-фан"(8,4-8,6), затем образцы экстрагировали 5 мл смеси хлороформ: изобутанол 6:1 (по объёму). После экстракции в течение пяти минут на встряхивателе АВУ-6М от каждой пробы отбирали по 4 мл органического экстракта, который пропускали через 1 г безводного сульфата натрия. Слой соли промывали 1 мл хлороформа, к органической фазе добавляли 20 мкл раствора газохроматографического внутреннего стандарта (цикли-зин -0,04 г/л) и растворитель испаряли в токе воздуха. К сухим остаткам добавляли по 100 мкл метанола и 1 мкл анализировали методом газовой хроматографии на хроматографе НР-5890 с масс-селективным детектором НР-5972 (ГХ/МСД) в режиме SIM по двум характеристическим ионам для каждого анализируемого соединения. В качестве образца сравнения (стандарт со 100% степенью извлечения) использовали смесь из 20 мкл тех же самых смесей лекарственных и наркотических веществ или 40 мкл экстрактов, содержащих метаболиты, которые затравливались в мочу и 20 мкл раствора газохроматографического внутреннего стандарта (циклизин -
0,04 г/л). К образцу сравнения добавляли метанол до общего объёма 100 мкл и анализировали аналогично описанному выше способу. Некоторые соединения анализировали в виде триметилсилильных (ТМС), метиловых (Ме) эфиров или ацетилированных (Ас) производных. В этих случаях:
- для получения ТМС эфиров к сухим остаткам после испарения растворителей добавляли по 70 мкл BSA (^О-бис(триметилсилил) ацетамид) и смесь нагревали 15 минут при 80оС. 1 мкл полученной смеси исследовали методом ГХ/МСД по приведенным выше условиям в режиме SIM по характеристическим ионам ТМС производных анализируемых соединений,
- для получения метиловых эфиров к сухим остаткам добавляли 20 мкл 5% раствора тетраметиламмония гидроксида в метаноле и 100 мкл безводного диметил-сульфоксида. После двухминутной выдержки добавляли 20 мкл метилйодида, смесь выдер живали при комнатной температуре 10 минут при периодическом перемешивании. Далее к смеси добавляли 200 мкл 0,1н раствора соляной кислоты и 3 мл хлороформа. После экстракции в течение 5 минут хлороформный слой переносили в чистый флакон и испаряли в токе воздуха досуха. К сухому остатку добавляли 100 мкл метанола и 1 мкл исследовали методом ГХ/МСД в режиме SIM по характеристическим ионам метиловых эфиров анализируемых соединений;
- для получения ацетилированных производных к сухим остаткам после испарения растворителей добавляли 50 мкл смеси уксусного ангидрида и пиридина (3:2 по объёму). Смесь нагревали 20 минут при 80оС и избыток реагентов испаряли в токе воздуха при 40оС. Сухой остаток растворяли в 100 мкл этилацетата и 1 мкл исследовали методом ГХ/МСД по приведенным выше условиям в режиме SIM по характеристическим ионам ацетилирован-ных производных анализируемых соединений.
Образцы сравнения для этих соединений также подвергались дериватизации и анализу в виде соответствующих производных. Эксперименты проводились не менее двух раз и таблицах приведены средние значения от двух и более определений. В табл. 1 и 2 приведены данные по степени извлечения большой группы наркотических и лекарственных веществ, а также некоторых метаболитов и продуктов гидролиза. Из приведенных данных видно, что для большинства лекарственных и наркотических веществ, с которыми проводился эксперимент, степень извлечения при данных условиях выше 70% и для всех исследуемых соединений она не ниже 50%. По нашему мнению этого уровня извлечения вполне достаточно для проведения скрининга.
Дериватизация
Стадия дериватизации необходима для анализа методом газовой хроматографии соединений, имеющих полярные группы -ОН и -NH. Чем больше полярных групп в соединении, тем менее оно летуче и тем меньше чувствительность и хуже воспроизводимость газохроматографического анализа без стадии дерива-тизации. Обычно, метаболиты большинства лекарственных и наркотических веществ имеют одну или несколько полярных групп разной природы. В том числе первичные и вторичные аминные группы H2NR и HNRR', имеющие основные свойства разной силы, фенольные или спиртовые гидрокси- группы -ОН, а также карбок-си- и амидные группы, имеющие кислотные свойства разной силы. Поэтому, для их анализа в моче после гидролиза необходима стадия дериватизации. Наиболее часто для анализа метаболитов применяется ацетили-рование уксусным ангидридом в присутствии основного катализатора типа пиридина или триэтиламина. При ацетилировании происходит этерификация первичных и вторичных аминов, фенольных и спиртовых -ОН групп по схемам, приведенным на рис.1. Ацетилирова-ние, наряду с безусловными преимуществами - деше-
визна реактивов, стабильные дериваты с хорошими газохроматографическими свойствами, отсутствие эффекта "привыкания" колонки (как при анализе ТМС производных), обладает и некоторыми недостатками. Основным из них является возможность побочных реакций отнятия воды у некоторых соединений под действием сильного водоотнимающего средства
- уксусного ангидрида. Побочные реакции приводят к тому, что из одного соединения с несколькими - ОН группами может образоваться несколько дериватов с непостоянным количеством продуктов реакции. Например, один из метаболитов трамадола (1-(3-ме-токсифенил)-2-(диметиламинометил)-гидроксицик-логексан-1-ол) имеет структуру, изображенную на рис. 2. Этот метаболит имеет две -ОН группы в циклогексановом кольце и результатом реакции этого метаболита с уксусным ангидридом могут быть 8 соединений, структура которых изображена здесь же. При наличии большого количества метаболитов у одного соединения или при принятии нескольких препаратов одновременно это явление существенно усложняет идентификацию и снижает чувствительность газохроматографического анализа. Возмо жность подобных реакций при ацетилировании необходимо учитывать при поиске и идентификации метаболитов лекарственных и наркотических веществ на хроматограмме. Другим недостатком ацетилирования является отсутствие реакции с МН гру ппами кислого характера. Это не дает возможности закрытия полярных групп в барбитуратах и некоторых других соединениях, имеющих амидные группы. Хотя обычно концентрации барбитуратов и других соединений кислого характера в крови и моче даже при лекарственной дозировке достаточно велики и они легко обнаруживаются при скрининге без дериватизации.
- Алкилирование (метилирование, или пропилиро-вание) обычно применяются для количественного анализа веществ, имеющих -МН и -ОН групп кислого характера [6, 10-11].
- Триметилсилильные эфиры очень чувствительны к влаге и нестабильны при хранении, кроме того, введение реагентов для получения ТМС эфиров в колонку газового хроматографа при анализе ведет к ее "привыканию" и после этого резко ухудшаются газохроматографические характеристики колонки при ана-
лизе других дериватов и нативных лекарственных веществ. Однако в некоторых случаях нельзя обойтись без анализа ТМС эфиров, например при количественном анализе атропина и его аналогов, метаболитов трамадола [1] и др. Для таких анализов желательно иметь отдельную сменную колонку и некоторые навыки работы с такими производными.
- Полифторированные реагенты (трифторуксус-ный, пентафторпропионовый и гептафтормасляный ангидриды) довольно дороги и также относительно легко гидролизуются, что ограничивает их применение. Они обладают теми же недостатками, что и уксусный ангидрид в плане побочных реакций. Кроме того, для производных этих реагентов в библиотеках масс-спектров имеется очень мало справочных данных.
Для целей скрининга мы используем ацетилирова-ние смесью уксусного ангидрида с безводным пиридином, так как это один из самых простых и дешевых способов дериватизации и его преимущества для серийных массовых анализов, на наш взгляд, намного превосходят его недостатки.
Учитывая вышеизложенное, мы применяем следующую методику подготовки мочи к ГХ скринингу:
К 1 мл мочи добавляется 50 мкл раствора этил-морфина г/х (0,02 г/л), 0,2 мл концентрированной соляной кислоты. Флакон герметично закрывается и раствор нагревается на ки пящей водяной бане в течение 30 мин. После охлаждения до комнатной температуры к пробе добавляется 0,20 мл 30% раствор едкого натра и около 100 мг бикарбоната натрия до образования насыщенного раствора. Проверяется рН раствора по бумаге "Рифан" (рН должно быть равно 8,4-8,6) и объект экстрагируется 5 мл смеси хлороформ - изобутанол (6:1). Смесь встряхивается 5 мин. для перемешивания и центрифугируется со скоростью 3000 об/мин. в течение 5 мин. Органический экстракт пропускается через безводный сульфат натрия и испаряется в токе воздуха досуха при температуре не выше 40оС. К сухому остатку добавляется 50 мкл смеси уксусного ангидрида с обезво женным пиридином (3:2 по объему) и смесь нагревается в герметичной полипропиленовой пробирке 20 минут при 80оС. Избыток реагентов испаряется в токе воздуха при 40оС. Сухой остаток растворяется в 100 мкл этилаце-тата и 1 мкл исследуется методом ГХ/МСД.
Литература
1. Веселовская Н.В., Кислун Ю.В., Еремин С.К., Изотов Б.Н., Вятчанина А.П. Дорогокупец О.Б., Морозова Е.Б., Коваленко А.Е.// Суд. - мед. эксперт. - 1996. - №4.- С. 38-43.
2. Веселовская Н.В., Симонов Е.А., Сорокин В.И., Дроздов М.А., Изотов Б.Н., Андрияко Т.Б., Дорогокупец О.Б., Морозова Е.Б., Коваленко А.Е.// Суд. - мед. эксперт. - 1999. - №2.- С. 23-30.
3. Изотов Б.Н., Еремин С.К. Методология химико-токсикологического анализа органических ядов. Выделение и концентрирование. I. Жидкость - жидкостная экстракция // Современные методы химико-токсикологического анализа. Сборник научных трудов. М. - 1986. - с.7-39.
4. Мелентьев А.Б., Долгова Л.А., Котенко А.С. Судебно-медицинская экспертиза отравлений наркотическими веществами, психотропными средствами и алкоголем: Сб. научных трудов/Казань: ООО "ГранДан", 2001.- с.37-43.
5. De Zeeuw R.A. // Journal of Chromatography B. - 1989. - Vol.488. - №2. - P. 199-203.
6. Drummer O.H. // Journal of Chromatography B. - 1999. -Vol. 733. -№ 1-2. - P. 27-45.
7. Moffat A.C. Clarke's isolation and identification of drugs/London, Pharmaceutical Press. - 1986.
8. Maurer H.H. // Journal of Chromatography B. - 1992. - Vol. 580. - №1. - P. 3-41.
9. Maurer H.H. // Medical Focus - 1994.-Vol. 12. - №2. - P. 32-36.
10.Maurer H.H. / Journal of Chromatography B. - 1999.- Vol. 733.- № 1-2. - P. 3-25.
1173 p.
ll.MaurerH.H., TauvelF.X., Kraemer T. /Journal of Analytical Toxicology - 2001. - Vol. 25. - P. 237-245.
12.Simpson D., Brainthnaite R.A., Jarvie D.R., Stewart M.J., Walker S., Watson I.W., Widdop B. // Annals of Clinical Biochemistry -1997. - Vol.34. -№5. - P. 460-510.
13.Wilkins D., Haughey H., Cone E., et. al. // Journal of Analytical Toxicology - 1995. - Vol. 19. -№6- P. 483-491.
© В.И. Витер, А.Р. Поздеев, В.Е.Чирков, 2002 УДК 616-001-071-085:340,624.41
В.И. Витер, А.Р. Поздеев, В.Е.Чирков ЭЛЕКТРОПРОВОДНОСТЬ И МИКРОКРИСТАЛЛИЗАЦИЯ В ИССЛЕДОВАНИИ БИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕД ДЛЯ ПОСТМОРТАЛЬНОЙ КЛИНИКОФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ
Кафедра судебной медицины ИГМА (зав.кафедрой - проф. В.И. Витер), кафедра криминалистики ИФ НА МВД РФ (нач. кафедры - к.ю.н., доц. Ю.Т. Шуматов),
ГУЗ "Бюро судебно-медицинской экспертизы" М3 УР (начальник бюро - В.И. Жихорев)
Изучены электропроводность и микрокристаллизация крови, ликвора, желчи и мочи у получивших травму лиц и погибших на месте происшествия иускончавшихсяспустя время после интенсивного лечения для решения вопроса о возможности использования предложенных методов как теста обоснованности и эффективности применения лекарственных средств в премортальном периоде.
Ключевые слова: электропроводность, микрокристаллизация, клинико-фармакологическая оценка.
V.I.Viter,A.R.Pozdeev, V.E.Chirkov ELECTRORESISTANCE AND MICROCRYSTALLIZATION IN RESEARCH OF BIOLOGICAL ENVIRONMENTS FOR POSTMORTEM THE CLINIC-PHARMACOLOGICAL RATING
Izhevsk
Blood, liquor, bile and urine in corpses who have received a trauma on a place of incident, and after time after intensive treatments for the decision of a question on an opportunity of use of suggested methods as test of legality and efficiency of application of medical products in postmortem the period are investigated and microcrystalli zation Key words: microcrystallization, clinic-pharmacological rating.
Известно, что при проведении интенсивной терапии могут возникать патологические процессы, вызванные необоснованными отклонениями от стандартов и принципов проведения лечения [4,5]. Прежде всего, к ним следует отнести введение в кровяное русло избыточных доз инфузионных средств, иногда несовместимых коктейлей, проведение манипуляций без достаточных оснований, полипрагмазия, иногда не назначение показанных лекарственных средств [1,5]. Безусловный интерес для судебно-медицинской экспертизы представляет разработка экспресс-методов выявления нарушений в проведении интенсивной терапии.
Цель исследования - изучение электропроводности и микрокристаллизации крови, ликвора, желчи и мочи у лиц, умерших в результате травмы на месте происшествия и в ЛПУ спустя несколько дней интенсивного лечения после получения травмы. В первую группу вошли лица, умершие на месте происшествия, как правило, ДТП - 9 человек; вторая группа - 12 человек - провели в больнице от 0,5 до 72 часов. Средний возраст исследуемых лиц составил 35,2±0,27 лет. Судебно-медицинский диагноз травмы и травматического шока верифицирован комплексом морфологических и гистологических критериев. Давность смерти исследуемых трупов не превышала 12 часов. Забор ликвора производился в объеме 2-3 мл сразу после вскрытия головного мозга из желудочков головного мозга, без примесей крови. Кровь объемом 2-3 мл забиралась из крупных сосудов. Желчь в объеме 2-3 мл - пипеткой из желчного пузыря сразу после его вскрытия. Мочу извлекали пипеткой непосредственно из мочевого пузыря в объеме 2-3 мл в спе-
циальные пробирки. Температура помещения, в которой находились трупы, и комнаты где проводились измерения, была в среднем 21,6±0,31°С. В дальнейшем изучаемые среды подвергались центрифугированию (при 10000 об\мин) в течение 2 минут. Измерение электропроводности (ч) супернатантной фазы изучаемых сред проведено на частоте тока 1000 Гц с ис пользованием моста Кольрауша [3]. Электроды в кювете были платиновые. Всего проведено 144 измерения электропроводности. Микрокристаллизация изучалась по описанной ранее методике [2]. На предметное стекло наносили по три капли ликвора, плазмы крови, желчи и мочи, и высушивали их при комнатной температуре вдали от нагревательных приборов и прямых солнечных лучей. Высохшие капли изучали под микроскопом МБС-10 в отраженном свете при увеличении 2ґ6 или 4ґ6. Фотографирование картины микрокристаллизации осуществлялось с микроскопа цифровой камерой «ОЬУМРиБ» С-2000200М. Нами тщательно просматривались записи в картах стационарного больного, доставляемых вместе с трупами. Статистическая обработка материала проведена в специализированном пакете БТАНБТІСА 5.5.
Результаты анализа прижизненных лабораторных показателей из историй болезни, доставляемых с трупами лиц второй группы, были следующие (табл.1). Калий плазмы крови в среднем был ниже «пороговых» значений (4,31±1,2 ммоль/л), что указывало на гипокалие-мию. Натрий плазмы крови был практически на границе нормальных значений 134,4±6,1 ммоль/л. Кальций плазмы был измерен только у одного больного, у которого он был ниже нормальных значений почти в два с
