CC BY
15
СХ-РЕАКТИВНЫЙ ПРОТЕИН КАК ПОКАЗАТЕЛЬ ТОКСИЧНОСТИ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ВОЗДЕЙСТВИИ ВРЕДНЫХ
ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ
Кандидаты медицинских наук В. Д. Бартенев, Ai. М. Кочанов
Из токсикологической лаборатории Научно-исследовательского института
полимеризационных пластмасс (Ленинград)
При исследовании сыворотки больных крупозной пневмонией Тил-лет и Френсис (Tillet, Francis, 1930) обнаружили вещество, которое реагировало с соматическим С-полисахаридом пневмококков, образуя при этом преципитат. Это вещество получило название С-реактивного белка, или С-реактивного протеина, или реагента острой фазы.
С-реактивный протеин в очищенном виде был получен Маклеодом и Эвери (McLeod, Avery, 1941), а в кристаллическом — Маккарти (McCarty, 1947). Отличительной особенностью этого белка является отсутствие его в здоровом организме. С-реактивный белок появляется в сыворотке крови или серозных жидкостях в течение 24 часов при самых различных патологических процессах (инфекционного и неинфекционного происхождения) и исчезает из организма по мере выздоровления.
Аш (Ash, 1933) при исследовании сыворотки более 100 больных детей установил, что С-реактивный белок появляется в результате заболеваний, вызванных грамотрицательными бактериями кишечно-ти-фозной группы. Позднее рядом авторов было выявлено наличие С-реактивного белка и при многих других заболеваниях: ревматизме [Хилл (Hill, 1952); А. И. Воробьева, 1957; Ю. К. Токмачев, 1959; А. И. Нестеров, I960)], затяжном эндокардите и инфаркте миокарда [Круп и Шек-ман (Kroop, Shacman, 1954), Роантри и Ранц (Roantree, Rantz, 1955)], злокачественных опухолях [Селман и Гальперн (Selman, Halpern, 1956); Шетлар, Буллок, Шетлар (Shetlar, Bullock, Shetlar, 1955)]. Было установлено также, что С-реактивный белок более четко отражает динамику патологического процесса по сравнению с такими показателями, как температурная кривая, лейкоцитарная формула, РОЭ. Это оказалось особенно ценным в тех случаях, когда клинические симптомы были выражены слабо, а лабораторные показатели не отражали в должной мере состояния больного организма. Поэтому наличие С-реактивного протеина может иметь диагностическое и прогностическое значение.
Было отмечено, что в сыворотке крови С-реактивный белок находится в комплексе с липидами, поэтому для его выделения требуется предварительное обезжиривание. При фракционировании биологических субстратов, содержащих реагент острой фазы, было обнаружено, что он осажадается вместе с альбуминами (Маклеод и $вери, 1941); при электрофоретическом исследовании скорость движения его совпадает с подвижностью у-глобулинов [Вуд, Маккарти, Слатер (Wood, Slater, 1954)].
По мнению Деланау с соавторами (Delaunay, 1956), Гаутира и Ши-деггера (Gautier, Scheidegger, 1957); Вест и Марти (Vest, Marti, 1957), С-реактивный протеин появляется в сыворотке крови вследствие разрушения тканей при воспалении, некрозе и опухолях. Авторы предполагают, что в первую очередь денатурируются белки мезенхимы. Некоторые считают, что реагент острой фазы возникает вследствие всасывания продуктов распада тканей, которые стимулируют выработку глобулинов. Раппорт, Шварц, Граф (Rapport, Schwartz, Graf, 1957) полагают, что С-реактивный белок появляется вследствие активной деятельности макрофагов и полинуклеаров, реагирующих на патогенное воздействие. Монтелла и Вуд (Montella, 1957) указывают на связь между измене-
нием состояния ретикуло-эндотелия и образованием С-реактивного протеина.
Попытки Эбернети (Abernethy, 1937) получить у животных белок, подобный С-реактивному протеину человека, увенчались успехом только в эксперименте на обезьянах, болевших, пневмонией. Однако Лефстрем (Löfström, 1943), Андерсон и Маккарти (Anderson, 1950) обнаружили и выделили у кроликов реагент острой фазы, который в отличие от С-реактивного белка реагировал только с полимерной формой (СХ]Г со-' матического полисахарида певмококков и поэтому был назван Сх-про-теином. С-реактивный же белок реагирует как с соматическим полисахаридом пневмококков, так и с его полимерной формой.
Работы Гедлунга (Hedlung, 1944), В. В. Иоффе и Л." М. Хай (1959), Р. В. Петрова с соавторами (1959) показали, что при «острофазовой» реакции, вызванной антигенными, неантигенными и другими агентами (стрептококковая, коклюшная культуры, дифтерийный токсин, скипида-ро-масляная эмульсия, пирогенал, -у-лучи, соли магния, золота и др.) в сыворотке крови у обезьян или кроликов появляется С- или Сх-реак-тивный белок, динамика изменения которого соответствовала характеру патологического процесса и более точно характеризовала течение процесса, чем обычные лабораторные показатели.
Разработаны следующие методы определения С-реактивного белка, в основе которых лежит способность его вступать в реакцию с соматическим С-реактивным полисахаридом пневмококков: 1) реакция кольце-преципитации с соматическим полисахаридом; 2) реакция набухания капсул пневмококков; 3) реакция непрямой гемагглютинации; 4) реакция со специфической иммунной к С-реактивному белку сывороткой; 5) реакция диффузной преципитации в агаре; 6) внутрикожная проба; 7) реакция связывания комплемента (подробнее см. в работе П. М. Па-шинина !).
Определение С- и Сх-реактивного белка в настоящее время получило широкое распространение в клинической практике и экспериментальных исследованиях. Однако данных об использовании С- и Сх-реак-тивного белка в промышленной токсикологии мы не нашли. Вместе с тем, учитывая указанные особенности С- и Сх-реактивного белка, мы нашли целесообразным применить метод определения реагента острой фазы при воздействии химических веществ на организм, так как многие из них могут вызывать воспалительные или другого характера патологические процессы. Кроме того, на фоне «острофазовой» реакции, вызванной различными агентами, последующая динамика содержания Сх-реактивного протеина явилась бы более четким показателем изменения реактивности организма (по сравнению с другими методами).
В нашей работе определение Сх-реактивного белка осуществляли методом Андерсона и Маккарти (1950) в модификации П. М. Пашини-на (1961), основанным на реакции со специфической иммунной сывороткой к Сх-реактивному белку 2. Реакцию ставили в капиллярах диаметром 0,5—0,6 мм и длиной 90 мм, которые фиксировали в вертикальном положении в коробочке с пластилином. Реакция преципитации в виде мелких хлопьев при наличии Сх-реактивного белка в исследуемой сыворотке появляется через 30 минут. Однако окончательное суждение о количестве Сх-реактивного белка в условиях комнатной температуры выносилось через 18—20 часов. Количество преципитата выражалось в миллиметрах.
Метод определения Сх-реактивного белка в сыворотке крови мы применили как один из тестов выявления токсичности при хроническом
1 Лабораторное дело, 1961, № 5.
2 Авторы выражают благодарность П. М. Пашиннну, любезно предоставившему иммунную сыворотку и давшему необходимую консультацию при выполнении настоящей работы.
отравлении кроликов додекафторгептиловым спиртом (Л) и 3,3-ди(хлор-метил) оксациклобутаном (Б), используемых в промышленности пластических масс. Хроническое отравление осуществляли динамическим методом в течение почти 5-месячного срока по 4 часа в день. Концентрация для вещества А равнялась примерно 1 мг/л, а для вещества Б — в среднем 0,005 мг/л.
На 40-й день хронического отравления изучаемыми веществами в сыворотке крови у подопытных кроликов реакция на Сх-реактивный протеин была положительной у 9 из 10 животных, в то время как у контрольных животных реагент острой фазы не был обнаружен (см. таблицу). Реакция преципитации у кроликов, подвергавшихся хроническому воздействию вещества А, была выражена меньше, чем при отравлении веществом Б.
Интересно было также выяснить изменение интенсивности содержания Сх-реактивного белка в сыворотке крови вследствие «острофазового» воздействия какого-либо внешнего агента на фоне интоксикации. С этой целью на 40-й и 111-й день хронического отравления веществами А и Б определяли уровень Сх-реактивного белка при вызывании «острофазовой» реакции тетравакциной (штаммы брюшного тифа, паратифа Б, дизентерии Флекснера и Зонне). При выборе агента «острофазовой» реакции мы руководствовались прежде всего тем, чтобы сам агент не оказывал каких-либо побочных влияний, которые могли бы
Рис. 1. Динамика изменения содержания Сх-реактивного белка в сыворотке крови кроликов на фоне «острофазовой» реакции при хроническом отравлении веществом А.
I — после первой вакцинации тетравакциной на 40-й день отравления; II — после второй вакцинации тетравакциной на 111-й день отравления. 1 — подопытная группа; 2 — контрольная группа.
отразиться на результатах хронического отравления изучаемыми веществами. Тетравакцину вводили подкожно из расчета 2 мл на каждого кролика (по 4,5 млрд. микробных тел на животное). После каждой вакцинации Сх-реактивный белок определяли на 1, 2, 3, 5 и 9-й день.
Анализ полученных данных показывает, что при отравлении как веществом А (рис. 1), так и веществом Б (рис. 2) реакция преципитации на Сх-реактивный белок у подопытных животных была менее вы-
* - • *..
Содержание Сх-реактивного белка в сыворотке крови кроликов на 40-й день хронического отравления
Реакция преципитации
отравление веществом А отравление веществом Б контроль
+++ ++ _
+ ++ —
+ —
+ ++ —
—■ ++ —
Примечание. Знак «минус» (—) — отсутствие преципитации; знак «плюс» ( + ) — 1 мм преципитации.
ражена, чем у контрольных животных. Особенно отчетливо различие в уровне Сх-реактивного белка было выражено в случае отравления веществом А на 2-й и 3-й день после 1-й и 2-й вакцинации (см. рис. 1); это различие оказалось статистически достоверным.
В случае хронического отравления веществом Б качественные изменения Сх-реактивного белка были аналогичными (см. рис. 2), но количественная разница была более выражена при втором исследовании, что, очевидно, является результатом большей токсичности этого про-
д »и
Рис. 2. Динамика изменения содержания Сх-реактивного белка в сыворотке крови кроликов на фоне «острофазовой» реакции при хроническом отравлении веществом Б.
I и // то же что на рис. 1.
Таким образом, полученные при длительном отравлении изучаемыми веществами данные свидетельствуют о том, что уровень Сх-реактивного белка в сыворотке крови у подопытных животных на фоне «острофазовой» реакции был понижен по сравнению с контрольными животными. По-видимому, это связано с изменением реактивности организма в результате хронического воздействия веществ А и Б.
Выводы
1. В сыворотке крови кроликов, подвергавшихся хроническому отравлению додекафторгептиловым спиртом и 3,3-ди(хлорметил) оксаци-клобутаном, выявлено наличие Сх-реактивного белка; в то же время у контрольных животных он отсутствовал.
2. На фоне «острофазовой» реакции, вызванной тетравакциной у подопытных животных, реакция на Сх-реактивный белок в динамике была менее выраженной по сравнению с контролем, что, по-видимому, является следствием изменения реактивности организма.
3. Метод определения Сх-реактивного протеина, особенно на фоне протекания «острофазовой» реакции, может быть рекомендован к использованию в промышленной токсикологии как один из чувствительных тестов при воздействии вредных химических веществ в условиях хронического опыта. Можно также предположить, что тест на Сх-реактивный белок может быть использован в клинике для выявления хронических интоксикаций вредными химическими веществами.
От редакции. Приходится выразить сожаление, что новый тест применен авторами изолированно, без сравнения с уже хорошо известными нам чувствительными иммунобиологическими и физиологическими тестами. Такие сравнительные исследования могли бы служить подтверждением значимости для организма Сх-реактивного протеина. Одна работа, конечно, недостаточна для того, чтобы судить о значимости предлагаемого теста.
ЛИТЕРАТУРА
Воробьева А. И. Тер. арх., 1957, в. 8, стр. 31. —Иоффе В. И., Хай Л. М. В кн.: Ежегодник Ин-та экспериментальной медицины за 1958 г. Л., 1959, стр. 238.— Нестеров А. И. Сов. мед., 1960, № 1, стр. 22. — П а ш и н и н П. М. Лабор. дело, 1961, № 5, стр. 3. —Петров Р. В., Петрова А. С., Ш и ходы ров В. В. Докл. АН СССР, 1959, т. 129, № 5, стр. 1190. — Т о к м а ч е в Ю. К. Тер. арх., 1959, в. 10, стр. 56. — Ab ern ethy Т. J. J. exp. Med., 1937, v. 65, p. 75. — A n d е г s о n Н. С., McCarty М., Am. J. Med., 1950, v. 8, p. 445.— Ash R., J. infect. Dis., 1933, v. 53, p. 89.— Del a un ay A. et al., Presse med., 1956, v. 64, p. 1814. — G a u t i e г A., Scheidegger J. J., Schweiz, med. Wschr., 1957, Bd. 87, S. 950. — H e d 1 u n d P.. Acta med. scand., 1944, v. 118, p. 329. — H i 11 A. G. S., Lancet, 1951, v. 2, p. 807.— Kroop I. G., Shacman N. H., Proc. Soc. exp. Biol. (N. Y.), 1954, v. 86, p. 95.— Löf ström G., Acta med. scand., 1943, suppl. 141, p. 1.—McLeod С. M., Avery О. Т., J. exp. Med., 1941, v. 73, p. 191. —Maclyn McCarty. J. exp. Med., 1947, v. 85, p. 491. — Montel 1 a S., Wood H,. F., J. exp. Med., 1957, v. 106, p. 32!. — Rapport M. M., Schwartz A. E., Graf L., Ann. Surg., 1957, v. 145, p. 321.— Roan tree R. J., Rantz L. A., Arch,, intern. Med., 1955, v. 96, p. 674. — S e 1-man D., H a 1 p e r n A., Angiology, 1956, v. 7, p. 292. — S h e 11 а г M. R., Bullock J. A., Shetlar C. L. et al., Proc. Soc. exp. Biol. (N. Y.), 1955, v. 88, p. 107.— Tillet W. S., Francis T. Jr., J. exp. Med., 1930, v. 52, p. 561. —Vest. M., Marti J., Schweiz med. Wschr., 1957, Bd. 87, S. 782.— Wood H. F., McCarty M„ S 1 a t e г R. J., J. exp. Med., 1954, v. 100, p. 71.
Поступила 20/VI 1962 r.
Cx-REACTIVE PROTEIN AS A TOXICITY INDEX IN CHRONIC POISONING WITH
NOXIOUS CHEMICAL SUBSTANCES
V. D. Barteneu, M. M. Kochanov, Candidates of Medical Sciences
The method of detecting Cx-reactive protein in the blood serum of rabbits was used for the first time in industrial toxicology as a test for investigating the effect of poisonous substances. It was found that in the course of chronic action of noxious substances the test for Cx-reactive protein proved positive. On the other hand, no Cx-reactive protein was detected in control animals. In the course of an "acute phase" reaction, produced by tetravaccine, a comparatively low level of Cx-reactive protein was noted in the experimental animals as compared with the controls. Apparently, this was due to the changed body reactivity resulting from the chronic action of noxious substances.
-¿г lir tV
КОМБИНИРОВАННОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ НЕЙТРОННОГО ОБЛУЧЕНИЯ И ПОВЫШЕННОЙ ТЕМПЕРАТУРЫ ВОЗДУХА
НА ЖИВОТНЫХ
Аспирант А. Ф. Гурьев
Из кафедры общей гигиены I Московского ордена Ленина медицинского института
имени И. М. Сеченова
При изучении гигиенических условий работы с радиоактивными веществами на нефтяных промыслах необходимо наряду с влиянием ионизирующих излучений учитывать возможное дополнительное воздействие и некоторых других факторов внешней среды. Одним из таких неблагоприятных факторов может быть повышенная температура окружающего воздуха.
По данным ряда авторов (Н. И. Рыжов, 1958; П. А. Милонов, 1959, и др.), содержание животных после однократного общего облучения рентгеновыми лучами в дозах порядка 250—600 г в условиях повышенной температуры окружающего воздуха усиливает тяжесть течения острой лучевой болезни.
Мы поставили перед собой задачу изучить влияние повышенной температуры окружающего воздуха на возникновение и развитие лучевых поражений, вызванных дробным облучением быстрыми нейтронами.
