CC BY
41
УДК 547.92+542.91
Вестник СПбГУ. Сер. 4. 2012. Вып. 3
С. Н. Морозкина, О. И. Антимонова, А. С. Дроздов, Р. П. Богаутдинов, А. Г. Шавва
СИНТЕЗ И ИССЛЕДОВАНИЕ НЕКОТОРЫХ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ 17,17-ДИМЕТИЛ-Б-ГОМО-8а-АНАЛОГОВ СТЕРОИДНЫХ ЭСТРОГЕНОВ
Введение. Стероидные эстрогены и их модифицированные аналоги находят широкое клиническое применение в качестве средств заместительной гормональной терапии [1-3], контрацептивных препаратов [4], при остеопорозе [5]. Однако при длительном применении эстрогенов, обладающих заметной гормональной активностью, у женщин повышается риск возникновения различных опухолевых заболеваний [6-8]. Канцерогенные свойства природных эстрогенов в значительной степени обусловлены их метаболическим гидроксилированием в положение 4 [9, 10], а также в а-положение по отношению к кетогруппе в кольце Б [11]. Поэтому желательно создание модифицированных аналогов эстрогенов, у которых такие метаболические превращения были бы невозможны или значительно снижены.
Ранее на кафедре химии природных соединений были синтезированы 8а-аналоги стероидных эстрогенов, содержащие фтор в положении 2 [12, 13]. Исследование их биологических свойств показало, что они могут обладать заметным остеопротекторным эффектом и/или гиполипидемической активностью при пониженном гормональном действии, что является преимуществом по сравнению с рядом лекарственных препаратов. При наличии заместителя при С-2 канцерогенный эффект от гидроксилирования в положение 4 должен значительно уменьшиться [9, 10].
В продолжение этих работ представлялось интересным синтезировать соединения, у которых а-положение к кетогруппе в кольце Б было бы защищено от метаболического гидроксилирования, и изучить их биологическое действие. В качестве модельных стероидов мы избрали 17,17-диметил-Б-гомо-8а-аналоги стероидных эстрогенов, поскольку при этом решалась ещё одна задача — получение соединений с повышенной гидрофобностью в районе кольца Б. Такие модификации важны при поиске противоопухолевых препаратов, действие которых обусловлено ингибированием ферментов, стимулирующих образование эстрогенов в опухолевых клетках [14-17]. При наличии у новых соединений преимуществ по сравнению с известными веществами открываются перспективы создания модифицированных стероидов, одновременно содержащих фтор в положении 2 и метильные группы в кольце Б.
Обсуждение результатов.
Ранее на кафедре химии природных соединений СПбГУ были получены Б-гомо-В-нор-аналоги стероидных эстрогенов с ^ис-сочленением колец В и С, содержащие заме© С. Н. Морозкина, О. И. Антимонова, А.С.Дроздов, Р. П. Богаутдинов, А. Г. Шавва, 2012
О
О
НО
стители в кольце Б [18, 19]. Поскольку полный синтез модифицированных эстрогенов 8а-ряда намного проще, чем соединений других стереохимических рядов, на первом этапе работы представлялось важным оценить биологическую активность недавно полученного аналога 1, сравнив её с активностью известного стероида 2 [20]. У аналога 2 наиболее выражено иммуносупрессорное действие, именно этот эффект исследовали в первую очередь (табл. 1). Представленные результаты показывают, что стероид 1 является иммуностимулятором в клетках тимуса и иммуносупрессором в клетках селезёнки. Это означает, что соединение 1 может иметь более широкое применение по сравнению с аналогом 2 .
Таблица 1
Иммунологические показатели (М ± т, в скобках — % к контролю) у мышей после перорального введения стероида 1
Опыт Селезёнка Тимус
Масса, мг Клеточность, 1 • 106 АОК, 1 • 103 АОК/Юь спленоцитов Масса, мг Клеточность, 1 • 106
Контроль 157 ± 9,6 (100 ±6,1) 158 ± 16,3 (100 ±10,3) 224 ± 16,3 (100 ± 7,3) 1460 ± 160 (100 ±11,0) 35,4 ±1,5 (100 ±4,2) 54,4 ± 5,2 (100 ±9,6)
Введение стероида, 5 мг/кг 141 ± 3,3 (89,8 ±2,1) 140 ± 12,3 (88,6 ± 7,8) 122 ±27,1 (54,5 ± 12,0)* 910 ±219 (62,3 ± 15,0) 44,6 ± 3,5 (126 ±9,9)* 74,0 ± 10,8 (136 ± 19,9)
Введение стероида, 15 мг/кг 139 ± 5,8 (88,5 ± 3,7) 128 ± 16,0 (81,0 ±10,0) 108 ± 15,6 (48,2 ± 7,0)* 840 ± 109 (57,5 ± 7,5)* 50,8 ±4,1 (144 ±11,6)* 95,5 ± 6,3 (176 ± 11,6)
* р ^ 0,05 по сравнению с группой овариэктомированных животных, получавших гиперхолестери-немическую диету. Стероид использовали в дозе 15 мг/кг веса тела в день.
Мы изучили влияние соединения 1 на течение экспериментального атеросклероза на модели крыс и кроликов — самцов, получавших с пищей холестерин. Результаты представлены в табл. 2 и 3. Наиболее важный эффект — блокирование избыточного содержания холестерина в аорте подопытных животных. Представляется также существенным отсутствие гипертриглицеридемического эффекта, поскольку последний рассматривается как независимый фактор риска сердечно-сосудистых заболеваний [21-23].
Таблица 2
Гиполипидемическое действие соединения 1 в опытах на крысах-самцах, получавших гиперхолестеринемическую диету
Холестерин Холестерин Холестерин Триглицериды Триглицериды
Группа животных в сыворотке в печени, в аорте, в сыворотке в печени,
крови, ммоль/л мг/г мг/г крови, мг/дл мг/г
Интактные 1,67 ±0,09** 3,82 ± 0,18** 1,51 ±0,06* 53,3 ± 4,5** 7,5 ±0,12**
Интактные,
получавшие 4,09 ±0,37 9,64 ±0,74 1,83 ±0,14 84,4 ± 5,4 10,5 ±0,7
диету
Интактные,
получавшие диету 2,62 ±0,18** 6,60 ±0,41** 1,51 ±0,04* 57,7 ±4,8** 8,2 ± 0,5*
и стероид 1
* р < 0,05;
** р ^ 0,01 по сравнению с группой овариэктомированных животных, получавших гиперхолесте-ринемическую диету. Стероид использовали в дозе 15 мг/кг веса тела в день.
Стероид 1 не влияет на уровни ориентационно-исследовательской реакции и двигательной активности в опытах на крысах-самцах в «норковой камере», как и на уровень тревожности — в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт». Очень важно, что у исследованного стероида отсутствует утеротропная активность.
Поскольку частота сердечно-сосудистых заболеваний у женщин значительно возрастает после менопаузы и по мере старения, в течение многих лет считали, что применение эстрогенов для профилактики и лечения этих заболеваний весьма перспективно. Однако широкомасштабные исследования, проведённые в разных странах, не подтвердили этой точки зрения [24]. Очевидно, что отрицательные результаты клинических исследований объясняются сложной системой регуляции в организме, и ряд физиологических функций эстрогенов в патологических состояниях может иметь и негативное влияние. Сказанное выше свидетельствует о необходимости изучения биологических свойств модифицированных эстрогенов, у которых предполагаемые негативные эффекты могут быть нивелированы.
О
О.
\
О
н Л Л^ н
О
яо
яо
8 Я = Н
9 Я = С6Н5СН2
5 Я = С6Н5СН2 10 Я = Н
Учитывая результаты изучения биологической активности 17,17-диметил-Б-гомо-В-нор-8а-эстрона 1, представлялось интересным синтезировать другие Б-гомо-8а-ана-логи стероидных эстрогенов, содержащие метильные группы в положении 17. В качестве модельного соединения мы избрали стероид 3, поскольку его аналог 4 проявляет гиполипидемическую активность при низком утеротропном действии [25]. Наконец, в число модельных соединений был включён стероид 5. Важным элементом структуры этого вещества является метильная группа при С-1, наличие которой должно препятствовать потенциальному повреждению ДНК после метаболического гидроксилирова-ния кольца А и, следовательно, снижать потенциальную канцерогенность [26, 27].
Соединение 3 получено алкилированием известного стероида 6 [28], спектральные характеристики нового вещества однозначно доказывают его пространственное строение. Отметим, что в одном из опытов, помимо основного продукта, был выделен
Таблица 3
Гиполипидемическое действие соединения 1 в опытах на кроликах-самцах, получавших с пищей холестерин (500 мг/кг веса тела в день) в течение 45 дней
Холестерин Холестерин Холестерин Триглицериды Триглицериды
Группа животных в сыворотке в печени, в аорте, в сыворотке в печени,
крови, ммоль/л мг/г мг/г крови, мг/дл мг/г
Интактные 1,72 ±0,36** 3,20 ±0,20** 2,56 ±0,12* 1,13 ±0,04** 4,1 ± 0,3**
Интактные,
получавшие 48,9 ±2,2 19,6 ±2,2 33,8 ±3,4 6,50 ± 1,14 18,5 ± 1,1
диету
Интактные,
получавшие диету 35,8 ± 2,8* 16,9 ±2,7 19,4 ±3,9* 7,72 ±0,89 13,2 ± 1,8*
и стероид 1
* р < 0,05;
** р ^ 0,01 по сравнению с группой овариэктомированных животных, получавших только холестерин. Стероид использовали в дозе 15 мг/кг веса тела в день.
аналог — соединение 7. Совершенно очевидно, что промежуточным этапом в образовании этого продукта является окисление по С-17 под действием кислорода воздуха, поэтому в дальнейшем целесообразно проводить стадию алкилирования в инертной атмосфере.
Модельный стероид 5 получали из аналога 8, синтезированного по схеме Торго-ва—Ананченко [28]. Перед стадией алкилирования вводили бензильную защиту, что позволило удалить её на последнем этапе каталитическим гидрированием с выходом 73 %.
Схемы синтеза новых модельных соединений не оптимизированы.
Экспериментальная химическая часть. Полноту протекания реакций проверяли методом ТСХ на пластинах Silufol в системах растворителей петролейный эфир — этилацетат, (4:1), (3:1). Детектирование веществ проводили адсорбцией паров иода, в УФ-свете или действием фосфомолибденовой кислотой. Для очистки веществ колоночной хроматографией использовали силикагель 60 (0,040-0,063 мм) фирмы Merck.
Спектры ЯМР ХН и 13С регистрировали на спектрометре Bruker DPX-300 соответственно на частотах 300,13 и 75,468 МГц при 295 K. Для спектров ЯМР 1Н использовали растворы 5-7 мг вещества в 0,6 мл CDCl3, а для ЯМР 13С — 30-50 мг в том же объёме. Химические сдвиги измерены по отношению к TMC путём присвоения сигналам растворителя (CDCI3/CHCI3 99,9/0,1) стандартных значений 7,26 (1Н) и 76,90 м. д. (13С). Температуры плавления веществ определяли на нагревательном столике Boetius. Все синтезированные вещества — рацемические.
Метиловый эфир D-гомо-ва-эстрона (6) получали в условиях, предложенных в работе [28]. Выход (82 %), т. пл. 130,5-131 °С (т. пл. 128,0-128,5 °С [28]). Полученное вещество плавилось без депрессии температуры плавления в пробе смешения с заведомо известным препаратом. Спектр ЯМР 1Н (5, м. д.): 7,02 (Н-1), 6,70 (Н-2), 6,58 (Н-4), 2,65 (Н-6а), 2,80 (Н-6|3), 1,87 (Н-7а), 1,72 (Н-7|3), 1,96 (Н-8а), 2,60 (Н-9а), 1,77 (Н-11а), 1,60 (н-11|3), 1,65 (Н-12а), 1,70 (Н-12|3), 1,75 (Н-14а), 1,46 (Н-15а), 2,02 (Н-15|3), 1,67 (Н-16а), 2,07 (Н-16|3), 2,24 (Н-17а), 2,61 (Н-17|3), 1,15 (н-18), 3,85 (СН3О). Спектр ЯМР 13С (5, м. д.): 139,72 (С-1), 111,92 (С-2), 157,21 (С-3), 112,96 (С-4), 137,00 (С-5), 31,32 (С-6), 21,24 (С-7), 40,73 (С-8), 40,78 (С-9), 132,46 (С-10), 27,86 (С-11), 32,85 (С-12), 47,73
(С-13), 47,69 (С-14), 25,51 (С-15), 26,12 (С-16), 37,56 (С-17), 214,99 (С-17а), 18,63 (С-18), 54,84 (СНзО). Найдено, %: С 80,32; Н 8,80; C20H26O2. Вычислено, %: С 80,50; Н 8,78.
17,17-Диметил-3-метокси-В-гомо-8а-эстра-1,3,5(10)-триен-17а-он (3).Краствору 500 мг (1,67 ммоль) 3-метокси^-гомо-8а-эстра-1,3,5(10)-триен-17а-она в 25 мл ТГФ при перемешивании добавляли 0,93 г (8,3 ммоль) трет-бутилата калия и 1,18 г (8,3 ммоль) йодистого метила. Реакционную смесь перемешивали при нагревании, ход реакции контролировали методом ТСХ. После обычной обработки целевой продукт получали кристаллизацией из метанола, выход 333 мг (61 %), т. пл. 147-150 °С. Спектр ЯМР ХН (CDCI3, 6, м. д.): 7,06 д (хН, J = 8,5 Гц, С^Н), 6,73 дд (ХН, J = 8,5 Гц, J = 2,4 Гц, С2-Н), 6,62 д (ХН, J = 2,4 Гц, С4-Н), 3,79 с (3Н, МеО), 2,88-2,70 м (ХН), 2,70-2,57 м (2Н), 2,22-2,05 м (1H), 2,04-1,82 м (4Н), 1,82-1,61 м (5Н), 1,55-1,41 м (2н), 1,21 с (3Н, С18-Нз), 1,15 с, 1,11 с (6Н, 2CH3-C17). Спектр ЯМР 13C (CDCI3, 6, м. д.): 219,4, 157,29, 137,30, 133,69, 129,90, 113,12, 112,03, 55,06, 47,48, 46,81, 44,29, 41,11, 40,74, 39,0, 34,56, 31,53, 28,12, 28,01, 27,88, 22,93, 21,40, 19,72. Найдено, %: С 80,73; Н 9,40; C22H30O2. Вычислено, %: С 80,94; Н 9,26.
3,17-Диметокси-0-гомо-8а-эстра-1,3,5(10),16-тетраен-17а-он (7). Соединение было выделено в одном из экспериментов по алкилированию стероида 6 с выходом около 17 % после хроматографии продуктов реакции на колонке с силикагелем в системе растворителей петролейный эфир — этилацетат (1:1). После кристаллизации из метанола т. пл. 170-175 С. Спектр ЯМР 1Н (6, м. д.): 1,13 (3Н, с, Н-18), 3,63 (3Н, с, СН3О при С-17), 3,79 (3Н, с, СН3О при С-3), 5,85 (1Н, д, J = 4,2 Гц, Н-16), 6,62 (1Н, с, Н-4), 6,74 (1Н, д, J = 8,4 Гц, Н-2), 7,07 (1Н, д, J = 8,4 Гц, Н-1). Спектр ЯМР 13С, (6, м. д.): 17,94; 22,03; 26,21; 28,55; 31,86; 33,71; 40,48; 41,39; 44,38; 41,12; 55,29; 55,61; 112,64; 113,54; 114,55; 130,51; 133,96; 137,62; 147,76; 157,89; 200,37. Масс-спектр, m/z (Ioth.O, %): 326 (100), 297 (4), 283 (4), 241 (4), 204 (10), 173 (12), 160 (34), 115 (14), 91 (10), 55 (12).
1,17,17-Триметил-Б -гомо-8а-эстрон (5). К раствору 60 мг (0,2 ммоль) соединения 8 в 2 мл CH2CI2 добавляли бензилбромид (41 мг, 0,24 ммоль), йодид тетрабу-тиламмония (1 мг) и водный раствор гидроксида натрия (10 % w/v, 0,27 мл), смесь кипятили при сильном перемешивании 24 ч. Затем раствор выливали в воду, продукты реакции экстрагировали этилацетатом. Экстракт промывали водой, насыщенным водным раствором NaCl, сушили над безводным сульфатом магния и упаривали. Полученное вещество 9 (74 мг, 95 %) использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
К раствору соединения 9 (74 мг, 0,19 ммоль) в безводном ТГФ добавляли 85 мг (0,76 ммоль) трет-бутилата калия, смесь перемешивали 5 мин при комнатной температуре. После добавления 162 мг (1,14 ммоль) метилйодида и кипячения в течение 4 ч реакционную смесь выливали в воду, продукты реакции экстрагировали этилацетатом. Экстракт промывали 10 %-ной соляной кислотой, водой, насыщенным раствором NaCl в воде и сушили над безводным сульфатом магния. После удаления растворителей целевое соединение 10 получали очисткой остатка флэш-хроматографией на силикагеле, элюция в системе этилацетат — петролейный эфир. Получали 35 мг стероида 10, выход 44 %. К раствору 35 мг (0,084 ммоль) полученного выше соединения в 5 мл смеси равных количеств ТГФ и метанола добавляли 5 мг 10 %-ного Pd/C, через раствор пропускали ток водорода при атмосферном давлении в течение 6 ч. Катализатор отфильтровывали, растворители удаляли на роторном испарителе, остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюировали смесью этилацетат — петролейный эфир (1:4). Получали 20 мг (73 %) целевого стероида 5, т. пл. 230-235 °C. Спектр ЯМР 1Н (6, м. д.):
1,12 c (3H), 1,19 c (3H), 1,22 c (3H), 1,42-1,54 м (3Н), 1,62-1,98 м (8Н), 2,10-2,18 м (1Н), 2,27 с (3Н), 2,61-2,75 м (2Н), 2,78-2,89 м (1Н), 4,98 с (1Н, ОН), 6,44 с (1Н), 6,53 с (*н). Найдено, %: С 80,67; Н 9,42; C22H30O2. Вычислено, %: С 80,94; Н 9,26.
Экспериментальная биологическая часть. Утеротропную активность модельных соединений, их влияние на содержание минеральных компонентов в бедренной кости, вес тела, содержание холестерина и триглицеридов в сыворотке крови и печени исследовали в опытах на овариэктомированных крысах линии Wistar в соответствии с работами [29-31].
Поведенческие эффекты стероида 1 исследовали на самцах нелинейных белых крыс массой 180-220 г, по 9 животных в каждой группе. Препараты суспендировали в 1 мл вазелинового масла (эстрадиол — 0,1 мг, остальные вещества — 5 мг) и вводили дробно в три точки вдоль позвоночника подкожно. Животным контрольной группы вводили эквивалентное количество вазелинового масла, инъекции проводили 4 сут.
Оценку уровня ориентационно-исследовательской реакции и двигательной активности животных проводили в «норковой камере» [32], уровня тревожности — в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» [33]. Результаты исследований обрабатывали методом Стьюдента [34].
Авторы благодарят группу доктора медицинских наук Б. П. Суринова (НИИ медицинской радиологии, г. Обнинск) за изучение иммунологических свойств представленных соединений, группу доктора биологических наук, профессора Н.Д. Ещен-ко (биолого-почвенный факультет СПбГУ) за изучение кардиопротекторного действия модифицированных стероидов и группу доктора медицинских наук, профессора Л. М. Берштейна (НИИ онкологии Минздрава РФ, Санкт-Петербург) за анализ утеро-тропной активности веществ.
Литература
1. Blair J. A. Analysis of estrogen in serum and plasma for postmenopausal women: Past, present, and future // Steroids. 2010. Vol. 75, N 4-5. P. 298-306.
2. Sumino H., Ichikawa S., Kasama S. et al. Different effects of oral conjugated estrogen and transdermal estradiol on arterial stiffness and vascular inflammatory markers in postmenopausal women // Atherosclerosis. 2006. Vol. 189, N 2. Р. 436-442.
3. Gieraad D., Conradt C., Jesinger D., Bakowski M. Clinical study comparing the effects of sequential hormone replacement therapy with estradiol/dydrogesterone and conjugated equine es-trogen/norgestrel on lipides and symptoms // Gynecol. Obstetrics. 2006. Vol. 274, N 2. P. 246-253.
4. МакацарияА. Д., Саидова Р. А., Бицадзе В. О. и др. Гормональная контрацепция и тром-бофилические состояния. Москва: Триада-Х, 2004. 240 с.
5. РиггзБ. Л., Мелтон IIIЛ. Д. ОСТЕОПОРОЗ. М.: Бином, 2000. 558 с.
6. Beral V. & Million Women Study Collaborators. Breast cancer and hormone-replacement therapy in the Million Women Study // Lancet. 2003. Vol. 362, N 9382. P. 419-427.
7. Beral V., BullD., Reeves G. & Million Women Study Collaborators. Endometrial Cancer and hormone-replacement therapy in Million Women Study // Lancet. 2005. Vol. 365, N 9469. P. 1543-1551.
8. GludE., KjaerS. K., Thomsen B. L. et al. Hormone therapy and the impact of estrogen intake on the risk of ovarian cancer // Arch. Internal Med. 2004. Vol. 164. P. 2253-2259.
9. ZahidM., KohliE., Saeed M. et al. The Greater Reactivity of Estradiol-3,4-quinone vs Estradiol-2,3-quinone with DNA in Formation of Depurinating Adducts: Implication for tumor-Initiated Activity // Chem. Res. Toxicol. 2006. Vol. 19, N 1. P. 164-172.
10. Zhang Q., Aft R. L., Gross M. L. Estrogen Carcinogenesis: Specific Identification of Estrogen-Modified Nucleobase in Breast Tissue from Women // Chem. Res. Toxicol. 2008. Vol. 21, N 8. P. 1509-1513.
11. SeegerH., Wallwiener D., Kraemer E., Mueck A. O. Comparison of possible carcinogenic estradiol metabolites: Effects on proliferation, apoptosis and metastasis of human breast cancer cells // Maturitas. 2006. Vol. 281, N 28. P. 19055-19063.
12. Белов В. Н., ДудкинВ. Ю., УрусоваЕ. А. и др. Синтез, исследование структуры и биологических свойств некоторых 8а-аналогов стероидных эстрогенов, содержащих фтор в положении 2 // Биоорган. химия. 2007. Т. 33, № 3. С. 315-323.
13. ShavvaA. G., Morozkina S. N., Ushakov D. B. Synthesis and investigation of biological properties of new 8a-steroid estrogen analogues with fluorine at position 2 // Abstr. of 21st IUBMB and 12th FAOBMB International Congress of Biochemistry and Molecular Biology. Shanghai, China.
2009. P. 100.
14. Fischer D. S., WooL. W.L., MahonM. F. et al. Novel D-ring Modified Estrone Derivatives as Novel Potent Inhibitors of Steroid Sulfatase // Bioorg. Med. Chem. 2003. Vol. 11, N 2-3. Р. 1685-1700.
15. Maltais R., Poirier D. Steroid sulfatase inhibitors: A review covering the promising 2000-2010 decade // Steroids. 2011. Vol. 76, N 10-11. P. 929-948.
16. Laplante Y., CadotC., FournierM.-A., PoirierD. Estradiol and estrone C-16 derivatives as inhibitors of type 1 17|3-hydroxysteroid dehydrogenase: Blocking of ER+ breast cancer cell proliferation induced by estrone // Bioorg. Med. Chem. 2008. Vol. 16, N 4. Р. 1849-1860.
17. ShavvaA., Morozkina S., Galkina O. Approaches for Searching of Modified Steroid Estrogen Analogues with Improved Biological Properties // Steroids — Basic Science, In Tech, Rijeka, Croatia, 2011. P. 171-220.
18. Шавва А. Г., Антимонова О. И., БайгозинД. В. и др. Синтез и исследование молекулярной структуры D-гомо-В-нор-8a-аналогов стероидных эстрогенов // Журн. орган. химии.
2010. Т. 46. Вып. 10. C. 1506-1511.
19. Морозкина С. Н., Старова Г. Л., Селиванов С. И., Шавва А. Г. Исследование молекулярной структуры и биологических свойств некоторых 16,16-диметил^-гомо-В-нор-9|3-аналогов стероидных эстрогенов // Журн. общей химии. 2011. Т. 81. Вып. 6. С. 997-1001.
20. Шавва А. Г., Селиванов С. И., Старова Г. Л. и др. Синтез и исследование B-нор^-изоаналогов стероидных эстрогенов // Биоорган. химия. 2002. Т. 28, № 3. С. 242-250.
21. BansalS., BuringJ. E., RifaiN. et al. Fasting compared with nonfasting triglycerides and risk of cardiovascular events in women // J. Am. Med. Assoc. 2007. Vol. 298, N 3. P. 309-316.
22. McBride P. E. Triglycerides and risk of coronary heart disease // J. Am. Med. Assoc. 2007. Vol. 298, N 3. P. 336-338.
23. Freiberg J. J., Tybjaerg-Hansen A., Jensen J. S., Nordestgaard B. G. Nonfasting triglycerides and risk of ischemic stoke in the general population // J. Am. Med. Assoc. 2008. Vol. 300, N 18. P. 2142-2152.
24. Stork S., van der Schouw Y. T., Grobbee D. E., BottsM. L. Estrogen, inflammation and cardiovascular risk in women: a critical appraisal // Trends Endocrinol. Metab. 2004. Vol. 15, N 2. P. 66-72.
25. Рыженков В. Е., Прокопьев А. А., Каменева И. Ю. и др. Гиполипидемическое действие метилового эфира 16,16-диметил-8-изо^-гомоэстрона // Вопр. мед. хим. 1987. № 2. С. 65-68.
26. Zhang Q., Aft R. L., Gross M. L. Estrogen Carcinogenesis: Specific Identification of Estrogen-Modified Nucleobase in Breast Tissue from Women // Chem. Res. Toxicol. 2008. Vol. 21, N 8. P. 1509-1513.
27. Bolton J., Thatcher G. R. J. Potential Mechanisms of Estrogen Quinone Carcinogene-sis // Chem. Res. Toxicol. 2000. Vol. 21, N 1. P. 93-101.
28. Ananchenko S. N., Limanov V. Ye., Leonov V. N. et al. Synthesis of derivatives of oestrane and 19-norsteroids from 6-methoxytetralone and 6-hydroxytetralone // Tetrahedron. 1962. Vol. 18, N 12. P. 1355-1367.
29. ШавваА. Г., Морозкина С. Н., ИщенкоИ. В. и др. Синтез и исследование биологических свойств 6-окса^-гомо-8а-аналогов стероидных эстрогенов // Биоорган. химия. 2007. Т. 33, № 3. С. 310-314.
30. Сергеев П. В., КареваЕ. Н., Соловьёва Е. В. и др. Влияние аналогов 8-изоэстрадиола на связывание эстрадиола в ткани матки овариэктомированных крыс // Бюлл. эксп. биол. мед. 1995. № 2. С. 165-167.
31. Морозкмна С. Н., Егоров М. С., Елисеев И. И. и др. Синтез и исследование остеопротек-торного действия некоторых 8а-аналогов стероидных эстрогенов // Вестн. С.-Петерб. ун-та. Сер. 4: Физика, химия. 2009. Вып. 2. С. 126-134.
32. MakanjuolaR. O. A., HillG., Dow C. et al. The effects of psychotropic drugs on exploratory and stereotyped behavior of rats studied on a Hole-Board // Psychopharmacology. 1977. Vol. 55, N 1. P. 67-74.
33. Dawson G. R., Tricklebank M. D. Use of the elevated plus-maze in the search for novel anxi-olytic agents // Trends Pharmacol. Sci. 1995. Vol. 16, N 2. P. 33-36.
34. Джонсон Н., Лион Ф. Статистика и планирование эксперимента в технике и науке. М.: Мир, 1980. 610 с.
Статья поступила в редакцию 6 апреля 2012 г.
